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5种埃博拉病毒多重实时荧光PCR方法的建立
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作者 师永霞 黄吉城 +4 位作者 袁帅 黎东 孙芳芳 郑夔 戴俊 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2019年第1期1-4,共4页
目的建立扎伊尔型(EBOZ)、苏丹型(EBOS)、科特迪瓦型(EBOC)、本迪布焦型(EBOB)和莱斯顿型(EBOR)埃博拉病毒多重实时荧光PCR检测方法,一次检测可实现5种埃博拉病毒的分型。方法比较5种15株埃博拉病毒基因组的保守性和特异性,设计5种埃博... 目的建立扎伊尔型(EBOZ)、苏丹型(EBOS)、科特迪瓦型(EBOC)、本迪布焦型(EBOB)和莱斯顿型(EBOR)埃博拉病毒多重实时荧光PCR检测方法,一次检测可实现5种埃博拉病毒的分型。方法比较5种15株埃博拉病毒基因组的保守性和特异性,设计5种埃博拉病毒特异性引物和探针用于核酸检测,EBOZ、EBOS、EBOC、EBOB和EBOR分别使用FAM、VIC、Texas red、FAM、VIC荧光基团标记探针。分2管对5种埃博拉病毒进行多重实时荧光PCR检测,其中管1检测EBOZ、EBOS和EBOC,管2检测EBOB和EBOR。使用不同浓度的埃博拉病毒阳性对照质粒进行检测,确定最佳的引物、探针用量和Mg2+用量,建立5种埃博拉病毒分型检测的多重实时荧光PCR方法。同时,对建立的方法进行灵敏度、特异性和灵敏度分析。结果优化的多重实时荧光PCR方法的引物和探针终浓度分别为160 nmol/L和80 nmol/L,Mg2+终浓度为2 mmol/L。建立的方法灵敏度为103拷贝/ml,EBOZ、EBOS、EBOC、EBOB和EBOR实时荧光PCR检测10次的CV值分别为0.16%、0.25%、0.24%、0.22%、0.28%。埃博拉病毒多重实时荧光PCR对马尔堡病毒阳性对照,登革病毒、黄热病毒、基孔肯雅病毒、寨卡病毒、裂谷热病毒等阳性毒株检测结果为阴性。结论建立的5种埃博拉病毒多重实时荧光PCR检测方法灵敏度高,特异性强,重复性好,可用于口岸输入性埃博拉出血热病例的早期检测和分型鉴别。 展开更多
关键词 扎伊尔型埃博拉病毒 苏丹型埃博拉病毒 科特迪瓦型埃博拉病毒 本迪布焦型埃博拉病毒 莱斯顿型埃博拉病毒 多重实时荧光PCR
精细化护理干预对腹腔镜结直肠癌根治术患者术后恢复与生存质量的影响 预览
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作者 黎东 黄燕平 +2 位作者 梁姗 李惠仪 陆碧华 《护理实践与研究》 2019年第23期87-89,共3页
目的探讨精细化护理干预对腹腔镜结直肠癌根治术患者术后恢复状况与生存质量的影响。方法选取2018年1—12月我院收治的腹腔镜结直肠癌根治术患者88例为研究对象,随机将其等分为对照组与观察组,对照组予以常规护理,观察组予以精细化护理... 目的探讨精细化护理干预对腹腔镜结直肠癌根治术患者术后恢复状况与生存质量的影响。方法选取2018年1—12月我院收治的腹腔镜结直肠癌根治术患者88例为研究对象,随机将其等分为对照组与观察组,对照组予以常规护理,观察组予以精细化护理干预,比较两组术后恢复状况与生存质量。结果观察组术后恢复状况与生存质量明显优于对照组(P<0.05)。结论在腹腔镜结直肠癌根治术患者中应用精细化护理干预,能促进术后恢复,提高患者生存质量。 展开更多
关键词 精细化护理干预 结直肠癌 腹腔镜根治术 生存质量
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一例基孔肯雅病毒和寨卡病毒混合感染病例的发现
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作者 郑夔 孙芳芳 +9 位作者 袁帅 黎东 林泽凯 梁洁怡 欧阳善初 黄树祥 戴俊 师永霞 李小波 黄吉城 《华南预防医学》 2019年第5期481-485,共5页
目的对来自菲律宾的入境旅客(1例发热病例)进行病原体鉴定。方法采集病例血液样本,提取核酸后进行基孔肯雅病毒和寨卡病毒荧光RT PCR检测,进而接种Vero细胞分离培养病毒,细胞培养上清用荧光RT PCR方法和宏基因组序列测定分析法进行病毒... 目的对来自菲律宾的入境旅客(1例发热病例)进行病原体鉴定。方法采集病例血液样本,提取核酸后进行基孔肯雅病毒和寨卡病毒荧光RT PCR检测,进而接种Vero细胞分离培养病毒,细胞培养上清用荧光RT PCR方法和宏基因组序列测定分析法进行病毒鉴定。结果荧光RT PCR检测结果显示,该病例存在基孔肯雅病毒和寨卡病毒感染,Ct值分别为20和26;血清样本接种Vero细胞72 h后可观察到明显的细胞病变效应,细胞培养上清的荧光RT PCR检测和病毒宏基因组测序分析结果显示,Vero细胞中有基孔肯雅病毒和寨卡病毒。结论该病例为基孔肯雅病毒和寨卡病毒混合感染病例。 展开更多
关键词 基孔肯雅病毒 寨卡病毒 感染
2013—2016年广东口岸输入性流感病例流行病学分析
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作者 黎东 孙芳芳 +6 位作者 袁帅 范秀莹 郑夔 李小波 戴俊 黄吉城 师永霞 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2018年第3期197-200,共4页
目的 对2013—2016年广东口岸输入性流感病例的流行病学特征进行分析,为流感的监测及其疫情防控提供依据。方法 采集广东25个口岸有咳嗽、咽痛、发热、体温≥37℃等症状的入境人员的鼻咽拭子样本,采用实时荧光RT-PCR法对样本进行流感病... 目的 对2013—2016年广东口岸输入性流感病例的流行病学特征进行分析,为流感的监测及其疫情防控提供依据。方法 采集广东25个口岸有咳嗽、咽痛、发热、体温≥37℃等症状的入境人员的鼻咽拭子样本,采用实时荧光RT-PCR法对样本进行流感病毒核酸检测和分型,通过Excel、SPSS 22.0等软件对流感病例进行描述和统计分析。结果 2013—2016年,广东口岸共采集14566名流感样病例样本,检出流感病例2984例,阳性率为20.49%。其中,2013年以甲型H1N1(2009)流感为主,2014和2015年均以季节性H3N2流感为主,2016年2-4月甲型H1N1(2009)流感和乙型流感共同流行,之后季节性H3N2流感逐月增多,成为2016年下半年的主要流行株。检出的流感病例主要来自我国香港地区,共检出1 339例,占总病例的44.87%。各年龄组均有流感病例检出,以25~59岁年龄组为主,共检出1 712例,占总流感病例数的57.37%。结论 2013—2016年,广东口岸输入性流感以季节性H3N2、乙型和甲型H1N1(2009)流感交替流行,各年龄组均有流感病例检出。 展开更多
关键词 流感 广东口岸 流行病学
科特迪瓦型埃博拉病毒实时荧光PCR方法的建立 被引量:1
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作者 师永霞 戴俊 +4 位作者 黎东 袁帅 孙芳芳 郑夔 黄吉城 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2018年第4期233-236,共4页
目的建立科特迪瓦型埃博拉病毒实时荧光PCR检测方法,并在广东口岸进行应用。方法分析埃博拉病毒基因组的同源性,设计3组引物和探针用于科特迪瓦型埃博拉病毒核酸检测。对不同浓度的科特迪瓦型埃博拉病毒体外转录RNA进行检测,确定最佳的... 目的建立科特迪瓦型埃博拉病毒实时荧光PCR检测方法,并在广东口岸进行应用。方法分析埃博拉病毒基因组的同源性,设计3组引物和探针用于科特迪瓦型埃博拉病毒核酸检测。对不同浓度的科特迪瓦型埃博拉病毒体外转录RNA进行检测,确定最佳的引物和探针组合、用量,以及Mg2+用量,建立科特迪瓦型埃博拉病毒实时荧光PCR方法。对建立的方法进行灵敏度、特异性和灵敏度分析,并用于广东口岸非洲入境发热人员血清样本的筛查。结果经筛选,引物Ebv-C-3F/Ebv-C-3R和探针Ebv-C-3P对102~105拷贝/ml的阳性质粒的检出率为100.0%,是最佳的引物和探针组合。优化后的实时荧光PCR体系中引物和探针终浓度分别为400 nmol/L和80 nmol/L,Mg2+终浓度为2 mmol/L。方法的灵敏度为50拷贝/ml,重复性好、特异性强,对扎伊尔型、苏丹型、本迪布焦型和莱斯顿型埃博拉病毒阳性对照样本、马尔堡病毒阳性对照样本和广东口岸非洲发热入境人员血清样本检测均为阴性。结论建立的科特迪瓦型埃博拉病毒实时荧光PCR检测方法灵敏度高,特异性强,重复性好,对于境外输入性埃博拉病毒病病例的早期诊断和分型鉴别具有重要意义。 展开更多
关键词 埃博拉病毒 实时荧光PCR 灵敏度 特异性
广东首例苏里南输入性寨卡病毒感染病例的实验室检测 预览 被引量:1
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作者 梁洁怡 戴俊 +8 位作者 黎东 师永霞 黄吉城 袁帅 郑夔 李小波 张显光 宋卫 吴惠明 《中国人兽共患病学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期522-525,共4页
目的对从广州白云国际机场口岸入境的一例自苏里南归国发热人员进行寨卡病毒实验室检测。方法采集发热人员的血液和唾液样本,同时使用两种寨卡病毒实时荧光RT-PCR试剂进行寨卡病毒核酸检测。RT-PCR扩增寨卡病毒部分基因片段,并进行序列... 目的对从广州白云国际机场口岸入境的一例自苏里南归国发热人员进行寨卡病毒实验室检测。方法采集发热人员的血液和唾液样本,同时使用两种寨卡病毒实时荧光RT-PCR试剂进行寨卡病毒核酸检测。RT-PCR扩增寨卡病毒部分基因片段,并进行序列测定和同源性比较。基于扩增片段构建系统进化树,分析输入性病例的来源。结果实时荧光RT-PCR结果显示,该病例血清样本寨卡病毒核酸弱阳性、唾液样本寨卡病毒核酸阳性。RT-PCR扩增出预期大小约1.5Kb片段,测序结果表明该片段与巴西寨卡病毒株(GenBank号KX197250)相应序列的同源性为99%。系统进化树显示该病毒属亚洲谱系。结论根据患者流行病学史、临床表现和病例标本核酸检测情况,确诊该病例为广东首例从苏里南地区输入性寨卡病例。 展开更多
关键词 寨卡病毒 实时荧光RT-PCR 核酸检测 进化分析
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新疆出血热病毒实时荧光RT-PCR检测方法的假病毒阳性对照品制备
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作者 郑夔 袁帅 +5 位作者 黎东 丁国允 李小波 师永霞 戴俊 黄吉城 《华南预防医学》 2016年第1期1-5,共5页
目的制备安全、稳定的新疆出血热病毒实时荧光RT-PCR检测阳性对照品。方法人工合成含实时荧光RT-PCR扩增片段的新疆出血热病毒核苷酸序列,连接入慢病毒载体,将重组慢病毒载体与慢病毒包装载体共转染293T细胞,培养48 h后采用实时荧光RT-... 目的制备安全、稳定的新疆出血热病毒实时荧光RT-PCR检测阳性对照品。方法人工合成含实时荧光RT-PCR扩增片段的新疆出血热病毒核苷酸序列,连接入慢病毒载体,将重组慢病毒载体与慢病毒包装载体共转染293T细胞,培养48 h后采用实时荧光RT-PCR方法检测假病毒包装情况,随后将包装成功的假病毒颗粒加核酸保护剂制备成阳性对照品,并进行稳定性试验。结果重组慢病毒载体与慢病毒包装载体共转染293T细胞后,将收集到的细胞培养上清采用实时荧光RT-PCR进行检测,结果显示10、100、1 000、10 000倍4个倍比稀释度扩增后所得的Ct值分别为13、19、25、33,显示含高浓度的假病毒颗粒。取经1 000倍稀释后制备的阳性对照品于37℃孵箱中放置0、3、7、15、21和30 d后,提取的RNA经实时荧光RT-PCR检测,所得Ct值在25~28之间,表明阳性对照品有较高的热稳定性。结论本研究通过慢病毒包装技术制备的假病毒颗粒,是新疆出血热病毒荧光RT-PCR核酸检测过程中理想的阳性对照品。 展开更多
关键词 新疆出血热病毒 实时荧光RT-PCR 阳性对照品
克里米亚-刚果出血热病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立 被引量:2
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作者 袁帅 郑夔 +7 位作者 黄吉城 戴俊 丁国允 师永霞 李晓波 李淑芬 黎东 傅玉才 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2016年第3期183-185,190共4页
目的建立一种快速、敏感检测克里米亚-刚果出血热病毒的实时荧光RT-PCR检测方法。方法分析克里米亚-刚果出血热病毒S基因片段核酸序列的保守性,设计实时荧光RT-PCR引物和探针,优化引物和探针浓度,确定最佳反应体系,并进行灵敏性、重复... 目的建立一种快速、敏感检测克里米亚-刚果出血热病毒的实时荧光RT-PCR检测方法。方法分析克里米亚-刚果出血热病毒S基因片段核酸序列的保守性,设计实时荧光RT-PCR引物和探针,优化引物和探针浓度,确定最佳反应体系,并进行灵敏性、重复性、特异性检测。结果建立的克里米亚-刚果出血热病毒实时荧光RT-PCR方法的检测灵敏性为7.26×10^2 copies/μl,重复性好,与汉坦病毒等无交叉反应。结论建立的克里米亚-刚果出血热病毒实时荧光RT-PCR法能准确、快速地检测克里米亚-刚果出血热病毒。 展开更多
关键词 克里米亚-刚果出血热病毒 实时荧光RT-PCR
人性化护理对门诊输液患儿输液配合度的影响研究 预览
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作者 黎东 黄婉玲 傅嘉颖 《齐齐哈尔医学院学报》 2016年第7期978-980,共3页
目的探讨人性化护理对门诊输液患儿的护理方法,评估其临床效果。方法选择我院门诊2012年3月至2015年3月诊治的96例输液患儿,随机分为观察组和对照组各48例。观察组应用常规护理和人性化护理,对照组应用常规护理。观察记录输液中患儿穿... 目的探讨人性化护理对门诊输液患儿的护理方法,评估其临床效果。方法选择我院门诊2012年3月至2015年3月诊治的96例输液患儿,随机分为观察组和对照组各48例。观察组应用常规护理和人性化护理,对照组应用常规护理。观察记录输液中患儿穿刺配合度、护理满意度等情况。结果与对照组相比,观察组合作率显著提高,坚持合作率与不合作率均明显降低(P〈0.05),一次穿刺成功率明显提高,心悸、头晕及胸闷等不良反应发生率均明显降低,在态度、治疗效果等项目护理满意度均明显提高,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论人性化护理能有效提高患儿穿刺配合度及穿刺成功率,提高护理满意度,改善患儿生活质量,值得推广使用。 展开更多
关键词 配合度 满意度 静脉输液 门诊 患儿
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心理护理干预在先兆流产治疗中的临床价值 被引量:2
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作者 关小珊 何宝颖 黎东 《岭南急诊医学杂志》 2012年第2期 153-154,共2页
目的:探讨心理护理在先兆流产治疗中的临床价值。方法:将200例先兆流产患者随机分为干预组和对照组各100例,对照组采用常规治疗和常规护理,干预组在此基础上实施心理护理干预,用焦虑自评量表(SAS)对两组进行调查评价,观察住院... 目的:探讨心理护理在先兆流产治疗中的临床价值。方法:将200例先兆流产患者随机分为干预组和对照组各100例,对照组采用常规治疗和常规护理,干预组在此基础上实施心理护理干预,用焦虑自评量表(SAS)对两组进行调查评价,观察住院日、继续妊娠率。结果:干预组护理后SAS评分均较护理前明显下降,且明显低于对照组(P〈0.05);对照组护理前后SAS评分无显著差异(P〉0.05)。干预组住院H数、继续妊娠率均明显优于对照组(P〈0.05)。结论:对先兆流产患者采用心理护理干预,可明显改善患者的焦虑状态,全面提高治愈率。 展开更多
关键词 先兆流产 心理护理 焦虑
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