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不同盐度季节凡纳滨对虾亲虾生物饵料营养成分测定分析 预览
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作者 朱昔恩 何苹萍 +6 位作者 黎大勇 陈田聪 陈晓汉 谢达祥 彭金霞 张彬 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第2期457-462,共6页
【目的】测定比较不同盐度季节下凡纳滨对虾亲虾饵料生物的营养成分组成及差异,分析营养成分的季节性变化与亲虾繁殖性能的相关性,为实现凡纳滨对虾在广西沿海全年稳定高效繁殖提供理论参考。【方法】委托广西分析测试中心对不同盐度季... 【目的】测定比较不同盐度季节下凡纳滨对虾亲虾饵料生物的营养成分组成及差异,分析营养成分的季节性变化与亲虾繁殖性能的相关性,为实现凡纳滨对虾在广西沿海全年稳定高效繁殖提供理论参考。【方法】委托广西分析测试中心对不同盐度季节的沙蚕、鱿鱼和牡蛎等亲虾饵料进行营养成分测定,分别采用火焰发射光谱法、氨基酸自动分析仪和脂肪酸气相色谱法测定微量元素、氨基酸和脂肪酸的组成及含量。【结果】在低盐季节中,饵料牡蛎、鱿鱼和沙蚕中多种矿物质元素(尤其是镁、锌和硒)含量显著降低,但磷含量显著升高,过高的磷含量会抑制其他矿物元素的吸收从而抑制对虾的生长。此外,鱿鱼的必需氨基酸比例仅在高盐季节达到标准,低盐季节未达到FAO/WTO的理想模式,蛋白质量较差。与此同时,3种生物饵料在低盐季节的20∶5n-3(EPA)和22∶6n-3(DHA)含量均呈不同程度的下降,而这两种不饱和脂肪酸与对虾繁殖性能密切相关。【结论】低盐度季节中亲虾鲜活饵料的微量元素含量、必需氨基酸比例及不饱和脂肪酸含量等营养指标显著下降或异常变化,导致饵料营养质量降低,推测其是造成亲虾摄食生长状态和繁殖性能显著降低的重要原因。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 亲虾 繁殖性能 饵料生物 营养成分
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香港牡蛎野生群体家系建立及耐高盐性筛选 预览
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作者 张兴志 官俊良 +5 位作者 何苹萍 张立 罗帮 彭金霞 李琼珍 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期385-390,共6页
【目的】选育出香港牡蛎(Crassostrea hongkongensis)耐高盐品系,为提高其养殖经济效益和促进产业持续发展提供保障。【方法】以广西茅尾海海区野生香港牡蛎为亲本,采用♂∶♀=1∶3的交配方式建立30个香港牡蛎野生群体全同胞家系,比较... 【目的】选育出香港牡蛎(Crassostrea hongkongensis)耐高盐品系,为提高其养殖经济效益和促进产业持续发展提供保障。【方法】以广西茅尾海海区野生香港牡蛎为亲本,采用♂∶♀=1∶3的交配方式建立30个香港牡蛎野生群体全同胞家系,比较各家系早期的生长性状差异,并对30个家系在高盐度(25‰~30‰)自然海域的生长和存活率进行监测,对香港牡蛎耐高盐性进行筛选。【结果】各家系间的受精率及孵化率无显著差异(P>0.05,下同)。在幼虫培育过程中,至15日龄时以家系G1的壳高最大,家系I1的壳高最小,二者差异显著(P<0.05);以G为父本的半同胞家系存活率较低,均低于平均值(63.21%);而以D为父本的3个家系存活率较高,均超过71.33%。海区养殖期间,至60日龄时各家系均表现出较高的存活率,保持在90.00%以上;至120日龄时,除家系B1、B2、B3、E1、I1、J1、J2和J3外,其他各家系的存活率均为0;至300日龄时家系B1、B2、B3、I1、J1和J2的存活率在40.23%~60.32%。不同家系的壳高在相同日龄差异明显,养成期至300日龄时,家系B2的壳高最大,但与家系B1和J3的差异不显著;以家系E1的壳高最小。【结论】通过家系建立结合高盐海域养殖的方式筛选获得B1、B2、I1、J1和J2等优良家系,可为香港牡蛎耐高盐品系选育提供种质资源。 展开更多
关键词 香港牡蛎 家系选育 耐高盐 壳高 存活率
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凡纳滨对虾LvRab5B蛋白与IHHNV病毒蛋白的互作 预览
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作者 刘青云 李强勇 +10 位作者 王韶韶 朱威霖 彭敏 曾地刚 陈秀荔 杨春玲 赵永贞 彭金霞 何苹萍 陈晓汉 《水产学报》 CSCD 北大核心 2018年第11期1829-1839,共11页
为了探究LvRab5B蛋白在凡纳滨对虾抗病毒感染中的作用,实验分别构建了LvRab5B蛋白在昆虫和酵母细胞中的融合表达载体,将不同的载体导入不同的细胞中,利用免疫荧光和酵母双杂交的方法研究了Lv Rab5B蛋白在昆虫细胞中的表达以及Lv Rab5B... 为了探究LvRab5B蛋白在凡纳滨对虾抗病毒感染中的作用,实验分别构建了LvRab5B蛋白在昆虫和酵母细胞中的融合表达载体,将不同的载体导入不同的细胞中,利用免疫荧光和酵母双杂交的方法研究了Lv Rab5B蛋白在昆虫细胞中的表达以及Lv Rab5B蛋白与病毒IHHNV之间的互作关系;通过qRT-PCR方法研究了该蛋白在健康对虾不同组织中的表达情况以及凡纳滨对虾分别感染IHHNV和WSSV后不同时间点的相对表达量。结果显示,Lv Rab5B基因融合蛋白能够在昆虫细胞中表达;Lv Rab5B蛋白与IHHNV病毒衣壳蛋白CP无相互作用,而与非结构蛋白NS1相互作用明显,与非结构蛋白NS2作用较弱。qRT-PCR结果显示,LvRab5B基因在凡纳滨对虾心脏、鳃腺、肠道、胃、肝胰脏和肌肉中都表达,在肠道中表达量最高,肝胰脏次之;Lv Rab5B蛋白在凡纳滨对虾机体感染病毒前后的表达情况不同,感染初期表达降低,随后迅速上升,末期下降。研究表明,LvRab5B基因参与凡纳滨对虾抵抗IHHNV和WSSV病毒的先天免疫过程,为进一步研究Lv Rab5B蛋白在对虾机体中的免疫功能及作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 LvRab5B蛋白 IHHNV 酵母双杂交
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猪丁型冠状病毒TaqMan实时定量RT-PCR检测方法的建立和应用
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作者 秦毅斌 何苹萍 +7 位作者 卢冰霞 何颖 李斌 苏乾莲 段群棚 周英宁 赵武 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2018年第6期692-699,共8页
根据GenBank中登录的猪丁型冠状病毒(PDCoV)N基因序列在保守区设计合成特异性引物和TaqMan探针,构建含有PDCoVN基因的重组质粒作为阳性标准品,通过优化各项反应条件,建立了检测PDCoV的TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法,并对该方法进行特... 根据GenBank中登录的猪丁型冠状病毒(PDCoV)N基因序列在保守区设计合成特异性引物和TaqMan探针,构建含有PDCoVN基因的重组质粒作为阳性标准品,通过优化各项反应条件,建立了检测PDCoV的TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法,并对该方法进行特异性、定量线性范围、敏感性和重复性等试验。结果显示,该方法仅对PDCoV出现特异性扩增反应,与猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、A群猪轮状病毒、猪嵴病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒、猪瘟病毒及猪细小病毒均无交叉反应。该方法的标准曲线Ct值与2.2×10 9-2.2×10 1copies/L之间的质粒浓度具有良好的线性关系,标准曲线方程为Ct=-3.539×lg X+38.95,线性相关系数(R2)为1.0,检测下限为2.2 copies/L。对3个不同浓度(2.2×10 2、2.2×10 4、2.2×10 6copies/L)的pMD18-PDCoV-N进行2次重复检测,每个浓度重复试验的Ct值的变异系数均小于1.0%,表明该方法具有良好的重复性。应用建立的方法对64份广西临床腹泻样品进行检测,结果从其中18份样品中检出PDCo V,样品阳性率为28.1%,说明广西猪群存在PDCoV感染。结果表明,建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法为PDCoV的检测和定量分析提供了一种快速、敏感和特异的技术手段。 展开更多
关键词 猪丁型冠状病毒 荧光定量RT-PCR TAQMAN探针
接种密度、氮、磷、碳、硅、维生素对牟氏角毛藻生长的影响 预览
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作者 朱昔恩 黎大勇 +5 位作者 熊建华 彭金霞 陈晓汉 谢达祥 张彬 《普洱学院学报》 2018年第6期9-14,共6页
研究接种密度和氮、磷、碳、硅、维生素营养盐对牟氏角毛藻生长的影响,筛选获得最佳营养盐配方及方法,以期为其规模化培养提供基础资料。采用单因子实验方法研究接种密度和氮源等5种营养盐对牟氏角毛藻生长的影响。接种密度和5种营养盐... 研究接种密度和氮、磷、碳、硅、维生素营养盐对牟氏角毛藻生长的影响,筛选获得最佳营养盐配方及方法,以期为其规模化培养提供基础资料。采用单因子实验方法研究接种密度和氮源等5种营养盐对牟氏角毛藻生长的影响。接种密度和5种营养盐对牟氏角毛藻的生长均影响显著(P<0.05),其中最佳接种密度为0.7×10^6cell/mL;适宜氮源依次为:NaNO3 >CO(NH2)2 >NH4HCO3,但CO(NH2)2和NH4HCO3在高浓度( >75mg/L)下对牟氏角毛藻生长具有明显抑制作用;适宜磷源为KH2PO4,其最佳浓度为2.5mg/L;有机碳源(C6H12O6)的促长效果优于无机碳源(NaHCO3),其最适浓度为20mg/L;硅源(Na2SiO3)最适添加浓度为30mg/L;维生素B1和B12联用效果显著优于分别单独添加(<0.05)。接种密度和筛选获得的5种营养盐在适宜浓度下均能显著促进牟氏角毛藻的生长,进而提高规模化培养的产量和稳定性,但高浓度下均对牟氏角毛藻的生长速度和藻细胞浓度产生明显抑制作用。 展开更多
关键词 牟氏角毛藻 接种密度 碳源 硅源 维生素 藻细胞浓度
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不同程度低温胁迫对凡纳滨对虾主要消化酶活性的影响 预览 被引量:4
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作者 何苹萍 +3 位作者 赵永贞 李强勇 陈晓汉 彭金霞 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第1期233-237,共5页
研究不同程度低温胁迫条件下凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)主要消化酶活性的变化规律,以期为低温消化生理学及低温条件下投喂饵料成分配比的调整提供参考。试验设计20、16℃两个温度组,每组设计5个取样时间点,每组以28℃(常温)为对... 研究不同程度低温胁迫条件下凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)主要消化酶活性的变化规律,以期为低温消化生理学及低温条件下投喂饵料成分配比的调整提供参考。试验设计20、16℃两个温度组,每组设计5个取样时间点,每组以28℃(常温)为对照组。对各组取样实验虾的肝胰腺及胃肠进行胃蛋白酶、胰蛋白酶、淀粉酶3种消化酶活性的测定。结果表明,3种消化酶在不同温度下的活性顺序均为28℃〉20℃〉16℃;3种消化酶活性顺序为胰蛋白酶〉淀粉酶〉胃蛋白酶。淀粉酶及胃蛋白酶的活性顺序为肝胰腺〉胃肠,胰蛋白酶活性顺序为胃肠〉肝胰腺。3种消化酶的活性均为低温处理24 h开始出现不同程度的降低,144 h活性达到最低值,回复常温24 h后活性有所回升。3种消化酶受低温影响程度为胃蛋白酶〉淀粉酶〉胰蛋白酶。20℃下消化酶活性与常温相比降幅最小的为淀粉酶,16℃下消化酶活性与常温相比降幅最小的为胰蛋白酶。生产中在不同温度情况下应根据消化酶的活性来决定饵料成分的配比及投饵量,应随着温度的持续降低不断减少总投饵量,降温初期(常温降至20℃)应以提高饵料的淀粉含量配比方式进行投喂;降温后期(20℃降至16℃)应以提高蛋白含量配比方式进行投喂。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 温度 胃蛋白酶 胰蛋白酶 淀粉酶
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低温诱导型凡纳滨对虾DEAD-box RNA解旋酶基因的克隆与表达分析 预览 被引量:1
7
作者 彭金霞 吕丽虹 +2 位作者 何苹萍 陈晓汉 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期474-480,共7页
为研究凡纳滨对虾耐寒性状的分子基础,克隆鉴定了凡纳滨对虾DEAD.boxRNA解旋酶的同源基因。根据差减文库中筛选到的一个低温上调表达的DEAD.boxRNA解旋酶基因片段,通过RACEPCR扩增获得两条高度相似的cDNA全长序列,两条cDNA均为143... 为研究凡纳滨对虾耐寒性状的分子基础,克隆鉴定了凡纳滨对虾DEAD.boxRNA解旋酶的同源基因。根据差减文库中筛选到的一个低温上调表达的DEAD.boxRNA解旋酶基因片段,通过RACEPCR扩增获得两条高度相似的cDNA全长序列,两条cDNA均为1430bp,包含139bp5'UTR、79bp3'UTR和1212bp开放阅读框,编码403个氨基酸残基。Blast比对结果显示,两条cDNA与其他物种的DDX5相似性最高,推测为凡纳滨对虾DDX5基因的两个变异体,分别命名为LvDDX5variantA(LvDDX5A)和LvDDX5variantB化vDDX5B),在系统进化树中,LvDDX5A和LvDDX5B聚为最近的一支,并与虾类DDX5、文昌鱼DDX、贝类的DDx5距离较近。Real.timePCR分析结果显示,三vDDx5,4和三加D.嬲B都呈多组织遍在表达,在精巢、鳃、肠、肌肉和卵巢中,LvDDX5B表达量高于LvDDX5A,而在肝胰腺中LvDDX5A表达量高于LvDDX5B。在低温胁迫对虾肝胰腺和心中,LvDDX5A呈上调表达而三1,DD肺B表达量无明显变化。进一步对三vD删在不同低温条件胁迫对虾的肝胰腺中表达变化进行了分析。结果显示,LvDDX5A在18℃、15℃、13℃和11℃低温胁迫36h均被诱导表达,并随着15℃和13℃低温胁迫时间的增加呈先上升后下降的表达模式,在48h达到峰值,LvDDX5A的低温诱导表达模式暗示其可能是在凡纳滨对虾低温适应中发挥作用的剪接体。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 低温诱导 DEAD-BOX RNA解旋酶 耐寒
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圆尾鲎与中国鲎消化道形态学与组织学观察 被引量:1
8
作者 陈秀荔 朱威霖 +7 位作者 杨春玲 罗帮 李琼珍 彭金霞 彭敏 蒋伟明 李咏梅 《水生态学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第5期92-100,共9页
比较分析圆尾鲎和中国鲎消化道组织学和形态学特征,为其发育生物学的研究和健康繁育提供理论依据。中国鲎与圆尾鲎均来自于广西合浦县西场镇邻近海域,10龄和14龄均各5只,平均头胸甲宽:圆尾鲎46.78-52.42 mm、中国鲎46.09-55.44 mm。通... 比较分析圆尾鲎和中国鲎消化道组织学和形态学特征,为其发育生物学的研究和健康繁育提供理论依据。中国鲎与圆尾鲎均来自于广西合浦县西场镇邻近海域,10龄和14龄均各5只,平均头胸甲宽:圆尾鲎46.78-52.42 mm、中国鲎46.09-55.44 mm。通过形态解剖、组织切片和光镜技术等对消化道的形态学与组织学特征进行研究。结果表明:圆尾鲎与中国鲎消化道外部及解剖形态基本相似;它们的消化道可划分为前肠(口道、食道、前胃、幽门)、中肠和后肠(直肠、肛门);前肠、中肠和后肠都由几丁质层、粘膜层、粘膜下层、肌层及外膜组成,但是中肠不含几丁质层。10龄中国鲎和圆尾鲎的消化道总长以及中肠长度差异显著,消化道其余各部分的长度差异不显著。不同龄同种鲎以及同龄不同种鲎间的所有测量指数差异显著。消化道各部分的结构、组织形态均与其杂食性密切相关。 展开更多
关键词 圆尾鲎 中国鲎 消化道 形态学 组织学
卵形鲳鲹性腺组织学观察及简易性别判定方法建立 预览
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作者 蒋小珍 +4 位作者 陈晓汉 彭敏 蒋伟明 李咏梅 彭金霞 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第1期428-432,共5页
卵形鲳鲹雌雄鱼不具备性别特异的外形特征,发展一种可以简便鉴定卵形鲳鲹性别的技术是产业发展的迫切需要。通过一龄商品规格鱼性腺解剖学观察,发现商品规格鱼性腺已出现形态学上的明显差异,根据其形态学差异,建立了一种卵形鲳鲹早期的... 卵形鲳鲹雌雄鱼不具备性别特异的外形特征,发展一种可以简便鉴定卵形鲳鲹性别的技术是产业发展的迫切需要。通过一龄商品规格鱼性腺解剖学观察,发现商品规格鱼性腺已出现形态学上的明显差异,根据其形态学差异,建立了一种卵形鲳鲹早期的性别判定方法。进一步对性腺切片进行HE染色观察,发现上述形态学判定方法判断性别准确率达100%。形态学判定为雌鱼的性腺为典型的卵巢组织结构,有大量卵母细胞分布,而形态学判定为雄鱼的性腺观察到精小囊和精小叶等精巢典型结构。研究建立并验证的基于性腺解剖形态的卵形鲳鲹早期性别判定简易方法,可为下一步卵形鲳鲹性别决定机制研究和基于分子标记的早期性别鉴定方法建立提供参考材料。 展开更多
关键词 卵形鲳鲹 精巢 卵巢 性别判定
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凡纳滨对虾亲虾持续性死亡病因的初步研究 预览 被引量:3
10
作者 张彬 何苹萍 +5 位作者 彭金霞 蒋小珍 熊建华 谢达祥 陈晓汉 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第6期2798-2802,共5页
2014年夏季,广西发生一起凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)亲虾持续死亡病例,患病亲虾部分个体肝胰腺明显萎缩,腹节肌肉轻微白浊,个体呈黄鳃。采用TCBS选择培养基从病虾和亲虾池水中分离细菌,对各分离菌株16S rRNA基因序列进行扩增... 2014年夏季,广西发生一起凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)亲虾持续死亡病例,患病亲虾部分个体肝胰腺明显萎缩,腹节肌肉轻微白浊,个体呈黄鳃。采用TCBS选择培养基从病虾和亲虾池水中分离细菌,对各分离菌株16S rRNA基因序列进行扩增、测序,运用DNAStar软件进行序列分析;利用石蜡组织切片技术对病虾肝胰腺、鳃丝、肌肉、肠等器官组织进行病理分析。结果从病虾中分离到5株优势菌,均鉴定为巴西弧菌(Vibrio brasiliensis);从亲虾池水中分离到2株巴西弧菌,1株副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus),1株哈氏弧菌(Vibrio harveyi)。推测此次亲虾发病是由于投喂了弧菌数量超标的牡蛎及鱿鱼,巴西弧菌可能为致病菌。组织病理观察发现患病亲虾多个器官组织均发生不同程度的病变,且肝胰腺呈现显著的弧菌病病理变化。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 弧菌 分离鉴定 16S RRNA 组织病理学
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广西黄喉拟水龟铜绿假单胞菌的分离鉴定 预览
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作者 何苹萍 彭金霞 +6 位作者 张彬 陈秀荔 彭敏 杨春玲 李咏梅 陈晓汉 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期2306-2309,共4页
从患病黄喉拟水龟的肝脏分离到1株优势菌(N.0),对该菌进行革兰氏染色、镜检,观察其在普通培养基、血平板上的菌落形态,对分离菌株进行生化特性测定及16SrRNA基因序列的克隆、测定,运用DNASTAR软件进行序列分析,并构建系统进化树。综... 从患病黄喉拟水龟的肝脏分离到1株优势菌(N.0),对该菌进行革兰氏染色、镜检,观察其在普通培养基、血平板上的菌落形态,对分离菌株进行生化特性测定及16SrRNA基因序列的克隆、测定,运用DNASTAR软件进行序列分析,并构建系统进化树。综合该菌株的形态、生理生化特征及16SrRNA基因序列分析结果,确定该菌株是铜绿假单胞菌。药敏实验结果表明该菌对氧氟沙星、诺氟沙星高度敏感,对阿米卡星、庆大霉素、环丙沙星中度敏感,对大多数药物存在耐药性。该研究为国内首次通过分子生物学手段从患病黄喉拟水龟中分离鉴定出铜绿假单胞菌。 展开更多
关键词 黄喉拟水龟 铜绿假单胞菌 分离鉴定 药敏实验
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低温处理与常温凡纳滨对虾基因差异表达文库的构建及分析 预览 被引量:1
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作者 蒋小珍 彭金霞 +1 位作者 陈晓汉 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1662-1668,共7页
[目的]筛选出对虾耐寒相关基因,为今后进一步研究对虾耐寒分子机理提供科学依据.[方法]利用SSH技术构建低温处理与常温凡纳滨对虾的基因差异表达文库,并通过斑点杂交、克隆测序分析及候选基因RT-PCR扩增等对差减获得的耐寒相关功能基因... [目的]筛选出对虾耐寒相关基因,为今后进一步研究对虾耐寒分子机理提供科学依据.[方法]利用SSH技术构建低温处理与常温凡纳滨对虾的基因差异表达文库,并通过斑点杂交、克隆测序分析及候选基因RT-PCR扩增等对差减获得的耐寒相关功能基因进行验证.[结果]在构建的正、负文库768个克隆中有152个为低温高表达克隆、331个为常温高表达克隆;将正文库100个克隆拼接可获得ESTs同源群39个,其中已知基因29个,主要涉及能量代谢、表达调控、信号传导、细胞免疫、抗细胞凋零、蛋白质加工及其他基因等;将负文库50个克隆拼接可获得ESTs同源群18个,其中已知基因17个,主要涉及细胞免疫、维持细胞代谢、物质转运、信号传导及其他基因等.经RT-PCR验证,从正文库中筛选出的HSPB1、NGT4和NGT7基因在低温条件下的表达量显著高于常温.[结论]综合运用SSH、斑点杂交、克隆测序和RT-PCR可有效筛选并验证凡纳滨对虾耐寒相关基因,为揭示对虾耐寒分子调控机制奠定基础. 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 抑制性消减杂交技术(SSH) 文库 耐寒相关基因 斑点杂交
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凡纳滨对虾精子超微结构及遗传失活的研究 预览
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作者 张彬 +3 位作者 熊建华 谢达祥 赵永贞 陈晓汉 《广西师范大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2014年第4期126-134,共9页
本文研究使凡纳滨对虾精子遗传失活的方法,用波长365nm和照射距离10.5cm的不同剂量紫外线照射凡纳滨对虾精液稀释液或精荚,然后进行人工授精。结果表明,新鲜精液稀释液在0~20s照射范围内,受精作用都仍能正常发生,与卵子人工体外授精仍... 本文研究使凡纳滨对虾精子遗传失活的方法,用波长365nm和照射距离10.5cm的不同剂量紫外线照射凡纳滨对虾精液稀释液或精荚,然后进行人工授精。结果表明,新鲜精液稀释液在0~20s照射范围内,受精作用都仍能正常发生,与卵子人工体外授精仍可获得5%的平均受精率,但胚胎在孵化前死亡;新鲜精荚在5~10min照射范围内,采用精液移植授精法可获得20%的平均受精率和3%的平均幼体孵化率。精子在2×105个/cm2的条件下,精液稀释液厚度2cm,经30s以上紫外线照射后,精子染色体可完全失活,而精荚经20min以上紫外照射后,精子染色体亦可完全失活。应用透射电镜对正常和不同时间紫外辐射的凡纳滨对虾精子形态和超微结构进行观察,结果发现,凡纳滨对虾正常精子系单一棘突类型,主要由前端棘突、中间帽状体和后主体部构成,精子无尾部,不主动运动。紫外辐射凡纳滨对虾新鲜精液稀释液10~20s的精子形态和超微结构与正常活精子无明显变化。紫外辐射30s的精子表现为顶体和棘突形态正常,而染色质散乱,后主体部壁变薄;紫外辐射60s时精子就出现明显的受损状态,主要表现为细胞核变形,核区缩小,核膜受损部分破裂,染色质散乱甚至溢出,后主体部或前部胞壁加厚、膜表面皱缩、底部凹陷,顶体部局部受损,细胞质带囊泡化,双层膜肿胀,膜间腔增大。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 精子 超微结构 遗传失活
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凡纳滨对虾胚胎发育进程及诱导染色体加倍时间确定 预览 被引量:2
14
作者 张彬 +3 位作者 熊建华 谢达祥 赵永贞 陈晓汉 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期664-670,共7页
[目的]了解凡纳滨对虾胚胎发育的时序及特征,为其雌核发育诱导中染色体加倍最佳操作窗口的确定及人工苗种生产提供参考依据.[方法]以人工培育成熟凡纳滨对虾“桂海1号”的受精卵为研究对象,观察并描述不同水温下卵子从产出受精至幼体孵... [目的]了解凡纳滨对虾胚胎发育的时序及特征,为其雌核发育诱导中染色体加倍最佳操作窗口的确定及人工苗种生产提供参考依据.[方法]以人工培育成熟凡纳滨对虾“桂海1号”的受精卵为研究对象,观察并描述不同水温下卵子从产出受精至幼体孵化出膜的整个胚胎发育过程.[结果]根据凡纳滨对虾胚胎发育的形态特征变化,可分为7个阶段:受精卵期、卵裂期、囊胚期、原肠期、肢芽期、膜内无节幼体期和出膜幼体期.凡纳滨对虾受精卵在水温30.5℃、盐度28.6‰的条件下,整个胚胎发育过程需11.5~11.8 h.水温变化对凡纳滨对虾受精卵极体的排出和孵化时间有明显影响,水温每下降1℃,孵化时间需增加0.6h;在28.0~30.5℃的水温范围内,受精卵第一极体释放时间为7~13 min,第二极体释放时间为8~14 min,整个胚胎发育过程需11.5~13.0 h.其中,在30.5℃的水温条件下,第一极体释放的时间为7~9 min,第二极体释放的时间为8~10 min,即在水温30.5℃、盐度28.6‰的条件下,凡纳滨对虾受精卵染色体加倍诱导的最佳时间在卵子受精后8~10 min.[结论]在确保凡纳滨对虾受精卵正常发育的前提下,适当调低培育水温能延迟胚胎发育速度,为人工诱导受精卵染色体加倍创造较充足的操作窗口期.此外,受精卵是否均等分裂是判断凡纳滨对虾卵子受精与否的重要标准. 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 受精卵 胚胎发育 染色体加倍 水温
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基于卵黄蛋白原基因表达的水丝蚓促熟南美白对虾研究
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作者 彭金霞 胡睿宇 +5 位作者 陈晓汉 蒋小珍 李咏梅 陈秀荔 蒋伟明 《水生态学杂志》 北大核心 2014年第2期74-79,共6页
针对传统海产亲虾饵料易感染或携带与对虾共患病毒,给育种和苗种繁育工作带来巨大生物安全隐患的问题,以淡水品种水丝蚓作为替代饵料进行南美白对虾亲虾催熟试验,并以卵黄蛋白原基因的表达水平变化验证饵料的催熟效果。设水丝蚓、水丝... 针对传统海产亲虾饵料易感染或携带与对虾共患病毒,给育种和苗种繁育工作带来巨大生物安全隐患的问题,以淡水品种水丝蚓作为替代饵料进行南美白对虾亲虾催熟试验,并以卵黄蛋白原基因的表达水平变化验证饵料的催熟效果。设水丝蚓、水丝蚓组合饵料、商业亲虾饲料及传统沙蚕组合饵料等4个饵料组合,分别投喂南美白对虾后备亲虾,测定繁殖性能相关参数,并通过荧光定量PCR技术对各亲虾肝胰腺和卵巢中VTG的表达水平的变化进行了追踪研究。结果显示,水丝蚓组的性腺增重最高,达1 475%,连续产卵率最大,平均为72.08%,与传统沙蚕组合饵料组无显著差异性(P〉0.05)。南美白对虾肝胰腺和卵巢组织中均存在VTG mRNA,在肝胰腺和卵巢中均呈先上升后下降的表达模式;VTG mRNA的表达量能够一定程度上反映对虾的繁殖性能,有希望发展成为亲虾繁殖性能选育指标;水丝蚓在促进亲虾性腺发育方面效果较传统沙蚕饵料组合好,在改善亲虾产卵效果方面基本与沙蚕组合相当,可作为沙蚕替代饵料用于南美白对虾的亲虾强化培育和催熟。 展开更多
关键词 卵黄蛋白原 基因表达 促熟 南美白对虾 水丝蚓
凡纳滨对虾人工授精技术初步研究 预览
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作者 张彬 +4 位作者 陈晓汉 熊建华 赵永贞 杨彦豪 谢达祥 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期489-493,共5页
【目的】筛选出有效的凡纳滨对虾人工授精方法,为后续的雌核发育诱导研究奠定基础。【方法】以受精率和幼体孵化率为考核指标,探讨外体精卵结合授精法、精荚移植法、精液移植法等不同人工授精技术对凡纳滨对虾繁育效果的影响。【结果... 【目的】筛选出有效的凡纳滨对虾人工授精方法,为后续的雌核发育诱导研究奠定基础。【方法】以受精率和幼体孵化率为考核指标,探讨外体精卵结合授精法、精荚移植法、精液移植法等不同人工授精技术对凡纳滨对虾繁育效果的影响。【结果】体外精卵结合授精法在各处理组均无幼体成功孵出,但在精子密度为2&#215;107个/L和卵子密度为300枚/L,且在卵排出1 min内完成授精操作时,可获得相对较高的受精率(6.67%)。在精液移植法中,发现精荚在8℃恒温条件下保存3h内进行授精操作,仍可获得一定的受精率和幼体孵化率,超过3h后则无法实现受精;精荚保存温度以8-16℃为宜,保存温度升至25℃时则无法实现受精。3种人工授精技术中,以精液移植法的受精率和幼体孵化率最高,分别为52.33%和12.35%,其次是精荚移植法,体外精卵结合授精法的效果最差,无幼体孵出。【结论】精液移植法是凡纳滨对虾最有效的人工授精方法,但精荚保存时间不宜超过3 h,且应在雌虾排卵后1-2 min完成挤精荚和网搓释放精子溶液,同时可添加预先收集浓缩制备好的卵水溶液,以提高凡纳滨对虾的人工授精效率。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 精卵结合授精法 精荚移植法 精液移植法 受精率 幼体孵化率
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南海区卵形鲳鲹遗传多样性的研究 预览 被引量:3
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作者 赵永贞 陈秀荔 +5 位作者 李咏梅 彭敏 杨春玲 彭金霞 陈晓汉 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第4期1786-1790,共5页
为研究南海区4个不同地理位置卵形鲳鲹种群(QZ、ZJ、BH、HN)的遗传多样性.利用35对可扩增出特异性条带的引物对卵形鲳鲹4个不同地理种群进行遗传多样性分析,筛选出10对扩增效果比较好的引物,其中7对引物具有多态性.7个微卫星多态位点... 为研究南海区4个不同地理位置卵形鲳鲹种群(QZ、ZJ、BH、HN)的遗传多样性.利用35对可扩增出特异性条带的引物对卵形鲳鲹4个不同地理种群进行遗传多样性分析,筛选出10对扩增效果比较好的引物,其中7对引物具有多态性.7个微卫星多态位点中,一共扩增出21个等位基因;多态信息含量为0.2896~ 0.6914,且处于中度到高度多态,表明这些引物可作为卵形鲳鲹遗传多样性分析的有效微卫星引物;4个群体的平均期望杂合度在0.4811~0.6135,北海群体的平均期望杂合度小于0.5,表明北海卵形鲳鲹群体的遗传多样性较低.用Popgene32软件计算出4个种群卵形鲳鲹的标准遗传距离和相似性系数,并构建聚类树,发现湛江卵形鲳鲹群体和海南群体遗传相似性系数最大,遗传关系最近. 展开更多
关键词 卵形鲳鲹 微卫星分子标记 遗传多样性
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凡纳滨对虾精液制备及精子质量评价的初步研究 预览
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作者 张彬 +3 位作者 熊建华 陈晓汉 赵永贞 谢达祥 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第6期2700-2705,共6页
研究胰酶消化法、网搓法和机械匀浆法等3种方法制备凡纳滨对虾精荚获得游离精子的效果,以每个精荚获得的精子数量和畸形精子比例作为评判标准。数据显示,网搓法和胰酶消化法获得的精子数量较高,分别为21.10×10^6和20.16×10^6... 研究胰酶消化法、网搓法和机械匀浆法等3种方法制备凡纳滨对虾精荚获得游离精子的效果,以每个精荚获得的精子数量和畸形精子比例作为评判标准。数据显示,网搓法和胰酶消化法获得的精子数量较高,分别为21.10×10^6和20.16×10^6个,两者无明显差异,均显著高于机械匀浆法,且机械匀浆法的精子畸形率最高,为42.83%,其次是胰酶消化法,为26.83%,网搓法的精子畸形率最低,为17.67%。结果表明,网搓法获得游离精子的方法明显优于胰酶消化法和机械匀浆法,且操作简便。探讨了不同饵料、精荚体质量和着生部位对凡纳滨对虾雄虾成熟精荚中精子质量的影响。结果表明,鲜活饵料组的精荚体质量(〉53mg)明显大于商品饲料组(41.93 mg);鲜活饵料组的精子数量(20.57×10^6)与商品亲虾料组(21.46×10^6)相当,两者无差异,而交配脱落精荚组的精子数量最低,仅为4.90×10^6;但商品饲料组的精子畸形率最高(17.67%),显著高于鲜活饵料组(5.33%)。精荚体质量对精子数量影响不明显,但对精子畸形率影响显著,大于60 mg的畸形率最高(23.33%),40~60 mg范围内的精子畸形率最低,仅为5.33%。精荚着生部位对精荚体质量、精子数量和精子畸形率均无明显影响。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 精液制备 精子质量评价 精荚
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凡纳滨对虾酚氧化酶原激活因子基因的克隆及表达分析 预览 被引量:2
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作者 赵永贞 陈秀荔 +7 位作者 曾地刚 杨春玲 彭敏 何苹萍 李咏梅 彭金霞 陈晓汉 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1068-1078,共11页
为研究酚氧化酶原激活因子(prophenoloxidase-activating factor,PPAF)在凡纳滨对虾感染传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)过程中所起的免疫作用,实验采用逆转录聚合酶链式反应和cDNA末端快速扩增技术克隆了凡纳滨对虾PPAF基因... 为研究酚氧化酶原激活因子(prophenoloxidase-activating factor,PPAF)在凡纳滨对虾感染传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)过程中所起的免疫作用,实验采用逆转录聚合酶链式反应和cDNA末端快速扩增技术克隆了凡纳滨对虾PPAF基因的全长cDNA序列,并通过实时荧光定量PCR技术分析了该基因在正常凡纳滨对虾和感染IHHNV凡纳滨对虾不同组织的表达情况。结果显示,克隆获得了1 986 bp凡纳滨对虾PPAF基因cDNA全长序列(GenBank登录号JQ684529),其中含有一个1 629 bp开放阅读框(ORF),两翼分别存在21 bp(5’端)和336 bp(3’端)的非翻译区。该基因的开放阅读框共编码542个氨基酸,氨基酸序列269~517处存在功能结构域——丝氨酸蛋白酶结构域,氨基酸序列494~502区域存在一个ALPHA-2巨球型免疫蛋白功能位点,316~321区域有一个组氨酸酶活性位点;定量PCR分析发现,该基因无论在正常对虾还是感染IHHNV对虾的心脏、肝胰腺、肠、胃和肌肉中的表达量均较低,在血液和鳃腺中的表达量明显高于其他组织,但感染IHHNV对虾不同组织中PPAF基因的表达量均低于正常对虾相应组织中的表达量。定量检测PPAF基因在对虾鳃腺组织中的表达情况显示,对虾感染IHHNV后,PPAF基因的表达量急剧降低,3 h时至最低,之后表达量逐渐上升,48h时达最高值。研究表明,IHHNV可抑制PPAF基因的表达,因而抑制酚氧化酶原免疫系统的有效激活,或是其感染对虾并在对虾组织内增殖的原因之一。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 酚氧化酶原激活因子(PPAF) 传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV) 克隆
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凡纳滨对虾HSP10基因序列与低温表达分析 预览 被引量:2
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作者 彭金霞 +3 位作者 殷勤 蒋小珍 黎铭 陈晓汉 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期838-843,共6页
【目的】克隆分析凡纳滨对虾HSPIO~因,为研究其在寒冷耐受过程中发挥调控功能提供参考依据。【方法】搜索EST库获得凡纳滨对虾HSPIO~因序列,再通过RACE—PCR扩增获得凡纳滨对虾HSP10基因cDNA全长序列,对其进行生物信息学分析,并通... 【目的】克隆分析凡纳滨对虾HSPIO~因,为研究其在寒冷耐受过程中发挥调控功能提供参考依据。【方法】搜索EST库获得凡纳滨对虾HSPIO~因序列,再通过RACE—PCR扩增获得凡纳滨对虾HSP10基因cDNA全长序列,对其进行生物信息学分析,并通过荧光定量PCR分析HSPIO基因的组织表达及低温胁迫下表达量的变化。【结果】凡纳滨对虾HSP10基因cDNA全长720bp,包含306bp的开放阅读框,编码102个氨基酸。以各物种的HSP10蛋白序列构建系统进化树,能较好反映各物种间的进化关系。荧光定量PCR分析结果显示,凡纳滨对虾HSPIOmRNA在各组织中呈遍在表达,其中以肌肉中的表达量最高。低温表达谱分析结果显示,凡纳滨对虾HSPIOmRNA在低温处理凡纳滨对虾的各组织中均呈下调表达,当处理温度降至13℃,其在肝胰腺中表达量降至最低。【结论】凡纳滨对虾HSP10在结构和进化上较保守,其mRNA表达量在低温胁迫下呈下降趋势,可能在寒冷耐受过程中发挥负调控作用。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 热休克蛋白 HSP10基因 低温 表达量 荧光定量PCR
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