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AFLP在分子生物学研究中的应用 被引量:19
1
作者 郭勇 《生物技术通报》 CAS CSCD 2001年第2期 22-24,36,共4页
扩增片段长度多态性(AFLP)可靠性强,多态检出率高,因而被认为是最有效的DNA指纹分析技术。AFLP已广泛应用于分类学、病理学、种群遗传学、DNA指纹分析的研究和建立数量性状基因图谱,成为最主要的遗传标记。介绍了AFLP的原理、影响... 扩增片段长度多态性(AFLP)可靠性强,多态检出率高,因而被认为是最有效的DNA指纹分析技术。AFLP已广泛应用于分类学、病理学、种群遗传学、DNA指纹分析的研究和建立数量性状基因图谱,成为最主要的遗传标记。介绍了AFLP的原理、影响因素及其在分子生物学研究中的应用。 展开更多
关键词 分子标记 指纹分析 AFLP 分子生物学研究 应用
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鼠李糖脂生物表面活性剂的研究进展 预览 被引量:25
2
作者 吴虹 汪薇 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期 148-152,共5页
鼠李糖脂是一种重要的生物表面活性剂。综述了鼠李糖脂生物表面活性剂的化学结构、特性、生理学功能及其发酵生产,特别讨论了利用廉价原料——工农业的废物,如植物油废渣等来生产鼠李糖脂,其不仅可降低生产成本,还能减少工农业废渣... 鼠李糖脂是一种重要的生物表面活性剂。综述了鼠李糖脂生物表面活性剂的化学结构、特性、生理学功能及其发酵生产,特别讨论了利用廉价原料——工农业的废物,如植物油废渣等来生产鼠李糖脂,其不仅可降低生产成本,还能减少工农业废渣对环境的污染,降低其处理费用。 展开更多
关键词 生物表面活性剂 鼠李糖脂 铜绿假单胞菌
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免疫检测技术的研究进展 预览 被引量:10
3
作者 林影 叶茂 +1 位作者 吴晓英 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期 117-120,共4页
综述了近几年来出现的免疫检测技术的新方法,简要介绍了它们的原理、特点及其应用,并做出相应的比较。免疫检测技术是基于抗体抗原反应的原理对待测物进行定量定性分析的检测方法,具有特异性强、灵敏度高、简便等优点,是现代生命科学的... 综述了近几年来出现的免疫检测技术的新方法,简要介绍了它们的原理、特点及其应用,并做出相应的比较。免疫检测技术是基于抗体抗原反应的原理对待测物进行定量定性分析的检测方法,具有特异性强、灵敏度高、简便等优点,是现代生命科学的重要研究手段,在生物分析检测领域有着广泛的应用前景。此外,展望了免疫检测技术的发展方向,以期为有关的科研工作者提供参考。 展开更多
关键词 免疫检测技术 分子印迹 流动注射免疫 免疫传感器 脂质体 多组分
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生物表面活性剂的生产与应用 预览 被引量:13
4
作者 任昌琼 林影 《中国工程科学》 2009年第4期 26-30,共5页
生物表面活性剂主要由微生物发酵和酶催化下合成,具有表面活性剂基本结构与性质的物质,其除了具有化学表面活性剂的特点外,还具有生物兼容性高、安全无毒性、可被生物降解、不会对环境造成不利影响等优点。随着环保意识的增强和食品... 生物表面活性剂主要由微生物发酵和酶催化下合成,具有表面活性剂基本结构与性质的物质,其除了具有化学表面活性剂的特点外,还具有生物兼容性高、安全无毒性、可被生物降解、不会对环境造成不利影响等优点。随着环保意识的增强和食品安全级别的提高,生物表面活性剂开始应用于食品、医药、化妆品、洗涤剂和石油化工等领域,研究开发各种高效、低成本的生物表面活性剂生产技术成为生物化工的研究热点。 展开更多
关键词 生物表面活性剂 微生物选育 酶催化 生物兼容性 生物降解
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南极假丝酵母脂肪酶B的酿酒酵母表面展示及其催化己酸乙酯的合成 预览 被引量:15
5
作者 潘志友 +1 位作者 林影 郑穗平 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期 673-678,共6页
从南极假丝酵母(Candida antarctica)基因组克隆得到南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica Lipase B,CALB)全基因片段,利用连接肽celA Linker将CALB与酿酒酵母细胞表面展示蛋白α-凝集素的C端连接融合,构建表面展示载体pICAS-... 从南极假丝酵母(Candida antarctica)基因组克隆得到南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica Lipase B,CALB)全基因片段,利用连接肽celA Linker将CALB与酿酒酵母细胞表面展示蛋白α-凝集素的C端连接融合,构建表面展示载体pICAS-celAL-CALB,转化酵母后获得重组酵母菌Saccharomyces cerevisiae pICAS-celAL-CALB。该重组酵母菌经葡萄糖诱导表达及分析,表明CALB已在酿酒酵母细胞表面成功展示,水解活力达26.26u/(g·dry cell)。重组酵母菌经冻干能有效地实现在非水相中全细胞催化己酸和乙醇酯化合成己酸乙酯。反应物己酸与乙醇的摩尔比为1:1.25,己酸乙酯的产率为98.0%,具有较好的操作稳定性。 展开更多
关键词 酵母表面展示 南极假丝酵母脂肪酶B 全细胞催化 己酸乙酯
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医用生物蛋白胶及其主体成分纤维蛋白原的免疫原性研究 预览 被引量:16
6
作者 朱彩云 +3 位作者 王小宁 吕建新 黄星 林影 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期,共5页
研究医用生物蛋白胶及其主体成分纤维蛋白原的潜在免疫原性。采用SDS-PAGE电泳、Western blot分离确定主体胶成分中的纤维蛋白原蛋白,建立间接ELISA法检测抗体条件;新西兰白兔创伤实验及BALB/c小鼠实验考察医用生物蛋白胶及纤维蛋白原... 研究医用生物蛋白胶及其主体成分纤维蛋白原的潜在免疫原性。采用SDS-PAGE电泳、Western blot分离确定主体胶成分中的纤维蛋白原蛋白,建立间接ELISA法检测抗体条件;新西兰白兔创伤实验及BALB/c小鼠实验考察医用生物蛋白胶及纤维蛋白原的免疫原性。结果表明,生物蛋白胶主体成分以0.5μg/ml包被时,可有效检测抗纤维蛋白原抗体。新西兰白兔创伤实验中,实验组兔血清1周后出现抗体,2周后抗体水平明显升高,6周后抗体水平下降,呈先升后降的动态变化趋势;小鼠实验中,NBT试验未发现阳性中性粒细胞,MTT检测到T细胞呈现弱增殖能力。研究表明,医用生物蛋白胶主体胶成分中的纤维蛋白原在兔出现一过性抗体,医用生物蛋白胶对小鼠未表现出明显的免疫原性。 展开更多
关键词 医用生物蛋白胶 纤维蛋白原抗体 免疫原性
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黑曲霉发酵产酶研究进展 预览 被引量:14
7
作者 张熙 《化学与生物工程》 CAS 2016年第1期13-16,共4页
黑曲霉(Aspergillus niger)是曲霉属真菌中的常见种,它生长旺盛、发酵周期短、不产生毒素,是美国FDA认证安全菌种(GRAS)之一,也是重要的酶制剂生产菌种。综述了黑曲霉产纤维素酶、木聚糖酶、蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶的研究进展,并展... 黑曲霉(Aspergillus niger)是曲霉属真菌中的常见种,它生长旺盛、发酵周期短、不产生毒素,是美国FDA认证安全菌种(GRAS)之一,也是重要的酶制剂生产菌种。综述了黑曲霉产纤维素酶、木聚糖酶、蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶的研究进展,并展望了其广阔的应用前景。 展开更多
关键词 黑曲霉 发酵产酶
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生物制药工艺学课程建设的研究与实践 预览 被引量:12
8
作者 吴晓英 +1 位作者 范一文 杨汝德 《化工高等教育》 2009年第2期 28-30,共3页
生物制药工艺学是制药工程专业的一门主要的专业理论课,在该课程建设的研究和探索中,笔者进行了包括教学内容、多媒体课件、课程网站、实践教学体系、教学方法、考试模式和成绩评价体系等多方面的改革和建设,取得了预期的成果。
关键词 生物制药工艺学 课程建设 制药工程专业 专业理论课
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米黑根毛霉脂肪酶基因在毕赤酵母中的高效表达 被引量:10
9
作者 徐苏炜 林影 +2 位作者 振林 梁书利 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期 10-14,共5页
脂肪酶是主要工业用酶制剂之一,在食品、洗涤剂和制药等领域广泛应用。将编码米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)脂肪酶RML的基因克隆到pPIC9K载体中,构建了分泌型表达载体pPIC9K-RML,载体经线性化后转化Pichia pastoris GS115,G418... 脂肪酶是主要工业用酶制剂之一,在食品、洗涤剂和制药等领域广泛应用。将编码米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)脂肪酶RML的基因克隆到pPIC9K载体中,构建了分泌型表达载体pPIC9K-RML,载体经线性化后转化Pichia pastoris GS115,G418梯度筛选获得了分泌表达RML的重组毕赤酵母工程菌,SDS-PAGE分析显示表达的脂肪酶分子量大小与预期一致。初步研究表明,重组脂肪酶最适温度为40℃,最适pH值为8.0,以橄榄油为底物时,发酵上清液酶活最大可达102U/mL,表明构建的重组毕赤酵母工程菌具有较好的工业化生产潜力。 展开更多
关键词 米黑根毛霉 脂肪酶 毕赤酵母 分泌表达
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酿酒酵母表面展示南极假丝酵母脂肪酶B的酶学性质研究 预览 被引量:8
10
作者 黄登峰 潘志友 +2 位作者 林影 郑穗平 《现代食品科技》 EI CAS 2008年第7期 627-630,共4页
本文对酿酒酵母表面展示南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)的一般酶学性质进行研究,得出如下结论:酵母表面展示CALB在碱性条件下具有很好的稳定性和水解活性。其水解对硝基苯酚酯的最适反应pH值范围是8.0-8... 本文对酿酒酵母表面展示南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)的一般酶学性质进行研究,得出如下结论:酵母表面展示CALB在碱性条件下具有很好的稳定性和水解活性。其水解对硝基苯酚酯的最适反应pH值范围是8.0-8.5,与游离的CALB商品酶相比,向碱性条件偏移。最适反应温度范围是40-45℃。最适反应底物为对硝基苯酚丁酸酯,表现出极为明显的底物特异性。Ca^2+、Mg^2+对其有明显的激活作用。K^+对其有微弱的激活作用。而Co^2+、Cu^2+对其有明显的抑制作用。本研究为酵母表面展示脂肪酶的应用研究奠定理论基础。 展开更多
关键词 酵母表面展示 南极假丝酵母脂肪酶B 全细胞催化 酶学性质
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酵母细胞表面展示系统的研究进展及其应用 预览 被引量:8
11
作者 叶波 林影 《工业微生物》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期 53-58,共6页
酵母表达体系不但有原核表达体系的特点,同时具有真核细胞翻译后蛋白加工修饰的过程,因此,以酵母为基础的表面展示体系在诸多展示系统中有独特的优势。将酶,抗原,抗体和六聚组氨酸等不同蛋白和多肽展示在酵母细胞表面,可实现各种... 酵母表达体系不但有原核表达体系的特点,同时具有真核细胞翻译后蛋白加工修饰的过程,因此,以酵母为基础的表面展示体系在诸多展示系统中有独特的优势。将酶,抗原,抗体和六聚组氨酸等不同蛋白和多肽展示在酵母细胞表面,可实现各种各样的用途。本文主要概述了酵母细胞展示的理论基础、展示体系类型及应用研究的进展。 展开更多
关键词 酿酒酵母 表面展示 GPI 凝集素 絮凝素
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枯草杆菌纤溶酶基因的克隆及表达 被引量:7
12
作者 罗文华 郭勇 《华南理工大学学报:自然科学版》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第11期 115-119,共5页
为了提高豆豉纤溶酶(DFE)的表达产量,采用PCR方法从高纤溶活性的枯草芽孢杆菌DC12的基因组中扩增获得DFE基因,将含有启动子至3’非翻译区的全长1400bp基因插入大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体pBE3,构建了DFE基因的表达质粒,化学转化枯... 为了提高豆豉纤溶酶(DFE)的表达产量,采用PCR方法从高纤溶活性的枯草芽孢杆菌DC12的基因组中扩增获得DFE基因,将含有启动子至3’非翻译区的全长1400bp基因插入大肠杆菌-枯草杆菌穿梭载体pBE3,构建了DFE基因的表达质粒,化学转化枯草杆菌WB800获得了DFE的重组表达菌.试验结果表明:DFE基因在自身启动子驱动下,在蛋白酶缺陷型的枯草杆菌中获得了高活性的分泌表达;重组表达菌株培养30h后,培养物上清液中的纤溶酶活性最高可达690U/mL. 展开更多
关键词 豆豉纤溶酶 枯草杆菌 基因克隆 表达
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豆豉纤溶酶在枯草杆菌WB800中的高水平表达 预览 被引量:5
13
作者 罗文华 郭勇 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期 565-569,共5页
一个来源于豆豉产生菌DC12的新的纤溶酶基因序列被克隆测序.为了实现在枯草杆菌中高水平表达豆豉纤溶酶,将来源于枯草杆菌168的重叠启动子P43序列以及转录终止信号序列通过重叠延伸融合,将融合序列克隆到大肠杆菌一枯草杆菌穿梭载体p... 一个来源于豆豉产生菌DC12的新的纤溶酶基因序列被克隆测序.为了实现在枯草杆菌中高水平表达豆豉纤溶酶,将来源于枯草杆菌168的重叠启动子P43序列以及转录终止信号序列通过重叠延伸融合,将融合序列克隆到大肠杆菌一枯草杆菌穿梭载体pBE3中,构建了pBEP43载体.将豆豉纤溶酶基因插入到载体pBEP43后转化枯草杆菌WB800.结果表明,在P43启动子驱动下,豆豉纤溶酶基因在重组菌中的对数生长期和平衡期均获得了表达且分泌到培养基中.重组菌经培养后上清液中的纤溶酶活性最高达1270U/mL,是豆豉纤溶酶基因在自身启动子驱动下表达量的1.87倍和野生菌株枯草杆菌DC12表达量的4.1倍.图5参16 展开更多
关键词 豆豉纤溶酶 枯草杆菌 启动子P43 重叠PCR 基因表达
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展示南极假丝酵母脂肪酶B的毕赤酵母全细胞催化合成短链芳香酯 被引量:7
14
作者 金子 林影 +2 位作者 黄登峰 苏国栋 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1927-1932,共6页
展示酶的酵母细胞作为全细胞催化剂,既具有固定化酶的优点,又有制备简单、成本较低的特点。本研究将细胞表面展示南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)的重组毕赤酵母用于非水相中催化合成短链芳香酯,通过滴定和气... 展示酶的酵母细胞作为全细胞催化剂,既具有固定化酶的优点,又有制备简单、成本较低的特点。本研究将细胞表面展示南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)的重组毕赤酵母用于非水相中催化合成短链芳香酯,通过滴定和气相色谱的方法测定底物酸的转化率,从底物的碳链长度、醇的结构、酵母冻干粉的添加量、底物浓度及底物的酸醇摩尔比等方面考察了展示CALB的毕赤酵母全细胞催化合成短链芳香酯的特性。研究结果表明:该全细胞催化剂可催化C10以下的酸和醇直接酯化合成多种短链芳香酯,酸的转化率达到90%以上;其中己酸和乙醇为酶的最适底物;酵母冻干粉的添加量20g/L(306.0U/g-drycell)、己酸浓度0.8mol/L、酸醇摩尔比1:1.1是合成己酸乙酯的最佳条件。在此条件下反应1.5h,己酸的转化率达到97.3%。在现有的关于脂肪酶非水相催化合成短链芳香酯的报道中,该全细胞催化剂显示出较好的底物耐受性以及较高的催化反应速率。因此,展示CALB的毕赤酵母全细胞催化剂在合成短链芳香酯方面具有较大的商业化应用潜能。 展开更多
关键词 酵母表面展示 南极假丝酵母脂肪酶B 全细胞催化 短链芳香酯
低温诱导对毕赤酵母表达重组外源蛋白的影响 预览 被引量:7
15
作者 廖锡豪 陈明祥 +2 位作者 谢万勇 林影 《中国酿造》 CAS 2013年第2期9-12,共4页
毕赤酵母表达系统是近年发展较为突出的表达系统之一。大量研究表明,低温诱导在毕赤酵母发酵过程中对促进细胞物质及能量代谢,提高胞内醇氧化酶活力及能量水平,降低细胞死亡率及蛋白酶作用有明显影响;此外,外源蛋白表达过程中的聚... 毕赤酵母表达系统是近年发展较为突出的表达系统之一。大量研究表明,低温诱导在毕赤酵母发酵过程中对促进细胞物质及能量代谢,提高胞内醇氧化酶活力及能量水平,降低细胞死亡率及蛋白酶作用有明显影响;此外,外源蛋白表达过程中的聚集与降解作用也与诱导温度有关。该文从诱导温度角度对重组毕赤酵母表达外源蛋白的研究进展进行了综述。 展开更多
关键词 毕赤酵母 诱导温度 物质及能量代谢
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不同方式接种DNA疫苗免疫效果的比较 预览 被引量:3
16
作者 郭勇 +2 位作者 杨慧兰 王捷 杨传红 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期 245-248,共4页
DNA疫苗经基因枪和肌肉注射两种接种方式免疫小鼠,免疫组化检测gD抗原表达情况.全自动图像分析系统分析表达量,ELISA检测抗体滴度,病毒攻击考察保护效应,比较不同方式接种DNA疫苗的免疫效果.重组质粒pVAX-gD经基因枪接种与肌肉接种均能... DNA疫苗经基因枪和肌肉注射两种接种方式免疫小鼠,免疫组化检测gD抗原表达情况.全自动图像分析系统分析表达量,ELISA检测抗体滴度,病毒攻击考察保护效应,比较不同方式接种DNA疫苗的免疫效果.重组质粒pVAX-gD经基因枪接种与肌肉接种均能实现gD基因在肌肉细胞的表达,激发免疫动物体内的高滴度抗体,保护免疫动物免于HSV-2感染.研究表明基因枪接种要求的DNA疫苗剂量小,基因枪介导的免疫重复性高、效果好,更适合DNA疫苗接种. 展开更多
关键词 基因枪 肌肉接种 基因表达 抗体
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DNA疫苗经基因枪介导的免疫研究 被引量:2
17
作者 李杰生 +4 位作者 郭勇 杨慧兰 王捷 杨传红 詹纯利 《华南理工大学学报:自然科学版》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第3期 33-36,共4页
将基因枪介导的DNA疫苗用于小鼠腹部免疫,并用免疫组化法检测gD抗原在接种部位的表达,利用ELISA检测血清中的抗gD抗体,并采用病毒攻击检测DNA疫苗对动物的保护效果。结果表明,基因枪可有效地将DNA质粒运送至小鼠皮肤组织,DNA疫苗... 将基因枪介导的DNA疫苗用于小鼠腹部免疫,并用免疫组化法检测gD抗原在接种部位的表达,利用ELISA检测血清中的抗gD抗体,并采用病毒攻击检测DNA疫苗对动物的保护效果。结果表明,基因枪可有效地将DNA质粒运送至小鼠皮肤组织,DNA疫苗携带的抗原保护基因gD2糖蛋白能在真皮和肌肉组织中高效表达。同时,免疫小鼠体内产生高滴度的中和抗体,能有效抵抗HSV2病毒的攻击。 展开更多
关键词 基因枪 基因表达 抗体 DNA疫苗
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不同陈化期烤烟叶表细菌的多样性及发育分析 预览 被引量:6
18
作者 伍雪莹 梁书利 +2 位作者 陈小敏 林影 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第18期28-33,38共7页
为了全面了解陈化烟叶细菌多样性,以进一步挖掘其中的有益微生物,利用16S rRNA克隆文库测序分析技术,鉴定和比较了曲靖烟区陈化时间分别为24、36、48个月的烤烟烟叶上的细菌多样性。结果在陈化24、36、48个月的烟叶上分别鉴定得到55、60... 为了全面了解陈化烟叶细菌多样性,以进一步挖掘其中的有益微生物,利用16S rRNA克隆文库测序分析技术,鉴定和比较了曲靖烟区陈化时间分别为24、36、48个月的烤烟烟叶上的细菌多样性。结果在陈化24、36、48个月的烟叶上分别鉴定得到55、60、23个细菌的操作分类单元(OTU),其中肠杆菌科、假单胞菌科和黄杆菌科的细菌占优势。在不同陈化阶段,菌群的多样性和优势菌有所不同,烟叶上细菌的多样性在陈化后期逐渐减低。研究结果展示了烟叶陈化期间细菌的菌群结构和动态变化,发现了一些能够减少烟叶有害物质的细菌,是烟叶上的有益细菌筛选的重要参考。 展开更多
关键词 烟叶 细菌 16S-rRNA克隆文库 多样性 发育分析
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质粒DNA单次脾内注射制备单克隆抗体 预览 被引量:3
19
作者 郑泓 +1 位作者 林影 王小宁 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期 710-714,共5页
探索一种新的快捷有效DNA免疫制备单克隆抗体的方法,辅助实现构建高通量无蛋白纯化体系单克隆抗体制备和筛选。分别通过“重叠PCR”和“无模板PCR”在pVAX1真核载体中分别引入IL-2信号肽、IgGkappa链信号肽构建分泌型真核表达载体,将... 探索一种新的快捷有效DNA免疫制备单克隆抗体的方法,辅助实现构建高通量无蛋白纯化体系单克隆抗体制备和筛选。分别通过“重叠PCR”和“无模板PCR”在pVAX1真核载体中分别引入IL-2信号肽、IgGkappa链信号肽构建分泌型真核表达载体,将代表抗原基因的profilin1基因克隆到经改造带有信号肽基因的表达载体上,构建重组质粒pVAX—IL2-profl和pVAX-Igtc-profl,单次脾内注射重组质粒DNA免疫BALB/c小鼠。经过细胞融合、ELISA筛选,获得两株抗profilin1的单克隆抗体。单抗亚型分剐为IgM和IgG3。单次脾内质粒DNA免疫便捷有效,是制备单克隆抗体的有效方法。 展开更多
关键词 脾内DNA免疫 单克隆抗体 profilin 1
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毛细管电泳在食品添加剂检测中的应用 预览 被引量:6
20
作者 崔堂兵 +1 位作者 林小琼 吴虹 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期 237-241,共5页
毛细管电泳(CE)具有样品预处理简单、可同时分离测定多组分等优点,在食品分析中的应用日益广泛。综述了近年来毛细管电泳在一系列食品添加剂,包括色素、防腐剂、抗氧化剂、甜味剂等检测中的应用,重点是实际样品的分析。
关键词 毛细管电泳 食品添加剂 检测
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