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弓形虫感染致男性不育2例 预览 被引量：3
1
作者 康建华 唐家平 蒋海英 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2005年第2期 155,共1页
弓形虫对孕妇尤其是对胎儿的危害已引起重视,但弓形虫对男性的危害却罕见报道,笔者自2003年3月份以来诊治弓形虫性男性不育患者2例,现报告如下.
关键词 男性不育 弓形虫
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弓形虫复合抗原基因P30-ROP2体外扩增、克隆及真核表达重组质粒的构建 预览 被引量：4
2
作者 蒋华 何深一 +4 位作者 周怀瑜 丛华 古钦民 李瑛 赵群力 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2005年第1期 1-4,共4页
目的构建弓形虫RH株pcDNA3.1-P30-ROP2真核表达重组质粒,为进一步表达及DNA疫苗的研制作准备. 方法用PCR技术从弓形虫RH分离株的基因组DNA中扩增编码 P30基因片段和棒状体蛋白(ROP2)的基因片段,重组入pUC18克隆载体,然后将pUC18-P30-ROP... 目的构建弓形虫RH株pcDNA3.1-P30-ROP2真核表达重组质粒,为进一步表达及DNA疫苗的研制作准备. 方法用PCR技术从弓形虫RH分离株的基因组DNA中扩增编码 P30基因片段和棒状体蛋白(ROP2)的基因片段,重组入pUC18克隆载体,然后将pUC18-P30-ROP2中的P30-ROP2外源基因片段经酶切、连接等反应,亚克隆入pcDNA3.1真核表达载体,再经含氨苄青霉素的LB培养基筛选、酶切及PCR鉴定. 结果从弓形虫RH株基因组中扩增出特异的P30、ROP2片段,克隆成功pUC18-P30-ROP2重组质粒;经亚克隆、筛选鉴定获得了pcDNA3.1-P30-ROP2重组表达质粒. 结论成功构建了弓形虫pUC18-P30-ROP2重组克隆质粒,亚克隆成功pcDNA3.1-P30-ROP2真核表达重组质粒,为下一步DNA疫苗的研究奠定了基础. 展开更多
关键词 弓形虫 P30 棒状体蛋白2 克隆 基因重组
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弓形体抗原的免疫化学研究 预览 被引量：23
3
作者 沈继龙 徐秉锟 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1990年第4期 14-18,共5页
本文应用4种免疫血清学方法和免疫印迹技术分析了3种不同毒力弓形体株(RH、Beverley和Fukaya)感染小鼠后诱导血清IgM和IgG抗体产生的速殖子表膜抗原及株间的抗原差异。速殖子膜有3种主要功能性抗原,分子量分别为120、35和27kd。P_(27)除... 本文应用4种免疫血清学方法和免疫印迹技术分析了3种不同毒力弓形体株(RH、Beverley和Fukaya)感染小鼠后诱导血清IgM和IgG抗体产生的速殖子表膜抗原及株间的抗原差异。速殖子膜有3种主要功能性抗原,分子量分别为120、35和27kd。P_(27)除被IgG抗体识别外,同时还可被IgM抗体所识别。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离并部分纯化的抗原进行ELISA检测发现,含有P_(35)的洗脱抗原组分与小鼠多克隆抗体反应最为强烈,其次为含有P_(27)的洗脱组分。用洗脱各抗原组分免疫小鼠后证明,血清IgG抗体主要与P_(35)和P_(27)结合。用部分纯化的P_(35)抗原免疫小鼠可使受试鼠获得抗攻击感染的部分保护性免疫力。 展开更多
关键词 弓形体 抗原 免疫化学
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弓形虫棒状体蛋白2家族成员研究进展 被引量：4
4
作者 张贤 甘小凤 +1 位作者 程正阳 余莉 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第6期574-576,I0003共4页
弓形虫是引起人兽共患弓形虫病的顶复门专性细胞内寄生原虫,感染的宿主范围广泛,严重危害人类的健康及畜牧业的发展。近年来随着对弓形虫研究的不断深入,弓形虫棒状体蛋白2家族在虫体入侵、纳虫泡修饰及毒力作用方面发挥的重要作用得到... 弓形虫是引起人兽共患弓形虫病的顶复门专性细胞内寄生原虫,感染的宿主范围广泛,严重危害人类的健康及畜牧业的发展。近年来随着对弓形虫研究的不断深入,弓形虫棒状体蛋白2家族在虫体入侵、纳虫泡修饰及毒力作用方面发挥的重要作用得到进一步的证实。棒状体蛋白ROP18作为该家族的重要成员,是弓形虫重要的毒力分子,在IRGs通路中发挥着重要作用。它可以定位在PVM上,清除IRGs,从而在弓形虫入侵细胞的过程中发挥着逃避免疫细胞清除的作用。另一家族成员蛋白假性激酶ROP5与ROP18之间发挥着协同作用,可以提高激酶活性来控制弓形虫的急性毒力,保护弓形虫免于清除。本文就ROP18与ROP5等毒力因子的分子作用机制进行了综述。 展开更多
关键词 ROP2家族 弓形虫 毒力 综述
三株弓形虫速殖子体外培养形成包囊的研究 预览 被引量：6
5
作者 杨秀珍 王文实 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1997年第5期 6-9,共4页
弓形虫ＲＨ、ＰＰ、ＳＨ１株速殖子以１０＾５、１０＾４、１０＾３的接种量接各２４ｈ的ＨｅＬａ细胞，分别维持Ｐ来８．０、７．０和６．５的培养条件，并适时补充ＨｅＬａ细胞，结果可见了在不同ＰＨ值条件下，３株弓形虫均可成囊，... 弓形虫ＲＨ、ＰＰ、ＳＨ１株速殖子以１０＾５、１０＾４、１０＾３的接种量接各２４ｈ的ＨｅＬａ细胞，分别维持Ｐ来８．０、７．０和６．５的培养条件，并适时补充ＨｅＬａ细胞，结果可见了在不同ＰＨ值条件下，３株弓形虫均可成囊，其成囊现象与速殖子接种量及培养基ＰＨ值有关，并显示定定的一定的虫株间差异。 展开更多
关键词 包囊 速殖子 体外培养 弓形体
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同种异基因造血干细胞移植急性移植物抗宿主病小鼠模型的制作
6
作者 纳宁 何善阳 +4 位作者 徐霖 陈康 何霞 廖冰 曹开源 《中华器官移植杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期 626-629,共4页
目的制作同种异基因造血干细胞移植急性移植物抗宿主病（GVHD）Ib鼠模型。方法以C57BL／6（H_2^b）小鼠为供者，Balb／c（H-2A^4）小鼠为受者，进行同种异基因骨髓移植。设立全身照射（TBI）对照组（4只）、GVHD组（10只）、单纯骨髓移... 目的制作同种异基因造血干细胞移植急性移植物抗宿主病（GVHD）Ib鼠模型。方法以C57BL／6（H_2^b）小鼠为供者，Balb／c（H-2A^4）小鼠为受者，进行同种异基因骨髓移植。设立全身照射（TBI）对照组（4只）、GVHD组（10只）、单纯骨髓移植组（10只）及正常对照组（4只）。TBI对照组仅进行致死性TBI，TBI后不进行骨髓移植；GVHD组于TBI前5d开始饮用含320mg／L庆大霉素和250mg／L红霉素的饮用水，移植当天以。。Coy射线行一次性TBI，总剂量8．0Gy，TBI后5h内每只小鼠经尾静脉输注C57BL／6小鼠骨髓细胞2×10^6个＋脾细胞1×10’个；单纯骨髓移植组预处理与GVHD组相同，每只小鼠经尾静脉输注C57BL／6小鼠骨髓细胞2×10“个。移植后观察小鼠的精神状态、活动能力、体位改变、皮毛、体重和大便等，记录每只小鼠的存活时问，计算存活率，并绘制生存曲线。濒死小鼠的皮肤、肝脏、小肠和骨髓行病理检查。结果TBI对照组小鼠的存活时间为（9．0±0．7）d，GVHD组为（32．0±3．2）d，单纯骨髓移植组为（17．5±1．6）d，3组间两两比较，存活时间的差异均有统计学意义（P〈（）．01）。TBI对照组病理检查显示造血功能衰竭。GVHD组于移植后第10～13天出现急性GVHD表现，其皮肤、肝脏和小肠组织的病理表现均符合I～Ⅱ度急性GVHD改变，单纯骨髓移植组也于移植后第10～13天出现GVHD表现，但其GVHD表现和组织学改变明显轻于GVHD组，仅为0～I度GVHD。结论Ba｜b／c小鼠经致死性TBI后移植同种异基因小鼠骨髓细胞＋脾细胞可成功制作稳定的急性GVHD模型。 展开更多
关键词 小鼠 造血干细胞移植 移植物抗宿主病 模型 动物
弓形虫棒状体蛋白18的原核表达及免疫分析 预览 被引量：4
7
作者 王素凡 齐辰 +2 位作者 陈滨 吴焜 陈晓光 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期211-215,共5页
目的克隆刚地弓形虫ROP18基因，进行原核表达及重组蛋白的免疫分析。方法提取弓形虫RH株基因组DNA，经PCR获得ROPl8基因片段，经双酶切分别连入原核表达载体pET28a（＋）和pET-32a（＋），构建重组表达载体pET28a—ROP18和pET32a—ROP1... 目的克隆刚地弓形虫ROP18基因，进行原核表达及重组蛋白的免疫分析。方法提取弓形虫RH株基因组DNA，经PCR获得ROPl8基因片段，经双酶切分别连入原核表达载体pET28a（＋）和pET-32a（＋），构建重组表达载体pET28a—ROP18和pET32a—ROP18，并转化大肠杆菌BL21（DE3）。IPTG诱导表达后，收集菌体进行SDS-PAGE电泳及Western—blot检测。结果PCR得到约1665bp目的基因片段，单、双酶切及PCR鉴定结果显示成功构建重组表达载体pET28a—ROP18和pET32a—R（-）P18；经IPTG诱导后，ROP-8基因在大肠杆菌中高效表达；SDS-PAGE电泳及western—blot分析显示，pET28a—ROP18在相对分子质量约60kD的位置出现目的蛋白条带，pET32a—ROP18在相对分子质量约83kD的位置出现目的蛋白条带，均与理论值相符；Western—blot结果显示重组蛋白与弓形虫慢性感染小鼠血清具有特异免疫反应性。结论成功克隆和表达了ROP18基因，所表达的重组蛋白具有免疫效应，为其功能研究奠定基础。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 棒状体蛋白18 基因克隆 原核表达 免疫分析
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弓形虫感染大鼠动物模型的研究进展 预览 被引量：8
8
作者 赖植发 陈晓光 《热带医学杂志》 CAS 2005年第6期 874-877,共4页
对近年来弓形虫感染大鼠模型的研究进展进行了综述.阐述了弓形虫不同虫株对大鼠的感染性、不同品系大鼠对弓形虫的易感性和作用机理以及大鼠在弓形虫病发病机制、临床诊治及先天性弓形虫病研究等方面的应用.
关键词 弓形虫 大鼠 动物模型
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刚地弓形虫China 1基因型成囊株在小鼠体内的动态分布 预览 被引量：3
9
作者 王林 霍星星 +6 位作者 陈兆武 陈鹤 余莉 宋晓蓉 Faustina Halm-Lai 罗庆礼 沈继龙 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期 179-183,共5页
目的观察流行我国的刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）主要基因型China 1成囊株在感染小鼠体内的动态分布和包囊形成。方法采自武汉的猫源性刚地弓形虫株（TgCtwh1,基因型为China 1,即ToxoDB#9）包囊50个（约含1×104个缓殖子）经口... 目的观察流行我国的刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）主要基因型China 1成囊株在感染小鼠体内的动态分布和包囊形成。方法采自武汉的猫源性刚地弓形虫株（TgCtwh1,基因型为China 1,即ToxoDB#9）包囊50个（约含1×104个缓殖子）经口感染SPF级CD1雌性小鼠50只,于感染后第2、4、7、10、14、21、35、50和72天,分别大体观察小鼠健康状况并测定体重;颈椎脱臼法处死小鼠,脑组织压片观察弓形虫包囊形成时间,计算成囊率,测量包囊直径;荧光定量PCR和组织接种方法检测弓形虫在血液、心、肝、脑和淋巴结组织中的动态分布。结果实验小鼠感染后第7天体重减轻（3.650±0.252）g;第10天[（1.730±0.017）g]与第14天体重差值[（-0.390±0.554）g]比较,有统计学意义（P〈0.05）。感染后第21天,在脑组织中查获包囊,成囊率为80%,直径为20～40μm;至感染后第35天,小鼠成囊率增为100%,包囊直径为50～60μm。感染后第2天,TgCtwh1虫体即出现在血液、心、肝和淋巴结组织中,拷贝数分别为3.510±0.152、4.100±0.198、4.220±0.209和4.960±0.052,感染后第4天见于脑组织（3.800±0.154）;血液中的虫体在第7天达峰值（5.240±0.115）,随后逐渐下降,至第35天消失;心和脑组织中的虫体分别于第14天和第10天达峰值后（5.640±0.214和5.790±0.060）维持相对稳定的水平;肝和淋巴组织中的虫体分别于第7天和第10天达峰值（5.310±0.038和6.200±0.152）,此后虫体逐渐减少,至第50天转阴。结论流行中国的弓形虫China 1基因型成囊株在感染小鼠体内虫血症可持续至少21 d,感染后第21天首次在小鼠脑组织内检测到包囊。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 基因型 动态分布 荧光定量PCR
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孕早期急性感染弓形虫致先天性弓形虫病胎鼠模型的建立 预览 被引量：1
10
作者 张皓云 孙秀宁 《山东医药》 CAS 2013年第18期27-30,共4页
目的建立孕鼠早期急性感染弓形虫RH强毒株致先天性弓形虫病胎鼠模型,观察孕早期母体弓形虫感染对胎鼠脑发育的影响。方法 SD孕鼠42只于胚胎第3天（E3）随机分为对照组、实验组、地塞米松组各14只。对照组注射灭菌PBS,实验组与地塞米松... 目的建立孕鼠早期急性感染弓形虫RH强毒株致先天性弓形虫病胎鼠模型,观察孕早期母体弓形虫感染对胎鼠脑发育的影响。方法 SD孕鼠42只于胚胎第3天（E3）随机分为对照组、实验组、地塞米松组各14只。对照组注射灭菌PBS,实验组与地塞米松组以腹腔注射弓形虫RH株,后者同时给予地塞米松饮水。分别于胚胎第14、16天（E14、E16）处死孕鼠剖腹取胎鼠,进行胚胎形态学观察;胎盘压片镜下观察弓形虫体;PCR检测各组羊水、胎肝中的弓形虫B1基因;免疫荧光染色检测对照组、实验组及地塞米松组胎鼠不同发育时期脑组织中的Caspase-3、神经元迁移蛋白（DCX）。结果 3组孕鼠均无死亡。实验组、地塞米松组E14、E16胚胎均有出血、坏死和吸收发生,胎鼠无明显肉眼可见畸形,对照组无死胎、吸收胎出现,3组平均活胎率分别为100%、61%、18%,3组平均活胎率相比,P均〈0.05。仅地塞米松组在E14一窝别观察到2个胎盘压片有弓形虫体,羊水中检测到B1基因表达。实验组及地塞米松组胎肝中均检测到B1基因表达。E14、E16实验组胎鼠脑组织中Caspase-3表达较对照组明显增强,但较地塞米松组减低（P均〈0.05）;实验组DCX表达较对照组减弱,较地塞米松组增强（P均〈0.05）。结论建立了稳定垂直传播的先天性弓形虫病胎鼠模型,弓形虫对胚胎脑发育具有毒性作用。 展开更多
关键词 弓形虫 弓形虫病 大鼠
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感染弓形体小鼠腹腔液体外存放保种方法的初步研究 预览
11
作者 岑伟家 周永华 《实验动物与动物实验》 1990年第1期 24-25,共2页
关键词 弓形体 腹腔液 体外保种 小鼠
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弓形虫RH株致密颗粒蛋白GRA4基因的克隆与表达 预览 被引量：4
12
作者 林绮萍 吴少庭 +6 位作者 翁亚彪 张仁利 高世同 黄达娜 袁仕善 雷明军 潘晖榕 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期 500-503,共4页
目的克隆和表达弓形虫RH株致密颗粒蛋白GRA4基因.方法根据GRA4基因序列,设计合成一对引物,用聚合酶链式反应(PCR)方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增GRA4基因片段,插入pMD18-T载体,并转化大肠杆菌JM109,经PCR、双酶切、测序验证后,将GRA4... 目的克隆和表达弓形虫RH株致密颗粒蛋白GRA4基因.方法根据GRA4基因序列,设计合成一对引物,用聚合酶链式反应(PCR)方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增GRA4基因片段,插入pMD18-T载体,并转化大肠杆菌JM109,经PCR、双酶切、测序验证后,将GRA4基因片段定向亚克隆到载体pGEX-4T-2中构建原核表达重组质粒pGEX-4T-2-GRA4,重组子在E.coli BL21中经IPTG诱导表达,并对表达产物进行SDS-PAGE及Western blot分析.结果从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出GRA4基因片段并诱导表达出能被兔抗弓形虫血清识别的重组GRA4蛋白.结论成功构建和表达了弓形虫pGEX-4T-2-GRA4重组质粒,为弓形虫病诊断抗原和疫苗的研究奠定了基础. 展开更多
关键词 弓形虫 GRA4 PCR 基因克隆 原核表达
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编码弓形虫表面抗原P30、P22复合基因真核表达载体的构建 预览
13
作者 郭岚 古钦民 +4 位作者 李瑛 周怀瑜 赵群力 丛华 何深一 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2005年第1期 8-11,共4页
目的构建编码弓形虫RH株表面抗原P30、P22复合基因的真核表达重组质粒, 为进一步表达融合蛋白及研制核酸疫苗做准备. 方法用弓形虫RH株腹腔接种小鼠,收集腹水,酚/氯仿法抽提弓形虫基因组DNA;用PCR技术从基因组DNA中扩增编码表面抗原P30... 目的构建编码弓形虫RH株表面抗原P30、P22复合基因的真核表达重组质粒, 为进一步表达融合蛋白及研制核酸疫苗做准备. 方法用弓形虫RH株腹腔接种小鼠,收集腹水,酚/氯仿法抽提弓形虫基因组DNA;用PCR技术从基因组DNA中扩增编码表面抗原P30、P22的基因片段,分别重组入pMD18-T载体中.将pMD18-T载体中的P30、P22基因片段分别酶切,定向克隆入pUC18克隆载体中, pUC18-P30-P22中的P30-P22片段经酶切、纯化后,亚克隆入pcDNA3.1(-)真核表达载体,用酶切、PCR及测序的方法对重组子进行鉴定. 结果从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出特异的P30及P22片段;大小均与预测值相符;克隆pUC18-P30-P22重组质粒的酶切片段分别与P30、P22基因大小一致;经亚克隆、筛选鉴定获得了pcDNA3.1-P30-P22重组质粒,所测P30、P22基因序列与文献报道一致.结论成功构建弓形虫pUC18-P30-P22重组质粒和pcDNA3.1-P30-P22重组质粒,为研制弓形虫DNA疫苗奠定了基础. 展开更多
关键词 弓形虫属 P30基因 P22基因 克隆
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弓形虫进入宿主细胞的方式与机理 预览
14
作者 向选东 《实用预防医学》 CAS 1995年第1期 62-64,共3页
弓形虫进入宿主细胞的方式与机理向选东综述欧阳颗张铮审校（湖南医科大学附属湘雅医院传染科４１０００８）弓形虫是一种专性细胞内寄生原虫，呈世界性分布，我国各地均有弓形虫病流行。近十年来，随着诊断技术的发展，国内确诊的弓形... 弓形虫进入宿主细胞的方式与机理向选东综述欧阳颗张铮审校（湖南医科大学附属湘雅医院传染科４１０００８）弓形虫是一种专性细胞内寄生原虫，呈世界性分布，我国各地均有弓形虫病流行。近十年来，随着诊断技术的发展，国内确诊的弓形虫病例大幅度增加，其危害性正日益受... 展开更多
关键词 弓形体病 弓形体 感染 宿主细胞
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刚地弓形虫细胞培养的研究：Ⅰ磷脂酶A2对成囊株速殖子侵入细… 预览 被引量：9
15
作者 孙新 Cozon,G 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 1995年第1期 41-44,共4页
已知多种酶和细胞因子对弓形虫侵入细胞有促进或抑制作用。本研究旨在探讨利用对弓形虫侵入细胞有促进作用的因子提高以细胞培养作病原诊断的敏感性。以激素弱化的小鼠接种成囊株包囊获得速殖子，以单核细胞ＴＨＰ－１细胞系的培养系统... 已知多种酶和细胞因子对弓形虫侵入细胞有促进或抑制作用。本研究旨在探讨利用对弓形虫侵入细胞有促进作用的因子提高以细胞培养作病原诊断的敏感性。以激素弱化的小鼠接种成囊株包囊获得速殖子，以单核细胞ＴＨＰ－１细胞系的培养系统定量接种速殖子并加入源自蛇毒的磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２），以免疫荧光法和流式细胞仪检测细胞感染率。结果表明ＰＬＡ２对弱毒株速殖子侵入细胞有明显促进作用，在４株成囊株培养不同时间的检测，其感染细胞比率均比对照有显著提高。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 细胞培养 磷脂酶A2 弓形虫病
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十堰地区育龄妇女弓形虫血清流行病学分析 被引量：2
16
作者 朱敬 朱名胜 +1 位作者 卫荣华 杨树国 《中国热带医学》 CAS 2012年第9期1123-1124,共2页
目的探讨弓形虫感染对育龄妇女生殖健康的影响。方法采用金标免疫诊断试验和酶联免疫吸附试验测定1 316例育龄妇女血清弓形虫抗体IgG、IgM和循环抗原。结果1 316例育龄妇女中血清弓形虫抗体或循环抗原阳性171例,阳性率13.0%,阳性组中流... 目的探讨弓形虫感染对育龄妇女生殖健康的影响。方法采用金标免疫诊断试验和酶联免疫吸附试验测定1 316例育龄妇女血清弓形虫抗体IgG、IgM和循环抗原。结果1 316例育龄妇女中血清弓形虫抗体或循环抗原阳性171例,阳性率13.0%,阳性组中流产、死胎、畸形发生率高于阴性组（P〈0.01）;妇科疾病如子宫肌瘤、宫外孕、盆腔炎、不孕症的患病率也显著高于阴性组（P〈0.01）;饲养宠物者弓形虫阳性率高于不养宠物者（P〈0.01）。结论育龄妇女弓形虫感染与异常妊娠结局及某些妇科疾病密切相关,加强对育龄妇女弓形虫血清学监测和健康教育具有十分重要的意义。 展开更多
关键词 育龄妇女 弓形虫感染 血清学监测
自噬相关5蛋白对刚地弓形虫刺激树突状细胞成熟的影响
17
作者 吴尚桦 耿娥燕 +8 位作者 张静 张衡 施之强 汪汕 陆维 吴以振 王桂军 王勇 徐前明 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CSCD 北大核心 2018年第5期464-468,共5页
目的探讨自噬相关5 （ATG5）蛋白对刚地弓形虫（简称弓形虫）体外刺激树突状细胞（DCs）成熟的影响。方法采用TRIzol法提取昆明小鼠总RNA,反转录为cDNA,经PCR扩增获得ATG5基因。构建重组质粒pET-32a-ATG5,转入大肠埃希菌Rosetta株中表达... 目的探讨自噬相关5 （ATG5）蛋白对刚地弓形虫（简称弓形虫）体外刺激树突状细胞（DCs）成熟的影响。方法采用TRIzol法提取昆明小鼠总RNA,反转录为cDNA,经PCR扩增获得ATG5基因。构建重组质粒pET-32a-ATG5,转入大肠埃希菌Rosetta株中表达,尿素纯化后用抗His标签单抗蛋白质印迹（Western blotting）鉴定ATG5。分离鼠源DCs,用弓形虫体外感染DCs。感染实验分为3组：对照组（仅含DCs）、弓形虫组（弓形虫＋DCs）和ATG5蛋白组（ATG5蛋白＋弓形虫＋DCs）,每组设3次重复,各组弓形虫速殖子（1×10^4个）同时加入到DCs中, 37℃、 5%CO2共培养2 h。其中, ATG5蛋白组弓形虫在感染DCs前,预先与ATG5蛋白（50μg）在体外作用2 h。采用流式细胞术检测CD11cCD83双表达成熟型DCs在细胞总数中比例的变化,分析DCs的成熟情况,评价ATG5蛋白对弓形虫体外刺激DCs成熟的影响。结果ATG5扩增产物约为729 bp,ATG5蛋白相对分子质量（Mr）约为46 000。Western blotting检测结果显示,重组ATG5蛋白具有良好的反应原性。流式细胞术结果显示,对照组、弓形虫组、 ATG5蛋白组中CD11cCD83双表达成熟型DCs在细胞总数的比例分别为（13.3±0.5）%、（52.5±0.3）%和（47.8±0.6）%,弓形虫组和ATG5蛋白组差异有统计学意义（P 〈0.01）,对照组与其他两组的差异有统计学意义（P 〈0.01）。结论ATG5蛋白可降低弓形虫体外刺激DCs成熟的能力。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 自噬相关5蛋白 树突状细胞
编码刚地弓形虫棒状体蛋白2与主要表面抗原1基因的克隆和表达 预览
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作者 张佃波 高红刚 +6 位作者 崔勇 魏庆宽 宰德富 李瑾 柏雪莲 赵立江 刘克义 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2006年第3期 202-206,共5页
目的 构建编码弓形虫RH株棒状体蛋白2（ROP2）和主要表面抗原1的重组表达质粒，纯化和复性的融合蛋白为弓形虫病快速诊断试剂盒及蛋白质疫苗的研制作准备。方法 用PCR技术从弓形虫基因组DNA中扩增出ROP2和P30基因片段，分别克隆人pMDl8-... 目的 构建编码弓形虫RH株棒状体蛋白2（ROP2）和主要表面抗原1的重组表达质粒，纯化和复性的融合蛋白为弓形虫病快速诊断试剂盒及蛋白质疫苗的研制作准备。方法 用PCR技术从弓形虫基因组DNA中扩增出ROP2和P30基因片段，分别克隆人pMDl8-T载体，并对重组人外源基因的质粒通过PCR、双酶切和测序鉴定，将pMD-ROP2中RoP2基因片段经EcoRI和HindⅢ酶切、连接等反应，亚克隆入pET-30a（＋）原核表达载体，构建pET-ROP2载体，然后再将pMD-P30中的P30基因片段与经同样NcoI和EcoRI酶切的pET-30a（＋）载体连接，经含卡那霉素的LB平板筛选，酶切和PCR鉴定。阳性重组质粒转化到大肠埃希菌BL21（DE3）中，经IPTG诱导，表达产物用SDS-PAGE进行鉴定。大量的表达融合蛋白经纯化和复性后，用Westernblot分析。结果 从弓形虫RH株DNA中扩增出特异的RoP2和P30基因片段，成功克隆出pET-ROP2和pET-P30载体。结论 成功构建了pET-ROP2和pET-P30重组体，获得纯化和复性的弓形虫ROP2和P30的高效表达产物，为弓形虫病的诊断和疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 P30基因 ROP2基因 融合蛋白纯化 WESTERN BLOT
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弓形虫的感染途径和预防 预览 被引量：6
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作者 徐军（综述） 孙新（审校） 《疾病控制杂志》 2007年第5期 512-515,共4页
弓形虫是一种世界范围内广泛分布的机会致病原虫,人类普遍易感且感染途径广泛,先天性和免疫缺陷者获得性弓形虫病危害较为严重。对于人类感染弓形虫途径的深入了解,有助于更好的预防弓形虫感染。
关键词 弓形虫属 感染 一级预防
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刚地弓形虫RH株感染对BALB／c小鼠情绪行为的影响 预览
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作者 葛璞 李春莉 +2 位作者 黄开顺 高西 叶彬 《世界科技研究与发展》 CSCD 2011年第1期148-150,共3页
目的研究刚地弓形虫RH株感染对BALB／c小鼠学习记忆行为的影响及可能机制。方法将72只周龄、大小相近的雄性BALB／c小鼠采用随机数字表分为生理盐水对照组与不同数量（3×10^3／ml、3×10^4／ml、3×10^5／m1）弓形虫RH株... 目的研究刚地弓形虫RH株感染对BALB／c小鼠学习记忆行为的影响及可能机制。方法将72只周龄、大小相近的雄性BALB／c小鼠采用随机数字表分为生理盐水对照组与不同数量（3×10^3／ml、3×10^4／ml、3×10^5／m1）弓形虫RH株感染组，每组18只。于感染第5周从每组各随机抽取6只分别进行高架十字迷宫实验、旷场实验及强迫游泳实验，观察各组小鼠在实验中情绪行为变化。并记录各项指标进行统计分析。结果在高架迷宫试验与旷场实验中，3×10^3／ml弓形虫感染组小鼠与生理盐水对照组小鼠比较，各项行为学指标无明显差异。在3×10^4／ml、3×10^5／ml弓形虫感染组小鼠与对照组小鼠比较出现明显降低（P〈0．05）．以3×10^5／ml感染组最为明显，其小鼠运动活力（0E＋cE）、进入开放臂次数比例（OE％）、开放臂停留时间比例（OT％）小鼠爬行总格数、中央格在总格数中比例分别为11．08±2．12、28．73±0．59％、25．62±2．33％、32．30±17．26、2．42±0．65％。在强迫游泳试验中，各弓形虫感染组小鼠游泳的静止时间均高于对照组小鼠（P〈0．05），3×10^5／ml感染组静止时间最长，达226．6±1．9S。结论刚地弓形虫RH株感染可引起小鼠情绪行为改变，具有焦虑抑郁倾向。 展开更多
关键词 刚地弓形虫RH株 高架十字迷宫实验 旷场实验 强迫游泳实验
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