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治疗性人乳头瘤病毒16型疫苗的人参皂苷单体佐剂筛选研究
1
作者 高孟 高丽 +5 位作者 吴洁 陈刚 李剑波 周冬 罗永能 庄昉成 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期406-410,共5页
目的研究不同人参皂苷单体佐剂对治疗性人乳头瘤病毒16型(human papillomavirus type 16,HPV16)重组疫苗免疫效果的影响,筛选合适的人参皂苷单体作为候选佐剂。方法选择5种人参皂苷单体Rb1、Rh1-1、Rh1-2、Rg1、Rg3,分别与治疗性HPV16... 目的研究不同人参皂苷单体佐剂对治疗性人乳头瘤病毒16型(human papillomavirus type 16,HPV16)重组疫苗免疫效果的影响,筛选合适的人参皂苷单体作为候选佐剂。方法选择5种人参皂苷单体Rb1、Rh1-1、Rh1-2、Rg1、Rg3,分别与治疗性HPV16重组疫苗联合免疫C57BL/6小鼠,用酶联免疫斑点试验比较各组小鼠的特异性细胞免疫应答水平,同时比较这5种人参皂苷单体对治疗性HPV16重组疫苗抑制小鼠肿瘤生长的影响。结果人参皂苷单体Rg1、Rb1可以显著提高治疗性HPV16重组疫苗特异性细胞免疫应答(HPV+Rg1组vs HPV组:t=3.729,P=0.006;HPV+Rb1组vs HPV组:t=3.204,P=0.013),同时可以在小鼠特异性肿瘤模型建立4周时,有效抑制肿瘤的生长水平(HPV+Rg1组vs HPV组:t=2.318,P=0.032;HPV+Rb1组vs HPV组:t=2.258,P=0.037)。结论人参皂苷单体Rg1、Rb1能在C57BL/6小鼠中提高治疗性HPV16重组疫苗的特异性免疫效果,有望成为候选佐剂。 展开更多
关键词 人参皂苷 T细胞免疫 人乳头瘤病毒16 治疗性疫苗
重组柯萨奇病毒构建及其感染性研究
2
作者 周冬 高孟 +8 位作者 高丽 吴洁 杨宏宏 陈刚 高磊 姜云水 李剑波 李永学 庄昉成 《国际流行病学传染病学杂志》 CAS 2019年第2期93-98,共6页
目的纯化柯萨奇病毒(CV)-A6、CV-A16 cDNA,在此基础上将CV-A6-VP(结构蛋白)替换CV-A16-VP构建重组病毒pBM 16A-Re(CV-A16-CV-A6-VP),并研究其感染性,为CV-A6、CV-A16及重组疫苗的研发提供依据.方法提取CV-A6、CV-A16基因组RNA,经RT-PCR... 目的纯化柯萨奇病毒(CV)-A6、CV-A16 cDNA,在此基础上将CV-A6-VP(结构蛋白)替换CV-A16-VP构建重组病毒pBM 16A-Re(CV-A16-CV-A6-VP),并研究其感染性,为CV-A6、CV-A16及重组疫苗的研发提供依据.方法提取CV-A6、CV-A16基因组RNA,经RT-PCR得到基因组全长cDNA,PCR后纯化插入至pBM16A-TOPO载体,利用T7聚合酶系统将线性基因组cDNA体外转录得到病毒基因组RNA,纯化后转染Vero细胞,获得重组病毒Re,并对Re进行显微镜观察、基因测序、免疫荧光等方法检测鉴定其感染性.结果构建的CV-A6、CV-A16、Re经电泳鉴定可见约7 500 bp的条带.得到的pBM16A-CV-A6、pBM16A-CV-A16、pBM16A-Re经限制性内切酶双酶切鉴定,可见约7 500 bp的目的条带和约1 800 bp的载体条带.构建的克隆经全基因测序验证与理论序列完全一致.细胞形态学鉴定显示,CV-A16组可见典型肠道病毒所致的细胞病变,CV-A6及Re组则没有明显病变;RT-PCR鉴定也得出相同结果.结论成功构建重组CV-A6、CV-A16和重组病毒Re,重组CV-A16与母本野生型病毒增殖特性基本一致,重组病毒pBM16A-Re丧失细胞感染性. 展开更多
关键词 柯萨奇病毒感染 反向遗传技术 重组病毒 感染性
穿心莲提取物抗柯萨奇病毒A16型感染的体外研究
3
作者 姜慧芬 张丽红 +3 位作者 高丽 徐笑红 郑晓妍 罗永能 《中华临床感染病杂志》 2018年第1期42-46,共5页
目的观察穿心莲提取物对柯萨奇病毒A16型(CVA16)的体外抑制作用。方法采用CCK8法检测浓度为500.0、250.0、125.0、60.0、30.0、15.0、7.5和3.8 μg/mL的穿心莲提取物对非洲绿猴肾上皮细胞(Vero细胞)的毒性作用,用概率单位回归法计... 目的观察穿心莲提取物对柯萨奇病毒A16型(CVA16)的体外抑制作用。方法采用CCK8法检测浓度为500.0、250.0、125.0、60.0、30.0、15.0、7.5和3.8 μg/mL的穿心莲提取物对非洲绿猴肾上皮细胞(Vero细胞)的毒性作用,用概率单位回归法计算半数抑制浓度(IC50)。以利巴韦林(RBV)为药物对照,比较穿心莲提取物对CVA16感染Vero细胞的直接灭活病毒、阻断病毒吸附和抑制病毒复制作用,采用SPSS 24.0软件对数据进行分析。结果根据细胞毒性试验选取药物溶度均分别为15.0、7.5和3.8 μg/mL的穿心莲提取物和利巴韦林进行抗CVA16实验。穿心莲提取物与利巴韦林在3个浓度下对CVA16既无直接灭活作用,也无阻断病毒吸附作用(F=1.54、1.52和0.67、1.68,P值均〉0.05),两种药物在7.5和15.0 μg/mL时均能抑制CVA16在Vero细胞的复制(t=6.87、11.76和7.71、12.84,P〈0.05)。结论体外实验表明,穿心莲提取物可通过抑制CVA16在Vero细胞内的复制,实现抗病毒作用。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒感染 穿心莲属 致细胞病变 病毒 抗病毒作用
语文教学议环保自觉护绿美家乡
4
作者 高丽 《课程教材教学研究:教育研究》 2018年第11期27-28,共2页
环境问题不仅威胁着人类的身心健康,还成为吞噬经济成果的恶魔,影响着中国的可持续发展。在日益恶化的环境面前,人们越来越清楚地认识到环境教育的重要性。作为教师,应当担负起对少年儿童进行环境保护教育的职责,让孩子从小就了解人类... 环境问题不仅威胁着人类的身心健康,还成为吞噬经济成果的恶魔,影响着中国的可持续发展。在日益恶化的环境面前,人们越来越清楚地认识到环境教育的重要性。作为教师,应当担负起对少年儿童进行环境保护教育的职责,让孩子从小就了解人类环境的构成和环境问题的严重性,学习环境保护的法律法规,不断增强环境保护的意识,自觉履行保护环境的义务。 展开更多
关键词 语文教学 自觉 环境保护教育 环境问题 护绿 环保 人类环境 可持续发展
HMGB1对HPV16型重组腺病毒载体疫苗免疫效果的影响及机制研究 被引量:2
5
作者 陈刚 李剑波 +4 位作者 高孟 高丽 吴洁 姜云水 庄昉成 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 2017年第6期827-831,共5页
目的探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)分子与人乳头瘤病毒(HPV)16型E6E7重组腺病毒载体疫苗免疫效果的关系及机制。方法通过TC-1细胞移植诱导建立小鼠肿瘤模型,在接种HPV重组腺病毒载体疫苗的同时,给予注射HMGB1特异性拮抗剂HMGB1 A box... 目的探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)分子与人乳头瘤病毒(HPV)16型E6E7重组腺病毒载体疫苗免疫效果的关系及机制。方法通过TC-1细胞移植诱导建立小鼠肿瘤模型,在接种HPV重组腺病毒载体疫苗的同时,给予注射HMGB1特异性拮抗剂HMGB1 A box,开展肿瘤抑制试验、小鼠免疫状态观察、肿瘤相关信号检测等研究。结果 A box蛋白与疫苗联用,可显著降低模型小鼠HMGB1血清水平,抑制肿瘤组织中NF-?B的m RNA高表达,提高疫苗的抗肿瘤活性。同时,它还可减少IL-4、促进IFN-?产生,使体内免疫平衡由Th2向Th1偏移。和肿瘤模型对照组相比,在接种疫苗并注射A box蛋白后,由肿瘤引起的NF-?B、Bcl-2、c-IAP2、VEGF、MMP-9的表达提高、Bax表达降低均得到显著扭转。结论 HMGB1分子可以削弱HPV重组腺病毒载体疫苗的免疫效果,其机制可能是HMGB1在调节免疫平衡状态及控制肿瘤细胞的凋亡、浸润、转移等多层面均能参与并发挥重要作用。 展开更多
关键词 HMGB1蛋白质 乳头状瘤病毒疫苗 接种 影响 机制
禽流感病毒H7N9神经氨酸酶的优势线性B细胞抗原位点的预测及确定 被引量:1
6
作者 高孟 谢珲 +3 位作者 姜立民 高丽 倪红霞 罗永能 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2017年第4期287-290,共4页
目的 确定禽流感病毒H7N9神经氨酸酶的优势线性B细胞抗原位点.方法 利用生物信息学软件DNAStar中的Protean程序分析禽流感病毒H7N9神经氨酸酶氨基酸序列的亲水性、抗原性和表面可及性,计算不同区段上述指数的加权平均值,预测出潜在的优... 目的 确定禽流感病毒H7N9神经氨酸酶的优势线性B细胞抗原位点.方法 利用生物信息学软件DNAStar中的Protean程序分析禽流感病毒H7N9神经氨酸酶氨基酸序列的亲水性、抗原性和表面可及性,计算不同区段上述指数的加权平均值,预测出潜在的优势线性B细胞抗原位点并进行人工合成.利用多肽-酶联免疫吸附试验(多肽-ELISA)检测各预测片段与明确感染H7N9患者血清的反应性,同时以未感染H7N9的正常人血清作为阴性对照.结果 根据抗原性、亲水性和表面可及性指数均较高的特点,共预测出7个潜在的神经氨酸酶线性B细胞抗原位点,分别为A、B、C、D、E、F和G多肽-ELISA实验结果证实各预测表位均与H7N9患者血清发生阳性反应.结论 成功预测及确定了禽流感病毒H7N9神经氨酸酶优势线性B细胞抗原位点,为抗原分子特异性研究和抗体制备奠定了基础. 展开更多
关键词 流感病毒A型 线性B细胞抗原位点 多肽-酶联免疫吸附测定
逆转录-荧光实时定量PCR法快速测定肠道病毒71型病毒滴度
7
作者 李剑波 吴洁 +4 位作者 高丽 周康凤 毛卓玥 高孟 庄昉成 《国际流行病学传染病学杂志》 CAS 2017年第5期312-316,共5页
目的 建立一种肠道病毒71型(EV71)病毒滴度快速测定法.方法 以TCID50法测定的EV71病毒样品作为滴度检测参考品,建立EV71病毒滴度的逆转录-荧光实时定量PCR测定方法.通过滴度参考品和待测病毒样品的Ct值计算待测样品中的病毒滴度,并对... 目的 建立一种肠道病毒71型(EV71)病毒滴度快速测定法.方法 以TCID50法测定的EV71病毒样品作为滴度检测参考品,建立EV71病毒滴度的逆转录-荧光实时定量PCR测定方法.通过滴度参考品和待测病毒样品的Ct值计算待测样品中的病毒滴度,并对该检测法进行特异性、重复性验证.结果 所得检测方法可以用于EV71病毒滴度的快速检测.本测定法具有较好的线性,线性范围为lgTCID50 2.61-8.61,相关系数R2为0.9881;特异性和重复性较好,与TCID50法检测之间具有较好的一致性,变异系数(CV)<5%.结论 所建立的逆转录-荧光实时定量PCR法线性范围广,具有较好的重复性和特异性,可用于EV71样品病毒滴度的快速测定. 展开更多
关键词 逆转录聚合酶链反应 肠道病毒71型 病毒滴度
重组4-1BB配体对治疗性重组人乳头瘤病毒16型蛋白疫苗的佐剂作用
8
作者 高孟 高丽 +5 位作者 朱赟 陈刚 吴洁 许玲敏 罗永能 庄昉成 《国际生物制品学杂志》 CAS 2017年第2期68-74,共7页
目的研究重组4-1BB配体(recombinant 4-1BB ligand,r4—1BBL)作为佐剂对治疗性重组人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirus16,HPVl6)蛋白疫苗(HPVl6蛋白疫苗)免疫效果的影响。方法对4-1BBL胞外功能区进行密码子优化,并通过NdeI... 目的研究重组4-1BB配体(recombinant 4-1BB ligand,r4—1BBL)作为佐剂对治疗性重组人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirus16,HPVl6)蛋白疫苗(HPVl6蛋白疫苗)免疫效果的影响。方法对4-1BBL胞外功能区进行密码子优化,并通过NdeI和XhoI酶切位点定向插入pET28a表达载体。将获得的重组表达载体转化至大肠埃希菌BL21(DE3),并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导重组蛋白表达。用蛋白质印迹法对重组蛋白进行鉴定,并用非还原性十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和电子显微镜分析重组蛋白结构。用CCK-8试剂盒检测纯化r4-IBBL对小鼠T细胞体外增殖的影响。同时将r4-1BBL与HPV16蛋白疫苗联合免疫C57BL/6小鼠,用酶联免疫斑点试验检测小鼠的细胞免疫应答水平,观察r4-1BBL对HPV16蛋白疫苗抑制肿瘤生长的影响。结果密码子优化的4-1BBL胞外功能区能在重组表达载体中表达,且表达产物同时以包涵体和可溶性形式存在。可溶性产物的结构主要为二聚体,电子显微镜下可以观察到类似亚单位的结构。纯化r4-1BBL可促进小鼠脾淋巴细胞的体外增殖。与单纯HPV16蛋白疫苗相比,r4—1BBL联合HPV16蛋白疫苗能诱导更强的特异性细胞免疫应答(t=3.525,P=0.024)和产生更明显的肿瘤生长抑制作用(t=2.534,P=0.021)。结论r4-1BBLL在小鼠中提高HPV16蛋白疫苗的免疫效果,具有作为HPV16蛋白疫苗佐剂的潜力。 展开更多
关键词 重组蛋白类 佐剂 免疫 人乳头瘤病毒16 乳头状瘤病毒疫苗
针对肠道病毒71型的新型重组融合蛋白类病毒颗粒疫苗研制及其免疫效果评价
9
作者 蔡静 顾春燕 +3 位作者 张锋 高孟 高丽 罗永能 《中华临床感染病杂志》 2017年第4期268-273,共6页
目的 研制针对肠道病毒71型(EV71)的新型重组类病毒颗粒疫苗,并评价其免疫效果.方法 利用诺如病毒(NoV)衣壳蛋白(VP1)P区(NoVP)可呈现外源抗原并形成类病毒颗粒的特点,构建获得只包含NoVP或在其表面环位点串联插入EV71衣壳蛋白... 目的 研制针对肠道病毒71型(EV71)的新型重组类病毒颗粒疫苗,并评价其免疫效果.方法 利用诺如病毒(NoV)衣壳蛋白(VP1)P区(NoVP)可呈现外源抗原并形成类病毒颗粒的特点,构建获得只包含NoVP或在其表面环位点串联插入EV71衣壳蛋白的三个特异性抗原位点(VP1的SP55和SP70,VP2的VP2-28)基因片段,克隆至质粒pET-28a(+)后分别转化大肠杆菌后诱导表达,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹和透射电镜鉴定和观察表达的重组融合蛋白(NoVP+ EV71-SP55-SP70-VP2-28)和NoVP蛋白.同时,采用随机分组法将BALB/C小鼠分成A、B和C三组,每组10只,分别用重组融合蛋白(NoVP+ EV71-SP55-SP70-VP2-28)、NoVP和透析液免疫获得抗血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中特异性抗体;将小鼠血清与EV71 H3-TY株混合,加入Vero细胞,通过微量中和实验检测特异性抗体效价.采用方差分析和Bonferroni检验对数据进行分析.结果 重组表达产物在大肠杆菌中以包涵体形式存在,SDS-PAGE显示重组融合蛋白和NoVP相对分子质量约为43×10^3和36×10^3;免疫印迹显示重组融合蛋白在相对分子质量约为43×10^3处有特异性条带,透射电镜观察显示重组融合蛋白呈现类病毒颗粒.ELISA显示与SP70多肽反应的小鼠血清吸光度(A490)值A组明显大于B组和C组(F=13.860,P<0.05);微量中和实验显示A组小鼠血清针对EV71 H3-TY株的几何平均中和滴度为1∶38.结论 本研究初步获得了针对EV71的一种新型重组融合蛋白类病毒颗粒疫苗,其具有良好的抗原性和特异性,能诱导小鼠产生较高中和滴度的特异性抗体. 展开更多
关键词 肠道病毒属 肠道病毒71型 诺如病毒 酶联免疫吸附测定 类病毒颗粒疫苗 微量中和实验 ENTEROVIRUS 71
柯萨奇病毒A16型感染性模型的建立及其相关免疫学指标和应用的评价 预览 被引量:1
10
作者 张锋 高孟 +1 位作者 高丽 罗永能 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第1期37-42,共6页
目的建立简便和可靠的对柯萨奇病毒A16型(coxsackievirus A16,CVA16)敏感的小型啮齿类实验动物模型。方法选取不同日龄长爪沙鼠,腹腔接种CVA16后连续观察14 d,筛选出对病毒敏感的最适接种日龄段;然后比较接种剂量与效应关系,测定其50... 目的建立简便和可靠的对柯萨奇病毒A16型(coxsackievirus A16,CVA16)敏感的小型啮齿类实验动物模型。方法选取不同日龄长爪沙鼠,腹腔接种CVA16后连续观察14 d,筛选出对病毒敏感的最适接种日龄段;然后比较接种剂量与效应关系,测定其50%致死剂量(LD50);并测定感染3 d后其血液和主要组织器官中CVA16病毒滴度;最后用CVA16灭活疫苗在1日龄和11日龄免疫2针沙鼠后,在14日龄时用LD50剂量病毒攻毒,观察并记录沙鼠体重、症状及死亡率,2周后眼球采血,应用微量中和试验和ELISA分别检测中和抗体效价和总抗体水平。结果长爪沙鼠感染CVA16后出现活动减少、后肢无力、麻痹瘫痪、死亡等临床症状,不同日龄沙鼠对CVA16感染的易感能力和感染后发病程度不同,7日龄和14日龄沙鼠易感,28日龄沙鼠不易感染,最敏感和最合适接种日龄为14日龄,其LD50为1×104.5 CCID50,感染3 d后其血液和主要组织器官中均可检测到高滴度的CVA16病毒,免疫两针灭活疫苗的14日龄沙鼠用LD50剂量攻毒,存活率87.5%,疫苗免疫诱导沙鼠产生的CVA16中和抗体几何平均值(GMT)为28.14,抗体阳性率为87.5%。结论长爪沙鼠对CVA16敏感并且病毒能在其体内进行有效的复制和繁殖,可作为CVA16致病机制研究、疫苗研发及药物评价的可靠小动物模型。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒A16型 长爪沙鼠 动物模型
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拓展训练在初中篮球基础技术教学中的应用初探 预览 被引量:3
11
作者 高丽 《内江科技》 2017年第12期155-156,共2页
在现代化的初中教育教学工作中,已经对各个学科进行了全面改革,在其深入贯彻新课程标准中,对学生自主学习和体验这两个层面进行了强调,其中应用拓展训练的教学模式,非常符合新课程标准的教学目标。因此,本文针对拓展训练在初中篮球基础... 在现代化的初中教育教学工作中,已经对各个学科进行了全面改革,在其深入贯彻新课程标准中,对学生自主学习和体验这两个层面进行了强调,其中应用拓展训练的教学模式,非常符合新课程标准的教学目标。因此,本文针对拓展训练在初中篮球基础技术教学中的应用做出了进一步探究,对拓展训练的概念及其特征、拓展训练的重要意义、拓展训练融入篮球基础技术教学的应用策略给出了详细的分析。 展开更多
关键词 教学工作 初中教育 训练 应用 技术 基础 篮球 新课程标准
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人感染 H7 N9禽流感病毒血凝素蛋白线性 B 淋巴细胞抗原表位的预测及鉴定 被引量:2
12
作者 陶薇 高孟 +7 位作者 姜立民 谢珲 倪红霞 高丽 罗永能 洪艳 何卓晶 傅婷 《中华临床感染病杂志》 2016年第4期336-341,348共7页
目的:预测并鉴定人感染H7N9禽流感病毒血凝素(HA)蛋白的线性B淋巴细胞抗原表位及H7亚型的特异性。方法选取绍兴市人民医院提供的人感染H7 N9患者不同时间的三份血清样本和一份健康对照血清样本,采用TMHMM Sever v.2.0预测蛋白质... 目的:预测并鉴定人感染H7N9禽流感病毒血凝素(HA)蛋白的线性B淋巴细胞抗原表位及H7亚型的特异性。方法选取绍兴市人民医院提供的人感染H7 N9患者不同时间的三份血清样本和一份健康对照血清样本,采用TMHMM Sever v.2.0预测蛋白质胞外区,采用DNAStar Lasergene’ s Protean、BcePred和ABCpred预测其优势B淋巴细胞抗原表位,并用间接酶联免疫吸附试验( ELISA)验证预测的B淋巴细胞抗原表位的免疫原性。使用Clustal X2.1软件将预测抗原表位与GenBank上H7N9和H1~H16亚型流感病毒HA蛋白的氨基酸序列进行多重序列比对以分析预测抗原表位的H7亚型特异性,采用Cn3D 4.3.1软件分析预测的线性B淋巴细胞抗原表位在H7N9禽流感病毒HA蛋白中的分布情况。结果 HA蛋白可能的B淋巴细胞表位位于胞外区N端的第172~183、363~380、452~472和第491~506四个区段。 ELISA结果表明,四个预测的B淋巴细胞表位均与已确诊患者血清发生阳性反应。多重序列比对结果发现第172~183和452~472区段与其他亚型氨基酸序列差异最大,可能具有更好的H7亚型特异性。 HA蛋白的三维结构进一步证明预测的四个B淋巴细胞抗原表位均位于HA蛋白表面。结论鉴定出了四个 HA蛋白线性B淋巴细胞抗原表位,其中第172~183和452~472区段具有更好的H7亚型特异性,可作为新型疫苗表位设计和H7抗原和抗体的特异性检测的依据。 展开更多
关键词 流感病毒A型 H7 N9亚型 血凝素糖蛋白类 流感病毒 表位 B淋巴细胞 免疫原性 特异性
高迁移率族蛋白B1对人乳头瘤病毒重组腺病毒载体疫苗免疫效果的影响
13
作者 陈刚 高孟 +4 位作者 吴洁 姜云水 高丽 李剑波 庄昉成 《国际流行病学传染病学杂志》 CAS 2016年第6期377-381,共5页
目的评价高迁移率族蛋白B1(HMGBl)分子对接种HPVl6型重组腺病毒载体疫苗实验小鼠免疫应答和抗肿瘤生物学效应的影响。方法通过TC-1细胞移植诱导建立小鼠肿瘤模型,在接种HPVl6型重组腺病毒载体疫苗的同时,给予外源性HMGBl及其特异性... 目的评价高迁移率族蛋白B1(HMGBl)分子对接种HPVl6型重组腺病毒载体疫苗实验小鼠免疫应答和抗肿瘤生物学效应的影响。方法通过TC-1细胞移植诱导建立小鼠肿瘤模型,在接种HPVl6型重组腺病毒载体疫苗的同时,给予外源性HMGBl及其特异性拮抗剂HMGBlAbox注射,进行肿瘤抑制试验、肿瘤细胞挑战实验、特异性IFN1的诱导检测。结果肿瘤抑制试验表明,与单独接种不同剂量疫苗组相比,注射HMGBl后小鼠成瘤率显著提高(2/10VS9/10,P〈0.05);而注射了A—box则减低了小鼠成瘤率(7/10VS1/10,P〈O.05)。TC-1肿瘤细胞挑战试验显示,10只先接种疫苗的小鼠中有8只免受TC-1肿瘤细胞的攻击,而HMGB1仅能保护2只,且小鼠成瘤时间提前,肿瘤更大,同时HMGB1还使疫苗诱导特异性IFNγ的能力显著降低。结论HMGBl分子可以削弱HPV16型重组腺病毒载体疫苗在小鼠模型上的免疫效果,而其拮抗剂Abox蛋白具有一定程度增强作用。 展开更多
关键词 乳头状瘤病毒疫苗 HMGB1蛋白质 免疫效果
乡镇初中学生参加课外体育活动现状与对策研究---基于龙海市10所中学的调查 预览
14
作者 高丽 《福建教育学院学报》 2016年第12期115-117,共3页
为了探寻体育活动对增进学生身心健康的作用.文章采用文献资料法、问卷调查法、访谈法和数理统计法等,对龙海市乡镇初中学生参加课外体育活动现状进行研究.结果表明:龙海市乡镇初中学生参加课外体育活动存在着目的性不够明确、参与时... 为了探寻体育活动对增进学生身心健康的作用.文章采用文献资料法、问卷调查法、访谈法和数理统计法等,对龙海市乡镇初中学生参加课外体育活动现状进行研究.结果表明:龙海市乡镇初中学生参加课外体育活动存在着目的性不够明确、参与时间不足、积极性不高,活动内容单一、体育场馆欠缺等问题,并就如何加强、改善乡镇初中学生参加课外体育活动提出相应的对策与建议. 展开更多
关键词 初中学生 课外体育活动 现状
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Vero细胞肠道病毒71型灭活疫苗的纯化及鉴定 被引量:2
15
作者 姜云水 高孟 +5 位作者 周康凤 陈科达 高丽 唐彩华 朱莲 毛江森 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 2015年第2期136-140,共5页
目的建立Vero细胞肠道病毒71型(EV71)灭活疫苗的纯化工艺。方法病毒收获液经离心澄清、福尔马林灭活和超滤浓缩后,采用Sephacryl S-400 HR凝胶过滤层析和Source 30Q离子交换层析2步层析法纯化EV71,进行各项检定及分析后除菌过滤。结... 目的建立Vero细胞肠道病毒71型(EV71)灭活疫苗的纯化工艺。方法病毒收获液经离心澄清、福尔马林灭活和超滤浓缩后,采用Sephacryl S-400 HR凝胶过滤层析和Source 30Q离子交换层析2步层析法纯化EV71,进行各项检定及分析后除菌过滤。结果经纯化的疫苗各项纯化指标均符合中国药典2010年版的要求,杂蛋白去除率〉99.9%;病毒纯化液在电镜下观察到典型的EV71病毒颗粒,经SDS-PAGE及Western blot分析,检测到与文献报道大小相符的EV71 VP1、VP2、VP3及特异性免疫反应;制备成疫苗后免疫大鼠能产生特异性中和抗体。结论本实验建立了Vero细胞的EV71灭活疫苗的纯化工艺,纯化后制备的EV71灭活疫苗具有较好的免疫原性。 展开更多
关键词 肠道病毒71型灭活疫苗 VERO细胞 纯化 鉴定
甲醛和β-丙内酯灭活柯萨奇病毒A组16型效果比较
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作者 朱莲 朱赟 +4 位作者 高丽 倪红霞 姜云水 唐彩华 周康凤 《国际流行病学传染病学杂志》 CAS 2015年第6期418-420,共3页
柯萨奇病毒A组16型(CoxA16)是人手足口病的主要病原体,尽管多数病毒引起的临床症状较轻,但最近一些研究表明CoxA16也像EV71一样能引发严重的疾病,
关键词 甲醛 β-丙内酯 柯萨奇病毒A组16型 灭活
柯萨奇病毒A16型衣壳蛋白VP1~VP3的B淋巴细胞线性抗原表位预测与确定 被引量:7
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作者 高孟 倪红霞 +3 位作者 朱莲 李剑波 高丽 罗永能 《中华临床感染病杂志》 2015年第6期543-548,共6页
目的 确定柯萨奇病毒A16型(CVA16)YY157株衣壳蛋白VP1~VP3的优势B淋巴细胞线性抗原表位。方法用生物信息学软件Lasergene分析CVA16YY157株衣壳蛋白VP1-VP3氨基酸序列的亲水性、抗原性和表面可及性,预测出包含潜在B淋巴细胞线性抗原... 目的 确定柯萨奇病毒A16型(CVA16)YY157株衣壳蛋白VP1~VP3的优势B淋巴细胞线性抗原表位。方法用生物信息学软件Lasergene分析CVA16YY157株衣壳蛋白VP1-VP3氨基酸序列的亲水性、抗原性和表面可及性,预测出包含潜在B淋巴细胞线性抗原表位的区段,并用BepiPred1.0Server进行评估。人工合成相应的多肽片段,用多肽-酶联免疫吸附试验(ELISA)检测其与明确感染CVA16的患儿血清的阳性反应与否和程度,并以健康人血清作比较。结果根据抗原性强、亲水性强和表面性好的要求,共预测出21个可能的B淋巴细胞线性抗原表位。相应的人工合成多肽与感染CVA16的患儿血清均呈现阳性反应,但程度不同。结论成功预测并用实验证实了CVA16YY157株衣壳蛋白VP1~VP3的优势线性B淋巴细胞线性抗原表位。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒感染 表位 B淋巴细胞 酶联免疫吸附测定
柯萨奇病毒YY157株在不同细胞系中的增殖特性 被引量:1
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作者 陈军 朱莲 +4 位作者 张锋 袁建国 倪红霞 高丽 罗永能 《国际流行病学传染病学杂志》 2015年第2期103-106,共4页
目的了解柯萨奇病毒A16型(CoxA16)YY157株在多种细胞系中培养的增殖特性,为疫苗研制提供参考。方法把YY157株接种于非洲猴肾细胞(Vero)、人胚肺二倍体成纤维细胞MRC-5或KMBl7进行适应性传代培养,观察细胞病变情况,检测病毒感染... 目的了解柯萨奇病毒A16型(CoxA16)YY157株在多种细胞系中培养的增殖特性,为疫苗研制提供参考。方法把YY157株接种于非洲猴肾细胞(Vero)、人胚肺二倍体成纤维细胞MRC-5或KMBl7进行适应性传代培养,观察细胞病变情况,检测病毒感染性滴度,绘制增殖曲线。结果CoxA16YY157株在3种细胞中培养均产生细胞病变,在Vero细胞中病变早,增殖快,滴度达8.5lgCCIDs/mL;在MRC-5细胞中,此毒株增殖速度比在Vero细胞中慢,滴度达7.5lgCCID50/mL;在KMB17细胞中,此毒株增殖最慢,滴度只有7.0lgCCID如L。结论CoxA16型YY157株均可感染Vero、MRC-5和KMB17细胞并增殖,但敏感性和增殖速度有差异。 展开更多
关键词 细胞培养技术 柯萨奇病毒A16型 细胞病变
柯萨奇病毒A16型YY157株在Vero细胞中培养与增殖特性的研究 被引量:3
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作者 张锋 朱莲 +5 位作者 陈军 高孟 唐彩华 周康凤 高丽 罗永能 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2014年第6期446-448,共3页
目的 探索柯萨奇病毒A16型(CVA16) YY157株在非洲绿猴肾(Vero)细胞中培养与增殖的合适条件.方法 把CVA16 YY157株接种于Vero细胞适应性传代,挑斑纯化后,在不同条件下培养并比较其对病毒滴度的影响.结果 CVA16 YY157株在Vero细胞中... 目的 探索柯萨奇病毒A16型(CVA16) YY157株在非洲绿猴肾(Vero)细胞中培养与增殖的合适条件.方法 把CVA16 YY157株接种于Vero细胞适应性传代,挑斑纯化后,在不同条件下培养并比较其对病毒滴度的影响.结果 CVA16 YY157株在Vero细胞中培养能导致细胞病变(CPE),可形成蚀斑.将此CVA16病毒以0.01 ~0.1MOI接种于Vero细胞,并在低于2%牛血清浓度的培养基,35℃培养60 h,CPE可达90%以上;此条件下收获培养液上清,可得到较高滴度的病毒.结论 初步建立了CVA16 YY157株在Vero细胞中培养与增殖的方法,为其下一步的大规模培养及疫苗制备奠定了基础. 展开更多
关键词 肠道病毒B型 细胞 生理学 病毒培养
肠道病毒71型H3-TY株衣壳蛋白VP1~VP3的优势线性B细胞抗原决定簇预测与确定 被引量:6
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作者 高丽 高孟 +2 位作者 王静华 唐彩华 罗永能 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2014年第22期3193-3195,共3页
目的确定肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)H3-TY株衣壳蛋白VP1-VP3的优势线性B细胞抗原决定簇位点。方法用生物信息学软件DNAStar中的Protean程序分析EV71 H3-TY株衣壳蛋白VP1-VP3氨基酸序列的亲水性、抗原性和表面可能性,预测出包... 目的确定肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)H3-TY株衣壳蛋白VP1-VP3的优势线性B细胞抗原决定簇位点。方法用生物信息学软件DNAStar中的Protean程序分析EV71 H3-TY株衣壳蛋白VP1-VP3氨基酸序列的亲水性、抗原性和表面可能性,预测出包含潜在线性B细胞抗原决定簇位点的区段,并计算各区段上述指数的加权平均值。人工合成相应的多肽片段,用多肽-酶联免疫吸附检测(多肽-ELISA)检测其与明确感染EV71的临床病患儿童血清的阳性反应与否和程度。结果根据抗原性强、亲水性强和表面性好的要求,共预测出15个可能的线性B细胞抗原决定簇位点。相应的人工合成多肽与感染EV71的临床病患儿童血清均呈现为阳性反应但程度不同,其中免疫显性最高的肽段为包含VP1氨基酸残基208-222位的VP1D。结论成功预测并用实验证实了EV71 H3-TY株衣壳蛋白VP1-VP3的优势线性B细胞抗原决定簇位点,有助于揭示EV71衣壳蛋白抗原特异性的分子基础。 展开更多
关键词 肠道病毒71型 线性B细胞抗原决定簇 多肽-酶联免疫吸附检测
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