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基于基因组编辑技术的大片段克隆新策略
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作者 曾哲 任晓丹 杨晟 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期401-408,共8页
基因组大片段克隆技术是合成生物学研究领域关键的使能技术。传统的大片段克隆技术获取目的大片段的手段存在各种缺陷,比如随机建库克隆需要依靠高通量筛选;PCR难以扩增10 kb以上片段,从小片段拼装费时费力且突变率高;基于限制性酶切连... 基因组大片段克隆技术是合成生物学研究领域关键的使能技术。传统的大片段克隆技术获取目的大片段的手段存在各种缺陷,比如随机建库克隆需要依靠高通量筛选;PCR难以扩增10 kb以上片段,从小片段拼装费时费力且突变率高;基于限制性酶切连接难以找到片段两端适宜的限制性内切酶酶切位点。最近全基因组合成等前沿研究创造了全新的高性能大片段克隆方法,比如CRISPR/cas9系统中cas9可识别并切割20 bp核酸序列解决了识别位点设计难题,可用来获取任意目的基因片段;组合Gibson或者酵母偶联重组技术组装技术,可高效克隆大片段基因。本文将分类介绍基因组大片段克隆技术,并提出适用不同尺度大小基因克隆的技术选择参考标准。 展开更多
关键词 大片段克隆 合成生物学 基因组编辑 Gibson组装
海底总动员2:寻找多莉
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《科学大众:小诺贝尔》 2016年第5期11-11,共1页
导演:安德鲁·斯坦顿 配音:艾伦·德杰尼勒斯 艾伯特·布鲁克斯黛安·基顿尤金·列维泰·布利尔 语言:英语类型:喜剧/动画/家庭/冒险 发行公司:华特·迪士尼影片公司 出品公司:皮克斯动画工作室... 导演:安德鲁·斯坦顿 配音:艾伦·德杰尼勒斯 艾伯特·布鲁克斯黛安·基顿尤金·列维泰·布利尔 语言:英语类型:喜剧/动画/家庭/冒险 发行公司:华特·迪士尼影片公司 出品公司:皮克斯动画工作室上映日期:2016年6月17日(美国) 剧情简介 故事的主角是一条有点爱唠叨的蓝藻鱼多莉。她的记忆力很短暂,本来生活得很幸福.但是一次事故让她重新想起了她的家入和明友。 展开更多
关键词 多莉 海底 安德鲁 工作室 记忆力 动画 蓝藻
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不同糖及糖水平对松浦镜鲤养殖过程中糖代谢相关基因表达的影响 预览
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作者 李晋南 王常安 +3 位作者 王连生 赵志刚 罗亮 徐奇友 《水产学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期766-776,共11页
为探讨在养殖不同阶段,不同糖及糖水平对松浦镜鲤肝脏糖酵解酶(GK和HK)、糖异生酶(G6Pase和PEPCK)和糖代谢相关基因(IGF-Ⅰ和GHR)m RNA表达水平的影响,实验采用2×2双因素设计实验,选择淀粉和葡萄糖2种糖源,2个糖水平(25%和... 为探讨在养殖不同阶段,不同糖及糖水平对松浦镜鲤肝脏糖酵解酶(GK和HK)、糖异生酶(G6Pase和PEPCK)和糖代谢相关基因(IGF-Ⅰ和GHR)m RNA表达水平的影响,实验采用2×2双因素设计实验,选择淀粉和葡萄糖2种糖源,2个糖水平(25%和50%),共4个实验组,分别为低淀粉组(LS)、高淀粉组(HS)、低葡萄糖组(LG)和高葡萄糖组(HG)。选用初始体质量为(8.30±0.15)g的松浦镜鲤420尾,随机分为4组,每组3个重复,每个重复35尾鱼。实验周期为7周。结果显示,不同养殖阶段,HK基因和IGF-Ⅰ基因在不同实验组中的表达趋势基本一致,HK基因在养殖1周时表达量显著升高,之后开始降低,IGF-Ⅰ基因在养殖3周时表达量显著升高。在不同养殖阶段,GK、PEPCK、G6Pase和GHR基因的表达趋势受糖水平和糖种类的影响。在低糖水平下(LS组和LG组),这些基因表现了相同的变化趋势,GK和GHR基因在1周时表达量最高,之后开始下降;PEPCK基因在3周时表达量最高;G6Pase在1周时表达量升高,之后下降,在7周时表达量又有上升趋势。在高糖水平下,HS组的GK基因的表达量在各个养殖阶段差异不显著,而HG组的GK基因则在1周时表达量显著升高;HS组和HG组的PEPCK基因的表达量在各个养殖阶段差异不显著;HS组的G6Pase基因的表达量在各个养殖阶段差异不显著,而HG组的G6Pase基因则在3周时表达量显著升高;HG组的GHR基因的表达量在各个养殖阶段差异不显著,而HS组的GHR基因则在3周时表达量显著升高。在养殖初期(1周),高糖饲料显著促进了HK基因的表达,并抑制了PEPCK、G6Pase和GHR基因的表达。 展开更多
关键词 松浦镜鲤 葡萄糖 淀粉 糖酵解酶 糖异生酶 基因表达
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马氏珠母贝(Pinctada fucata martensii)PmGIFLP基因的分子特征与表达分析
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作者 范闪闪 李绮晴 +3 位作者 郑哲 郝瑞娟 杜晓东 焦钰 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2018年第8期3313-3321,共9页
胃内因子(gastric intrinsic factor,GIF)是一种转运蛋白,在介导维生素B12(VB12)维持机体正常造血功能、神经系统功能和免疫调节功能等方面发挥重要作用。为探究胃内因子样蛋白(gastric intrinsic factorlike protein,GIFLP)在马... 胃内因子(gastric intrinsic factor,GIF)是一种转运蛋白,在介导维生素B12(VB12)维持机体正常造血功能、神经系统功能和免疫调节功能等方面发挥重要作用。为探究胃内因子样蛋白(gastric intrinsic factorlike protein,GIFLP)在马氏珠母贝免疫调节中的作用,本研究运用RACE技术获得马氏珠母贝胃内因子样蛋白基因(Pm GIFLP)的c DNA序列全长,并检测Pm GIFLP在各个组织的表达模式。结果表明:Pm GIFLP序列全长1 721 bp,其中5'UTR为78 bp,3'UTR为116 bp,开放阅读框(ORF)为1 527 bp,编码508个氨基酸。预测其分子量(MW)为56 644.84 Da,理论等电点(p I)为7.13。SMART软件分析显示Pm GIFLP氨基酸序列具有2个典型的钴胺素结合结构域。多序列比对发现Pm GIFLP与其它物种的同源性较低。q RT-PCR结果表明Pm-GIFLP基因在肝胰腺中显著高表达,其次是外套膜边缘区、性腺和足。综上所述,Pm GIFLP可能参与马氏珠母贝的免疫调节作用,可为进一步探究Pm GIFLP在马氏珠母贝中免疫防御中的作用积累基础资料。 展开更多
关键词 马氏珠母贝 胃内因子样蛋白 分子特征 表达分析
抑制JNK通路对胃癌细胞SGC7901增殖、凋亡、迁移和周期的影响
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作者 彭豆豆 陈婧 易永芬 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2018年第8期3713-3718,共6页
探讨JNK通路抑制剂SP600125对胃癌细胞SGC7901增殖、凋亡、迁移和周期的影响及其机制。以胃癌细胞SGC7901为研究对象,实验分为空白对照组及药物处理组,采用CCK-8法检测不同浓度及不同作用时间SP600125对SGC7901增殖活性的影响,筛选出最... 探讨JNK通路抑制剂SP600125对胃癌细胞SGC7901增殖、凋亡、迁移和周期的影响及其机制。以胃癌细胞SGC7901为研究对象,实验分为空白对照组及药物处理组,采用CCK-8法检测不同浓度及不同作用时间SP600125对SGC7901增殖活性的影响,筛选出最佳作用时间与浓度用于后续实验。通过流式细胞术检测SP600125对SGC7901凋亡和周期的影响。Transwell迁移实验检测其对SGC7901迁移能力的影响。Western blotting检测SP600125作用后各组细胞GM130、JNK、p-JNK、c-jun、cleaved caspase-3、bcl-2、MMP-7蛋白水平的变化。研究表明,与空白对照组相比,10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L、40μmol/L、50μmol/L浓度均能使SGC7901增殖活性降低,且在40μmol/L水平作用24 h其增殖抑制率最高(p〈0.05)。在此水平可使细胞凋亡率明显增加(p〈0.001)。与空白对照组相比,药物处理组细胞处于G2/M期的比例显著增加(p〈0.01),处于G0/G1期比例减少(p〈0.01),S期无明显变化,细胞迁移能力也明显下降(p〈0.01)。Western blotting显示药物处理组与空白对照组相比,蛋白GM130(p〈0.01)、JNK(p〈0.01)、P-JNK(p〈0.01)、c-jun(p〈0.01)、BCL-2(p〈0.01)、MMP-7(p〈0.05)的表达明显下降,cleaved caspase-3表达升高(p〈0.01)。以上研究表明JNK通路抑制剂SP600125可抑制胃癌细胞SGC7901增殖活性,促进其凋亡,使其周期阻滞于G2/M期,抑制胃癌细胞迁移能力,这可能与其抑制GM130、c-jun、MMP-7等蛋白的表达有关。 展开更多
关键词 JNK 增殖 凋亡 周期 迁移
抗口蹄疫病毒单克隆抗体1C7重轻链可变区基因的克隆及序列分析 预览 被引量:1
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作者 曹盛丰 王欣 +3 位作者 孙涛 陆苹 魏然 王国丰 《中国预防兽医学报》 CAS 北大核心 2002年第5期 341-345,共5页
应用分子生物学技术,从分泌抗O型口蹄疫病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞1C7中提取总RNA,经反转录,PCR扩增及克隆,分别得到VH基因及VL基因.序列测定结果表明:1C7的VH基因为368bp,VL基因为323bp.用NCBI GenBank分析表明,VH和VL均符合小鼠抗体... 应用分子生物学技术,从分泌抗O型口蹄疫病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞1C7中提取总RNA,经反转录,PCR扩增及克隆,分别得到VH基因及VL基因.序列测定结果表明:1C7的VH基因为368bp,VL基因为323bp.用NCBI GenBank分析表明,VH和VL均符合小鼠抗体可变区特征,为功能性重排的抗体可变区基因.根据Kabat分类体系,1C7的VH基因中的VH基因片段隶属于抗体重链第7183家族,其VL基因中的VL基因片段隶属于抗体K轻链20家族,VH基因由VH76-1BG-DFL16.1-JH4重排而形成,VL基因由VKbw20-JK2重排而形成.1C7的VH和VL基因的克隆为抗FMDV scFv的构建与表达奠定了基础. 展开更多
关键词 抗口蹄疫病毒 单克隆抗体 1C7重轻链 可变区基因 克隆 序列分析
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单性生殖小鼠是怎么回事? 预览
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作者 禾乃 《中国科技教育》 2004年第4期 52-53,共2页
生殖是生物体产生子代的现象,是生物体基本的特征之一,是生命得以延续的惟一手段。
关键词 生殖方式 有性生殖 无性生殖 单性生殖技术 基因工程 核移植 克隆技术
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棉花MADS框蛋白基因(GhMADS1)的克隆 预览 被引量:5
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作者 郑尚永 郭余龙 +4 位作者 肖月华 罗明 侯磊 罗小英 裴炎 《遗传学报》 SCIE CAS 北大核心 2004年第10期 1136-1141,共6页
作为转录因子,MADS框蛋白基因在植物花器官发育中有着重要的功能.为研究棉花花器官发育的分子机理,以棉花花器官突变体CHV1(cotton homeotic variant)和徐州142正常植株为材料,利用棉花EST数据库资料,通过EST序列整合,从陆地棉徐州142... 作为转录因子,MADS框蛋白基因在植物花器官发育中有着重要的功能.为研究棉花花器官发育的分子机理,以棉花花器官突变体CHV1(cotton homeotic variant)和徐州142正常植株为材料,利用棉花EST数据库资料,通过EST序列整合,从陆地棉徐州142花蕾中克隆出一个MADS框蛋白的编码区段,GenBank登录号为AF538965.该片段(GhMADS1)长713 bp,包含一个711bp的开放阅读框,推导的氨基酸序列(236个氨基酸)与葡萄、烟草、矮牵牛、拟南芥和金鱼草等的AGDS组MADS框蛋白有很高的序列相似性.系统进化分析同样将GhMADS1基因归入AGL2组MADS框蛋白.RT-PCR分析显示,该基因在陆地棉的花瓣、雄蕊、胚珠和纤维中表达,特别是在花瓣中表达量最高,而在根、茎、叶等营养器官和棉花同源异型突变体CHV1(所有花器官均变为苞叶状叶性器官)的变异花蕾中不表达.这些结果说明GhMADS1基因可能在棉花花器官发育中有着重要的功能. 展开更多
关键词 棉花 花器官 MADS框
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我国转基因体细胞克隆牛再创两项世界之最 预览
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《中国科技财富》 2003年第11期 94,共1页
关键词 中国 转基因体细胞 克隆技术 克隆牛 胃溃疡疾病 岩藻糖转移酶基因
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日本乳腺细胞克隆牛顺利产仔 预览
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作者 张可喜 《中国动物保健》 2001年第11期 32,共1页
<正> 据日本雪印乳业公司提供的信息说,它们培育的一头乳腺细胞克隆牛7月30日产下一头体重40公斤的小公牛,到目前为止,这头小公牛一切正常。从外观上看,这头小公牛与普通的小牛没有什么差别,但从组织解剖学的观点来
关键词 日本 乳腺细胞克隆牛 组织解剖学 繁殖技术 受精率
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渗透胁迫下白花柽柳cDNA文库的构建及EST分析 预览 被引量:1
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作者 蔡勤安 王玉成 +1 位作者 张道远 董玉芝 《生物技术》 CAS 2005年第3期 21-25,共5页
目的:寻找渗透胁迫相关基因EST片断.方法:构建白花柽柳cDNA文库,对文库阳性克隆随机测序,并进行网上比对分析.结果:该cDNA文库克隆的重组率大于95%,插入片段主要集中在250~1000bp之间,并获得了如脯氨酸丰富蛋白基因,钙依赖蛋白激酶基因... 目的:寻找渗透胁迫相关基因EST片断.方法:构建白花柽柳cDNA文库,对文库阳性克隆随机测序,并进行网上比对分析.结果:该cDNA文库克隆的重组率大于95%,插入片段主要集中在250~1000bp之间,并获得了如脯氨酸丰富蛋白基因,钙依赖蛋白激酶基因,丝氨酸/苏氨酸激酶基因,过氧化氢酶基因,膜转运蛋白等基因.结论:渗透胁迫基因是多基因参与的系统调控过程,它们涉及了植物细胞壁合成、信号传递、基因调控、氧化物质清除、渗透调节物质的转运等方面. 展开更多
关键词 白花柽柳 渗透胁迫 CDNA文库 表达序列标签
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克氏杆菌gldA基因亚克隆及其原核表达载体构建 预览
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作者 邵敬伟 郭养浩 +1 位作者 吴志香 刘长江 《农业生物技术学报》 CAS 2005年第2期 260-261,共2页
甘油脱水酶(glycerol dehydratase EC 4.2.1.30)是控制甘油分解和产生1,3-丙二醇的关键性限速酶.甘油脱水酶是由α、β和γ 3个亚基组成的复合物(α2β2γ2),分别由gldA、gldB和gldC基因编码.研究(Frank et al,1998;Macis etal.,1998;Ma... 甘油脱水酶(glycerol dehydratase EC 4.2.1.30)是控制甘油分解和产生1,3-丙二醇的关键性限速酶.甘油脱水酶是由α、β和γ 3个亚基组成的复合物(α2β2γ2),分别由gldA、gldB和gldC基因编码.研究(Frank et al,1998;Macis etal.,1998;Markus et al,1996)认为甘油脱水酶α亚基无论在甘油脱水酶的结构上还是功能上都起到重要的作用.本研究克隆了克氏杆菌的甘油脱水酶α亚基基因(gldA)并构建了该基因的原核表达载体,为甘油脱水酶基因的进一步表达研究及探索其作用机制奠定了基础. 展开更多
关键词 表达载体构建 杆菌 亚克隆 甘油脱水酶 原核表达载体 3-丙二醇 Α亚基基因 亚基组成 基因编码 作用机制 限速酶 关键性 复合物 酶基因
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H9N2亚型禽流感病毒M基因的克隆及序列分析 预览 被引量:8
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作者 傅生芳 常惠芸 +2 位作者 独军政 候顺利 陈怀涛 《甘肃农业大学学报》 CAS 2005年第5期 579-582,共4页
从鸡胚尿囊液中提取H9N2亚型禽流感病毒的 RNA,根据已发表的 A型流感病毒(AIV)的核苷酸序列 ,设计一对特异引物 ,采用反转录-聚合酶链式反应 (RT-PCR)成功地扩增了AIV的M基因.将M基因的cDNA克隆后进行了序列测定,测序结果表明所扩增的1 ... 从鸡胚尿囊液中提取H9N2亚型禽流感病毒的 RNA,根据已发表的 A型流感病毒(AIV)的核苷酸序列 ,设计一对特异引物 ,采用反转录-聚合酶链式反应 (RT-PCR)成功地扩增了AIV的M基因.将M基因的cDNA克隆后进行了序列测定,测序结果表明所扩增的1 192 nt片段包含了完整的M基因的两个开放阅读框.核苷酸序列比较分析结果表明:该毒株与A/Hong Kong/1073/99(H9N2)、A/Duck/Hong Kong/380.5/2001(H5N1)、A/Duck/NY/191255-79/02(H5N2)相比 ,核苷酸序列的同源性在92.2 %~96.1 %之间,其相对应的氨基酸序列的同源性在91.7 %~96.3 %之间. 展开更多
关键词 禽流感病毒 M基因 克隆 序列分析
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斑马鱼Hoxa-11a基因克隆及序列分析的研究
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《生物技术通报》 CAS 2005年第6期 101,共1页
浙江大学生物技术系薛良义和林凯先对斑马鱼基因组DNA进行研究。他们用PCR法从斑马鱼基因组DNA中扩增了HoXa-11a基因的完整编码序列,并将其克隆到PCR—ToPo载体,该基因包括两个外显子,其长度分别为622bp和233bp,其间的内含子为726b... 浙江大学生物技术系薛良义和林凯先对斑马鱼基因组DNA进行研究。他们用PCR法从斑马鱼基因组DNA中扩增了HoXa-11a基因的完整编码序列,并将其克隆到PCR—ToPo载体,该基因包括两个外显子,其长度分别为622bp和233bp,其间的内含子为726bp,可共编码为284个氨基酸,它与人、鼠、鸡、爪蟾和矛尾鱼HoXa-11基因氨基酸序列的同源性分别为50.0%、51.3%、53.3%、56.7%和59.7%除同源异型盒外, 展开更多
关键词 基因克隆 斑马鱼 序列分析 HoXa-11基因 基因组DNA 氨基酸序列 编码序列 PCR法 生物技术 浙江大学
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一株无血凝性兔出血症病毒的分离鉴定及其衣壳蛋白VP60基因的克隆和序列分析 被引量:8
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作者 田浪 王红宁 +4 位作者 李建文 廖娟 张夏兰 周万蓉 王鸿宾 《畜牧兽医学报》 CAS 北大核心 2006年第10期 1078-1083,共6页
从临床病料中分离鉴定出1株无血凝性的致病性兔出血症病毒(RHDV),命名为Yaan-1。HA试验测得该毒株原代及经兔体传3代后的肝毒在25℃、37℃和4℃时均无血凝性;但在琼脂扩散试验和对流免疫电泳中均可见分离株与常规RHDV高免血清形成... 从临床病料中分离鉴定出1株无血凝性的致病性兔出血症病毒(RHDV),命名为Yaan-1。HA试验测得该毒株原代及经兔体传3代后的肝毒在25℃、37℃和4℃时均无血凝性;但在琼脂扩散试验和对流免疫电泳中均可见分离株与常规RHDV高免血清形成清晰的沉淀线;电镜观察可见30nm左右的病毒粒子。采用RT-PCR方法将Yaan-1株的衣壳蛋白VP60基因进行了克隆测序,序列分析表明VP60基因序列全长1740bp,编码579个氨基酸,测序结果提交GenBank(注册号为DQ069280),并与世界各国的常规RHDV分离株进行比较,结果表明核苷酸同源性为90.0%~98.0%,氨基酸同源性为94.1%~99.0%,氨基酸变异多发生在衣壳蛋白C、E区;同时对Yaan-1株的分子量、等电点、疏水性、跨膜区等分子结构特征进行了分析。本研究首次报道了无血凝性RHDV中国分离株,丰富了地方毒株资源,为明确我国地方株的分子流行病学,以及对VP60蛋白分子特征研究提供了新材料。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 无血凝性 衣壳蛋白 VP60基因 序列分析 RT—PCR
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百合ACC氧化酶基因全长cDNA的克隆及序列分析 预览 被引量:9
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作者 刘鲜艳 刘雅莉 +1 位作者 王跃进 张宗勤 《西北植物学报》 CAS 北大核心 2008年第4期 651-656,共6页
以亚洲百合‘Polyanna’(Lilium spp.)花瓣为材料,根据已报道的百合ACC氧化酶基因片段设计1对末端扩增特异引物,采用RACE方法,获得百合ACC氧化酶基因的全长eDNA(GenBank登录号为EU296623)。该eDNA全长1152bp,具有一个954bp的... 以亚洲百合‘Polyanna’(Lilium spp.)花瓣为材料,根据已报道的百合ACC氧化酶基因片段设计1对末端扩增特异引物,采用RACE方法,获得百合ACC氧化酶基因的全长eDNA(GenBank登录号为EU296623)。该eDNA全长1152bp,具有一个954bp的开放阅读框,编码318个氨基酸。Blast搜索结果显示,百合ACC氧化酶基因核苷酸序列与其它植物已报道的ACC氧化酶基因具有71%~82%的相似性,氨基酸序列有70%~87%的相似性,聚类分析表明,与单子叶植物百合科郁金香首先聚类,其次与双子叶植物聚类,最后与单子叶禾本科和兰科植物聚类。 展开更多
关键词 ACC氧化酶 EDNA克隆 百合 基因
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杜仲次生代谢调控基因克隆与转基因技术研究
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《中国科技成果》 2008年第8期62-62,共1页
本研究得到国家重大基础研究前期专项、国家自然科学基金支持。本研究突破杜仲胶颗粒提取等关键技术,对杜仲胶细胞及胶颗粒形态进行观察,分离纯化胶粒结合蛋白并进行免疫组织化学定位,为阐明杜仲胶细胞发育及杜仲胶颗粒的形成机理奠... 本研究得到国家重大基础研究前期专项、国家自然科学基金支持。本研究突破杜仲胶颗粒提取等关键技术,对杜仲胶细胞及胶颗粒形态进行观察,分离纯化胶粒结合蛋白并进行免疫组织化学定位,为阐明杜仲胶细胞发育及杜仲胶颗粒的形成机理奠定了基础。分离、纯化杜仲蛋白并进行序列测定,证明杜仲蛋白对白色念珠球菌等病原真菌以及小麦赤霉病等植物病原菌有抑制作用,为克隆相关蛋白编码基因并利用基因工程方法生产杜仲药用蛋白提供技术储备。 展开更多
关键词 转基因技术 基因克隆 杜仲胶 代谢调控 国家自然科学基金 免疫组织化学定位 次生 颗粒形态
FMDV整联蛋白受体β1亚基的克隆及其配体黏附区多抗的制备 预览 被引量:1
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作者 杜平 尚佑军 +3 位作者 马军武 贺延玉 孙晓林 刘湘涛 《生物工程学报》 CAS 北大核心 2008年第5期 874-880,共7页
采用RT-PCR技术从牛气管组织扩增出2400bp的β1基因,回收纯化连入PGEM-T载体,测序。用Expasy软件对β1基因的抗原性进行分析,选取胞外区334-861bp的配体结合区与6×His融合,在大肠杆菌中大规模诱导表达,并经Ni2+亲和柱层析纯化。通... 采用RT-PCR技术从牛气管组织扩增出2400bp的β1基因,回收纯化连入PGEM-T载体,测序。用Expasy软件对β1基因的抗原性进行分析,选取胞外区334-861bp的配体结合区与6×His融合,在大肠杆菌中大规模诱导表达,并经Ni2+亲和柱层析纯化。通过SDS-PAGE鉴定后,应用纯化蛋白免疫新西兰家兔,获得效价在1:12800以上的多抗,Western blotting鉴定表明此抗体可特异性的与表达的融合蛋白作用。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 整联蛋白 Β1亚基 配体结合区 多克隆抗体
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葛仙米中SOD基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 预览
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作者 汪滢 章秀 +1 位作者 吴双秀 王全喜 《上海师范大学学报:自然科学版》 2008年第3期 301-304,共4页
采用PCR技术从葛仙米(Nostoc sphaeroides)总DNA中克隆了一段基因序列,该序列与基因库中已公布的编码普通念珠藻(Nostoc commnue)超氧化物歧化酶的氨基酸序列同源性为98%,将该基因插入含T7启动子的质粒pET-32a(+)中构建表达质... 采用PCR技术从葛仙米(Nostoc sphaeroides)总DNA中克隆了一段基因序列,该序列与基因库中已公布的编码普通念珠藻(Nostoc commnue)超氧化物歧化酶的氨基酸序列同源性为98%,将该基因插入含T7启动子的质粒pET-32a(+)中构建表达质粒pET-sod,然后将该表达质粒转入大肠杆菌BL21中进行蛋白表达,表达菌株用lmmol/L1PTG诱导表达数小时后,产生较多重组的蛋白,且该蛋白以可溶性蛋白形式存在,SDS-PAGE分析表明:在相对分子量约为22kd的位置有一条明显蛋白质带,将诱导表达后的蛋白通过亲和层析的方法进行蛋白纯化;NBT光还原法测定表达产物的比活力,每毫克纯化蛋白约为2550U。 展开更多
关键词 葛仙米 SOD基因克隆 诱导表达
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抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体制备及部分特性鉴定 预览 被引量:11
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作者 裴敦国 葛俊伟 +2 位作者 马广鹏 姜艳萍 李一经 《东北农业大学学报》 CAS 2008年第7期 84-89,共6页
以原核表达系统pGEX-6p-1-N/BL21经IPTG诱导表达的重组PEDV N-GST融合蛋白作为免疫抗原,免疫BALB/c小鼠,运用淋巴细胞杂交瘤技术,制备单克隆抗体,用原核表达系统T12-pPROHTa/BL21经IPTG诱导表达的PEDV N蛋白做筛选抗原,通过间接ELISA进... 以原核表达系统pGEX-6p-1-N/BL21经IPTG诱导表达的重组PEDV N-GST融合蛋白作为免疫抗原,免疫BALB/c小鼠,运用淋巴细胞杂交瘤技术,制备单克隆抗体,用原核表达系统T12-pPROHTa/BL21经IPTG诱导表达的PEDV N蛋白做筛选抗原,通过间接ELISA进行筛选,获得两株抗PEDV N蛋白杂交瘤细胞,命名为2E3、4C6。亚类鉴定为IgG1和IgG2a型,均为к链抗体,染色体数平均为(91±7)对。用制备的单抗与pGEX-6p-1-N/BL21、T12-pPROHTa/BL21诱导表达后的菌体裂解物做Western Blot试验,在不同载体表达的N蛋白处出现明显的特异性条带;通过间接ELISA做病原检测,这两株单抗不与TGEV、PRV和PrV发生交叉反应,而与PEDV显示良好的特异性反应。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 单克隆抗体 WESTERNBLOT 间接ELISA
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