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HLA—A0201与EGFP融合蛋白表达载体的构建及其在K562细胞的表达和定位 预览 被引量:3
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作者 何贤辉 徐丽慧 +2 位作者 刘毅 蔡小嫦 曾耀英 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期 705-710,共6页
目的:构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与HLA-A*0201(A*0201)融合蛋白哺乳动物细胞表达载体,分析其在K562细胞中的表达和亚细胞定位.方法: 以RT-PCR方法克隆A*0201 cDNA,构建A*0201-EGFP融合蛋白表达载体,转染K562细胞,以流式细胞仪和激光... 目的:构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与HLA-A*0201(A*0201)融合蛋白哺乳动物细胞表达载体,分析其在K562细胞中的表达和亚细胞定位.方法: 以RT-PCR方法克隆A*0201 cDNA,构建A*0201-EGFP融合蛋白表达载体,转染K562细胞,以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位.结果: 从两个HLA-A2阳性供者外周血细胞中克隆到A*0201 cDNA编码区全长序列.通过PCR方法在起始位点前加入Kozak序列并删除终止密码,成功构建A*0201-EGFP融合蛋白表达载体.以该质粒转染K562细胞,5 h后A*0201和EGFP的表达百分率分别为25.12±2.26、27.37±3.59, 24 h后表达水平无明显提高.表达的融合蛋白主要分布于细胞膜上,胞内分布较少.相反,转染空载体的细胞不表达A*0201分子,仅表达EGFP,且其在细胞内呈弥散样分布.结论: 成功构建A*0201-EGFP融合蛋白表达载体,并在K562细胞中得到表达,表达产物主要分布于细胞膜表面,提示表达该融合蛋白的K562细胞是潜在的人工抗原提呈细胞. 展开更多
关键词 HKA—A2抗原 绿色荧光蛋白质类 融合蛋白质类 显微镜检查 共焦
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重组人磷脂酶D1/腺病毒表达载体的构建与表达 预览
2
作者 韩黎 吴桂芝 +2 位作者 朱世俊 陈运奇 陈世平 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期 315-318,i001,共5页
将磷脂酶D1基因及其功能缺陷点突变基因从真核表达载体pCGN-PLD1亚克隆至带有绿色荧光标记蛋白的穿梭质粒pAdTrack-CMV中;再与腺病毒骨架载体一起在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组;阳性重组子经PacⅠ线性化后,转染入病毒组装细胞系293细... 将磷脂酶D1基因及其功能缺陷点突变基因从真核表达载体pCGN-PLD1亚克隆至带有绿色荧光标记蛋白的穿梭质粒pAdTrack-CMV中;再与腺病毒骨架载体一起在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组;阳性重组子经PacⅠ线性化后,转染入病毒组装细胞系293细胞,成功构建磷脂酰胆碱专一性磷脂酶D1重组腺病毒; 并用该病毒颗粒感染嗜铬细胞瘤细胞PC12细胞,高效表达磷脂酶D1蛋白.证明大蛋白基因,如磷脂酶D1基因的同源重组腺病毒表达构建切实可行,为研究其在细胞内的生理功能提供了有力工具. 展开更多
关键词 磷脂酶D1 腺病毒 同源重组
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长爪沙鼠1~5号染色体G显带特征初步研究 被引量:1
3
作者 王钜 郑思华 孟霞 《实验动物科学与管理》 2004年第2期 8-10,共3页
目的通过易于区分的1~5号长爪沙鼠染色体G显带特性研究,逐步建立完整的长爪沙鼠G带染色体细胞遗传学背景资料.方法取6只成熟长爪沙鼠,雌雄各半,采用外周血进行淋巴细胞培养,获得分裂中期细胞染色体标本制片,以胰蛋白酶处理,选1周龄标... 目的通过易于区分的1~5号长爪沙鼠染色体G显带特性研究,逐步建立完整的长爪沙鼠G带染色体细胞遗传学背景资料.方法取6只成熟长爪沙鼠,雌雄各半,采用外周血进行淋巴细胞培养,获得分裂中期细胞染色体标本制片,以胰蛋白酶处理,选1周龄标本染色观察.结果长爪沙鼠染色体指数表明,1~5号染色体以相对长度、着丝点位置易于排列.1号染色体与2号染色体各有八条深染带纹,可以着丝点位置加以区分.3号染色体有六条深染带纹,位于着丝点附近和长臂与短臂中部无穷侧端.4号染色体与5号染邑体均有四条深染带,5号染色体短臂深染带纹位于着丝点一侧可予以区分.结论长爪沙鼠1~5号染色体有较稳定的基本深染G带型,可做为染色体区带划分的重要标界. 展开更多
关键词 长爪沙鼠 染色体 G带
基因表达谱数据的多分类问题研究
4
作者 王伟 罗林开 《福州大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2008年第S1期共3页
针对基因表达谱微阵列的数据多分类问题,给出一种在多病类情况下的基于信噪比和相关性的特征基因选择方法.该方法一次性考虑基因区分所有病类的能力,尽量避免基因的冗余性;其次利用支持向量机,构建了基因表达谱微阵列数据的多分类器;最... 针对基因表达谱微阵列的数据多分类问题,给出一种在多病类情况下的基于信噪比和相关性的特征基因选择方法.该方法一次性考虑基因区分所有病类的能力,尽量避免基因的冗余性;其次利用支持向量机,构建了基因表达谱微阵列数据的多分类器;最后通过实验表明了本方法的有效性. 展开更多
关键词 基因选择 相关性 信噪比 支持向量机
雄性不育基因TA29-Barnase转化番茄的初步研究 预览 被引量:2
5
作者 邹礼平 陈锦华 《孝感学院学报》 2004年第3期 15-17,共3页
以番茄无菌苗子叶切段为外植体,采用农杆菌介导法将雄性不育基因TA29-Barnase导入番茄品种中蔬5号,获得再生植株。经PCR检测,外源的TA29-Barnase基因已导入番茄细胞。
关键词 番茄 TA29-Barnase 农杆菌介导法 雄性不育 遗传转化
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肌注组织型纤溶酶原激活剂基因在小鼠体内表达 预览
6
作者 李银聚 扈荣良 +2 位作者 赖良学 岳军明 殷震 《生物技术通讯》 CAS 1997年第Z1期106-107,共2页
组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)是人体内重要的丝氨酸蛋白酶,它能特异地激活血栓中的纤溶酶原,使之成为具有溶解纤维蛋白能力的纤溶酶,临床上将提纯的t-PA作为心血管栓塞性疾病急救和康复治疗的首选药物。由于t-PA在天然材料中含量甚微,... 组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)是人体内重要的丝氨酸蛋白酶,它能特异地激活血栓中的纤溶酶原,使之成为具有溶解纤维蛋白能力的纤溶酶,临床上将提纯的t-PA作为心血管栓塞性疾病急救和康复治疗的首选药物。由于t-PA在天然材料中含量甚微,难以大量制备,基因工程产品产量有限,临床应用货源紧缺且价格昂贵。为探索心血管疾病的基因治疗和预 展开更多
关键词 酶原激活剂 组织型 心血管疾病 基因治疗 小鼠 启动子 纤溶酶原 基因工程产品 丝氨酸蛋白酶 康复治疗
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热带、亚热带作物的基因转移利用 预览
7
作者 杨莹 江梅 《世界热带农业信息》 1994年第7期20-20,共1页
热带、亚热带作物的基因转移利用基因转移可以把一种新性状导入某种植物,而不改变植物原有的任何性状。这对于无性繁殖杂合种的种类来说很有价值,尤其是世代间隔时间较长的作物,就显得更重要了。许多热带和亚热带作物都具有无性繁... 热带、亚热带作物的基因转移利用基因转移可以把一种新性状导入某种植物,而不改变植物原有的任何性状。这对于无性繁殖杂合种的种类来说很有价值,尤其是世代间隔时间较长的作物,就显得更重要了。许多热带和亚热带作物都具有无性繁殖和生活世代长两种特点。目前可利用基... 展开更多
关键词 基因转移 亚热带作物 无性繁殖 基因转移技术 猕猴桃 番木瓜 世代间隔 性状 甘薯 植物
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苦瓜MAP30基因原核表达载体的构建和PCR快速检测重组子的研究 预览 被引量:4
8
作者 庄东红 欧阳永长 胡忠 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期 701-704,共4页
根据已报道的序列,把苦瓜(Momordica charantia) MAP30基因成功克隆到原核表达载体pET28a(+)中,并对PCR快速检测阳性克隆进行了研究.结果表明,直接用菌落、菌液、酚氯仿处理过的菌液,以及提取的质粒进行PCR都可以成功地筛选阳性菌落.其... 根据已报道的序列,把苦瓜(Momordica charantia) MAP30基因成功克隆到原核表达载体pET28a(+)中,并对PCR快速检测阳性克隆进行了研究.结果表明,直接用菌落、菌液、酚氯仿处理过的菌液,以及提取的质粒进行PCR都可以成功地筛选阳性菌落.其中,酚氯仿处理过的菌液PCR与质粒PCR的结果最接近,而且比质粒PCR简单,因此可作为方便可靠的阳性克隆筛选的新方法. 展开更多
关键词 MAP30 PCR 克隆子筛选 苦瓜
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破译基因脸 预览
9
作者 黄冠 《发现.图形科普》 2001年第3期 6-11,共6页
相面作为一种古老的文化现象,在中国传统戏曲得到了保留。各类角色都有自己特定的脸谱,净、末、旦、丑,贪、廉、忠、奸,文、武、智、愚,内行观众一看便知。
关键词 相面 基因技术 儿童痴呆 染色体 美容方法 重度弱智 相面诊断
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血小板生成素在枯草杆菌中的表达分泌及前肽作用 预览 被引量:2
10
作者 张美华 周建 +1 位作者 杨宇峰 吴自荣 《华东师范大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期 117-121,共5页
利用PCR方法扩增得到枯草杆菌本身的表达调控序列SP(含有信号肽)和Pro序列(包含信号肽和前肽),分别与血小板生成素(TPO)结构基因及枯草杆菌载体片段连接,构建两个重组TPO枯草杆菌表达载体,转化受体菌,得到DB403(SP-TPO)和DB403(Pro-TPO... 利用PCR方法扩增得到枯草杆菌本身的表达调控序列SP(含有信号肽)和Pro序列(包含信号肽和前肽),分别与血小板生成素(TPO)结构基因及枯草杆菌载体片段连接,构建两个重组TPO枯草杆菌表达载体,转化受体菌,得到DB403(SP-TPO)和DB403(Pro-TPO)重组克隆,比较有无前肽对其表达分泌的作用.用ELISA和Western B1ot检测TPO的表达分泌,发现DB403(Pro-TPO)能够表达分泌TPO,而DB403(SP-TPO)未发现TPO的分泌.对小鼠腹腔注射DB403(Pro-TPO)发酵浓缩液,发现能够明显增加血小板数目,与自身对照相比增加84.2%,与生理盐水对照比较增加99.7%.以上实验说明Pro-TPO能够表达分泌有明显活性的TPO蛋白,而且前肽对外源蛋白的分泌是必要的. 展开更多
关键词 血小板生成素 枯草杆菌 分泌 前肽
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黄瓜育成品种“春玉”RAPD指纹图谱分析 预览 被引量:2
11
作者 耿红 娄群峰 +1 位作者 余纪柱 陈劲枫 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期 876-880,共5页
从300条随机引物中筛选出能稳定扩增的26个引物,对黄瓜育成品种"春玉"等21个实验材料进行扩增,在扩增出的173条谱带中,多态性带有80条,比例为46.24%."春玉"在用引物E13扩增时有特异缺失条带,大小为400 bp,可作为特... 从300条随机引物中筛选出能稳定扩增的26个引物,对黄瓜育成品种"春玉"等21个实验材料进行扩增,在扩增出的173条谱带中,多态性带有80条,比例为46.24%."春玉"在用引物E13扩增时有特异缺失条带,大小为400 bp,可作为特征性指纹图谱,为其产权保护提供分子依据.利用各材料的DNA指纹可将不同参试材料鉴别出来.同时利用MEGA软件进行UPGMA聚类分析,将参试材料在相似系数0.706处分为4个组群. 展开更多
关键词 黄瓜 RAPD DNA指纹
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PCR技术在医学检验中的应用现状 预览 被引量:8
12
作者 王耿新 《实用医药杂志》 2005年第6期 550-552,共3页
聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)又称体外基因扩增技术或DNA扩增技术.自1985年美国PE-Cetus公司的Mullis等首创PCR技术以来,它以惊人的速度被广泛应用于医学及分子生物学等各个领域.现今,PCR技术已成为一种对标本中特定的... 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)又称体外基因扩增技术或DNA扩增技术.自1985年美国PE-Cetus公司的Mullis等首创PCR技术以来,它以惊人的速度被广泛应用于医学及分子生物学等各个领域.现今,PCR技术已成为一种对标本中特定的DNA片段进行分析研究和检测鉴定的重要方法.近20年来PCR技术在生物医学等各个研究领域和临床应用中发挥了重大的作用,在病原体鉴定、遗传病诊断、免疫学研究、癌基因探索及治疗等方面都作出了相应的贡献. 展开更多
关键词 聚合酶链反应 医学检验
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C-Jun蛋白对糖皮质激素受体表达及转录激活能力的影响 预览 被引量:2
13
作者 程晓刚 粟永萍 +1 位作者 罗成基 刘晓宏 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第B06期 106-109,共4页
目的观察促进与抑制c-Jun蛋白表达对糖皮质激素受体(GR)表达和转录激活能力的影响,探索c-Jun与GR功能的相互关系。方法采用基因重组技术,构建PAVU6-c Jun siRNA干涉质粒,电穿孔法分别转染U937细胞c-Jun蛋白表达真核载体与:PAVU6-c J... 目的观察促进与抑制c-Jun蛋白表达对糖皮质激素受体(GR)表达和转录激活能力的影响,探索c-Jun与GR功能的相互关系。方法采用基因重组技术,构建PAVU6-c Jun siRNA干涉质粒,电穿孔法分别转染U937细胞c-Jun蛋白表达真核载体与:PAVU6-c Jun siRNA干涉质粒,观察c-Jun表达对GR表达和转录激活能力的影响。结果成功构建PAVU6-c Jun siRNA干涉质粒,转化U937细胞后GR的表达和转录激活活性有增强,而转染c-Jun表达载体pCMV-c JunGR的表达和转录激活活性有所减弱。结论c-Jun蛋白表达水平对GR的表达和转录激活活性有影响,抑制c-Jun蛋白表达,一定程度上可促进GR表达并增强其转录激活功能。 展开更多
关键词 C-JUN 糖皮质激素受体 转录激活 RNA干涉
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抗菌肽的研究进展(下)——基本特性及其活性影响因素 预览 被引量:2
14
作者 杨星剑 王金洛 +1 位作者 徐福洲 杨兵 《农业新技术:今日养猪业》 2005年第4期 47-49,共3页
五、抗菌肽的抗菌机制 目前,国内外对抗菌肽的抗菌机制仍有不同的看法,但大家都认可的是抗菌肽是直接作用于肿瘤细胞或细菌的质膜结构,引起胞内水溶性物质大量渗出,从而最后导致肿瘤细胞和细菌死亡,这种机制在最近的研究中也得到... 五、抗菌肽的抗菌机制 目前,国内外对抗菌肽的抗菌机制仍有不同的看法,但大家都认可的是抗菌肽是直接作用于肿瘤细胞或细菌的质膜结构,引起胞内水溶性物质大量渗出,从而最后导致肿瘤细胞和细菌死亡,这种机制在最近的研究中也得到了证实。抗菌肽分子的结构特征是保证这种机制发挥作用的重要基础。 展开更多
关键词 抗菌肽 抗菌机制 结构特征 外膜蛋白 调亡现象 细胞壁 基因工程
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实时荧光定量RT-PCR检测病理性瘢痕中热休克蛋白47mRNA的表达 预览 被引量:3
15
作者 陈俊杰 岑瑛 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期 613-616,共4页
目的应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测热休克蛋白47(heat shock protein47,HSP47)mRNA的表达,探讨HSP47基因在病理性瘢痕中的表达水平.方法取经确诊的正常皮肤(normal... 目的应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测热休克蛋白47(heat shock protein47,HSP47)mRNA的表达,探讨HSP47基因在病理性瘢痕中的表达水平.方法取经确诊的正常皮肤(normal skin,NS)、增生性瘢痕(hypertrophic scar,HS)和瘢痕疙瘩(keloid,K)新鲜组织各6份,基于TaqMan荧光探针技术,应用实时荧光定量RT-PCR检测各组织中HSP47mRNA的含量.结果HS和K中HSP47cDNA含量分别为(1.233±1.039)×105、(1.222±0.707)×105,明显高于NS(0.019±0.021)×105,且差异有统计学意义(P<0.05).结论成功建立HSP47mRNA的荧光定量检测方法;HSP47可能在病理性瘢痕的形成过程中起促进作用. 展开更多
关键词 热休克蛋白47增生性瘢痕瘢痕疙瘩
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基于Cre重组酶体系的鸡卵清蛋白基因打靶载体的构建 预览 被引量:1
16
作者 张传生 杜立新 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第4期 685-690,共6页
利用胚胎干细胞基因打靶技术制备转基因鸡是研制鸡输卵管反应器的最佳技术路线.为建立基于Cre/loxp系统的鸡卵清蛋白基因(Ovalbumin gene,OV)位点的双交换打靶载体系统,本研究克隆了鸡的OV基因7.8 kb片段,并与克隆的内部核糖体进入位点(... 利用胚胎干细胞基因打靶技术制备转基因鸡是研制鸡输卵管反应器的最佳技术路线.为建立基于Cre/loxp系统的鸡卵清蛋白基因(Ovalbumin gene,OV)位点的双交换打靶载体系统,本研究克隆了鸡的OV基因7.8 kb片段,并与克隆的内部核糖体进入位点(IRES)、人工合成的含有Cre重组酶识别位点变异体交换盒m2/loxp71-EGFP-loxp66,一起构建了含有Hsv-tk负筛选标记的针对鸡卵清蛋白基因位点的敲入型共表达基因打靶载体pSSC-m2/71EGFP66IRES-OV7.8;以猪β干扰素基因(βInterferon,IFN-β)为目的基因构建了穿梭载体pMD-m2/66-MCS-IFN-MCS-Loxp71,经过限制酶酶切及部分测序鉴定,所构建载体结构正确.进一步将它们共转化组成性表达Cre的细菌BM25.8,验证了loxp突变位点对重组反应的有效性 展开更多
关键词 基因打靶 胚胎干细胞 OV CRE重组酶 RMCE 卵清蛋白基因 转基因鸡 基因构建 打靶载体 内部核糖体进入位点
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转基因动物研究中存在问题 预览 被引量:8
17
作者 田小利 陈兰英 《生物工程进展》 CSCD 1995年第5期 41-45,共5页
15年来已建了许多用作研究人类疾病的转基因动物模型。转基因动物已作为研究代谢调节、分化、发育中有关基因功能的工具,它已作为一种分子农场可生产基因产品等。但要看到,转基因还有许多问题要解决。首先是转基因的阳性率低,这是... 15年来已建了许多用作研究人类疾病的转基因动物模型。转基因动物已作为研究代谢调节、分化、发育中有关基因功能的工具,它已作为一种分子农场可生产基因产品等。但要看到,转基因还有许多问题要解决。首先是转基因的阳性率低,这是受了许多因素如DNA样品质量,分子大小和结构,动物种属,原核的可见性,注射针的调节和微注射技术等影响。通常转基因首建的阳性率在10-20%,有时甚至低于1%。在基因操作后,外源基因整合 展开更多
关键词 基因工程 转基因动物
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全球首只克隆狗在韩国亮相 预览
18
《国外科技动态》 2005年第8期 3,共1页
韩国科学家历时两年半,终于成功培育出世界上首只克隆狗,并在近日出版的《自然》杂志上发表了他们的研究成果。
关键词 韩国 克隆 球首 《自然》杂志 研究成果 科学家
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狼疮性肾炎近端小管上皮细胞凋亡的超微结构观察 预览 被引量:3
19
作者 徐彦平 李艳杰 +1 位作者 刘冬娟 石玉秀 《电子显微学报》 CAS CSCD 2005年第4期 402,共1页
系统性红斑狼疮是一种严重危害人类健康的常见疾病.最常累及的器官是肾脏,即狼疮性肾炎,近乎100%的患者肾脏有损害.近年来,随着细胞凋亡理论的引入,人们对细胞凋亡在狼疮性肾炎发病机制中的作用有了不同程度的研究,认为狼疮性肾炎可能... 系统性红斑狼疮是一种严重危害人类健康的常见疾病.最常累及的器官是肾脏,即狼疮性肾炎,近乎100%的患者肾脏有损害.近年来,随着细胞凋亡理论的引入,人们对细胞凋亡在狼疮性肾炎发病机制中的作用有了不同程度的研究,认为狼疮性肾炎可能与细胞凋亡有关. 展开更多
关键词 系统性红斑狼疮 细胞凋亡 上皮细胞 超微结构观察 肾炎 小管 透射电镜技术 常见疾病 人类健康
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五指山猪近交系群体中DRA和DRB基因的SSCP检测 预览 被引量:16
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作者 孙俊丽 牟玉莲 +2 位作者 顾茂松 刘小林 冯书堂 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2005年第8期 1458-1461,共4页
为确定五指山猪(WZSP)近交系群体SLA-ⅡDRA、DRB基因的等位基因数及其特性,利用PCR扩增SLA-ⅡDRA、DRB基因的第2外显子序列,经单链构象多态性即SSCP检测其等位基因数,选择纯合子个体的PCR产物直接测序.对所获得的序列与Genbank中所有相... 为确定五指山猪(WZSP)近交系群体SLA-ⅡDRA、DRB基因的等位基因数及其特性,利用PCR扩增SLA-ⅡDRA、DRB基因的第2外显子序列,经单链构象多态性即SSCP检测其等位基因数,选择纯合子个体的PCR产物直接测序.对所获得的序列与Genbank中所有相应的序列进行比对和聚类分析,特别是SLA-DRB-C、SLA-DRB-D、HLA-DRB*09012、HLA-DRB*1201、HLADRA*0101等位基因.结果表明:在WZSP近交系群体中,DRA、DRB各有2个等位基因且发现1个DRB新等位基因.DRA第2外显子有很强的保守性,而DRB基因呈现出高度的多态性,在核苷酸水平同源性为85%以上,氨基酸水平同源性为70%以上.该试验成功地检测了WZSP近交系SLA-DRA、DRB基因的等位基因及其特性,为建立WZSP SLA-DR基因抗原的分子分型及特异单倍型猪的培育研究奠定基础. 展开更多
关键词 五指山猪 SLA-Ⅱ DRA DRB SSCP 新等位基因
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