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一种适于家蚕细胞激素研究的双荧光素酶报告基因系统的内参质粒的构建(英文) 被引量:1
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作者 刘红玲 林英 +6 位作者 沈关望 张海燕 吴金鑫 徐银莹 龙威 夏庆友 《生物工程学报》 CSCD 北大核心 2018年第10期1631-1641,共11页
双荧光素酶报告基因系统能够提供灵敏的读数,但该系统需要依赖组成型表达的内参对读数进行归一化。然而,大多数内参并不是在所有条件下都组成型表达。为此,文中建立了一个有效的方法制备适于家蚕细胞双荧光素酶报告基因系统的内参质粒... 双荧光素酶报告基因系统能够提供灵敏的读数,但该系统需要依赖组成型表达的内参对读数进行归一化。然而,大多数内参并不是在所有条件下都组成型表达。为此,文中建立了一个有效的方法制备适于家蚕细胞双荧光素酶报告基因系统的内参质粒。首先,突变BmV gP78启动子上的激素应答相关元件,获得了在家蚕细胞中稳定表达的组成型启动子BmV gP78M;然后,用BmV gP78M替换pRL-SV40质粒上的SV40启动子和嵌合内含子序列,成功构建了pRL-V gP78M内参质粒;最后,通过细胞转染实验证实pRL-V gP78M内参在家蚕细胞系中稳定表达,并且pRL-V gP78M内参的表达活性不受蜕皮激素、保幼激素及激素相关转录因子的影响。最终,获得了在家蚕细胞中稳定表达且表达量适中的内参质粒pRL-V gP78M。该内参可以有效地作为双荧光素酶报告基因系统的内参质粒用于家蚕细胞系中激素的研究。同时,该内参质粒的构建方法也为构建适于其他物种细胞系的双荧光素酶报告基因系统的内参质粒提供了参考。 展开更多
关键词 家蚕 双荧光素酶报告基因系统 内参质粒 激素 方法
不同地应力下TBM盘形滚刀破岩特性 预览 被引量:5
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作者 夏毅敏 吴才章 +3 位作者 丛国强 唐露 张魁 《中南大学学报:自然科学版》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第2期450-458,共9页
根据Mohr-Coulomb准则分析岩石强度与地应力的变化关系,对不同地应力下盘形滚刀破岩载荷模型进行修正;以锦屏二级水电站TBM掘进现场实测的数据为依据,建立有初始地应力和无初始地应力下盘形滚刀破岩仿真模型,并进行无初始应力滚刀破岩试... 根据Mohr-Coulomb准则分析岩石强度与地应力的变化关系,对不同地应力下盘形滚刀破岩载荷模型进行修正;以锦屏二级水电站TBM掘进现场实测的数据为依据,建立有初始地应力和无初始地应力下盘形滚刀破岩仿真模型,并进行无初始应力滚刀破岩试验,研究盘形滚刀破岩载荷特性及岩石破碎特征。研究结果表明:随着地应力的增大,三向力载荷增大;在各个贯入度下,初始应力为28~36 MPa时与0 MPa时相比,垂直力和滚动力的增加幅度较大,增大幅度可达到70%以上,侧向力增加幅度最小;随着初始地应力的增加,滚刀总破岩量减少,破岩能耗上升;三向力理论计算值与仿真值吻合较好,相对误差范围在10%~21%之间;无初始应力下的破岩试验在一定程度上验证力学模型和仿真结果的正确性。 展开更多
关键词 地应力 盘形滚刀 力学模型 贯入度 三向力载荷
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产D-乳酸重组大肠杆菌ptsG基因的敲除及其混合糖同步发酵 预览 被引量:3
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作者 丁小云 +3 位作者 王永泽 赵锦芳 王金华 赵筱 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期221-226,共6页
为构建能够同时高效利用五碳糖和六碳糖发酵产D-乳酸的重组大肠杆菌工程菌,以能高效利用五碳糖发酵产D-乳酸的大肠杆菌工程菌E.coli JH13为出发菌株,通过Red同源重组技术敲除葡萄糖跨膜转运基因pts G。实验结果表明,pts G缺陷菌株E.coli... 为构建能够同时高效利用五碳糖和六碳糖发酵产D-乳酸的重组大肠杆菌工程菌,以能高效利用五碳糖发酵产D-乳酸的大肠杆菌工程菌E.coli JH13为出发菌株,通过Red同源重组技术敲除葡萄糖跨膜转运基因pts G。实验结果表明,pts G缺陷菌株E.coli JH15在10%混合糖(5%葡萄糖和5%木糖)培养基中发酵,可同时利用五碳糖和六碳糖以完成发酵;而对照菌葡萄糖消耗完才利用木糖,发酵结束还有18 g/L木糖残留;JH15乳酸产量为83.04 g/L,相比于对照菌株提高了25.86%;在稻草秸秆水解液中发酵,JH15同时利用葡萄糖、木糖和L-阿拉伯糖,乳酸产量为25.15 g/L,转化率为86.42%。JH15作为能利用混合糖同步发酵产D-乳酸的大肠杆菌工程菌,它的成功构建为利用廉价的木质纤维素水解物为原料发酵生产D-乳酸提供参考依据。 展开更多
关键词 重组大肠杆菌工程菌 D-乳酸 ptsG基因 RED同源重组 混合糖
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高能密度离合器接合过程的动力学特性 预览
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作者 朱湘衡 +2 位作者 胡兴怀 曹飞 杨添任 《振动.测试与诊断》 EI CSCD 北大核心 2013年第S2期114-120,223共8页
以某型高能密度离合器为研究对象,对离合器接合过程的动力学特性进行分析研究,建立了离合器接合过程的动力学模型。利用ADAMS软件建立了高能密度离合器的仿真模型,研究接合过程中接合面动摩擦系数、驱动力矩、阻力矩以及接触面正压力... 以某型高能密度离合器为研究对象,对离合器接合过程的动力学特性进行分析研究,建立了离合器接合过程的动力学模型。利用ADAMS软件建立了高能密度离合器的仿真模型,研究接合过程中接合面动摩擦系数、驱动力矩、阻力矩以及接触面正压力对接合时间以及接合主从动盘角速度的影响规律,分析接触面特征点面压的变化规律。研究结果表明:接合时间与接触面正压力以及动摩擦系数成反比,驱动力矩和阻力矩决定接合最终的角速度;压力在对偶钢片和摩擦片接触面上的分布受时间和位置双重因素的影响,提取4个互成90°的特征点,分析其压力随时间的变化,4个点处的压力都有明显的周期性波动,离合器在轴向方向大致以0.05s为周期振动。 展开更多
关键词 离合器 动力学 仿真 接触力 振动
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高速动车组制动闸片温度与应力分布规律研究 预览 被引量:12
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作者 夏毅敏 吴元 +2 位作者 卞章括 张振华 《机械科学与技术》 CSCD 北大核心 2012年第9期1377-1383,共7页
高速动车组制动闸片的温度和应力分布,是影响动车安全运行的关键。基于传热学相关知识和有限元数值模拟技术,考虑了弹性模量、泊松比、导热系数和比热容等材料参数随温度变化的影响,确定了制动过程中闸片热载荷和换热系数的计算方法... 高速动车组制动闸片的温度和应力分布,是影响动车安全运行的关键。基于传热学相关知识和有限元数值模拟技术,考虑了弹性模量、泊松比、导热系数和比热容等材料参数随温度变化的影响,确定了制动过程中闸片热载荷和换热系数的计算方法,建立了闸片制动过程中的热传导模型,并利用ANSYS软件建立了闸片热一力耦合三维仿真模型。通过仿真得到了制动过程中闸片的温度场和应力场分布规律。仿真结果表明:制动62s后,闸片温度达到最大值535℃;制动75s后,闸片应力达到最大值333MPa。所研制的某型闸片符合工程要求。 展开更多
关键词 制动闸片 温度场 热力耦合分析 有限元
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基于东风二汽生产运作技术与物料控制管理的研究 预览
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作者 刘峙麟 吴桐 《大众商务:下半月》 2009年第10期 117-118,共2页
先进的生产运作技术与物料控制管理在现代企业运营中起着极其重要的作用,不仅能为企业带来最大化的经济效益,而且能充分提高企业的资源利用率。其实质是运用材料、机械设备、人,结合作业方法,使用检测手段,在适宜的环境条件下通过... 先进的生产运作技术与物料控制管理在现代企业运营中起着极其重要的作用,不仅能为企业带来最大化的经济效益,而且能充分提高企业的资源利用率。其实质是运用材料、机械设备、人,结合作业方法,使用检测手段,在适宜的环境条件下通过物料控制达成品质、质量、交期的统一。经过对东风(十堰)二汽商用车公司的产销运作管理研究后,我们找到了品质、质量、交期统一的方法。 展开更多
关键词 东风二汽 生产运作技术 物料控制管理
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基于PRO/E的凸轮机构仿真分析 预览 被引量:1
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作者 龙尚斌 段晓威 《大众商务:下半月》 2009年第10期 151-152,共2页
本文介绍了基于PRO/E4.0对凸轮实际模型的仿真运动和受力的运动分析方法,并阐述了具体的参数设定和测量要素的构建。通过运用PRO/E软件的机构运动模块进行了凸轮的实际模型模拟以及对结果进行输出,实现了对凸轮参数科学性的测试。
关键词 PRO/E 凸轮 仿真 测量
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小学语文教学中的创意法教育应用初探
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作者 《中华少年》 2017年第35期59-59,共1页
<正>创意法教育提出:'最差'的学生就是'最好'的学生,'最好'的学生在某一方面也可能是'最好'的学生,即学生无好差之分,要有效地提高小学生的语文素质,只有想方设法去激发学生的学习兴趣,尊重学生... <正>创意法教育提出:'最差'的学生就是'最好'的学生,'最好'的学生在某一方面也可能是'最好'的学生,即学生无好差之分,要有效地提高小学生的语文素质,只有想方设法去激发学生的学习兴趣,尊重学生的个性,因材施教,均衡发展,培养学生的自主学习能力,才能全面提高小学语文教学水平。本人根据自己几十年的教学经验,总结有如下几点:1从学生的生活例子引入,激发学生学习语文的兴趣 展开更多
用于细胞水平家蚕转录调控元件研究的简单基础启动子的构建 预览
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作者 刘红玲 +7 位作者 李凯荣 孟紫旺 王慧娟 沈关望 张宇靖 阮杨 林英 夏庆友 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期391-397,共7页
【目的】本研究致力于构建一种能够在家蚕Bombyx mori细胞水平稳定表达的简单基础启动子,从而更准确地反映单一转录调控元件对基因启动子活性的影响,为研究家蚕乃至其他昆虫的基因转录调控奠定基础。【方法】本研究在本课题组已报道的... 【目的】本研究致力于构建一种能够在家蚕Bombyx mori细胞水平稳定表达的简单基础启动子,从而更准确地反映单一转录调控元件对基因启动子活性的影响,为研究家蚕乃至其他昆虫的基因转录调控奠定基础。【方法】本研究在本课题组已报道的能在家蚕细胞中稳定表达且基本不含上游转录调控元件的BmVgP78M启动子的基础上,通过PCR技术在其上游添加一定长度的间隔序列和能够应答20-羟基蜕皮激素(20E)且增强启动子活性的BrC-Z2转录因子结合基序(BrC-Z2Element,BrC-Z2E);通过基因克隆技术构建细胞转染载体;通过细胞转染技术和双荧光素酶报告基因系统检测启动子活性的变化。【结果】通过在BmVgP78M启动子上游添加28bp间隔序列,成功构建了一个简单基础启动子,命名为VgP78ML,并证明其为可用于研究目标转录调控元件的简单基础启动子。经实验验证表明,该简单基础启动子不仅可以在家蚕细胞中稳定表达,且其本身活性不受20E及转录因子BrC-Z2的影响;当该启动子上游连接BrC-Z2E时,可以显著地应答20E及BrC-Z2转录因子,从而调控报告基因的表达。【结论】VgP78ML能够作为简单基础启动子应用于细胞水平对家蚕基因转录调控进行研究。同时,其构建方法也为其他物种构建研究转录调控的简单基础启动子提供了参考。 展开更多
关键词 家蚕 细胞 简单基础启动子 双荧光素酶报告基因系统 转录调控 转录元件
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