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Ace-AMP1过表达毕赤酵母工程菌株的构建及其对梨青霉病的抑制作用 预览
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作者 林明 姜路花 余挺 《浙江大学学报:农业与生命科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期39-46,共8页
为解决从洋葱种子中直接提取Ace-AMP1抗菌肽难度大、成本高、提取率低的问题,本研究根据毕赤酵母密码子的偏好性,优化合成了洋葱种子的Ace-AMP1抗菌肽基因,将其连接到表达载体pPICZαA中,并电转化毕赤酵母GS115感受态细胞进行表达。实... 为解决从洋葱种子中直接提取Ace-AMP1抗菌肽难度大、成本高、提取率低的问题,本研究根据毕赤酵母密码子的偏好性,优化合成了洋葱种子的Ace-AMP1抗菌肽基因,将其连接到表达载体pPICZαA中,并电转化毕赤酵母GS115感受态细胞进行表达。实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chainreaction,RT-qPCR)及蛋白质印迹法(Western-blotting)结果证实,Ace-AMP1过表达GS115构建成功,抗菌肽能在酵母体内稳定表达。对蛋白质表达水平的检测结果表明,GS115/Ace-AMP1经诱导后上清液中蛋白质质量浓度显著增加,并于84h达到最大值(109μg/mL),而对照组则一直处于较低水平。对梨果实青霉病的抑制效果实验表明:GS115/Ace-AMP1能显著抑制扩展青霉(Penicillium expansum)在梨果实上的侵染;与对照组相比,青霉病发病率下降34%,平均病斑直径减小65%。本研究为Ace-AMP1抗菌肽的大规模生产及其抑制果实采后病害的开发利用奠定了基础。 展开更多
关键词 Ace-AMP1抗菌肽 毕赤酵母 青霉病 采后生物防治
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利用体细胞LOH突变制备α1,3-半乳糖基转移酶基因(GGTA1)缺失的五指山小型猪 预览 被引量:2
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作者 王飞 冯冲 +8 位作者 龙川 岳成鹤 王宁 李西睿 曹随忠 李明洲 储明星 潘登科 帅素容 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期522-527,共6页
制备α1,3-半乳糖基转移酶(αl,3-galactosyltransferase,GGTA1)基因缺失的五指山小型猪,为我国异种器官移植研究奠定基础。在已经获得的GGTA1单等位基因敲除(GGTA+/-)五指山小型猪基础上,建立GGTA1+/-猪耳成纤维细胞系。利用特... 制备α1,3-半乳糖基转移酶(αl,3-galactosyltransferase,GGTA1)基因缺失的五指山小型猪,为我国异种器官移植研究奠定基础。在已经获得的GGTA1单等位基因敲除(GGTA+/-)五指山小型猪基础上,建立GGTA1+/-猪耳成纤维细胞系。利用特异性结合α1,3Gal的药物GSI-B4联合免疫磁珠筛选,成功分离出自发杂合性缺失(Loss of heterozygosity,LOH)的双等位基因敲除(GGTA1-/-)耳成纤维细胞。单细胞克隆培养与PCR鉴定后,以GGTA1-/-细胞为核供体,体外成熟的猪卵母细胞为核受体构建克隆胚胎并移植。先后将3 122枚重构胚移植到13头受体母猪,其中4头怀孕,产仔12头。采用PCR和Southern blotting进行GGTA1基因型检测,11头为GGTA1-/-猪;流式细胞术分析表明,GGTA1-/-仔猪耳成纤维细胞不表达α1,3Gal。获得能克服异种器官超急性排斥反应(HAR)的GGTA1-/-猪,不仅为异种器官供体的进一步基因修饰提供了平台,也为异种移植临床前研究提供了宝贵资源。 展开更多
关键词 Α1 3-半乳糖基转移酶 自发杂合性缺失 异种器官移植 体细胞核移植 五指山小型猪
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小黄姜组培快繁技术研究 预览 被引量:1
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作者 黄明 赵懿琛 赵德刚 《山地农业生物学报》 2016年第3期63-65,71共4页
以贵州省六盘水市特产小黄姜茎尖为外植体,进行了组织培养快速繁殖技术研究。结果表明:消毒时间对茎尖成活率影响很大,以0.1%HgCl2消毒15 min 最有效。筛选出了不定芽分化的最适培养基(MS+6-BA 3.5 mg/ L+NAA 0.1 mg/ L),实现... 以贵州省六盘水市特产小黄姜茎尖为外植体,进行了组织培养快速繁殖技术研究。结果表明:消毒时间对茎尖成活率影响很大,以0.1%HgCl2消毒15 min 最有效。筛选出了不定芽分化的最适培养基(MS+6-BA 3.5 mg/ L+NAA 0.1 mg/ L),实现了小黄姜的继代和增殖同步化,组培苗移栽到营养土与珍珠岩为3∶1的混合基质中生长,成活率达到94%。 展开更多
关键词 六盘水小黄姜 茎尖 组培快繁
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可视化突变建模、定点突变和表达超耐热菌D-乳酸脱氢酶
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作者 田晋红 刘琦 +1 位作者 战丽萍 周泽扬 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期 73-78,共6页
目的:构建产天然防腐剂苯乳酸的工程菌。方法:分析超耐热菌(Aquifex aeolicus,A.aeolicus)D-乳酸脱氢酶(D-LDH)的三维构象,并与构建的可视化突变体三维模型进行对比,通过比较酶活性中心氨基酸残基与底物的空间构象,优选最佳模型... 目的:构建产天然防腐剂苯乳酸的工程菌。方法:分析超耐热菌(Aquifex aeolicus,A.aeolicus)D-乳酸脱氢酶(D-LDH)的三维构象,并与构建的可视化突变体三维模型进行对比,通过比较酶活性中心氨基酸残基与底物的空间构象,优选最佳模型进行定点突变、克隆、表达和苯乳酸发酵实验。结果:优选到F49A和Y297S两个单突变模型和一个F49A/Y297S双突变模型,分别进行定点突变和工程菌构建,三个突变工程菌均能发酵产生苯乳酸。结论:可视化定点突变乳酸脱氢酶可作为构建高产苯乳酸工程菌的有效方法。 展开更多
关键词 可视化 突变 苯乳酸 乳酸脱氢酶
壳聚糖转染胰岛素样生长因子基因促进兔关节软骨损伤修复的实验研究 被引量:3
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作者 赵荣兰 任玉平 +2 位作者 孙蓓 张瑞 梁东春 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1372-1375,共4页
目的探讨壳聚糖(chitosan,CS)介导IGF-1基因(igf-1)局部转染对关节软骨损伤修复的作用。方法 3月龄健康雄性大耳白家兔12只,体重2.0~2.5kg,随机分为对照组和干预组(n=6)。其中对照组实验动物左侧为正常对照组,右侧为生理盐水对照... 目的探讨壳聚糖(chitosan,CS)介导IGF-1基因(igf-1)局部转染对关节软骨损伤修复的作用。方法 3月龄健康雄性大耳白家兔12只,体重2.0~2.5kg,随机分为对照组和干预组(n=6)。其中对照组实验动物左侧为正常对照组,右侧为生理盐水对照组;干预组实验动物左侧为CS干预组,右侧为CS/igf-1干预组。后3组实验动物分别制备兔膝关节外侧髁软骨缺损模型,正常对照组不制备。CS/igf-1干预组于术后当日关节腔内注射CS/igf-1复合物0.5mL,每周2次,共4周;CS干预组注射等体积CS溶液;正常对照组和生理盐水对照组注射等体积生理盐水。术后28d,取关节软骨组织,分别行组织学观察和实时荧光定量PCR检测Ⅱ型胶原及聚集蛋白聚糖基因表达。结果 HE染色及甲苯胺蓝染色示,CS/igf-1干预组及CS干预组损伤部位均有明显软骨性修复,前者明显优于后者,同时均可见纤维组织增生和炎性细胞浸润;生理盐水对照组仅见大量纤维组织增生和炎性细胞浸润,未见明显软骨性修复。正常对照组、生理盐水对照组、CS干预组、CS/igf-1干预组Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖基因相对含量均依次增高,差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论 CS/igf-1复合物可增加软骨细胞中Ⅱ型胶原及聚集蛋白聚糖基因的表达,促进损伤软骨修复。 展开更多
关键词 壳聚糖/IGF-1基因复合物 软骨损伤 基因治疗 实时荧光定量PCR
基于基因组学的天然产物研究 预览
6
作者 王涛 《济宁医学院学报》 2018年第2期124-131,共8页
天然产物由于其结构及生物活性的多样性,一直是药物研发的一个重要来源。但是在过去的一段时间里,由于高通量筛选技术的制约,导致天然产物研究进展较为缓慢。近年来DNA测序技术的不断进步,从分子水平上对微生物次级代谢的研究,揭示了大... 天然产物由于其结构及生物活性的多样性,一直是药物研发的一个重要来源。但是在过去的一段时间里,由于高通量筛选技术的制约,导致天然产物研究进展较为缓慢。近年来DNA测序技术的不断进步,从分子水平上对微生物次级代谢的研究,揭示了大自然在生产天然产物方面的非凡能力,这给新药研发提供了新的研究方向。基于基因组学的天然产物发现是一种理性的、高效的及建立在测序技术上的发掘新化合物的方法。而生物信息学和合成生物学技术的蓬勃发展则为天然产物的探索与结构改造提供了便利的技术手段。鉴于此,本文将重点阐述基于基因组学的天然产物发现,包括其关键的步骤,相关的技术及涉及的成功应用。 展开更多
关键词 天然产物 新药发掘 基因组学 组合生物合成
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小鼠resistin基因慢病毒表达载体构建及在KMB17细胞中的表达 被引量:1
7
作者 陈瑜 赵远 +7 位作者 岳俊 李鸿钧 和占龙 马开利 马进 吴正存 唐东红 鲁帅尧 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期119-125,135共8页
[目的]构建携带小鼠resistin基因的慢病毒表达载体,并高效转导靶细胞。[方法]从小鼠脂肪组织提取总RNA,经PCR扩增、酶切、连接、转化后构建重组质粒;通过293T细胞包装为重组慢病毒颗粒,然后感染KMB17细胞,检测小鼠resistin基因在靶细胞... [目的]构建携带小鼠resistin基因的慢病毒表达载体,并高效转导靶细胞。[方法]从小鼠脂肪组织提取总RNA,经PCR扩增、酶切、连接、转化后构建重组质粒;通过293T细胞包装为重组慢病毒颗粒,然后感染KMB17细胞,检测小鼠resistin基因在靶细胞中的表达。[结果]PCR扩增到预期的342 bp大小的resistin基因目的片段;构建的重组质粒经酶切得到了342 bp大小的目的片段,测序鉴定为小鼠resistin基因序列;重组慢病毒包装可观察到很强的绿色荧光,说明具有较高的质粒转染效率;重组慢病毒感染KMB17后可检测到小鼠resistin基因转录水平和蛋白水平的表达,证明resistin基因得到有效转导并可在靶细胞中高水平表达。[结论]成功构建了携带小鼠resistin基因的慢病毒表达载体并可在KMB17靶细胞中获得高效表达。 展开更多
关键词 RESISTIN 慢病毒载体 靶细胞 表达 小鼠
一个GAP启动子的分析及点突变体构建 预览
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作者 孙雪娇 李昭洋 +1 位作者 李兵 孙忠科 《重庆工商大学学报:自然科学版》 2016年第6期117-123,共7页
甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(GAP)作为常见的持家基因在微生物中普遍表达,因而其启动子(PGAP)被认为是一个强的组成型启动子;首先,预测并克隆了双叉双歧杆菌的GAP启动子,并利用葡萄糖醛酸苷酶基因为报告基因,分析了PGAP在大肠杆菌和双... 甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(GAP)作为常见的持家基因在微生物中普遍表达,因而其启动子(PGAP)被认为是一个强的组成型启动子;首先,预测并克隆了双叉双歧杆菌的GAP启动子,并利用葡萄糖醛酸苷酶基因为报告基因,分析了PGAP在大肠杆菌和双歧杆菌中驱动表达的强度;不同碳源的发酵实验表明:PGAP在葡萄糖培养基中强度最高,而3种底物类似物对PGAP强度的影响各不相同;对PGAP预测的-10区进行了系列点突变,具有更接近sigma 70启动子共有序列的突变体p MGAP3表现出更高的驱动强度;最后,通过对代表性双歧杆菌PGAP序列的比对,表明在一些核心区域,如可能的TATA盒、转录起始位点、核糖体结合位点高度保守。 展开更多
关键词 GAP 启动子 双歧杆菌 点突变
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新型基因编辑技术发展及在植物育种中的应用 预览 被引量:1
9
作者 王艳芳 苏婉玉 +4 位作者 曹绍玉 张琳 吕霞 张应华 许俊强 《西北农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期617-625,共9页
近年来出现了几种新型基因编辑技术,包括锌指核酸酶(ZFN)、转录激活子样效应因子核酸酶(TALEN)、规律性重复短回文序列簇与Cas9(CRISPR/Cas9)系统。这些基因编辑技术是通过特异性结构识别靶位点,核酸酶发挥切割作用,对靶位点进行... 近年来出现了几种新型基因编辑技术,包括锌指核酸酶(ZFN)、转录激活子样效应因子核酸酶(TALEN)、规律性重复短回文序列簇与Cas9(CRISPR/Cas9)系统。这些基因编辑技术是通过特异性结构识别靶位点,核酸酶发挥切割作用,对靶位点进行定点编辑,由于此类基因编辑技术具有高效准确、制作简单的特点,已被广泛应用到植物基因功能研究和定向改良植物性状方面。在此综述上述3种新型基因编辑技术的原理,比较不同编辑技术的差异,总结在拟南芥、烟草、水稻、玉米等作物育种中的应用,指出基因编辑存在的问题,对这些技术在基础研究及育种实践中的应用进行展望。 展开更多
关键词 基因编辑 ZFN TALENS CRISPR/Cas
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理性设计定点突变提高Streptomyces kathirae SC-1酪氨酸酶热稳定性 预览
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作者 郭静 饶志明 +4 位作者 杨套伟 满在伟 张显 徐美娟 李星 《食品与生物技术学报》 CSCD 北大核心 2017年第9期906-911,共6页
利用SWISS-MODEL在线服务器以栗色浑圆链霉菌(Streptomyces castaneoglobisporus)酪氨酸酶(PDB登录号:2AHL)为模板对S.kathirae酪氨酸酶的3-D结构进行同源模拟。使用在线预测软件PoPMuSiC-2.1计算酪氨酸酶每个突变氨基酸的去折叠... 利用SWISS-MODEL在线服务器以栗色浑圆链霉菌(Streptomyces castaneoglobisporus)酪氨酸酶(PDB登录号:2AHL)为模板对S.kathirae酪氨酸酶的3-D结构进行同源模拟。使用在线预测软件PoPMuSiC-2.1计算酪氨酸酶每个突变氨基酸的去折叠自由能变化(ΔΔG)来辅助设计提高酪氨酸酶的稳定性,利用定点突变构建突变体,并且在大肠杆菌中对野生型酪氨酸酶及突变体进行表达,最终获得了两个热稳定性提高的突变体R95Y、G123W。在此基础上进行复合突变,获得了一个热稳定性显著提高的突变体R95Y/G123W。该突变体在60℃的半衰期提高了2.43倍,最适反应温度由45℃提高到50℃,本研究所用的基于蛋白质结构的理性设计提高稳定性的策略也可以应用于其他工业酶类,显示了良好的应用前景。 展开更多
关键词 酪氨酸酶 氢键 定点突变 热稳定性 理性设计 POPMuSiC
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单碱基基因编辑系统的研究进展 预览
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作者 刘佳慧 梁普平 +1 位作者 时光 黄军就 《世界科技研究与发展》 CSCD 2017年第6期457-462,共6页
基因编辑技术是近年来取得突破性进展的颠覆性技术之一。CRISPR/Cas9基因编辑系统简便、高效,被广泛应用于基因功能研究和利用。尽管CRISPR/Cas9可以高效靶向目的基因,但其定点修饰依赖于效率低下的同源重组机制,因此精准编辑基因... 基因编辑技术是近年来取得突破性进展的颠覆性技术之一。CRISPR/Cas9基因编辑系统简便、高效,被广泛应用于基因功能研究和利用。尽管CRISPR/Cas9可以高效靶向目的基因,但其定点修饰依赖于效率低下的同源重组机制,因此精准编辑基因的能力有待提高。单碱基编辑技术通过将Cas9切口酶或无核酸酶活性的Cas9与胞嘧啶脱氨酶形成融合蛋白,并通过sgRNA(单链向导RNA)将融合蛋白靶向靶位点,在不切割双链DNA的情况下对靶基因位点的单个碱基进行胞嘧啶C→胸腺嘧啶T或鸟嘌呤G→腺嘌呤A的精准编辑。目前,单碱基编辑技术已在植物、动物以及人细胞中进行了高效的基因定点突变,在农业、生物医学研究甚至基因治疗中有广泛的应用前景。本综述就单碱基编辑系统的发展和应用进行回顾和展望。 展开更多
关键词 基因编辑 CRISPR/Cas9 单碱基编辑 胞嘧啶脱氨酶
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植物抗病基因密码子使用特性分析 预览 被引量:1
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作者 韩淑晓 孙福来 +1 位作者 刘全兰 田纪春 《山东农业大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2013年第4期491-498,共8页
植物抗病基因(R基因)相对植物整个基因组进化较快,且作用机制复杂,抗病基因一直是遗传及病理学研究的热点问题。本研究运用CodonW等软件对多种植物的42个不同抗病基因进行密码子偏好性及聚类分析,初步探究了植物抗病基因密码子使... 植物抗病基因(R基因)相对植物整个基因组进化较快,且作用机制复杂,抗病基因一直是遗传及病理学研究的热点问题。本研究运用CodonW等软件对多种植物的42个不同抗病基因进行密码子偏好性及聚类分析,初步探究了植物抗病基因密码子使用模式。结果表明水稻Xal3、Xa21以及Xa27基因和玉米Hml基因明显区别于大部分R基因,除了这4个基因外之外,大部分R基因偏好于使用以A或T结尾的密码子,碱基组成AT含量大于GC。TTG、CTT、TAT等28个密码子为R基因的偏爱密码子,其中24个以A或T结尾。聚类结果在一定程度上反映了不同抗病功能基因的相似性及相同抗病基因的差异性。本研究为新的R基因的预测及R基因相关基因工程操作提供了一定参考。 展开更多
关键词 植物抗病基因 密码子偏好型 聚类分析
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蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2抑制剂高通量筛选模型的建立和应用 被引量:1
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作者 高炜 邵伟 +2 位作者 苏刚 李佳 谢小冬 《科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期91-94,共4页
为了建立体外蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2抑制剂的高通量筛选模型,筛选潜在的SHP2抑制剂,通过应用大肠杆菌系统克隆表达GST-SHP2融合蛋白。经过GST-Sepharose亲和层析分离得到纯化的GST·SHP2蛋白,建立384孔板的高通量筛选模型,对4800... 为了建立体外蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2抑制剂的高通量筛选模型,筛选潜在的SHP2抑制剂,通过应用大肠杆菌系统克隆表达GST-SHP2融合蛋白。经过GST-Sepharose亲和层析分离得到纯化的GST·SHP2蛋白,建立384孔板的高通量筛选模型,对48000个有明确结构的小分子化合物进行体外筛选,筛选出75个活性化合物对SHP2的抑制作用大于50%,确定3个化合物具有较高的抑制活性。该筛选模型灵敏、稳定,对SHP2抑制剂药物研发打下了基础。 展开更多
关键词 SHP2 抑制剂 高通量筛选
蒙古牛BTG2启动子的克隆与初步功能分析
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作者 钱呈 邢燕平 +2 位作者 齐昱 钱宏光 周欢敏 《内蒙古农业大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2014年第2期72-81,共10页
BTG2是新型细胞抗增殖因子BTG/Tob基因家族成员之一,在猪、牛中均报道存在品种和个体表达差异,但相关分子机理有待揭示。为阐明蒙古牛不同个体BTG2差异表达的分子机理,3个独立蒙古牛个体BTG2预测启动子序列(ATG起始密码子上游1766bp)... BTG2是新型细胞抗增殖因子BTG/Tob基因家族成员之一,在猪、牛中均报道存在品种和个体表达差异,但相关分子机理有待揭示。为阐明蒙古牛不同个体BTG2差异表达的分子机理,3个独立蒙古牛个体BTG2预测启动子序列(ATG起始密码子上游1766bp)被克隆、测序。序列比对发现,克隆序列与基因组组装BTG2启动子序列分别存在99.94%,98.64%,98.58%同源性,而且同源性最高的序列重组到哺乳动物表达载体pEGFP-N1后,由此获得的表达框架导入到HeLa细胞有受神经生长因子诱导表达的特性,该结果和已有报道一致。表明蒙古牛BTG2启动子序列被成功克隆,由此奠定了后续分离、鉴定该启动子上顺式元件和反式作用因子的基础。 展开更多
关键词 蒙古牛 B-细胞易位基因2 启动子
基因治疗产品、细胞治疗产品和组织工程产品在欧盟的监管 预览 被引量:1
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作者 韩倩倩 王春仁 《组织工程与重建外科》 2014年第5期244-246,共3页
欧盟将基因治疗产品、细胞治疗产品和组织工程产品定义为先进医疗产品(Advanced therapy medicinal products,ATMP),以专门的规定对此类产品进行管理,包括此类产品的技术要求、获准上市的程序、临床试验要求和生产要求.目前,我国对于... 欧盟将基因治疗产品、细胞治疗产品和组织工程产品定义为先进医疗产品(Advanced therapy medicinal products,ATMP),以专门的规定对此类产品进行管理,包括此类产品的技术要求、获准上市的程序、临床试验要求和生产要求.目前,我国对于此类产品还没有明确的监管法规.本文将介绍欧盟在此类产品上的监管法规,为我国探索和实践此类产品的监管提供参考. 展开更多
关键词 先进医疗产品 欧盟 监管法规
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高效转化法定向进化里氏木霉的纤维素酶 预览
16
作者 方浩 邓禹 +1 位作者 毛银 夏黎明 《生物加工过程》 CAS 2016年第1期1-7,共7页
优化了根癌农杆菌介导的里氏木霉的转化方法,得出转化的最适条件:共培养pH 5.3、共培养温度24℃、乙酰丁香酮浓度200μmol/L、根癌农杆菌OD660值0.8、里氏木霉孢子预萌发时间3 h。此时转化率为13 000个转化子(以107个里氏木霉孢子计)... 优化了根癌农杆菌介导的里氏木霉的转化方法,得出转化的最适条件:共培养pH 5.3、共培养温度24℃、乙酰丁香酮浓度200μmol/L、根癌农杆菌OD660值0.8、里氏木霉孢子预萌发时间3 h。此时转化率为13 000个转化子(以107个里氏木霉孢子计),是未优化条件下的27倍以上。利用此高效转化法,结合强化纤维二糖水解酶基因II表达的操作,从324个转化子中筛选到了1株优良的里氏木霉转化子C10,发酵5 d后,纤维二糖水解酶活力达(122.44±5.91)U/m L,是初始菌株的5.4倍;滤纸酶活力达(28.92±2.45)IU/m L,是初始菌株的4.3倍。与初始菌株所产纤维素酶相比,转化子C10所产纤维素酶降解玉米秸秆和稻草的能力有明显的提高。本研究为里氏木霉的基因工程改造及其纤维素酶的定向进化提供了有价值的实验数据。 展开更多
关键词 根癌农杆菌 转化 里氏木霉 优化 纤维二糖水解酶 纤维素酶
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刺参C型凝集素(AJL)基因的克隆及原核表达分析 预览 被引量:2
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作者 薛壮 李慧 +6 位作者 孙鹤 孔德荣 马普 周玮 仇雪梅 刘洋 王秀利 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期610-615,共6页
为了开发海参免疫基因,生产重组免疫因子蛋白,利用cDNA末端快速扩增技术(Rapid-amplification of cDNA ends,RACE)获得了刺参凝集素基因(Apostichopus japonicus Lectin,AJL)的编码区序列(Coding sequence,CDS),CDS的长度为492 bp... 为了开发海参免疫基因,生产重组免疫因子蛋白,利用cDNA末端快速扩增技术(Rapid-amplification of cDNA ends,RACE)获得了刺参凝集素基因(Apostichopus japonicus Lectin,AJL)的编码区序列(Coding sequence,CDS),CDS的长度为492 bp,编码163个氨基酸,其中成熟肽由143个氨基酸组成。将成熟肽的基因克隆并连接至载体p ET-32a(+)中,成功构建了原核表达的重组体p ET-32a(+)-AJL,进一步将重组体转化至大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,经诱导表达、分离纯化,获得了融合表达蛋白。本研究结果为进一步研究重组刺参C型凝集素在刺参健康养殖上的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 刺参 凝集素 基因克隆 原核表达
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集胞藻PCC6803基因slr2049定点突变及其体内重组功能研究 预览
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作者 朱超 陈思礼 《华中师范大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2013年第3期397-403,共7页
在Synechocystissp.PCC6803中找到与cpeS具有高度同源性的基因slr2049.采用PCR从Synechocystissp.PCC6803DNA中扩增出cpcB,slr2049,hol,pcyA4个基因;定点突变试剂盒构建8个突变体slr2049(H21S)、slr2049(L23S)、slr2049(A24... 在Synechocystissp.PCC6803中找到与cpeS具有高度同源性的基因slr2049.采用PCR从Synechocystissp.PCC6803DNA中扩增出cpcB,slr2049,hol,pcyA4个基因;定点突变试剂盒构建8个突变体slr2049(H21S)、slr2049(L23S)、slr2049(A24S)、slr2049(F25S)、slr2049(W72L)、slr2049(G84S)、slr2049(RL07S)和slr2049(Y124S);将它们与表达载体pCDFDuet-1和pET-23a(+)相连构建pCDF-cpcB-slr2049野生型和pCDF-cpcB-slr2049突变体以及pET-hol-pcyA,进行高效表达,用亲和层析柱纯化,产物用SDS-PAGE和光谱检测.研究表明:突变体slr2049(H21S)、slr2049(L23S)、slr2049(F25S)、slr2049(W72L)、slr2049(G84S)、slr2049(Y124S)与野生型slr2049催化获得的重组藻蓝蛋白p亚基具有与天然藻蓝蛋白口亚基相似的光谱特性,其他2个突变体slr2049(A24S)和slr2049(R107S)催化的产物则没有光谱特性.由此推测,第24位丙氨酸和第107位精氨酸可能是slr2049酶活性的必需氨基酸,其所处位置是slr2049的活性位点. 展开更多
关键词 色素裂合酶 藻蓝蛋白-β亚基 定点突变 体内重组
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非病毒载体在基因治疗中的发展与应用 被引量:2
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作者 谌平 何成宜 陈志英 《集成技术》 2017年第2期59-65,共7页
构建基因载体并建立安全高效的基因载体体内投递系统是基因治疗的关键。基因载体分病毒与非病毒载体。病毒载体转染高效,已应用于临床,但仍面临安全性低的问题。非病毒载体制备简单、安全性高、潜力大;然而,转染效率低的问题限制了其临... 构建基因载体并建立安全高效的基因载体体内投递系统是基因治疗的关键。基因载体分病毒与非病毒载体。病毒载体转染高效,已应用于临床,但仍面临安全性低的问题。非病毒载体制备简单、安全性高、潜力大;然而,转染效率低的问题限制了其临床应用。基因治疗领域的研究者一直致力于优化非病毒载体投递系统,提高转染效率,已经出现可应用于临床的基因投递产品。文章旨在回顾非病毒基因载体的研究进展及其临床应用前景。 展开更多
关键词 基因投递 非病毒载体 基因治疗 微环DNA
水稻OsV3IP2和OsV3IP3原核表达与鉴定 预览
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作者 程英 胡颖 +2 位作者 覃永华 程钢 王春台 《湖北农业科学》 2017年第17期3349-3352,共4页
通过生物信息学分析确定OsV3IP2和OsV3IP3的可溶性肽段,获得可溶性的OsV3IP2和OsV3IP3外源表达蛋白质,将相应的编码区克隆于原核表达载体p ET32a中,进行IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE和Western blot检测目的蛋白质。结果表明,利用生物信息... 通过生物信息学分析确定OsV3IP2和OsV3IP3的可溶性肽段,获得可溶性的OsV3IP2和OsV3IP3外源表达蛋白质,将相应的编码区克隆于原核表达载体p ET32a中,进行IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE和Western blot检测目的蛋白质。结果表明,利用生物信息学软件对蛋白质的二级结构进行预测,将OsV3IP2、OsV3IP3分别分为2个和4个部分。将其分别克隆到p ET32a后,采用0.2 mol/L IPTG在10、20、30℃诱导表达。经SDS-PAGE和Western Blot分析,证明OsV3IP2-1、OsV3IP 2-2、OsV3IP 3-1表达的融合蛋白存在于上清液中,而OsV3IP 3-2、OsV3IP 3-3表达的融合蛋白存在于沉淀中,获得了OsV3IP2-1、OsV3IP 2-2、OsV3IP 3-1可溶性目的蛋白,为进一步体外验证OsVDAC3与OsV3IP2、OsV3IP3的互作奠定了基础。 展开更多
关键词 水稻 OS V3IP2-3 诱导表达 SDS PAGE WESTERN BLOT
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