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小反刍兽疫病毒Nigeria75/1株磷蛋白的表达及磷酸化位点的预测
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作者 金红岩 封家旺 +4 位作者 李文超 程朝飞 隋修锟 华欣 李刚 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1252-1256,共5页
为深入研究小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)P蛋白对病毒复制的影响,以小反刍兽疫病毒Nigeria75/1株为研究对象,通过RT—PCR法扩增P基因,将扩增出的P基因克隆到pGEX-6P-1原核表达载体中,成功构建pGEX-6P-... 为深入研究小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)P蛋白对病毒复制的影响,以小反刍兽疫病毒Nigeria75/1株为研究对象,通过RT—PCR法扩增P基因,将扩增出的P基因克隆到pGEX-6P-1原核表达载体中,成功构建pGEX-6P-1-PPRV—P表达载体,测序鉴定无误后转化至表达宿主茵BL21(DE3)plysS中进行IPTG诱导表达,并通过在线软件预测了P蛋白的磷酸化位点。结果显示,pGEX-6P-1-PPRV—P重组菌在IPTG浓度1.0mmol/L时经37。C诱导4h,目的基因可正确表达,并以可溶性的形式存在。经Western—blot鉴定,目的蛋白可与PPRVNigeria75/1株病毒小鼠阳性血清发生特异性的免疫印迹反应,证明表达的蛋白具有较好的反应原性。经综合预测分析,可能被磷酸化的位点有46个,其中PKC、PKA、CKII/CKI、cdc2可能作用的位点分别为15个、7个、10个、6个,其他激酶作用位点可能为8个。结果表明,P蛋白的克隆表达及磷酸化位点的成功预测为小反刍兽疫病毒的深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 P蛋白 小反刍兽疫病毒 原核表达 磷酸化位点
小反刍兽疫病毒M蛋白主要抗原表位区的原核表达及鉴定 被引量:8
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作者 华欣 李刚 +6 位作者 史利军 赵占中 王勇 金红岩 李文超 陶春爱 隋修锟 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期266-270,共5页
为了制备小反刍兽疫病毒(PPRV)特异性单抗及临床抗体水平监测,通过在线软件分析PPRV Nigeria75/1株M蛋白可能包含的B细胞线性表位位点,结合可溶性预测,设计1对引物,扩增303bp目的基因。将目的基因克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,... 为了制备小反刍兽疫病毒(PPRV)特异性单抗及临床抗体水平监测,通过在线软件分析PPRV Nigeria75/1株M蛋白可能包含的B细胞线性表位位点,结合可溶性预测,设计1对引物,扩增303bp目的基因。将目的基因克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,用IPTG诱导表达,纯化,SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定结果显示,所构建的重组蛋白以可溶性形式高效表达并具有良好的反应原性,为制备特异性单抗及包被抗原用于PPRV抗体水平监测奠定了一定基础。 展开更多
关键词 小反刍兽疫 M蛋白 抗原表位 原核表达
四株鸽Ⅰ型副黏病毒的分离鉴定及基因型分析 被引量:2
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作者 隋修锟 李刚 +4 位作者 李铁 吴迪 程朝飞 陶春爱 华欣 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期136-140,共5页
为掌握安徽省鸽Ⅰ型副黏病毒病的流行特点及其与鸡新城疫各分离株的相互关系,对从安徽省不同鸽场鸽病料中分离的4株病毒(AH-2012、AH-2012-1、AH-2012-2、AH-2012-3),采用RT-PCR、血清学试验及基因序列测定等方法进行鉴定。结果显示,... 为掌握安徽省鸽Ⅰ型副黏病毒病的流行特点及其与鸡新城疫各分离株的相互关系,对从安徽省不同鸽场鸽病料中分离的4株病毒(AH-2012、AH-2012-1、AH-2012-2、AH-2012-3),采用RT-PCR、血清学试验及基因序列测定等方法进行鉴定。结果显示,这些分离株均具有血凝性,并能使NDV标准阳性血清特异性抑制;PCR扩增出F基因特异性目的片段,其核苷酸序列与GenBank上登录的鸽Ⅰ型副黏病毒的同源性较高,相似性达94.8%;与传统的鸡源新城疫病毒标准株LaSota、F48E9的同源性较低,相似性约为80%;F基因编码蛋白的第112~117位氨基酸序列为R-R-Q-K-R-F。结果表明,这些毒株为鸽Ⅰ型副黏病毒,属于基因Ⅵ型。 展开更多
关键词 鸽Ⅰ型副黏病毒(PPMV-Ⅰ) F基因 序列分析
小反刍兽疫病毒M基因截短表达及鉴定 预览
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作者 华欣 李刚 +4 位作者 王勇 金红岩 陶春爱 程朝飞 隋修锟 《中国动物检疫》 CAS 2012年第10期40-45,共6页
目的将小反刍兽疫病毒M蛋白基因截短表达后用于特异性单抗制备及临床抗体水平检测。方法:用在线分析软件BepiPred分析小反刍兽疫病毒M蛋白潜在的B细胞线性表位,以本实验室构建的pcR2.1T-PPRVM质粒为模板,扩增三段截短的M基因,纯化... 目的将小反刍兽疫病毒M蛋白基因截短表达后用于特异性单抗制备及临床抗体水平检测。方法:用在线分析软件BepiPred分析小反刍兽疫病毒M蛋白潜在的B细胞线性表位,以本实验室构建的pcR2.1T-PPRVM质粒为模板,扩增三段截短的M基因,纯化后的PCR产物分别与克隆载体pCR。2.1T连接,筛选出的阳性重组质粒经双酶切后,分别与表达载体pET-32a(+)及pGEX-6p-1连接,再将鉴定为阳性的重组质粒转化入E.coliBL21(DE3)菌株诱导表达,并用SDS.PAGE及Westernblot验证。结果PCR产物电泳,得到与预期大小相符的特异性片段。对连接克隆载体及表达载体的重组质粒双酶切后,均出现与预期一致的片段,DNA测序表明,插入片段序列与小反刍兽疫Nigeria75/1株M蛋白基因完全一致。重组蛋白经SDS—PAGE72.Westemblot鉴定,证明所构建的重组蛋白均获得高效表达,并均具有良好的反应原性。结论成功表达了小反刍兽疫截短M基因的蛋白,为制备特异性单抗及小反刍兽疫抗体检测奠定了一定基础。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 M基因 截短 表达
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小反刍兽疫病毒N蛋白主要抗原区域的原核表达及间接ELISA检测方法的建立 被引量:8
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作者 邱文英 李刚 +1 位作者 田康乐 华欣 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期 483-487,共5页
为了建立可特异性地检测血清中抗小反刍兽疫病毒(PRRV)抗体的方法,对具有小反刍兽疫病毒特异性的N蛋白第Ⅳ区域进行扩增,并克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,用于小反刍兽疫病毒N亚单位重组蛋白的表达。用纯化的重组蛋白作为检测抗... 为了建立可特异性地检测血清中抗小反刍兽疫病毒(PRRV)抗体的方法,对具有小反刍兽疫病毒特异性的N蛋白第Ⅳ区域进行扩增,并克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,用于小反刍兽疫病毒N亚单位重组蛋白的表达。用纯化的重组蛋白作为检测抗原,建立了检测血清中抗小反刍兽疫病毒抗体的间接ELISA方法,并对该间接ELISA的抗原包被量、血清稀释倍数、血清孵育时间等反应条件进行了优化。Western-blot分析结果表明,重组蛋白具有良好的反应原性。所建立的间接ELISA方法可以鉴别血清中的小反刍兽疫病毒抗体和牛瘟病毒抗体,具有良好的特异性和灵敏性,与标准竞争ELISA试剂盒的符合率达98.4%。证实,本研究建立的检测血清中抗PPRV抗体的间接ELISA方法具有良好的特异性和灵敏性。 展开更多
关键词 小反刍兽疫 N蛋白 间接酶联免疫吸附试验
抗狂犬病病毒N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 预览
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作者 曾妮 宫苗苗 +3 位作者 程朝飞 华欣 郭李平 李刚 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期 866-870,共5页
目的制备抗狂犬病病毒N蛋白单克隆抗体,为建立快速准确的狂犬病病毒抗原检测方法奠定基础。方法将狂犬病病毒Flury LEP株N基因克隆至pGEX-6P-1表达载体中,将纯化后的pGEX-6P-1-RV-N蛋白免疫BALB/c小鼠3次。取小鼠脾脏细胞和SP2/0细胞融... 目的制备抗狂犬病病毒N蛋白单克隆抗体,为建立快速准确的狂犬病病毒抗原检测方法奠定基础。方法将狂犬病病毒Flury LEP株N基因克隆至pGEX-6P-1表达载体中,将纯化后的pGEX-6P-1-RV-N蛋白免疫BALB/c小鼠3次。取小鼠脾脏细胞和SP2/0细胞融合后,用pET-32a-RV-N重组蛋白作为筛选抗原,经3次亚克隆筛选后得到1D9、2B6、3C5、6B5及5F2 5株单克隆抗体细胞株。亚类鉴定结果表明,其中1D9、2B6、6B5 3株亚类为IgG1,3C5、5F2的亚类为IgM。间接ELISA方法检测2B6单抗细胞腹水效价可达1∶106。经Protein G亲和层析柱纯化和脱盐后可得到浓度为2.5mg/mL的高纯度的单克隆抗体。其免疫荧光试验结果表明5株单克隆抗体均能特异地与狂犬病病毒结合。结论制备的单抗具有良好的特异性和敏感性,为后期诊断方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 N蛋白 表达 单克隆抗体
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进口传染性法氏囊炎“MB”株疫苗效果测定 预览
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作者 陈朝洪 剡根强 华欣 《新疆畜牧业》 2001年第2期 37-38,共2页
本文对进口"MB"株疫苗和国产"MB"苗免疫肉仔鸡后的抗体阳性率进行了测定,结果进口"MB"株疫苗明显优于国产苗,具有产生抗体快,阳性率高之特点,有推广应用的价值.
关键词 进口“MB”株疫苗 国产“MB”苗 抗体 阳性率 传染性法氏囊病 免疫接种
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我国动物防检疫工作的现状及建议 预览
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作者 华欣 《中国牧业通讯》 2000年第7期 22-23,共2页
<正> 5月18日-6月4日,农业部有关部门和全国畜牧兽医总站,会同各省动物防疫监督机构负责人组成了15个检查考核组,对我国31个省(市、自治区)的动物防检疫工作进行了交叉目标管理考核。本次检查考核主要是对各省的检疫、监督工作及... <正> 5月18日-6月4日,农业部有关部门和全国畜牧兽医总站,会同各省动物防疫监督机构负责人组成了15个检查考核组,对我国31个省(市、自治区)的动物防检疫工作进行了交叉目标管理考核。本次检查考核主要是对各省的检疫、监督工作及防疫基础工作等内容进行重点考核评分。通过此次检查考核,进一步增加了各省之间的了解和认识,促进了相互间的经验交流,同时也反映出了我国现阶段动物防检疫工作的现状和存在的问题。 展开更多
关键词 中国 动物防疫 动物检疫 监督工作
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乳酸钙添加剂喂鸡试验研究 预览
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作者 刘永旺 陈朝洪 +4 位作者 张东 关文琴 张贤亮 陆良 华欣 《石河子大学学报:自然科学版》 CAS 1995年第4期51-54,共4页
通过对17~49日龄的艾维菌肉鸡484只及35~40周龄的伊莎褐蛋鸡1018只的乳酸钙添加剂的试险,结果表明:试验期内,肉鸡试验组净增重1.496kg,对照组净增重1.368kg,前者高于后者8.5%。蛋鸡平均产蛋... 通过对17~49日龄的艾维菌肉鸡484只及35~40周龄的伊莎褐蛋鸡1018只的乳酸钙添加剂的试险,结果表明:试验期内,肉鸡试验组净增重1.496kg,对照组净增重1.368kg,前者高于后者8.5%。蛋鸡平均产蛋率试验组为70.5%,对照组为66.5%,前者高于后者4%,平均蛋重试验组高于对照组3.0g/枚,蛋料比试验组低于对照组0.18,说明乳酸钙添加剂可提高产蛋率及饲料报酬。蛋鸡血清钙测定结果:试验组为18.59mg%,对照组为17.32wg%,前者略高于后者,说明乳酸钙添加剂可提高蛋鸡的血清钙水平。 展开更多
关键词 乳酸钙 肉鸡 蛋鸡
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作者 华欣 《黄金时代:下半月》 2016年第5期48-48,共1页
阅读下面的材料,根据要求作文: 窗,是瞭望的视点;窗,是连接两个世界的通道;窗,可以是有形的;窗,可以是无形的;窗,可能有自己丰富的经历;窗,可能是生活无声的见证……大千世界,和窗有关的故事很多很多;芸芸众生,由窗生... 阅读下面的材料,根据要求作文: 窗,是瞭望的视点;窗,是连接两个世界的通道;窗,可以是有形的;窗,可以是无形的;窗,可能有自己丰富的经历;窗,可能是生活无声的见证……大千世界,和窗有关的故事很多很多;芸芸众生,由窗生发的见解也见仁见智。 展开更多
关键词 中学教育 语文 作文 《窗》
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