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病原微生物实验室风险评估
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作者 师永霞 +2 位作者 戴俊 树祥 袁帅 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2019年第2期147-150,共4页
风险评估是实验室生物安全和风险管理的基础,包括风险识别、风险分析和风险控制整个过程。病原微生物实验室风险评估包括生物安全风险评估和生物安保风险评估。本文介绍了病原微生物实验室生物安全风险评估和生物安保风险评估的要点、... 风险评估是实验室生物安全和风险管理的基础,包括风险识别、风险分析和风险控制整个过程。病原微生物实验室风险评估包括生物安全风险评估和生物安保风险评估。本文介绍了病原微生物实验室生物安全风险评估和生物安保风险评估的要点、风险描述、风险分析过程和采取的缓解风险措施等。举例说明了SARS疫苗实验室如何进行风险评估,并根据风险评估结果采取降低风险的措施。 展开更多
关键词 生物安全 生物安保 风险评估 风险识别 风险分析 风险控制
黄热病毒可视化RT-LAMP检测方法的建立
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作者 郑夔 戴俊 +3 位作者 刘丽娟 袁帅 孙芳芳 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2019年第3期153-157,共5页
目的建立一种根据颜色变化判断结果的黄热病毒可视化RT-LAMP快速核酸检测方法。方法针对112株目前GeneBank上所有基因亚型黄热病毒株的5’端非编码区保守性核苷酸序列,设计黄热病毒特异性LAMP引物,建立黄热病毒可视化RT-LAMP检测方法。... 目的建立一种根据颜色变化判断结果的黄热病毒可视化RT-LAMP快速核酸检测方法。方法针对112株目前GeneBank上所有基因亚型黄热病毒株的5’端非编码区保守性核苷酸序列,设计黄热病毒特异性LAMP引物,建立黄热病毒可视化RT-LAMP检测方法。评价该方法的特异性、灵敏性,并用临床样本和模拟样本进行应用性验证。结果建立的RT-LAMP方法有较高的特异性,与登革病毒、裂谷热病毒、西尼罗病毒、乙脑病毒及基孔肯雅病毒无交叉反应;用体外转录的RNA模板评估,其灵敏性可达102拷贝/μl;用口岸发热病例血清样本验证,该方法可检出血清中的黄热病毒。结论建立的黄热病毒可视化RT-LAMP检测方法操作简便、快速、特异性好,可应用于黄热病毒的现场检测。 展开更多
关键词 黄热病毒 环介导等温扩增 等温扩增
5种埃博拉病毒多重实时荧光PCR方法的建立
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作者 师永霞 +4 位作者 袁帅 黎东红 孙芳芳 郑夔 戴俊 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2019年第1期1-4,共4页
目的建立扎伊尔型(EBOZ)、苏丹型(EBOS)、科特迪瓦型(EBOC)、本迪布焦型(EBOB)和莱斯顿型(EBOR)埃博拉病毒多重实时荧光PCR检测方法,一次检测可实现5种埃博拉病毒的分型。方法比较5种15株埃博拉病毒基因组的保守性和特异性,设计5种埃博... 目的建立扎伊尔型(EBOZ)、苏丹型(EBOS)、科特迪瓦型(EBOC)、本迪布焦型(EBOB)和莱斯顿型(EBOR)埃博拉病毒多重实时荧光PCR检测方法,一次检测可实现5种埃博拉病毒的分型。方法比较5种15株埃博拉病毒基因组的保守性和特异性,设计5种埃博拉病毒特异性引物和探针用于核酸检测,EBOZ、EBOS、EBOC、EBOB和EBOR分别使用FAM、VIC、Texas red、FAM、VIC荧光基团标记探针。分2管对5种埃博拉病毒进行多重实时荧光PCR检测,其中管1检测EBOZ、EBOS和EBOC,管2检测EBOB和EBOR。使用不同浓度的埃博拉病毒阳性对照质粒进行检测,确定最佳的引物、探针用量和Mg2+用量,建立5种埃博拉病毒分型检测的多重实时荧光PCR方法。同时,对建立的方法进行灵敏度、特异性和灵敏度分析。结果优化的多重实时荧光PCR方法的引物和探针终浓度分别为160 nmol/L和80 nmol/L,Mg2+终浓度为2 mmol/L。建立的方法灵敏度为103拷贝/ml,EBOZ、EBOS、EBOC、EBOB和EBOR实时荧光PCR检测10次的CV值分别为0.16%、0.25%、0.24%、0.22%、0.28%。埃博拉病毒多重实时荧光PCR对马尔堡病毒阳性对照,登革病毒、黄热病毒、基孔肯雅病毒、寨卡病毒、裂谷热病毒等阳性毒株检测结果为阴性。结论建立的5种埃博拉病毒多重实时荧光PCR检测方法灵敏度高,特异性强,重复性好,可用于口岸输入性埃博拉出血热病例的早期检测和分型鉴别。 展开更多
关键词 扎伊尔型埃博拉病毒 苏丹型埃博拉病毒 科特迪瓦型埃博拉病毒 本迪布焦型埃博拉病毒 莱斯顿型埃博拉病毒 多重实时荧光PCR
一例基孔肯雅病毒和寨卡病毒混合感染病例的发现
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作者 郑夔 孙芳芳 +9 位作者 袁帅 黎东红 林泽凯 梁洁怡 欧阳善初 树祥 戴俊 师永霞 李小波 《华南预防医学》 2019年第5期481-485,共5页
目的对来自菲律宾的入境旅客(1例发热病例)进行病原体鉴定。方法采集病例血液样本,提取核酸后进行基孔肯雅病毒和寨卡病毒荧光RT PCR检测,进而接种Vero细胞分离培养病毒,细胞培养上清用荧光RT PCR方法和宏基因组序列测定分析法进行病毒... 目的对来自菲律宾的入境旅客(1例发热病例)进行病原体鉴定。方法采集病例血液样本,提取核酸后进行基孔肯雅病毒和寨卡病毒荧光RT PCR检测,进而接种Vero细胞分离培养病毒,细胞培养上清用荧光RT PCR方法和宏基因组序列测定分析法进行病毒鉴定。结果荧光RT PCR检测结果显示,该病例存在基孔肯雅病毒和寨卡病毒感染,Ct值分别为20和26;血清样本接种Vero细胞72 h后可观察到明显的细胞病变效应,细胞培养上清的荧光RT PCR检测和病毒宏基因组测序分析结果显示,Vero细胞中有基孔肯雅病毒和寨卡病毒。结论该病例为基孔肯雅病毒和寨卡病毒混合感染病例。 展开更多
关键词 基孔肯雅病毒 寨卡病毒 感染
当前传入我国风险较大的几种新发传染病 预览 被引量:4
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作者 李小波 《中国人兽共患病学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期182-187,共6页
近年来,国际新发、烈性传染病疫情发生的频率大大加快,对我国的影响也日益加大。西尼罗病毒、马尔堡病毒、拉沙病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、尼帕病毒、布氏锥虫、裂谷热病毒等多种人兽共患病原体均曾引起过人间或动物间较大规模的暴发... 近年来,国际新发、烈性传染病疫情发生的频率大大加快,对我国的影响也日益加大。西尼罗病毒、马尔堡病毒、拉沙病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、尼帕病毒、布氏锥虫、裂谷热病毒等多种人兽共患病原体均曾引起过人间或动物间较大规模的暴发流行。随着我国对外经贸、人员往来的日趋频繁,上述传染病疫情存在传入我国并引起国内地方性流行的巨大风险,应引起我国高度关注。 展开更多
关键词 风险 新发传染病 流行
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科特迪瓦型埃博拉病毒实时荧光PCR方法的建立 被引量:1
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作者 师永霞 戴俊 +4 位作者 黎东红 袁帅 孙芳芳 郑夔 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2018年第4期233-236,共4页
目的建立科特迪瓦型埃博拉病毒实时荧光PCR检测方法,并在广东口岸进行应用。方法分析埃博拉病毒基因组的同源性,设计3组引物和探针用于科特迪瓦型埃博拉病毒核酸检测。对不同浓度的科特迪瓦型埃博拉病毒体外转录RNA进行检测,确定最佳的... 目的建立科特迪瓦型埃博拉病毒实时荧光PCR检测方法,并在广东口岸进行应用。方法分析埃博拉病毒基因组的同源性,设计3组引物和探针用于科特迪瓦型埃博拉病毒核酸检测。对不同浓度的科特迪瓦型埃博拉病毒体外转录RNA进行检测,确定最佳的引物和探针组合、用量,以及Mg2+用量,建立科特迪瓦型埃博拉病毒实时荧光PCR方法。对建立的方法进行灵敏度、特异性和灵敏度分析,并用于广东口岸非洲入境发热人员血清样本的筛查。结果经筛选,引物Ebv-C-3F/Ebv-C-3R和探针Ebv-C-3P对102~105拷贝/ml的阳性质粒的检出率为100.0%,是最佳的引物和探针组合。优化后的实时荧光PCR体系中引物和探针终浓度分别为400 nmol/L和80 nmol/L,Mg2+终浓度为2 mmol/L。方法的灵敏度为50拷贝/ml,重复性好、特异性强,对扎伊尔型、苏丹型、本迪布焦型和莱斯顿型埃博拉病毒阳性对照样本、马尔堡病毒阳性对照样本和广东口岸非洲发热入境人员血清样本检测均为阴性。结论建立的科特迪瓦型埃博拉病毒实时荧光PCR检测方法灵敏度高,特异性强,重复性好,对于境外输入性埃博拉病毒病病例的早期诊断和分型鉴别具有重要意义。 展开更多
关键词 埃博拉病毒 实时荧光PCR 灵敏度 特异性
重组酶介导扩增方法快速检测寨卡病毒 被引量:1
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作者 袁帅 郑夔 +7 位作者 洪烨 孙芳芳 李小波 戴俊 师永霞 康晓平 李裕昌 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2018年第3期159-161,共3页
目的 建立寨卡病毒一步法重组酶聚合酶等温扩增检测方法(reverse transcription recombinase aid amplification,RT-RAA),为国境口岸提供现场快速检测方法。方法 根据寨卡病毒基因组保守片段NS2a设计引物和探针,建立寨卡病毒RT-RAA检... 目的 建立寨卡病毒一步法重组酶聚合酶等温扩增检测方法(reverse transcription recombinase aid amplification,RT-RAA),为国境口岸提供现场快速检测方法。方法 根据寨卡病毒基因组保守片段NS2a设计引物和探针,建立寨卡病毒RT-RAA检测方法。用合成的含有寨卡病毒基因序列的质粒测试方法的重复性和灵敏度,用登革病毒、基孔肯雅病毒、黄热病毒、乙脑病毒核酸测试方法的特异性。结果 寨卡病毒一步法RT-RAA检测时间短(〈20min),对寨卡病毒阳性质粒检测下限为10~3拷贝/μl,重复性好,与登革病毒、基孔肯雅病毒、黄热病毒、乙脑病毒无交叉反应。结论 建立的寨卡病毒一步法RT-RAA方法具有快速、特异以及灵敏的特点,适用于口岸现场快速检测。 展开更多
关键词 重组酶介导扩增 寨卡病毒 口岸
2013—2016年广东口岸输入性流感病例流行病学分析
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作者 黎东红 孙芳芳 +6 位作者 袁帅 范秀莹 郑夔 李小波 戴俊 师永霞 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2018年第3期197-200,共4页
目的 对2013—2016年广东口岸输入性流感病例的流行病学特征进行分析,为流感的监测及其疫情防控提供依据。方法 采集广东25个口岸有咳嗽、咽痛、发热、体温≥37℃等症状的入境人员的鼻咽拭子样本,采用实时荧光RT-PCR法对样本进行流感病... 目的 对2013—2016年广东口岸输入性流感病例的流行病学特征进行分析,为流感的监测及其疫情防控提供依据。方法 采集广东25个口岸有咳嗽、咽痛、发热、体温≥37℃等症状的入境人员的鼻咽拭子样本,采用实时荧光RT-PCR法对样本进行流感病毒核酸检测和分型,通过Excel、SPSS 22.0等软件对流感病例进行描述和统计分析。结果 2013—2016年,广东口岸共采集14566名流感样病例样本,检出流感病例2984例,阳性率为20.49%。其中,2013年以甲型H1N1(2009)流感为主,2014和2015年均以季节性H3N2流感为主,2016年2-4月甲型H1N1(2009)流感和乙型流感共同流行,之后季节性H3N2流感逐月增多,成为2016年下半年的主要流行株。检出的流感病例主要来自我国香港地区,共检出1 339例,占总病例的44.87%。各年龄组均有流感病例检出,以25~59岁年龄组为主,共检出1 712例,占总流感病例数的57.37%。结论 2013—2016年,广东口岸输入性流感以季节性H3N2、乙型和甲型H1N1(2009)流感交替流行,各年龄组均有流感病例检出。 展开更多
关键词 流感 广东口岸 流行病学
2014年广东地区生物安全柜性能检测结果分析 被引量:2
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作者 树祥 丁国允 +1 位作者 李小波 《华南预防医学》 2017年第2期199-200,共2页
目的了解广东地区生物安全柜的安全性能,呼吁各个生物安全柜使用单位加强生物安全柜的维护,保障实验室生物安全。方法对广东地区检验检疫局和疾病预防控制中心等单位委托检测的生物安全柜性能检测结果进行分析,按照标准JG170-2005对... 目的了解广东地区生物安全柜的安全性能,呼吁各个生物安全柜使用单位加强生物安全柜的维护,保障实验室生物安全。方法对广东地区检验检疫局和疾病预防控制中心等单位委托检测的生物安全柜性能检测结果进行分析,按照标准JG170-2005对垂直风速、工作窗口风速、洁净度、气流方向、送风高效过滤器检漏、排风高效过滤器检漏、噪声、照度等8个项目进行检测。结果112台生物安全柜整体合格率为67.86%。工作窗口风速合格率最低,为89.29%,检测合格率最高的是垂直风速,为96.43%,其他各项合格率均在90%以上。结论委托检测的生物安全柜整体合格率较低,8个检测项目均有不合格的生物安全柜。生物安全柜存在安全隐患,设备管理部门和使用部门应加强管理,保障实验室生物安全。 展开更多
关键词 生物安全柜 安全管理
浅述口岸卫生检疫实验室建设
10
作者 李小波 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2017年第5期372-375,共4页
作为口岸卫生检疫核心能力建设的重要环节,卫生检疫实验室在历次传染病疫情防控中发挥了重要的技术支撑作用。2009年甲型H1N1流感疫情席卷全球之时,检验检疫系统中具备病原体检测能力的实验室很少,广东出入境检验检疫局检验检疫技术中... 作为口岸卫生检疫核心能力建设的重要环节,卫生检疫实验室在历次传染病疫情防控中发挥了重要的技术支撑作用。2009年甲型H1N1流感疫情席卷全球之时,检验检疫系统中具备病原体检测能力的实验室很少,广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心卫生检疫实验室充分发挥了自身强大的科技优势,成功地检出国境口岸首例甲型H1N1流感病例(广东地区首例,全国第4例)。历经中东呼吸综合征、人感染高致病性H7N9禽流感、埃博拉病毒病、寨卡热、黄热病、裂谷热疫情,检验检疫系统已逐渐形成由点到面、日益严密的口岸传染病检测体系,越来越多的口岸卫生检疫实验室检出了多种重要病例。在新的历史条件下,卫生检疫实验室应更专业化、规范化并突出严谨性,更好地为卫生检疫提供技术支持。 展开更多
关键词 甲型H1N1流感 卫生检疫 口岸 实验室
广东首例苏里南输入性寨卡病毒感染病例的实验室检测 预览 被引量:1
11
作者 梁洁怡 戴俊 +8 位作者 黎东红 师永霞 袁帅 郑夔 李小波 张显光 宋卫 吴惠明 《中国人兽共患病学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期522-525,共4页
目的对从广州白云国际机场口岸入境的一例自苏里南归国发热人员进行寨卡病毒实验室检测。方法采集发热人员的血液和唾液样本,同时使用两种寨卡病毒实时荧光RT-PCR试剂进行寨卡病毒核酸检测。RT-PCR扩增寨卡病毒部分基因片段,并进行序列... 目的对从广州白云国际机场口岸入境的一例自苏里南归国发热人员进行寨卡病毒实验室检测。方法采集发热人员的血液和唾液样本,同时使用两种寨卡病毒实时荧光RT-PCR试剂进行寨卡病毒核酸检测。RT-PCR扩增寨卡病毒部分基因片段,并进行序列测定和同源性比较。基于扩增片段构建系统进化树,分析输入性病例的来源。结果实时荧光RT-PCR结果显示,该病例血清样本寨卡病毒核酸弱阳性、唾液样本寨卡病毒核酸阳性。RT-PCR扩增出预期大小约1.5Kb片段,测序结果表明该片段与巴西寨卡病毒株(GenBank号KX197250)相应序列的同源性为99%。系统进化树显示该病毒属亚洲谱系。结论根据患者流行病学史、临床表现和病例标本核酸检测情况,确诊该病例为广东首例从苏里南地区输入性寨卡病例。 展开更多
关键词 寨卡病毒 实时荧光RT-PCR 核酸检测 进化分析
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基于扩增后分析的单管双重荧光PCR方法的建立
12
作者 郑夔 袁帅 +6 位作者 孙芳芳 李小波 师永霞 戴俊 康晓平 秦成峰 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2017年第2期77-82,共6页
目的 建立单通道双重荧光PCR方法检测寨卡病毒和基孔肯雅病毒,为探索超多重荧光PCR方法奠定基础。方法 根据TOCE原理,首先在寨卡病毒的Taq Man探针荧光PCR技术基础上,设计两条含有不同标签序列的杂交探针,通过寨卡病毒毒株选择合适的标... 目的 建立单通道双重荧光PCR方法检测寨卡病毒和基孔肯雅病毒,为探索超多重荧光PCR方法奠定基础。方法 根据TOCE原理,首先在寨卡病毒的Taq Man探针荧光PCR技术基础上,设计两条含有不同标签序列的杂交探针,通过寨卡病毒毒株选择合适的标签序列,再根据合适的标签序列设计合成两条理论上解链温度不同的检测探针,同样用寨卡病毒毒株评估两条检测探针;接着按相同原则设计合成基孔肯雅病毒的杂交探针和检测探针,进行单管内单通道双重荧光PCR试验。结果 标签序列的选择结果表明,只有当标签序列的解链温度低于荧光PCR的退火延伸温度时,阳性样本才能获得相应的扩增曲线;根据合适的标签序列设计合成的两条理论上解链温度不同的检测探针,实际检测时可以在同一检测通道中通过融解曲线分析准确区分。单管双重荧光PCR可准确检测出基孔肯雅病毒、寨卡病毒的毒株和阳性样本。结论 建立了一种针对基孔肯雅病毒和寨卡病毒的单通道双重荧光PCR检测方法,为后续多种虫媒病毒超多重荧光PCR检测方法的开发提供借鉴。 展开更多
关键词 多重 荧光PCR 基孔肯雅病毒 寨卡病毒 虫媒病毒
二氧化氯溶液消毒剂对呼吸道病毒的杀灭效果评估
13
作者 叶丹 文博 +4 位作者 李小波 关文达 伍时冠 杨子峰 《现代生物医学进展》 CAS 2016年第16期3105-3107,3157共4页
目的:评估"菌bye-bye"消毒剂对甲型H1N1流感病毒PR8(PR8)、呼吸道合胞病毒(RSV)、3型腺病毒(ADV3)、人感染H7N9禽流感病毒(H7N9)的体外杀灭效果。方法:参考《消毒技术规范》和受试产品说明书进行细胞毒性试验、消毒剂中和... 目的:评估"菌bye-bye"消毒剂对甲型H1N1流感病毒PR8(PR8)、呼吸道合胞病毒(RSV)、3型腺病毒(ADV3)、人感染H7N9禽流感病毒(H7N9)的体外杀灭效果。方法:参考《消毒技术规范》和受试产品说明书进行细胞毒性试验、消毒剂中和试验和对PR8、RSV、ADV3、H7N9病毒的体外杀灭实验。结果:(1)候选中和剂选定0.02mol/L硫代硫酸钠(Na2S2O4);(2)候选中和剂、"菌-bye-bye"消毒剂及两者混合物对细胞毒性低;(3)候选中和剂能完全中和消毒剂消毒效果;(4)随着"菌bye-bye"消毒剂的浓度增大,病毒杀灭效果亦越好。在其不稀释的条件下,除了PR8毒株外,其他3种病毒的平均灭活率均在99.99%以上,且平均病毒TCID50负对数值(log10 TCID(50)/m L)均降低4 log10或以上;对半稀释后对RSV的杀灭效果最好,而对ADV3的杀灭效果最差。结论:高浓度"菌bye-bye"消毒剂对呼吸道病毒的杀灭效果较好,且对细胞的毒性较小,是一种安全、高效的消毒剂,值得临床推广。 展开更多
关键词 二氧化氯 消毒剂 呼吸道 病毒 感染
入境生物材料中人源基因实时荧光PCR检测方法的建立
14
作者 惠敏 +3 位作者 刘燕 李小波 郑夔 师永霞 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2016年第1期1-4,共4页
目的建立适合国境口岸入境生物材料中快速判断是否含有人源基因的实时荧光PCR检测方法并应用于口岸出入境生物材料的检测,为入境生物材料监管提供技术支撑。方法根据人线粒体ND2基因核酸序列,设计并筛选适合实时荧光PCR检测的引物和探针... 目的建立适合国境口岸入境生物材料中快速判断是否含有人源基因的实时荧光PCR检测方法并应用于口岸出入境生物材料的检测,为入境生物材料监管提供技术支撑。方法根据人线粒体ND2基因核酸序列,设计并筛选适合实时荧光PCR检测的引物和探针,优化反应体系,评估方法的灵敏度、特异性、稳定性,建立快速、特异的人源基因荧光PCR检测方法。结果建立的检测方法灵敏度高、特异性强、稳定性好,可在2 h内完成入境生物材料的检测,并有效区分非人灵长类动物及常见哺乳动物基因。结论本方法适用于对入境生物材料中人源基因的快速、准确检测,为口岸科学执法提供依据。 展开更多
关键词 生物材料 人源基因 检测
广东口岸鼠形动物间鼠疫耶尔森菌和汉坦病毒感染状况调查 被引量:3
15
作者 高云霞 李小波 +7 位作者 方盛藩 颜杰 张显光 方树春 邓荆 丁国允 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS CSCD 2016年第2期137-140,共4页
目的 了解广东省27个口岸鼠形动物及其体表寄生虫种类,鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)和汉坦病毒感染状况,为口岸鼠传疾病防控提供科学依据。方法 2014年5月至2015年4月,采用鼠笼法捕获鼠形动物,实时荧光PCR法检测鼠肺,收集口岸人员健康状况。... 目的 了解广东省27个口岸鼠形动物及其体表寄生虫种类,鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)和汉坦病毒感染状况,为口岸鼠传疾病防控提供科学依据。方法 2014年5月至2015年4月,采用鼠笼法捕获鼠形动物,实时荧光PCR法检测鼠肺,收集口岸人员健康状况。结果 共捕获鼠形动物885只,平均密度为0.58%,优势种为臭鼩鼱(47.68%)和褐家鼠(33.67%);检出印鼠客蚤,染蚤率为0.79%,蚤指数为0.03。共检测鼠肺839份,10个口岸检出汉城型汉坦病毒,病毒携带率为2.74%,其中黄胸鼠携带病毒率最高(7.45%)。不同类型口岸鼠形动物汉坦病毒携带率差异无统计学意义(χ^2=3.287,P=0.349,ν=3)。未检出鼠疫菌。结论 广东口岸的鼠形动物平均密度低于控制标准,未发现鼠间鼠疫流行线索,但存在黄胸鼠和印鼠客蚤,个别口岸汉坦病毒携带率较高,需采取措施预防控制鼠传疾病。 展开更多
关键词 鼠疫耶尔森菌 汉坦病毒 鼠形动物
我国口岸首例输入性寨卡病毒感染病例的实验室检测 被引量:12
16
作者 郑夔 袁帅 +7 位作者 梁洁怡 李小波 戴俊 师永霞 张显光 宋卫 吴惠明 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2016年第2期77-82,共6页
目的对从广州白云国际机场口岸入境的1例自委内瑞拉归国发热人员进行寨卡病毒实验室检测。方法同时使用自主研制的和中国疾病预防控制中心发放的实时荧光RT-PCR检测试剂,对发热人员的血清、全血、尿液、唾液和咽拭子等多种样本进行寨卡... 目的对从广州白云国际机场口岸入境的1例自委内瑞拉归国发热人员进行寨卡病毒实验室检测。方法同时使用自主研制的和中国疾病预防控制中心发放的实时荧光RT-PCR检测试剂,对发热人员的血清、全血、尿液、唾液和咽拭子等多种样本进行寨卡病毒核酸检测;对唾液样本进行寨卡病毒RT-PCR扩增和序列分析。结果入境第一天上午采集的血清、全血和咽拭子样本的实时荧光RT-PCR结果显示寨卡病毒核酸阳性,当天下午采集的血清样本检测结果显示核酸弱阳性,第二天采集的血清样本为寨卡病毒核酸阴性,但尿液和唾液样本仍为阳性,且唾液中病毒载量较高。RT-PCR结果显示,唾液样本扩增出了预期片段,测序结果表明该片段与巴西寨卡病毒毒株相应序列的同源性为99.8%。中国疾病预防控制中心复核检测确认为寨卡病毒核酸阳性。结论根据流行病学史、临床表现和病例样本核酸检测情况,确诊该入境人员为口岸截获首例、广东省首例、我国第二例输入性寨卡病毒感染病例。 展开更多
关键词 寨卡病毒 口岸
新疆出血热病毒实时荧光RT-PCR检测方法的假病毒阳性对照品制备
17
作者 郑夔 袁帅 +5 位作者 黎东红 丁国允 李小波 师永霞 戴俊 《华南预防医学》 2016年第1期1-5,共5页
目的制备安全、稳定的新疆出血热病毒实时荧光RT-PCR检测阳性对照品。方法人工合成含实时荧光RT-PCR扩增片段的新疆出血热病毒核苷酸序列,连接入慢病毒载体,将重组慢病毒载体与慢病毒包装载体共转染293T细胞,培养48 h后采用实时荧光RT-... 目的制备安全、稳定的新疆出血热病毒实时荧光RT-PCR检测阳性对照品。方法人工合成含实时荧光RT-PCR扩增片段的新疆出血热病毒核苷酸序列,连接入慢病毒载体,将重组慢病毒载体与慢病毒包装载体共转染293T细胞,培养48 h后采用实时荧光RT-PCR方法检测假病毒包装情况,随后将包装成功的假病毒颗粒加核酸保护剂制备成阳性对照品,并进行稳定性试验。结果重组慢病毒载体与慢病毒包装载体共转染293T细胞后,将收集到的细胞培养上清采用实时荧光RT-PCR进行检测,结果显示10、100、1 000、10 000倍4个倍比稀释度扩增后所得的Ct值分别为13、19、25、33,显示含高浓度的假病毒颗粒。取经1 000倍稀释后制备的阳性对照品于37℃孵箱中放置0、3、7、15、21和30 d后,提取的RNA经实时荧光RT-PCR检测,所得Ct值在25~28之间,表明阳性对照品有较高的热稳定性。结论本研究通过慢病毒包装技术制备的假病毒颗粒,是新疆出血热病毒荧光RT-PCR核酸检测过程中理想的阳性对照品。 展开更多
关键词 新疆出血热病毒 实时荧光RT-PCR 阳性对照品
克里米亚-刚果出血热病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立 被引量:2
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作者 袁帅 郑夔 +7 位作者 戴俊 丁国允 师永霞 李晓波 李淑芬 黎东红 傅玉才 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2016年第3期183-185,190共4页
目的建立一种快速、敏感检测克里米亚-刚果出血热病毒的实时荧光RT-PCR检测方法。方法分析克里米亚-刚果出血热病毒S基因片段核酸序列的保守性,设计实时荧光RT-PCR引物和探针,优化引物和探针浓度,确定最佳反应体系,并进行灵敏性、重复... 目的建立一种快速、敏感检测克里米亚-刚果出血热病毒的实时荧光RT-PCR检测方法。方法分析克里米亚-刚果出血热病毒S基因片段核酸序列的保守性,设计实时荧光RT-PCR引物和探针,优化引物和探针浓度,确定最佳反应体系,并进行灵敏性、重复性、特异性检测。结果建立的克里米亚-刚果出血热病毒实时荧光RT-PCR方法的检测灵敏性为7.26×10^2 copies/μl,重复性好,与汉坦病毒等无交叉反应。结论建立的克里米亚-刚果出血热病毒实时荧光RT-PCR法能准确、快速地检测克里米亚-刚果出血热病毒。 展开更多
关键词 克里米亚-刚果出血热病毒 实时荧光RT-PCR
广州空港口岸非洲航班入境旅客传染病罹患因素研究 被引量:1
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作者 戴俊 张显光 +7 位作者 洪烨 吴惠明 邓荆 陈艳玲 李小波 师永霞 郑夔 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2016年第1期15-20,39共7页
目的针对广州空港口岸非洲航班入境旅客个人基本情况、国内外生活和工作环境、个人在国外生活状况、传染病认知度、传染病防控主动获知意识等五大要素进行流行病学调查,研究其传染病罹患因素,探讨如何针对性强化境内外防控措施。方法 2... 目的针对广州空港口岸非洲航班入境旅客个人基本情况、国内外生活和工作环境、个人在国外生活状况、传染病认知度、传染病防控主动获知意识等五大要素进行流行病学调查,研究其传染病罹患因素,探讨如何针对性强化境内外防控措施。方法 2010—2014年,在广州白云国际机场口岸,针对非洲航班中国籍入境旅客发放调查表并统一回收统计。结果非洲航班入境旅客以男性为主,占94.23%;88.55%的旅客年龄集中在20-49岁之间;职业以劳务和商务人员为多,合计达68.14%;入境旅客在非生活地区以城市及周边郊区为主;传染病知识宣教和防护用品发放通常由当地政府、医疗机构提供,一般为驱蚊药物、口罩、手套等;52.07%的入境旅客声称身边有传染病患者,多为疟疾、登革热、流感等;入境旅客承认在境外期间有蚊虫叮咬史者最多,达80.46%;仅有11.07%和13.47%的旅客能正确认知以埃博拉出血热为代表的新发传染病传播途径及预防措施,入境有发热等不适症状时,仅有27.24%的旅客选择将情况告知口岸检疫部门。结论非洲航班入境旅客在境外受传染病威胁较大,自身传染病知识尤其是新发传染病知识、个人防护及主动配合意识有待加强,在境外感染传染病后输入我国导致本地疫情暴发的可能性不容忽视。检验检疫、卫生、劳务等部门应通力合作,采取积极主动的针对性境内外防控措施,达到提前防范风险的目标。 展开更多
关键词 非洲航班 传染病罹患因素
辛德比斯病毒的实时荧光RT-PCR检测方法研究
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作者 洪烨 袁帅 +5 位作者 戴俊 郑夔 师永霞 李小波 苏锦坤 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2015年第3期165-167,共3页
目的建立辛德比斯病毒的实时荧光RT-PCR检测方法。方法人工合成辛德比斯病毒特异性核酸序列作为阳性对照模板,设计实时荧光RT-PCR引物、探针并构建反应体系,对反应条件进行优化,验证该方法的特异性、灵敏度。结果建立的辛德比斯病毒实... 目的建立辛德比斯病毒的实时荧光RT-PCR检测方法。方法人工合成辛德比斯病毒特异性核酸序列作为阳性对照模板,设计实时荧光RT-PCR引物、探针并构建反应体系,对反应条件进行优化,验证该方法的特异性、灵敏度。结果建立的辛德比斯病毒实时荧光RT-PCR检测方法对辛德比斯病毒核酸检测有高度特异性,与1~4型登革病毒、流行性乙型脑炎病毒和基孔肯雅病毒均无交叉反应,检测灵敏度为103拷贝/反应。结论该方法灵敏度高、特异性强,适用于对辛德比斯病毒的快速检验。 展开更多
关键词 辛德比斯病毒 实时荧光RT-PCR 检测
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