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维甲酸促进隐睾大鼠睾丸生精功能改善的实验研究
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作者 周宇 彭金普 +7 位作者 张德迎 周玥 春兰 沈炼桔 刘星 林涛 何大维 魏光辉 《中华小儿外科杂志》 CSCD 北大核心 2019年第4期363-369,共7页
目的探讨维甲酸改善氟他胺诱导隐睾大鼠生精功能的相关机制,为临床预防隐睾患儿发生不育提供动物实验基础。方法30只雌性SD大鼠合笼成功后采用随机数字表法平均分为:对照组10只,孕期第12~20天皮下注射1 mg/ml的玉米油25 mg·kg^-1&#... 目的探讨维甲酸改善氟他胺诱导隐睾大鼠生精功能的相关机制,为临床预防隐睾患儿发生不育提供动物实验基础。方法30只雌性SD大鼠合笼成功后采用随机数字表法平均分为:对照组10只,孕期第12~20天皮下注射1 mg/ml的玉米油25 mg·kg^-1·d^-1;氟他胺诱导隐睾组10只,孕期第12~20天皮下注射玉米油配制的氟他胺25 mg·kg^-1·d^-1;维甲酸干预组10只,在氟他胺诱导隐睾组处理基础上,予子代雄鼠生后1~10 d及28~30 d玉米油配制的维甲酸1 mg·kg^-1·d^-1。于生后30 d及60 d观察子代雄鼠睾丸组织病理、精子数量及质量,免疫组织化学及蛋白质印迹法检测氧化应激水平蛋白、凋亡水平蛋白及血睾屏障相关连接蛋白水平改变。结果对照组无隐睾发生,睾丸重量为(0.56±0.17) g,体积为(0.44±0.12)cm^3,精子数量为(2.25±0.14)个/ml;睾丸组织各级生精细胞排列整齐,层次清楚,可见较多精子细胞;氧化应激蛋白SOD1、HO-1、Gpx表达量分别为0.92±0.02和0.62±0.06、0.93±0.12,凋亡蛋白Bax及Bcl-2表达量分别为0.67±0.06和0.80±0.04,血睾屏障相关连接蛋白Cx43及Zo-1表达量分别为1.44±0.07和3.84±0.10。氟他胺诱导隐睾组隐睾发生率为62.50%(20/32),睾丸重量为(0.13±0.03) g、体积为(0.07±0.02)cm^3,精子数量为(0.65±0.17)个/ml,上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);睾丸组织各级生精细胞排列紊乱,层次不清,结构破坏;氧化应激蛋白SOD1、HO-1、Gpx表达量分别为1.23±0.07和0.90±0.09、1.70±0.01,凋亡蛋白Bax及Bcl-2表达量分别为0.87±0.01和0.53±0.20,血睾屏障相关连接蛋白Cx43及Zo-1表达量分别为0.51±0.07和1.48±0.25,上述指标与对照组比较,差异亦均有统计学意义(P<0.05)。维甲酸干预组睾丸重量为(0.29±0.11) g、体积为(5.21±0.30)cm^3,精子计数为(1.49±0.31)个/ml,与对照组比较差异无统计学意义,但较氟他胺诱导隐睾组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)� 展开更多
关键词 隐睾 维甲酸 氧化应激 凋亡 血睾屏障
刺五加苷诱导大鼠间充质干细胞成骨分化的作用 预览
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作者 黄月 颜亮 +4 位作者 崔向荣 春兰 周琴 田杰 朱静 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期215-221,共7页
目的 探讨刺五加苷诱导大鼠间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用。方法 提取SD大鼠的BMSCs,培养3代后采用流式细胞术鉴定表面抗原CD45、CD29、CD90的表达;在经典成骨培养液中加入不同浓度的刺五加苷而分为9组:A组(1×10^–4mol/L),B... 目的 探讨刺五加苷诱导大鼠间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用。方法 提取SD大鼠的BMSCs,培养3代后采用流式细胞术鉴定表面抗原CD45、CD29、CD90的表达;在经典成骨培养液中加入不同浓度的刺五加苷而分为9组:A组(1×10^–4mol/L),B组(1×10^–5mol/L),C组(1×10^–6mol/L),D组(1×10^–7mol/L),E组(1×10^–8mol/L),F 组(1×10^–9mol/L),G组(1×10^–10mol/L),H组(经典成骨组),I组(阴性对照组)。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖能力,反转录定量PCR(RT-qPCR)检测骨形成蛋白(BMP)表达情况,筛选出刺五加苷的最佳诱导浓度。以最佳诱导浓度培养12d后,RT-qPCR检测成骨分化相关基因Runt相关转录因子(RUNX)、成骨细胞特异性转录因子(OSX)、骨涎蛋白(BSP)、骨钙素(OCN)的mRNA表达水平,Western blotting检测Notch跨膜受体蛋白1(Notch1)、毛发增强分裂蛋白(Hes1)的蛋白表达水平;第21天时行矿化钙结节茜素红染色。结果 第3代BMSCs表面抗原符合干细胞鉴定标准。CCK-8检测结果显示,A、B两组在培养120h后明显抑制了BMSCs的增殖,后期培养中将舍弃A、B两组;而RT-qPCR结果显示,添加有刺五加苷的C~G组中,E组BMP表达量最高(4.91±0.46),因此选择1×10–8mol/L作为刺五加苷的最佳诱导浓度进行后续实验。RT-qPCR检测结果显示,E组OSX表达量(30.72±1.96)明显高于I组(1.02±0.27)和H组(9.99±0.59,P<0.05),BSP表达量(8.15±0.47)高于I组(1.09±0.31)和H组(6.03±0.8,P<0.05),OCN表达量(5.91±0.68)高于I组(1.18±2.91)和H组(3.05±0.53,P<0.05),RUNX表达量(1.99±0.09)虽高于I组(1.02±0.19),却低于H组(2.51±0.06,P<0.05)。Western blotting检测结果显示,E组成骨诱导后Notch1表达量(4608±103)较I组(2638±308)高,却低于H组(5218±182,P<0.05),Hes1表达量(8885±17)较I组(6241±461)增高,却低于H组(12 289±629,P<0.05)。茜素红染色结果显示刺五加苷浓度为10–8mol/L时矿化钙结节多于经典成骨组,提示该浓度刺五加苷成骨诱导 展开更多
关键词 刺五加苷 成骨分化 骨髓间充质干细胞
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冻融联合灌注法优化大鼠肾脏脱细胞支架的制备
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作者 胡东 张德迎 +8 位作者 刘博 周宇 余熠杭 沈炼桔 春兰 刘星 林涛 何大维 魏光辉 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期307-318,共12页
本研究旨在探索优化肾脏脱细胞支架的制备方法,为肾脏组织工程及肾脏体外病理、毒理研究提供实验基础。取大鼠肾脏灌注PBS作为对照组(Control组),在不同流速下分别以十二烷基磺酸钠(Sodiumdodecyl sulfate,SDS)灌注(S组),Triton X-100联... 本研究旨在探索优化肾脏脱细胞支架的制备方法,为肾脏组织工程及肾脏体外病理、毒理研究提供实验基础。取大鼠肾脏灌注PBS作为对照组(Control组),在不同流速下分别以十二烷基磺酸钠(Sodiumdodecyl sulfate,SDS)灌注(S组),Triton X-100联合SDS灌注(TS组),反复冻融后Triton X-100联合SDS灌注(FTS组),制备肾脏脱细胞支架,并测定其流体分布及脉管阻力。HE染色、DAPI染色、DNA定量检测脱细胞支架脱细胞程度,Masson染色、PAS染色、免疫组织化学染色检测脱细胞支架主要成分的保留和结构的完整,扫描电镜检测支架的超微结构,MTT法检测支架的细胞毒性,ELISA检测支架中生长因子的含量。结果显示,FTS组脱细胞用时较S组、TS组少,10 mL/min组支架脉管阻力较低,S组、TS组、FTS组流体分布与Control组存在差异。HE染色和DAPI染色显示各组支架未见细胞成分残留,DNA含量<50 ng/mg。Masson染色和PAS染色可见细胞外网状胶原及多糖,免疫组织化学染色见Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、Ⅳ型胶原蛋白(Collagen Ⅳ)、纤维连接蛋白(Fibronectin)、层粘连蛋白(Laminin)表达。扫描电镜见支架呈蜂窝状结构。MTT法检测支架细胞毒性分级在0–1级之间。ELISA检测提示FTS组VEGF、EGF、IGF-1、PDGF含量明显高于S组和TS组。综上,联合冻融和灌注法能够制备更为理想且有效的大鼠肾脏整器官脱细胞支架,为肾脏组织工程及肾脏体外病理、毒理学研究奠定基础。 展开更多
关键词 组织工程 肾脏 脱细胞支架 冻融法 灌注法
邻苯二甲酸二乙酯诱导的大鼠尿道下裂与Mafb的表达相关:基于转录组测序结果 预览
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作者 向涵 王绍 +7 位作者 周玥 刘星 沈炼桔 春兰 张德迎 何大维 林涛 魏光辉 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期456-463,共8页
目的通过转录组测序筛选大鼠尿道发育过程中相关差异基因,并进行验证;探究邻苯二甲酸二乙酯(DEHP)诱导SD大鼠尿道下裂的发生机制。方法 40只成年SD孕鼠随机分成4组(n=10),前两组予以空白对照处理,分别于妊娠期16 d(GD16组)和GD19 d(GD19... 目的通过转录组测序筛选大鼠尿道发育过程中相关差异基因,并进行验证;探究邻苯二甲酸二乙酯(DEHP)诱导SD大鼠尿道下裂的发生机制。方法 40只成年SD孕鼠随机分成4组(n=10),前两组予以空白对照处理,分别于妊娠期16 d(GD16组)和GD19 d(GD19组)剖宫产取出雄性胎鼠,将收集好的胎鼠阴茎组织进行转录组测序,lllumina HiSeq 2000筛选出差异表达基因(DEGs),然后对DEGs进行差异基因功能(GO)和pathway显著富集性分析;选取其中的DEG(Mafb)进行免疫荧光验证。后两组分别予以玉米油(对照组)和DEHP [750 mg/(kg·d)](DEHP暴露组)于GD12 d至GD19 d每日灌胃处理,GD19 d剖宫产取出雄性胎鼠,并判断有无尿道下裂的发生。扫描电镜和HE染色观察阴茎组织形态学改变,免疫荧光和Western blot检验阴茎组织中Mafb、β-catenin的表达水平。结果 GD19组胎鼠阴茎组织与GD16组胎鼠阴茎组织转录组测序结果示1360个DEGs(其中上调797个,下调563个),差异基因主要富集于细胞粘着斑信号通路、轴突导向信号通路、细胞外基质受体作用信号通路等,选取DEG(Mafb)进行免疫荧光验证,发现Mafb的表达随发育显著增加,与测序结果相符。而DEHP暴露组胎鼠阴茎组织与对照组胎鼠阴茎组织相比,Mafb、β-catenin表达水平显著下调(P<0.01)。结论随着大鼠阴茎组织的正常发育,Mafb的表达逐渐增加;而DEHP暴露组较对照组Mafb、β-catenin表达显著下调,提示β-catenin信号通路影响Mafb表达可能与DEHP诱导大鼠尿道下裂发生相关。 展开更多
关键词 尿道下裂 邻苯二甲酸二乙酯 转录组测序 MAFB
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mTOR自噬信号通路和凋亡在DEHP致SD尿道下裂胎鼠中的改变
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作者 黄方圆 周玥 +6 位作者 沈炼桔 魏仪 春兰 唐向亮 李典 刘星 魏光辉 《中华小儿外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第5期383-388,共6页
目的 探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯[Di(2-Ethylhexyl) Phthalate,DEHP]诱导大鼠发生尿道下裂的机制.方法 20只成年孕SD鼠[10~12周龄,体重(240±20 g)]按照数字随机化法分为:正常对照组(n=10)和DEHP暴露组(750 mg·... 目的 探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯[Di(2-Ethylhexyl) Phthalate,DEHP]诱导大鼠发生尿道下裂的机制.方法 20只成年孕SD鼠[10~12周龄,体重(240±20 g)]按照数字随机化法分为:正常对照组(n=10)和DEHP暴露组(750 mg·kg-1·d-1)(n=10),于妊娠期(gestationday,GD)第8.5~18.5日每日灌胃,于GD 19.5时剖宫取出胎鼠,以有无睾丸分辨雌雄,并在解剖显微镜下观察有无尿道下裂的发生.测量肛门生殖器距离(anogenital distance,AGD)和肛门生殖指数(anogenital index,AGI),扫描电镜和HE染色观察阴茎组织形态改变,透射电镜观察阴茎组织内自噬的改变,western blot检测生殖结节(GTs)中自噬相关蛋白LC3、p62、Beclin1、Akt、mTOR、p-Akt、p-mTOR和凋亡相关蛋白cleaved-caspase3、Bax、Bcl2的表达水平,TUNEL法检测雄鼠GTs中细胞凋亡.结果 DEHP暴露后出现尿道下裂,发生率为27.58%,尿道下裂组中AGD、AGI均明显降低(P<0.05);尿道下裂雄鼠的GTs出现腹侧尿道缝融合障碍及尿道开口异位.尿道下裂组GTs中LC3和Beclin1的表达、LC3Ⅱ/Ⅰ比值增加(P<0.05),p62、p-Aktser473、p-mTORser2448表达明显减少(P<0.05),Bcl2表达减少(P<0.05),cleaved-caspase3和Bax蛋白表达水平则明显增高(P<0.05),细胞凋亡显著增加(P<0.05).结论 DEHP作为一个外源性干扰物进入机体后,致使胎鼠的GTs中PI3K/Akt/mTOR信号通路被抑制,自噬水平增加,同时促凋亡与抗凋亡系统失衡,进一步促进自噬的发生,最终使得凋亡异常增加,导致尿道下裂的发生. 展开更多
关键词 尿道下裂 细胞凋亡 自噬 DEHP
邻苯二甲酸二-(2-乙基己基)酯通过氧化应激、凋亡诱导大鼠尿道下裂 被引量:1
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作者 黄方圆 周玥 +6 位作者 王绍 刘星 沈炼桔 春兰 唐向亮 李典 魏光辉 《第三军医大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期372-379,共8页
目的 探讨邻苯二甲酸二-(2-乙基己基)酯[di(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP]诱导大鼠发生尿道下裂的发生机制。方法 20只成年孕SD大鼠[10~12周龄,体质量(240±20)g]按完全随机分为:玉米油对照组[750 mg/(kg·d),n=10]和D... 目的 探讨邻苯二甲酸二-(2-乙基己基)酯[di(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP]诱导大鼠发生尿道下裂的发生机制。方法 20只成年孕SD大鼠[10~12周龄,体质量(240±20)g]按完全随机分为:玉米油对照组[750 mg/(kg·d),n=10]和DEHP暴露组[750 mg/(kg·d),n=10],于妊娠期(gestation day,GD)第8.5~18.5日每日灌胃,于GD19.5时剖宫取出胎鼠,以有无睾丸分辨雌雄,并在解剖显微镜下观察有无尿道下裂的发生,将DEHP暴露组有尿道下裂的列入尿道下裂组,以玉米油对照组雄性无尿道下裂的胎鼠作为正常对照组。测量雄鼠胎鼠的肛门生殖器距离(anogenital distance,AGD)和肛门生殖指数(anogenital index,AGI),扫描电镜和HE染色观察阴茎组织形态改变情况,高效液相色谱法检测胎鼠肝脏中的维生素A、E水平,Western blot检测阴茎组织中氧化应激相关蛋白Nrf2、HO-1、SOD1、Gpx和凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、Bax、Bcl2的表达水平,TUNEL法检测阴茎组织中的细胞凋亡。结果 玉米油对照组胎鼠无尿道下裂发生,DEHP暴露组胎鼠出现尿道下裂,发生率为27.59%。与正常对照组相比,尿道下裂组AGD、AGI均明显降低(P〈0.05);尿道下裂胎鼠阴茎出现腹侧尿道皱褶融合障碍及尿道口开口异常;此外,尿道下裂胎鼠体内维生素A、E的水平明显降低(P〈0.05);阴茎组织中Nrf2、HO-1、Gpx、SOD1和Bcl2蛋白表达水平明显下降(P〈0.05),cleaved caspase-3和Bax蛋白表达水平则明显增高(P〈0.05),细胞凋亡显著增加(P〈0.05)。结论 DEHP诱导SD大鼠发生尿道下裂,可能与机体氧化应激失衡、Nrf2-HO-1信号通路被抑制后阴茎组织中细胞凋亡异常增加有关。 展开更多
关键词 尿道下裂 氧化应激损伤 凋亡 DEHP
联合维生素对邻苯二酸二-(2-乙基己基)酯所致睾丸发育异常的干预作用
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作者 唐向亮 沈炼桔 +7 位作者 吴盛德 魏仪 王养才 春兰 周玥 黄方圆 李典 魏光辉 《中华小儿外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期302-306,共5页
目的探讨联合应用维生素E和维生素C对邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯所致的睾丸发育异常的干预作用。方法将新生SD大鼠分为5组,即玉米油对照组、邻苯二酸二-(2-乙基己基)酯(DEHP)暴露组、维生素E干预组、维生素C干预组以及联合维生... 目的探讨联合应用维生素E和维生素C对邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯所致的睾丸发育异常的干预作用。方法将新生SD大鼠分为5组,即玉米油对照组、邻苯二酸二-(2-乙基己基)酯(DEHP)暴露组、维生素E干预组、维生素C干预组以及联合维生素E和维生素C干预组。药物剂量:DEHP为500 mg/kg、维生素E为200 mg/kg、维生素C为100 mg/kg,每日灌胃,连续处理30 d,6 d后麻醉并处死,测量肛门生殖器距离和肛门生殖指数,HE染色观察睾丸组织病理形态改变情况,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测睾丸组织睾酮含量,Western blot检测SOD及Nrf2的蛋白表达水平。结果与对照组相比,DEHP暴露组和维生素C干预组的肛门生殖指数明显降低(P〈0.05),联合干预组的肛门生殖器距离明显增大(P〈0.05)。HE染色发现DEHP暴露后,大鼠睾丸曲细精管结构紊乱,失去极性,上皮严重萎缩,生精细胞数量极少并且脱落,间质增生明显;维生素E或维生素C干预组的睾丸组织形态也有一定程度破坏,生精细胞数量减少,间质部分增生;联合干预组的睾丸曲细精管结构保存尚好。ELISA结果显示联合干预组的睾丸组织中睾酮含量明显增加(P〈0.05)。DEHP暴露组的SOD和Nrf2表达量明显增高(P〈0.05),其中联合干预组的SOD表达水平明显低于其余各组(P〈0.05),而Nrf2在其余各组中差异没有统计学意义(P〉0.05)。结论联合应用维生素E和维生素C较单独使用其中一种抗氧化剂能够更有效地减轻机体氧化应激压力从而改善环境内分泌干扰物引起的睾丸发育异常,缓解生殖细胞坏死,其中Nrf2信号通路可能起到重要作用。 展开更多
关键词 睾丸 氧化应激 维生素E 维生素C
性染色体型性发育异常的临床诊治
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作者 唐向亮 吴盛德 +13 位作者 魏仪 王养才 春兰 沈炼桔 林涛 何大维 李旭良 刘俊宏 刘星 华燚 陆鹏 张德迎 温晟 魏光辉 《中华实用儿科临床杂志》 CSCD 北大核心 2017年第8期582-584,共3页
目的 加深对性染色体型性发育异常的临床诊治认识。方法 回顾性分析1996年2月至2016年2月重庆医科大学附属儿童医院泌尿外科及内分泌科收治的39例性染色体型性发育异常患儿的临床资料,包括年龄、社会性别、染色体核型、入院情况、手术... 目的 加深对性染色体型性发育异常的临床诊治认识。方法 回顾性分析1996年2月至2016年2月重庆医科大学附属儿童医院泌尿外科及内分泌科收治的39例性染色体型性发育异常患儿的临床资料,包括年龄、社会性别、染色体核型、入院情况、手术及活检结果、术后随访情况等。结果 住院患儿39例,年龄6个月~18岁,平均5.3岁;入院前社会性别男23例,女11例,不详5例,治疗后男28例,女9例,不详2例。39例患儿中先天性卵巢发育不全(Turner综合征)6例(15.4%),先天性睾丸发育不全(Klinefelter综合征)9例(23.1%),混合型性腺发育不全16例(41.0%),46,XX/46,XY嵌合型7例(18.0%),性染色体结构异常1例(2.6%)。32例行性腺活检术,其中后期行尿道成形术和/或子宫、阴道、卵巢切除术25例,行阴蒂成形术和/或睾丸切除术7例;另有3例入院后仅行尿道成形术;4例未行手术治疗。共随访21例手术患儿(65.6%),2例行尿道形成术患儿出院后1年左右出现反复尿瘘及排尿异常,4例女性抚养患儿目前情况良好。结论 结合高灵敏度高特异性的染色体检查完成早期诊断,选择合适的治疗方案以及长期随访对性染色体型性发育异常患儿的预后具有重要意义。 展开更多
关键词 性发育异常 诊断 治疗
低氧环境下丙泊酚可增加PC12细胞的凋亡 预览 被引量:1
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作者 孙茫 沈炼桔 +4 位作者 刘阳 于晴 春兰 李上莹莹 涂生芬 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期216-220,共5页
目的探讨低氧环境下丙泊酚对PC12细胞株凋亡的影响及机制。方法将PC12细胞接种于培养板中,采用随机数字表法,将其随机分为6组:低氧对照组(CH组)、空气对照组(CA组)和氧气对照组(CO组),对照组加入脂肪乳浓度10μmol/L。丙泊酚低... 目的探讨低氧环境下丙泊酚对PC12细胞株凋亡的影响及机制。方法将PC12细胞接种于培养板中,采用随机数字表法,将其随机分为6组:低氧对照组(CH组)、空气对照组(CA组)和氧气对照组(CO组),对照组加入脂肪乳浓度10μmol/L。丙泊酚低氧组(PH组)、丙泊酚空气组(PA组)和丙泊酚氧气组(PO组),丙泊酚浓度为10μmol/L。药物处理完毕后分别放入低氧(5%O_2),空气和氧气(35%O_2)环境的细胞培养箱培养,8 h后流式检测细胞凋亡情况,检测细胞内ROS水平和细胞SOD酶活力。结果与CA组比较,PA组细胞凋亡增加,活性氧簇(ROS)升高,超氧化物歧化酶(SOD)活力增强;与CH组比较,PH组细胞凋亡增加,ROS升高,SOD活力增强;与CO组比较,PO组细胞凋亡增加,ROS升高,SOD活力增强;与PA组比较,PH细胞凋亡增加,ROS升高,SOD活力增强;CO组、CA组和CH组上述各指标差异无统计学意义。结论低氧环境下丙泊酚可通过氧化应激损伤导致PC12细胞凋亡增加。 展开更多
关键词 丙泊酚 低氧 氧化应激 PC12 凋亡
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邻苯二甲酸二-(2-乙基己)酯对血睾屏障完整性的损伤及机制 预览 被引量:1
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作者 沈炼桔 唐向亮 +9 位作者 春兰 曹希宁 魏仪 王养才 孙茫 周玥 刘洋 刘博 黄方圆 魏光辉 《南方医科大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第9期1178-1182,共5页
目的探讨邻苯二甲酸二-(2-乙基己)酯(DEHP)破坏睾丸血睾屏障完整性的机制研究。方法将出生后60 d的SD雄鼠随机分为两组,即玉米油对照组和DEHP暴露组,DEHP的用药剂量为750 mg/kg,采用灌胃的方式给药,每天1次,连续处理30 d,并于最后1... 目的探讨邻苯二甲酸二-(2-乙基己)酯(DEHP)破坏睾丸血睾屏障完整性的机制研究。方法将出生后60 d的SD雄鼠随机分为两组,即玉米油对照组和DEHP暴露组,DEHP的用药剂量为750 mg/kg,采用灌胃的方式给药,每天1次,连续处理30 d,并于最后1次处理后麻醉处死。HE染色观察睾丸的组织病理学改变情况;Western blot检测睾丸组织中构成血睾屏障的关键连接蛋白N-cadherin、β-catenin、occludin和connexin43(Cx43)的膜蛋白表达水平;MTT检测睾丸支持细胞(Sertoli cell)的活力,活性氧检测试剂盒检测细胞中活性氧(Reactive oxygen species,ROS)生成水平;Western blot检测抗氧化应激蛋白Nrf2以及p-p38的蛋白表达水平。结果与对照组相比,DEHP暴露后的睾丸曲细精管结构紊乱,管腔中可见圆形的精子细胞,精子排列失去极性;Western blot结果表明occludin和connexin43的表达明显降低,N-cadherin和β-catenin表达明显升高(P〈0.05);Sertoli细胞随着DEHP暴露浓度的增加,活力显著降低,ROS生成水平明显增加,Nrf2和p-p38的蛋白表达明显增高(P〈0.05)。结论 DEHP暴露可通过氧化应激激活p38 MAPK信号通路,破坏血睾屏障完整性,并最终损伤生精功能。 展开更多
关键词 血睾屏障 氧化应激损伤 P38 邻苯二甲酸二-(2-乙基己)酯
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氟他胺致大鼠隐睾模型的睾丸组织形态改变及其病理基础
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作者 彭金普 张德迎 +6 位作者 曹希宁 周玥 沈炼桔 春兰 何大维 林涛 魏光辉 《重庆医科大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第8期953-958,共6页
目的:研究抗雄激素受体氟他胺(Flutamide,Flu)孕中、晚期诱导子代雄鼠发生隐睾,及其病理组织学损害,探讨其不育的病理学基础,为临床治疗隐睾所致非梗阻性不育提供依据。方法:将20只SD(sprague dawley)孕鼠随机分为Flu隐睾组(n=1... 目的:研究抗雄激素受体氟他胺(Flutamide,Flu)孕中、晚期诱导子代雄鼠发生隐睾,及其病理组织学损害,探讨其不育的病理学基础,为临床治疗隐睾所致非梗阻性不育提供依据。方法:将20只SD(sprague dawley)孕鼠随机分为Flu隐睾组(n=10)、正常对照组(n=10),Flu隐睾组于妊娠12-21 d给予Flu 25 mg/(kg·d)皮下注射,正常对照组不予任何处理,取各组出生后第60天(postnatal day 60,PND60)的雄性SD大鼠睾丸组织(Flu隐睾组只取隐睾睾丸),HE染色观察睾丸组织形态学的差异,透射电镜观察睾丸支持细胞间的紧密连接结构,TUNEL凋亡染色检测生精细胞凋亡情况,取附睾尾进行精子计数及形态观测,免疫组织化学和Western blot检测睾丸组织中生殖细胞增殖分化指标视黄酸刺激因子8(stimulated by retinoic acid gene 8,Stra8)、联会复合体蛋白3(synaptonemal complex protein 3,SCP3)的表达,采用Q-PCR检测Stra8基因水平。结果:收集正常对照组正常睾丸30只与Flu隐睾组隐睾睾丸22只,HE染色显示隐睾睾丸管腔明显缩窄、生精细胞发育迟缓且排列紊乱、管腔中央无精子形成;TUNEL凋亡检测证实隐睾组有大量生精细胞发生凋亡,精子计数结果为隐睾组(1.99±0.13)×10^8个/m L,远低于正常对照组[(5.53±0.17)×10^8个/m L,P=0.000];透射电镜(transmission electron microscope,TEM)可观察到SD大鼠隐睾支持细胞间的紧密连接结构疏松;免疫组织化学显示Stra8在隐睾组织中表达较正常对照组少,SCP 3在正常对照组睾丸生精小管的各级生精细胞胞核中均有表达,而在隐睾组睾丸中表达很弱;Western blot结果显示,Flu隐睾组Stra8蛋白表达量(0.34±0.05)明显低于正常对照组(0.96±0.09),P=0.002;Flu隐睾组SCP3蛋白表达量(0.39±0.03)也明显低于正常对照组(0.97±0.07),P=0.001。Q-PCR结果显示,Flu组SD大鼠睾丸组织内Stra8 m RNA的表达(0.765±0.015)较� 展开更多
关键词 氟他胺 大鼠 隐睾 睾丸 病理改变
肛门生殖器距离与隐睾相关性的Meta分析
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作者 王养才 吴盛德 +7 位作者 魏仪 曹希宁 刘洋 沈炼桔 春兰 林涛 何大维 魏光辉 《中华小儿外科杂志》 CSCD 2017年第11期849-853,共5页
目的探讨肛门外生殖器距离(anogenital distance,AGD)与隐睾的相关性。方法检索国外数据库Pubmed、Embase、Medline以及国内数据库CNKI、VIP、万方(检索时限从1990年1月至2016年1月)。查找关于外生殖器距离与隐睾相关性的病例对照... 目的探讨肛门外生殖器距离(anogenital distance,AGD)与隐睾的相关性。方法检索国外数据库Pubmed、Embase、Medline以及国内数据库CNKI、VIP、万方(检索时限从1990年1月至2016年1月)。查找关于外生殖器距离与隐睾相关性的病例对照研究,文献初步检索出80篇,其中Pubmed,Embase共有79篇,中文数据库检索出1篇。由两人单独筛选并且评价文献。最终纳入5篇文献。应用Stata12.0软件进行Meta分析,计算合并统计量(weighted mean difference,WMD)以及95%的可信区间(confidence intervals,CI)。对纳入研究进行异质性评价后,依据患儿年龄,进行亚组分析,对纳入文献进行敏感性分析以及发表偏移的评估。结果共有5篇符合纳入标准的临床研究。依据年龄分为两个亚组,Meta分析结果显示:在新生儿组,隐睾患儿的肛门外生殖器距离(AGD)小于健康对照组[WMD=-0.34,95%CI(-0.40,-0.29),P〈0.05],差异具有统计学意义。在非新生儿组,隐睾患儿的肛门外生殖器距离(AGD)与对照组差异无统计学意义[WMD=-0.07,95%CI(-0.23,0.10),P=0.429]。敏感性分析以及发表偏倚的分析提示:所纳入的研究不存在导致合并效应量结果较大差异的研究,各项研究之间不存在发表偏倚。结论新生儿隐睾患儿的肛门外生殖器距离(AGD)较健康男婴短,平均差值约0.34 cm;新生儿AGD可能一定程度上反映体内激素水平的变化以及雄性化的水平。但在非新生儿中,因多种混杂因素的影响,其AGD的长短与隐睾的相关性,尚需更多的临床研究来证实。 展开更多
关键词 肛门外生殖器距离 隐睾 META分析
邻苯二甲酸二(2-乙己基)酯导致隐睾症发生跨代遗传的机制研究 被引量:1
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作者 陈进军 吴盛德 +7 位作者 温晟 沈炼桔 彭金普 曹希宁 春兰 林涛 何大维 魏光辉 《中华小儿外科杂志》 CSCD 2017年第5期377-384,共8页
目的探讨增塑剂邻苯二甲酸二(2-乙己基)酯(DEHP)于性腺发育的关键时期作用于孕鼠(F0),研究F1-F3代隐睾跨代遗传的演变情况及各代睾丸基因组DNA甲基化转移酶水平的改变情况。 方法妊娠SD大鼠随机分为两组:正常对照组和DEHP实验... 目的探讨增塑剂邻苯二甲酸二(2-乙己基)酯(DEHP)于性腺发育的关键时期作用于孕鼠(F0),研究F1-F3代隐睾跨代遗传的演变情况及各代睾丸基因组DNA甲基化转移酶水平的改变情况。 方法妊娠SD大鼠随机分为两组:正常对照组和DEHP实验组,实验组自妊娠第七天(GD7)到第十九天(GD19)持续经口予以DEHP 750 mg·kg-1·d-1灌胃,观察子代隐睾发生情况,雌鼠受孕率;记录大鼠体重和睾丸、附睾重量以及AGD值,观察精子数量和质量;观察连续三代大鼠睾丸组织形态的演变情况,检测DNA甲基化转移酶变化情况。 结果孕鼠在孕期(GD7-GD19)暴露于DEHP,第一代(F1)隐睾发生率为30%,第二代(F2)隐睾发生率为12.5%,第三代(F3)未见隐睾发生;交配实验F1代受孕率50%,F2代75%,F3代100%;HE染色发现F1代睾丸生精上皮明显萎缩,生精细胞少,F2代有所改善,F3代形态趋于正常。Real Time-PCR、免疫组化和Western Blot表明DNA甲基化转移酶的表达随着遗传代数的增加而上调,差异有统计学意义。 结论DEHP损伤大鼠雄性生殖功能,通过改变DNA甲基化转移酶的表达,继而导致基因组印记甲基化修饰模式改变并遗传给下一代,从而使子代雄性生殖系统发育的关键性印记基因作用失衡,并最终导致子代产生隐睾,可能是导致生殖系统损害的重要毒理机制之一。 展开更多
关键词 二乙基己基邻苯二甲酸 DNA甲基化 隐睾
精益组织化管理Solitaire AB支架取栓术治疗急性大动脉闭塞性脑梗死的研究 预览 被引量:1
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作者 刘翰文 李祥有 +3 位作者 春兰 李茂港 刘维钦 涂勇 《江西医药》 CAS 2017年第12期1271-1274,共4页
目的 探讨医院内精益组织化管理后Solitaire AB支架介入取栓治疗急性大动脉闭塞性脑梗死的应用疗效.方法 本项目主要针对大动脉闭塞性急性脑梗死(LAO)患者,2015年8月到2017年2月共31例,在发病时间窗内,通过院内精益组织化管理,使用蓝... 目的 探讨医院内精益组织化管理后Solitaire AB支架介入取栓治疗急性大动脉闭塞性脑梗死的应用疗效.方法 本项目主要针对大动脉闭塞性急性脑梗死(LAO)患者,2015年8月到2017年2月共31例,在发病时间窗内,通过院内精益组织化管理,使用蓝牙手环实时监控,不断的优化绿色通道流程,逐步控制DNT及介入血管再通时间;成熟的应用Solitaire AB支架取栓技术.通过比较控制DNT时间,患者入院及术前术后NIHSS评分,术后mRS评分进行统计学分析.结果 本组31例患者中前循环24例,其中大脑中动脉闭塞16例,颈内动脉闭塞7例,大脑前动脉闭塞1例,后循环7例,其中基底动脉闭塞6例,椎动脉闭塞1例,平均DNT时间为56.4min,1例开通后闭塞,1例开通后术中出血予球囊再次闭塞,其余全部患者血管开通TICI评分≥2b,植入9枚支架,术后颅内出血3例,术后NIHSS评分明显下降,术前术后对比P〈0.05,具有统计学意义,3月及6月随访结果良好,mRS评分≤2分19例(61.3%),3分8例,4-5分2例,死亡2例.结论 通过医院精益组织化管理降低入院后DNT时间,对于Solitaire AB支架介入取栓治疗急性大动脉闭塞性脑梗死具有重要意义,可以减少该类疾病带来的高致死致残率. 展开更多
关键词 精益组织化管理 SOLITAIRE AB支架 急性大动脉闭塞性脑梗死 机械取栓治疗
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汽车尾气来源PM2.5颗粒物长期暴露导致SD雄鼠生殖功能损害 被引量:12
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作者 严超 曹希宁 +9 位作者 沈炼桔 刘东尧 彭金普 陈进军 周玥 春兰 林涛 何大维 李旭良 魏光辉 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期104-109,共6页
目的:建立Sprague Dawley(SD)大鼠空气细颗粒物(PM2.5)长期暴露模型,研究PM2.5长期暴露对SD大鼠生殖功能的损伤及其机制。方法:45只SD大鼠(80~94 g,28日龄)随机分配成3组:生理盐水对照组,低剂量组[2μg/(100 g·d)],高... 目的:建立Sprague Dawley(SD)大鼠空气细颗粒物(PM2.5)长期暴露模型,研究PM2.5长期暴露对SD大鼠生殖功能的损伤及其机制。方法:45只SD大鼠(80~94 g,28日龄)随机分配成3组:生理盐水对照组,低剂量组[2μg/(100 g·d)],高剂量组[16μg/(100 g·d)]。每天分别给予0.9%的生理盐水或PM2.5颗粒,连续暴露60 d,最后一次暴露24 h后各实验组选取10只与正常雌鼠合笼,统计雌鼠受孕率,剩余实验鼠取材,进行精子计数和畸形率测定、睾丸组织病理学检测以及睾丸组织Connexin43蛋白表达检测。结果:与对照组雌鼠受孕率(100%)相比,PM2.5暴露组正常雌鼠受孕率(高剂量组50%,低剂量组70%)明显降低,精子数量和质量明显下降,生精小管结构紊乱,管腔精子数减少,部分次级精母细胞脱落至管腔。睾丸组织中Connexin43蛋白表达下降,血睾屏障破坏。结论:汽车尾气来源PM2.5长期暴露影响SD大鼠生殖功能。 展开更多
关键词 空气细颗粒物 大鼠 汽车尾气 生殖功能
小儿过敏性紫癜合并睾丸炎的诊断与治疗 被引量:5
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作者 魏仪 吴盛德 +12 位作者 王养才 春兰 沈炼桔 林涛 何大维 李旭良 刘俊宏 刘星 华燚 陆鹏 张德迎 温晟 魏光辉 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期952-954,共3页
过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura,HSP)是一种以全身小血管炎症为主要病变的变态反应性疾病,具体发病机制不明,好发于学龄前儿童,主要累及皮肤、胃肠道、关节和肾脏。HSP特征性临床表现包括皮疹、胃肠道疾病、关节炎和肾脏疾... 过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura,HSP)是一种以全身小血管炎症为主要病变的变态反应性疾病,具体发病机制不明,好发于学龄前儿童,主要累及皮肤、胃肠道、关节和肾脏。HSP特征性临床表现包括皮疹、胃肠道疾病、关节炎和肾脏疾病,但对阴囊受累的认知较少。据报道,男性患儿HSP伴急性阴囊受累的发病率为2%~38%。 展开更多
关键词 过敏性紫癜 并发症 睾丸炎 儿童
3-D多孔结构的小肠黏膜下组织在兔膀胱再生中的应用
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作者 储加强 马文军 +5 位作者 张德迎 春兰 龚梦嘉 赵丽 魏光辉 张元原 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第13期1487-1493,共7页
目的探讨3-D多孔结构的小肠黏膜下组织(small intestine submucosa,SIS)在新西兰大白兔膀胱再生中的应用。方法用物理及化学方法制备具有3-D多孔结构的SIS。将24只雄性新西兰大白兔随机分为3组(n=8),分别行膀胱半切术建立膀胱缺损模... 目的探讨3-D多孔结构的小肠黏膜下组织(small intestine submucosa,SIS)在新西兰大白兔膀胱再生中的应用。方法用物理及化学方法制备具有3-D多孔结构的SIS。将24只雄性新西兰大白兔随机分为3组(n=8),分别行膀胱半切术建立膀胱缺损模型,使用3种不同处理的SIS进行膀胱重建。A组:未经过氧乙酸(peroxyacetic acid,PAA)处理的SIS组;B组:PAA处理的SIS组;C组:PAA处理后100%胎牛血清浸润的SIS组。3组在术前及术后4周测定膀胱容量,并于术后4周取材,行大体观察及组织学检测,评估膀胱再生情况。结果应用SIS行兔膀胱重建术后4周,3组再生膀胱组织与周围组织粘连依次降低,结石率分别为33.3%、28.6%、14.31%。与术前自身比较,术后4周3组膀胱最大容量均缩小且依次增加,组间比较差异有统计学意义(P〈0.05)。术后组织学检测示3组膀胱上皮细胞均有再生,与A组比较,B、C组的上皮再生更好,边缘区和中心区无明显差异。3组膀胱平滑肌的再生均不理想,但边缘区平滑肌再生较中心区多;在边缘区和中心区,组间比较差异有统计学意义(P〈0.05)。3组在边缘区和中心区的再生血管面积依次增加,3组间比较差异有统计学意义(P〈0.05)。结论经PPA及胎牛血清处理后3-D多孔结构的SIS,具有良好的促进膀胱组织再生能力,是一种比较理想的修复支架材料。 展开更多
关键词 组织工程 小肠黏膜下组织 膀胱再生 血管化
汽车尾气来源PM2.5长期暴露导致大鼠多器官损害 预览 被引量:20
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作者 严超 曹希宁 +9 位作者 沈炼桔 刘东尧 彭金普 陈进军 周玥 春兰 林涛 何大维 李旭良 魏光辉 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期844-849,共6页
目的:建立Sprague Dawley(SD)大鼠空气细颗粒物(particulate matter 2.5,PM2.5)长期暴露模型,观察PM2.5长期暴露对SD大鼠全身主要脏器的影响。方法:40只SD大鼠(80~94 g,28日龄)随机分配成3组:生理盐水对照组10只,低剂量组[2μg... 目的:建立Sprague Dawley(SD)大鼠空气细颗粒物(particulate matter 2.5,PM2.5)长期暴露模型,观察PM2.5长期暴露对SD大鼠全身主要脏器的影响。方法:40只SD大鼠(80~94 g,28日龄)随机分配成3组:生理盐水对照组10只,低剂量组[2μg/100(g·d)]15只,高剂量组[16μg/100(g·d)]15只。每天分别给予0.9%的生理盐水或PM2.5颗粒,连续暴露60 d,最后一次暴露24 h后取标本,对肺、心、肝、脾和肾5个主要脏器进行大体观察以及病理学检测。结果:与正常组相比,PM2.5暴露组的体重明显降低(P〈0.05),且肺部外观改变明显,肺脏及心脏组织结构受损,炎症反应明显,肝脏、脾脏及肾脏亦有炎症表现。结论:长期暴露在汽车尾气来源PM2.5污染环境中引起大鼠肺、心、肝、脾、肾炎性损害,肺脏及心脏损害明显。 展开更多
关键词 大鼠 PM2.5 炎症损害
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旗袍与女人
19
作者 春兰 《杉乡文学》 2015年第7期84-85,共2页
旗袍之于女人,如同荷塘之于月色,玫瑰之于爱情,碧海之于蓝天,是恰如其分的辉映,是淡妆浓抹总相宜的韵味。旗袍传统、经典、素雅、精致;身着旗袍的女子,妙曼、优雅、柔美、婀娜、妩媚、感性。旗袍风情了女人,女人赋予了旗袍灵魂... 旗袍之于女人,如同荷塘之于月色,玫瑰之于爱情,碧海之于蓝天,是恰如其分的辉映,是淡妆浓抹总相宜的韵味。旗袍传统、经典、素雅、精致;身着旗袍的女子,妙曼、优雅、柔美、婀娜、妩媚、感性。旗袍风情了女人,女人赋予了旗袍灵魂。作为一个中国女性,一生中不穿一件旗袍是遗憾的,一件华丽的旗袍,没有一个玲珑的女子穿上,那也是没有灵韵的。 展开更多
关键词 旗袍 女人 中国女性 女子
阿茑
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作者 春兰 《杉乡文学》 2015年第3期24-26,共3页
阿茑死了。 我是在他死后的第三天才知道这个消息的,对于他的死,我和大多数人一样,没有过多地惊讶,尽管他才30多岁。
关键词 小说 文学 文学作品 现代文学
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