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牛肝辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢酶cDNA的克隆及组织表达 预览 被引量:3
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作者 王桂玲 黄东阳 +1 位作者 刘戈飞 杜晶 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS 北大核心 2003年第6期 811-815,共5页
NADP(H)-dependent retinol dehydrogenase/reductase (NRDR) was an important retinoic acid synthase, which was first purified from rabbit liver in 1997. In order to study the function of the NRDR gene,the full-length cDN... NADP(H)-dependent retinol dehydrogenase/reductase (NRDR) was an important retinoic acid synthase, which was first purified from rabbit liver in 1997. In order to study the function of the NRDR gene,the full-length cDNA of bovine NRDR was cloned. According to the conserved sequences of human, mouse and rabbit NRDR cDNA, a pair of primers was designed to amplify a 294 bp DNA fragment of bovine liver NRDR, and then the full-length of NRDR cDNA (AF487454) was cloned by using 3′-RACE and 5′-RACE. All the cloned NRDR proteins consist of 260 amino acid residues and showed high identity among them. The tri-peptide of human, mouse and rabbit NRDR C-end was -SRL and that of bovine NRDR C-end was -SHL, but both were considered to be peroxisomal target signal 1 (PTS1). RT-PCR demonstrated that NRDR gene was expressed in liver, heart, lung, kidney, stomach and intestine, and was not found in pancreas, muscle, artery and skin. The full-length bovine NRDR cDNA has been successfully cloned and the sequence was analyzed. It provided a reliable foundation to investigate the biological function of this protein. 展开更多
关键词 牛肝辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢酶 克隆 组织表达 CDNA
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亲和吸附剂对细菌内毒素吸附性能的研究 预览 被引量:7
2
作者 方晖 魏佼 俞耀庭 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS 北大核心 2004年第6期 1056-1059,共4页
制备了以球形纤维素为载体、 8种氨基酸和1种聚赖氨酸为配基的吸附剂, 对质量浓度为100.0 pg/mL的内毒素水溶液进行了吸附研究, 绘制了吸附等温线, 并初步探讨了吸附机理. 结果表明, 精氨酸和赖氨酸配基具有良好的吸附能力, 在1.5 mL 10... 制备了以球形纤维素为载体、 8种氨基酸和1种聚赖氨酸为配基的吸附剂, 对质量浓度为100.0 pg/mL的内毒素水溶液进行了吸附研究, 绘制了吸附等温线, 并初步探讨了吸附机理. 结果表明, 精氨酸和赖氨酸配基具有良好的吸附能力, 在1.5 mL 100.0 pg/mL内毒素溶液中吸附量分别达到182.0和160.0 pg/mL; 吸附等温线显示, 以赖氨酸为配基的吸附剂其吸附量随溶液内毒素浓度增加而线性增加, 符合Langmuir吸附方程, 吸附能力强, 具有一定的临床应用前景. 展开更多
关键词 内毒素 血液灌流 球形纤维素 氨基酸
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西瓜果实发育过程中番茄红素积累变化及相关酶基因表达 预览
3
作者 王学征 张雅楠 +4 位作者 肖琪 陈克农 朱子成 赵亮 栾非时 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期40-48,共9页
为研究西瓜果实发育过程番茄红素含量变化与相关酶基因表达关系,以LSW-177(红瓤)和COS(浅黄瓤)为材料,通过高效液相色谱法(HPLC)测定从坐果到过熟7个不同时间点果肉组织番茄红素变化,利用荧光定量PCR测定相应时期相关酶基因表达... 为研究西瓜果实发育过程番茄红素含量变化与相关酶基因表达关系,以LSW-177(红瓤)和COS(浅黄瓤)为材料,通过高效液相色谱法(HPLC)测定从坐果到过熟7个不同时间点果肉组织番茄红素变化,利用荧光定量PCR测定相应时期相关酶基因表达量变化。结果表明,LSW-177(红瓤)授粉后16 d,番茄红素开始逐渐积累,果实转色期(授粉后24 d)番茄红素迅速积累,成熟期(授粉后40 d)达到峰值,随后下降。而COS(浅黄瓤)整个发育过程均未检测到番茄红素积累。四种相关酶基因表达量两品种间存在差异。番茄红素积累与Psy1基因表达呈显著正相关,与Lcyb基因表达呈显著负相关。结合Psy1和Lcyb基因两品种间表达差异,特别是果肉转色期差异分析,推测Psy1和Lcyb基因是西瓜形成番茄红素关键基因。通过基因序列分析,浅黄瓤西瓜中Psy1基因内含子有缺失;两品种Lycb基因间有3个SNP位点,存在两个蛋白差异。 展开更多
关键词 西瓜 番茄红素 酶基因 HPLC 荧光定量PCR
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鸡MHCⅠα和β2m链基因真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达 预览 被引量:4
4
作者 戴银 胡晓苗 +5 位作者 赵瑞宏 侯宏艳 沈学怀 潘孝成 周学利 张丹俊 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第8期1938-1943,共6页
为进一步研究主要组织相容性复合体Ⅰ类(major histocompatibility complex,MHCⅠ)分子在免疫应答中的作用机制,试验经PCR克隆获得MHCⅠα和β2m链基因,随后插入带有荧光标签蛋白的真核表达载体,成功构建了重组质粒pEGFP-MHCⅠα和pmC... 为进一步研究主要组织相容性复合体Ⅰ类(major histocompatibility complex,MHCⅠ)分子在免疫应答中的作用机制,试验经PCR克隆获得MHCⅠα和β2m链基因,随后插入带有荧光标签蛋白的真核表达载体,成功构建了重组质粒pEGFP-MHCⅠα和pmCherry-MHCⅠβ2m,并通过脂质体法转染293T真核表达细胞。荧光显微镜观察可见,MHCⅠα和β2m分子主要分布于真核细胞的内膜系统,改变了与之融合的荧光蛋白在细胞内的定位。此外,Western blotting检测可见大小约68.3和41.3ku的目的蛋白反应带,表明重组质粒能够在293T细胞中顺利表达,且表达蛋白与鸡MHCⅠ类分子的相应抗体可发生特异性结合反应,具有良好的免疫学活性。 展开更多
关键词 鸡MHCⅠα基因 鸡MHCⅠβ2m链基因 真核表达载体 293T细胞
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微小RNA-205在肿瘤化学治疗耐药中的作用和机制 预览 被引量:1
5
作者 李龙 黄洪章 《国际口腔医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第6期734-738,共5页
肿瘤对化学治疗药物的耐药常导致化学治疗失败,肿瘤耐药是临床治疗的一大难题。肿瘤的化学治疗耐药涉及多基因多信号转导通路的复杂调控过程,其机制迄今不明。微小RNA(miRNA)是由一类长18-25碱基组成的内源性非编码单链小RNA分子,... 肿瘤对化学治疗药物的耐药常导致化学治疗失败,肿瘤耐药是临床治疗的一大难题。肿瘤的化学治疗耐药涉及多基因多信号转导通路的复杂调控过程,其机制迄今不明。微小RNA(miRNA)是由一类长18-25碱基组成的内源性非编码单链小RNA分子,在调节多种细胞生物学过程中起着重要的作用。miRNA的异常表达与肿瘤的发生进展、迁移及化学治疗耐药存在密切的关系,而miRNA-205(miR-205)在肿瘤化学治疗耐药中起重要的调控作用,但其具体机制尚不清楚。本文就miR-205及其在肿瘤化学治疗耐药中的作用和机制等研究进展作一综述。 展开更多
关键词 微小RNA-205 肿瘤 化学治疗耐药
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芒果SEPALAATA基因的克隆与表达分析 预览 被引量:1
6
作者 魏军亚 唐杰 +2 位作者 刘德兵 刘国银 陈业渊 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期74-80,共7页
以芒果品种‘吕宋’(Mangifera indica L. Carabao)为试材,利用同源克隆和RACE技术从花序中获得了1个芒果SEPALAATA(SEP)基因cDNA全长,命名为MSEP1(GenBank中登录号为KP702299)。MSEP1基因的cDNA全长为921 bp,包含一个长度为72... 以芒果品种‘吕宋’(Mangifera indica L. Carabao)为试材,利用同源克隆和RACE技术从花序中获得了1个芒果SEPALAATA(SEP)基因cDNA全长,命名为MSEP1(GenBank中登录号为KP702299)。MSEP1基因的cDNA全长为921 bp,包含一个长度为726 bp开放阅读框,编码241个氨基酸,蛋白质相对分子质量为27.7 kD,理论等电点为 5.79。序列比对和系统进化树分析表明, MSEP1具有保守的MADS box及半保守的K区, 属于 MADS box 家族的 SEP亚家族。器官特异性表达分析表明,MSEP1基因在芒果根、茎中表达量较低,在叶片、花芽中表达量较高,而在花序中表达量最高。研究推测,MSEP1基因可能在芒果生殖生长中发挥重要作用。 展开更多
关键词 芒果 MSEP1 RT PCR 克隆 表达
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重组人胃蛋白酶原Ⅰ在汉逊酵母中的分泌表达、纯化及其应用
7
作者 陈丹 李璐 +5 位作者 班靖洋 郭玉争 王维龙 刘娟 李鼎锋 刘勇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第2期125-132,共8页
目的实现人胃蛋白酶原Ⅰ(pepsiongenⅠ,PGⅠ)在汉逊酵母表达系统中的高效分泌表达,并将纯化的重组PGⅠ蛋白制备成体外诊断试剂用校准品。方法根据汉逊酵母遗传密码子偏爱性优化设计并合成PGⅠ基因,克隆至表达载体p RMHP2.1中,电转化... 目的实现人胃蛋白酶原Ⅰ(pepsiongenⅠ,PGⅠ)在汉逊酵母表达系统中的高效分泌表达,并将纯化的重组PGⅠ蛋白制备成体外诊断试剂用校准品。方法根据汉逊酵母遗传密码子偏爱性优化设计并合成PGⅠ基因,克隆至表达载体p RMHP2.1中,电转化汉逊酵母宿主菌26012,进行多次传代及稳定,筛选高水平分泌表达PGⅠ的菌株,并对该菌株的目的基因整合位置及整合拷贝数进行检测。应用200 L发酵罐大规模制备发酵培养液,通过Ni柱亲和层析方法纯化获得重组PGⅠ蛋白,经胶乳增强免疫比浊试剂盒进行PGⅠ蛋白的定值,应用类血清基质液制备100及50μg/L浓度的PGⅠ校准品后检测稳定性。结果重组表达质粒p RMHP2.1-PGⅠ经双酶切及测序鉴定证明构建正确。筛选获得的重组汉逊酵母菌株分泌表达的PGⅠ蛋白相对分子质量约45 000,表达量达100 mg/L以上,其外源基因整合于宿主r DNA位置,整合拷贝数不低于20个。纯化后的重组PGⅠ蛋白纯度为94.5%,配制后的PGⅠ校准品经4℃实时保存稳定性、37℃加速破坏性及4℃开盖保存稳定性试验,校准品定值的平均下降幅度均不超过10%。结论应用汉逊酵母表达系统可高效分泌PGⅠ蛋白,该蛋白具有良好的稳定性,可用作体外诊断试剂的PGⅠ校准品。 展开更多
关键词 胃蛋白酶原Ⅰ 汉逊酵母表达系统 分泌表达 纯化
小菜蛾储存蛋白基因的克隆与表达分析 预览
8
作者 陈伟军 尤燕春 +3 位作者 仲帆 任娜娜 许贤美 谢苗 《福建农林大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2017年第3期311-317,共7页
克隆和分析了2个小菜蛾的储存蛋白基因——PxAJSP-1和PxBJHSP-2.其中,PxAJSP-1属于芳基贮存蛋白,而PxBJHSP-2属于富甲硫氨酸储存蛋白.进化树分析表明,它们在同一目昆虫中相对保守.利用实时荧光定量PCR分析其表达模式,发现PxAJSP-1和PxBJ... 克隆和分析了2个小菜蛾的储存蛋白基因——PxAJSP-1和PxBJHSP-2.其中,PxAJSP-1属于芳基贮存蛋白,而PxBJHSP-2属于富甲硫氨酸储存蛋白.进化树分析表明,它们在同一目昆虫中相对保守.利用实时荧光定量PCR分析其表达模式,发现PxAJSP-1和PxBJHSP-2在4龄幼虫和蛹期高表达,且在脂肪体中的表达量远高于其他组织. 展开更多
关键词 储存蛋白 小菜蛾 实时荧光定量PCR 表达分析
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Differential gene expression profile of Buyanghuanwu decoction in rats with ventricular remodeling post-myocardial infarction
9
作者 Zhang Tao Hua Yue +7 位作者 Luo Hao Chen Hongmei Shao Meng Fu Xiuqiong John Man-Tak Chu Huang Guiqiong Liu Bin Zhou Yingchun 《中医杂志:英文版》 SCIE CAS CSCD 2017年第3期341-354,共14页
ObjectiveTo 在室的改变在基因表示上调查 Buyanghuanwu 煎(BYHWD ) 的效果在心肌的梗塞的 rats.MethodsAnimal 模型的 myocardial 以后梗塞被左前面的下降冠的动脉的永久结扎建立。 Echocardiography 大小在 BYHWD 的处理以后被执行( 1... ObjectiveTo 在室的改变在基因表示上调查 Buyanghuanwu 煎(BYHWD ) 的效果在心肌的梗塞的 rats.MethodsAnimal 模型的 myocardial 以后梗塞被左前面的下降冠的动脉的永久结扎建立。 Echocardiography 大小在 BYHWD 的处理以后被执行( 18 g ?????????????????????吠?呑?牴慥浴湥?潃据畬楳湯楅桴牥?剔元???????吠?呑???????????吗????????????????渠略潲牰瑯'虡N敶?? 展开更多
关键词 补阳还五汤 基因表达谱 心肌梗死 心室重构 单核细胞趋化蛋白1 转化生长因子 5-脂氧合酶 动物模型
甘蓝型油菜种子和角果皮中硫苷含量的动态变化及转录组关联分析 预览
10
作者 田志涛 赵永国 +6 位作者 Lenka Havlickova He Zhesi Andrea L Harper Ian Bancroft 邹锡玲 张学昆 陆光远 《中国农业科学》 CSCD 北大核心 2018年第4期635-651,共17页
【目的】探索甘蓝型油菜不同发育时期种子和角果皮硫苷含量的动态变化规律,通过转录组关联分析解析控制硫苷含量变异的遗传机制。【方法】在由113个油菜品种构成的自然群体中,利用高效液相色谱法检测不同发育时期油菜种子及角果皮中的... 【目的】探索甘蓝型油菜不同发育时期种子和角果皮硫苷含量的动态变化规律,通过转录组关联分析解析控制硫苷含量变异的遗传机制。【方法】在由113个油菜品种构成的自然群体中,利用高效液相色谱法检测不同发育时期油菜种子及角果皮中的硫苷含量。提取油菜幼嫩叶片m RNA并进行m RNA-Seq测序,开发了355 536个单核苷酸多态性标记(SNP)和116 098个基因表达量标记(GEM)。将开发的SNPs和GEMs分别导入到混合线性模型(MLM)和回归分析模型中进行关联分析,获得与油菜硫苷表型变异显著相关的遗传位点,进一步通过序列比对和功能预测筛选确定候选基因。【结果】授粉后15 d(15 DAP),油菜种子和角果皮的硫苷含量变异范围分别是1.69-20.45和1.47-25.23μmol·g^-1。25 DAP种子、25 DAP角果皮以及成熟种子的硫苷变异范围分别是2.17-147.21、0.73-130.77和8.87-111.83μmol·g^-1。后两个时期(即25 DAP和成熟期)的硫苷含量表现出较大变异,适合进行转录组关联分析。基于m RNA-Seq测序数据,经质量控制后获得256 397个高质量的SNP标记(MAF>0.01)和53 889个GEM标记(平均基因表达量>0.4)。利用SNP标记对成熟种子、25 DAP种子和25 DAP角果皮硫苷含量进行关联分析,分别检测到167、158和3个显著关联位点(-log10P>6.71)。其中,与成熟种子显著关联的SNP标记形成5个明显的关联峰,分别位于A2、A9、C2、C7和C9染色体上。同时,利用GEM标记进行的关联分析中,分别检测到127、16和24个与成熟种子、25 DAP种子、25 DAP角果皮硫苷含量显著关联的位点(-log10P>6.03),这些位点主要分布在A2、A8、A9、C2和C9染色体上并形成明显的关联峰。其中,成熟种子和25 DAP角果皮在A9、C2和C9染色体上形成共同的关联峰。通过与公共数据库的基因组序列比对和功能注释,共筛选到295个功能基因,其中25个基因涉及硫苷代谢网路途径,直接参与硫苷的调控。� 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 硫代葡萄糖苷 动态变化 转录组关联分析 单核苷酸多态性标记 基因表达量标记
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酵母双杂交系统 预览 被引量:1
11
作者 吴志聪 王一飞 《生物技术》 CAS 2003年第5期 43-44,共2页
就酵母双杂交系统的基本原理、主要进展和在蛋白质组研究中的应用作一综述.
关键词 酵母双杂交系统 蛋白质组 原理 相互作用组
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重组人ICOS蛋白在大肠杆菌中的表达及其对B细胞活性的作用
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作者 邓忠彬 陆长明 +5 位作者 黄伟达 沈丽琴 朱伟 马泓冰 范盘生 张学光 《生物化学与生物物理学报:英文版》 SCIE CAS 北大核心 2003年第7期 601-605,共5页
ICOS(inducible costimulator)是一种表达在活化T细胞上的新型共刺激分子,它的配体GL50组成性表达在B细胞及巨噬细胞上。ICOS可以促使Th2细胞的分化,能促进IL-4、IL-10的分泌。从扁桃体中克隆到ICOS基因,构建了PET-ICOS重组载体,并... ICOS(inducible costimulator)是一种表达在活化T细胞上的新型共刺激分子,它的配体GL50组成性表达在B细胞及巨噬细胞上。ICOS可以促使Th2细胞的分化,能促进IL-4、IL-10的分泌。从扁桃体中克隆到ICOS基因,构建了PET-ICOS重组载体,并在大肠杆菌中得到高效表达,经SDS电泳及Western印迹法鉴定,所获得的蛋白质为特异性目的蛋白质。继而利用ICOS联合IL-10以及PWM驱动的B细胞体外培养系统,分析了ICOS在B细胞生长及抗体产生中的作用。结果表明,ICOS在PWM体外培养体系中,能有效地促进B细胞生长以及协同IL-10增加IgG的分泌。 展开更多
关键词 ICOS B细胞 IL-10 表达 分泌 WESTERN印迹法 抗体产生 生长 大肠杆菌 蛋白
非小细胞肺癌p53蛋白表达量及倍体测定与预后关系 预览 被引量:4
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作者 谢成耀 苏禄晖 +3 位作者 刘楠 李庆昌 李宗铉 王恩华 《解剖科学进展》 CAS 2005年第1期 25-26,共2页
目的通过非小细胞肺癌P53蛋白表达量及倍体测定,结合临床病理学特点,探讨患者预后的影响因素.方法应用流式细胞术检测120例非小细胞肺癌的P53蛋白表达量及DNA倍体.结果淋巴结转移组P53蛋白表达量高于无转移组,COX单因素分析表明,p53蛋... 目的通过非小细胞肺癌P53蛋白表达量及倍体测定,结合临床病理学特点,探讨患者预后的影响因素.方法应用流式细胞术检测120例非小细胞肺癌的P53蛋白表达量及DNA倍体.结果淋巴结转移组P53蛋白表达量高于无转移组,COX单因素分析表明,p53蛋白表达量、倍体及临床TNM分期均与预后有关,COX多因素分析发现,仅p53蛋白表达量是独立的预后因素.结论 P53蛋白高表达可能是非小细胞肺癌患者预后不良的主要因素之一. 展开更多
关键词 P53蛋白表达 非小细胞肺癌 DNA倍体 预后不良 COX 患者 预后因素 结论 主要因素 特点
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药学——药物化学 预览
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《中国学术期刊文摘》 北大核心 2006年第9期 273-276,共4页
荧光猝灭和荧光加强理论公式的等效性论证;离线二维液相色谱对珠蛋白水解产物的分析;中国红豆杉中多种紫杉烷同时检测的液质联用方法的建立;重组人酸性成纤维细胞生长因子C-末端测序;液质联用法测定鸡肉组织中氯霉素残留的研究;超... 荧光猝灭和荧光加强理论公式的等效性论证;离线二维液相色谱对珠蛋白水解产物的分析;中国红豆杉中多种紫杉烷同时检测的液质联用方法的建立;重组人酸性成纤维细胞生长因子C-末端测序;液质联用法测定鸡肉组织中氯霉素残留的研究;超声造影剂全氟显质量标准的研究; 展开更多
关键词 药物化学 人酸性成纤维细胞生长因子 药学 荧光猝灭 中国红豆杉 氯霉素残留 超声造影剂 理论公式 水解产物 液相色谱
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重组猪卵透明带-3α抗原及其抗体的制备 预览
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作者 高彦茹 潘善培 +2 位作者 谢琪璇 肖銮娟 柯琼 《生物技术》 CAS 2006年第4期 18-20,共3页
目的:制备重组猪卵透明带-3α(rpZP3α)抗原及其抗体供发展避孕疫苗研究。方法:在2L发酵罐中接种毕赤酵母GS115-pZP3α工程菌,高密度发酵表达rpZP3α蛋白,表达的蛋白经螯合镍离子的亲和柱纯化后,用SDS—PAGE和Western blot进行... 目的:制备重组猪卵透明带-3α(rpZP3α)抗原及其抗体供发展避孕疫苗研究。方法:在2L发酵罐中接种毕赤酵母GS115-pZP3α工程菌,高密度发酵表达rpZP3α蛋白,表达的蛋白经螯合镍离子的亲和柱纯化后,用SDS—PAGE和Western blot进行鉴定,以Quantity One软件对rpZP3α进行定量分析。rpZP3α免疫家兔,间接免疫荧光法检测抗血清对rpZP3α和猪卵透明带的抗体反应。IVF试验体外检测抗rpZP3α抗体对猪、小鼠精卵结合的影响作用。结果:工程菌高密度发酵产物经分离纯化后获得能与抗pZP3抗体反应的46kD成分,平均产量为8mg/L,用其免疫家兔获得抗rpZP3α抗血清,间接免疫荧光法分析显示此抗血清能与猪卵透明带反应,产生亮绿荧光。体外精卵结合试验中,随着兔抗rpZP3α.抗血清浓度的加大,其对猪、鼠精卵结合的抑制作用也增强。ELISA结果显示抗rpZP3α抗体与rpZP3α蛋白以及天然pZP3蛋白两种抗原反应的强度和趋势基本一致。结论:通过酵母体系制备的rpZP3α及其抗体具有免疫学活性。 展开更多
关键词 重组猪卵透明带-3α抗原 毕赤酵母 抗体 抑制作用
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用基因芯片表达谱筛选恶性黑色素瘤差异基因的研究 预览
16
作者 张琳西 易成刚 +3 位作者 张旭东 杨力 杨继庆 郭树忠 《中国康复理论与实践》 2006年第8期 694-695,i0001,共3页
目的 用基因芯片表达谱筛选出恶性黑色素瘤的差异基因。方法 用Agilent Human 1A OligoDNA芯片对恶性黑色素瘤和色素痣组织中基因表达情况进行检测,提取总RNA,进行荧光标记探针、杂交、洗涤后分析。结果 恶性黑色素瘤和正常色素痣组... 目的 用基因芯片表达谱筛选出恶性黑色素瘤的差异基因。方法 用Agilent Human 1A OligoDNA芯片对恶性黑色素瘤和色素痣组织中基因表达情况进行检测,提取总RNA,进行荧光标记探针、杂交、洗涤后分析。结果 恶性黑色素瘤和正常色素痣组织共有1596个差异表达基因,其中上调基因733个,下调基因863个。结论 基因芯片技术可筛选出恶性黑色素瘤相关基因。 展开更多
关键词 基因芯片 恶性黑色素瘤 色素痣 差异基因
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H7亚型禽流感病毒HA1基因在重组杆状病毒中的表达及其表达产物的抗原性 预览 被引量:2
17
作者 贾珊珊 孙凌霜 +3 位作者 齐岩 孙进华 姜亦飞 王君伟 《中国兽医科学》 CAS 北大核心 2007年第3期 232-235,共4页
从pMD18-T—HA阳性质粒中扩增出H7亚型禽流感病毒(AIV)HA1基因,并亚克隆至昆虫杆状病毒转移载体pBlueBacHis2A,将筛选的重组质粒命名为pBlueBacHisH7-HA1,与线性化杆状病毒DNA(Bac—N—BlueDNA)共转染sf9昆虫细胞,挑取蓝色蚀斑... 从pMD18-T—HA阳性质粒中扩增出H7亚型禽流感病毒(AIV)HA1基因,并亚克隆至昆虫杆状病毒转移载体pBlueBacHis2A,将筛选的重组质粒命名为pBlueBacHisH7-HA1,与线性化杆状病毒DNA(Bac—N—BlueDNA)共转染sf9昆虫细胞,挑取蓝色蚀斑,经3次蚀斑纯化,得到重组杆状病毒rpBlue-HisH7HA1。Western-blotting和间接免疫荧光试验结果显示,HA1在昆虫细胞中得到表达,且表达产物具有抗原性。抗原特异性试验证明,重组HA1蛋白与鸡H5、H9亚型AIV抗血清不发生交叉反应。血凝试验证明,重组HA1蛋白具有良好的血凝性。 展开更多
关键词 禽流感病毒 HA1基因 重组杆状病毒 H7亚型
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禽呼肠孤病毒99G株σB编码基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达 预览 被引量:1
18
作者 张云 郝雪 +1 位作者 耿宏伟 郭东春 《中国兽医科学》 CAS 北大核心 2008年第5期 407-411,共5页
采用RTPCR方法扩增禽呼肠孤病毒(ARV)99G株σB编码基因,序列分析表明,99G株σB编码基因与其他禽呼肠孤病毒的同源性为90%~99%,而与我国番鸭呼肠孤病毒S12株的同源性仅有60%;用BamHⅠ和XhoⅠ酶将σB编码基因切下并克隆到表达载... 采用RTPCR方法扩增禽呼肠孤病毒(ARV)99G株σB编码基因,序列分析表明,99G株σB编码基因与其他禽呼肠孤病毒的同源性为90%~99%,而与我国番鸭呼肠孤病毒S12株的同源性仅有60%;用BamHⅠ和XhoⅠ酶将σB编码基因切下并克隆到表达载体pGEX-6p-1中,构建了重组表达质粒pGEX-σB;鉴定后转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,σB基因在大肠杆菌中得到了高效表达,表达的融合蛋白占总蛋白的41.46%,融合蛋白的分子质量为66ku,主要以包涵体形式存在;Western-blot结果显示,该融合蛋白能与抗ARV阳性血清发生特异性反应,表明重组蛋白具有良好的反应原性,可用于禽呼肠孤病毒病诊断试剂盒和基因工程疫苗的研制。 展开更多
关键词 禽呼肠孤病毒 σB基因 原核表达
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新型生长抑素原核表达质粒的构建及表达鉴定 预览 被引量:4
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作者 梁爱心 冯细钢 +5 位作者 韩丽 滑国华 桑雷 刘兴斌 刘耘 杨利国 《生物工程学报》 CAS 北大核心 2008年第6期 995-998,共4页
将生长抑素(SS)与乙肝表面抗原(S)融合基因插入平衡致死系统原核表达质粒pYA3493中,转化至缺失asd基因的减毒猪霍乱沙门氏菌C500,经酶切、测序筛选得到非抗性的目的克隆,命名为pYA-SS。应用SDS—PAGE和Western blotting技术分离... 将生长抑素(SS)与乙肝表面抗原(S)融合基因插入平衡致死系统原核表达质粒pYA3493中,转化至缺失asd基因的减毒猪霍乱沙门氏菌C500,经酶切、测序筛选得到非抗性的目的克隆,命名为pYA-SS。应用SDS—PAGE和Western blotting技术分离并检测融合蛋白在宿主菌中的表达活性。结果表明,本试验构建的非抗性筛选生长抑素原核表达质粒可以在宿主菌C500中稳定、正确表达。此研究为开发新型、高效、安全的促生长疫苗提供了可靠的研究材料。 展开更多
关键词 生长抑素 原核表达 平衡致死系统
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人类新基因Bzw2的克隆、抗体制备及表达分析 预览 被引量:1
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作者 姚力群 李志 +3 位作者 江志钢 万永奇 吴秀山 袁婺州 《激光生物学报》 CAS CSCD 2011年第6期 798-801,共4页
Bzw2(basic leucine zipper and W2 domains 2)基因是人类心脏发育候选基因,它由bzip结构域和W2结构域构成。为了研究该基因在心脏发育过程中的作用,利用生物信息学信息克隆了人类Bzw2基因全长,将所得的片段插入到原核表达载体pGEXT-4... Bzw2(basic leucine zipper and W2 domains 2)基因是人类心脏发育候选基因,它由bzip结构域和W2结构域构成。为了研究该基因在心脏发育过程中的作用,利用生物信息学信息克隆了人类Bzw2基因全长,将所得的片段插入到原核表达载体pGEXT-4T-1载体中,利用BL21菌株表达该重组质粒,经过IPTG诱导,得到GST-Bzw2融合蛋白,蛋白经纯化分离后免疫新西兰大白兔,并用Western blotting检测抗体效价。利用抗体进行了心脏,肌肉,脑组织表达检测,结果显示,Bzw2在心脏,肌肉,脑组织中高表达。 展开更多
关键词 Bzw2 原核表达 多克隆抗体
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