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ERβ重组质粒的构建及其在结肠癌细胞株Caco-2中的表达 预览
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作者 翟荣林 王国斌 +2 位作者 蔡开琳 许飞 田元 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2008年第7期706-710,共5页
目的:基因重组技术构建重组质粒pEGFP-C1-ERβ并检测其在结肠癌细胞株Caco-2中的表达.方法:应用RT-PCR从人结肠癌手术患者正常切缘组织中分离、扩增目的基因片段,将所得cDNA定向克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,采用双酶切和测序分... 目的:基因重组技术构建重组质粒pEGFP-C1-ERβ并检测其在结肠癌细胞株Caco-2中的表达.方法:应用RT-PCR从人结肠癌手术患者正常切缘组织中分离、扩增目的基因片段,将所得cDNA定向克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,采用双酶切和测序分析鉴定插入基因的序列;脂质体介导重组质粒pEGFP-C1-ERβ瞬时转染Caco-2并上流式细胞仪分选,获得比较单一的转染细胞:分别采用RT-PCR、Western blot检测转染前后ERβ基因不同分子水平表达.结果:酶切鉴定和测序分析表明重组表达质粒pEGFP-C1-ERβ构建无误;RT-PCR和Western blot分析均表明,与转染空质粒pEGFP-C1组和空白对照组细胞相比,转染重组表达质粒pEGFP-C1-ERβ组细胞ERβ基因表达水平明显提高.结论:成功构建重组质粒pEGFP-C1-ERβ并在Caco-2细胞株中表达,为进一步研究ERβ如何通过雌激素受体通路调控下游靶基因表达和参与结肠癌表遗传学发生机制奠定了基础. 展开更多
关键词 雌激素受体Β 基因重组 真核表达载体 结肠癌
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维持性血液透析患者同型半胱氨酸与左心室结构和功能的关系 预览 被引量:2
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作者 于黔 赵素云 +3 位作者 蒋文勇 吴欣 蓝天座 闵亚莉 《实用医院临床杂志》 2011年第3期 30-32,共3页
目的探讨维持性血液透析(MHD)患者同型半胱氨酸与左心室结构和功能的关系。方法选择我院MHD患者58例(血透组)、体检中心30例健康体检者(对照组),检测两组受试者血浆总同型半胱氨酸(tHcy)浓度,用彩色多普勒超声测定左心室舒张末... 目的探讨维持性血液透析(MHD)患者同型半胱氨酸与左心室结构和功能的关系。方法选择我院MHD患者58例(血透组)、体检中心30例健康体检者(对照组),检测两组受试者血浆总同型半胱氨酸(tHcy)浓度,用彩色多普勒超声测定左心室舒张末期内径(LVDd)与容积(LVVd)、左心室收缩末期内径(LVDs)与容积(LVVs)、左心室后壁厚度(LVP-WT)、室间隔厚度(IVST)、左心室射血分数(LVEF)、左心室质量指数(LVMI)及舒张早期、晚期最大血流比(E/A),分析tHcy与上述各参数间的关系。结果血透组患者血浆tHcy浓度、LVDd、LVDs、IVST、LVPWT、E/A、射血分数(EF)和LVMI均明显高于对照组,差异有统计学意义(P〈0.01);tHcy水平与LVD、IVST、LVMI呈显著正相关,与EF、E/A呈显著负相关。结论 MHD患者存在高同型半胱氨酸血症,tHcy浓度可作为心脏左心室肥厚和功能减退的预测因子。 展开更多
关键词 维持性血液透析 同型半胱氨酸 左心室结构 左心室功能
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LTF基因在多种肿瘤里的表达及机制研究 预览
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作者 诸葛小菊 陈仁聘 +1 位作者 卢光荣 黄智铭 《医学研究杂志》 2014年第5期7-9,共3页
研究发现对大多数肿瘤来说,人体染色体3p21.3区域存在一群高密度分布的肿瘤抑制基因簇(TSGs),LTF基因(1actotransferrin,LTF)是位于高频缺失区(CERl)的一员。LTF的抗肿瘤机制是多种多样的,如通过调节NK细胞的活动,调节细胞G... 研究发现对大多数肿瘤来说,人体染色体3p21.3区域存在一群高密度分布的肿瘤抑制基因簇(TSGs),LTF基因(1actotransferrin,LTF)是位于高频缺失区(CERl)的一员。LTF的抗肿瘤机制是多种多样的,如通过调节NK细胞的活动,调节细胞G1蛋白的表达,抑制肿瘤细胞的分化,增强其凋亡。在小鼠实验中,LTF基因能抑制动物肿瘤模型中细胞的生长。研究认为LTF在鼻咽癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、胃癌、恶性胶质瘤、口腔鳞癌等多种肿瘤里表达下调,是抑癌基因或者候选抑癌基因。总结多种肿瘤,LTF在肿瘤里表达下调的机制大致可分为基因水平相关和表观遗传学相关,前者包括杂合性缺失(10ssofheterozy—gosity,LOH)和基因突变,后者包括启动子甲基化和组蛋白去乙酰化修饰相关,本文主要介绍LTF在多种肿瘤内失活和表观遗传学机制的联系。 展开更多
关键词 LTF基因 肿瘤 抑癌基因 表观遗传学 启动子甲基化
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内源性一氧化氮提高TRAIL诱导的细胞凋亡率 预览 被引量:1
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作者 苏占海 杨生玺 +5 位作者 龙启福 王文青 王明宁 侯成荣 张昱 Susanne Strand 《青海医学院学报》 2011年第3期 145-150,共6页
目的探讨内源性一氧化氮在TRAIL诱导的细胞凋亡中的作用,以期了解许多肿瘤组织表达诱导性一氧化氮合成酶的分子和细胞学机制。方法用短暂转染、稳定转染方法在人胚胎肾细胞HEK293中进行重组质粒载体转染,并对可诱导表达一氧化氮合成酶N... 目的探讨内源性一氧化氮在TRAIL诱导的细胞凋亡中的作用,以期了解许多肿瘤组织表达诱导性一氧化氮合成酶的分子和细胞学机制。方法用短暂转染、稳定转染方法在人胚胎肾细胞HEK293中进行重组质粒载体转染,并对可诱导表达一氧化氮合成酶NOS2载体筛选稳定可被诱导的细胞克隆。一氧化氮表达通过ponastrone A试剂进行诱导表达实现。Caspase活性通过相应试剂盒进行检测,并用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果成功构建了稳定可诱导表达一氧化氮合成酶的细胞克隆;内源性一氧化氮可提高TRAIL诱导的细胞凋亡率,与凋亡相关的caspase-8激酶活性亦显增加。结论内源性一氧化氮可提高由TRAIL诱导的细胞凋亡率。* 展开更多
关键词 肿瘤 一氧化氮 TRAIL 细胞凋亡率
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体外循环肺损伤与水通道蛋白1基因表达相关性的实验研究 被引量:4
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作者 赵俊林 纪阴心 《生物医学工程与临床》 CAS 2012年第5期482-485,共4页
目的 观察羊体外循环模型中肺损伤的存在,探讨体外循环下肺损伤与水通道蛋白1(AQP-1)基因表达之间的关系。方法 健康成年羊16只,雌雄不拘,体质量15 - 30 kg,羊龄8个月。分为脂多糖组和对照组,每组8只。通过建立浅低温体外循环... 目的 观察羊体外循环模型中肺损伤的存在,探讨体外循环下肺损伤与水通道蛋白1(AQP-1)基因表达之间的关系。方法 健康成年羊16只,雌雄不拘,体质量15 - 30 kg,羊龄8个月。分为脂多糖组和对照组,每组8只。通过建立浅低温体外循环模型,停跳90 min,复跳6 h,分别比较其血流动力学的指标变化及普通病理组织和超微病理组织的各自特点,测定AQP-1 mRNA表达。结果 利用体外循环前指标作为自身对照,进行单因素方差分析和Q检验。体外循环缺血再灌注之后,血流动力学较平稳[中心静脉压在体外循环前、心脏复跳前、再灌注至平稳时分别为(5.86 ± 1.12) kPa、(6.52 ± 1.33) kPa、(6.36 ± 1.04) kPa],肺干质量/肺湿质量比值(体外循环前、心脏复跳前、复跳后1 h、复跳后3 h、复跳后6 h分别为0.232 ± 0.025、0.224 ± 0.021、0.187 ± 0.022、0.153 ± 0.018、0.134 ± 0.023)与体外循环时间呈反相关(P 〈 0.001),血浆总渗透压与体外循环时间呈正相关(P 〈 0.01)。病理组织证实,复跳之后3 - 6 h可以见到明显的肺间质水肿及血管内皮细胞损伤。肺内AQP-1 mRNA表达与体外循环时间呈反相关(体外循环前、心脏复跳前、复跳后1 h、复跳后3 h、复跳后6 h分别为100.0、98.1 ± 24.4、80.2 ± 20.3、78.1 ± 17.7、55.3 ± 16.4),在复跳后3 h与6 h分别降至术前水平的77.8 %和54.6 %(P 〈 0.01)。结论 体外循环造成的肺损伤在心脏复跳后3 - 6 h内表现严重,同时AQP-1的表达下降,存在肺血管内皮损伤。 展开更多
关键词 体外循环 肺损伤 水通道蛋白1(AQP-1) 基因表达
先天性巨结肠患者SEMA3C/SEMA3D基因错义突变对Semaphorin3蛋白表达的影响 预览 被引量:1
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作者 姜茜 李颀 +4 位作者 张震 肖萍 苏琳 苗春越 李龙 《医学研究杂志》 2015年第2期55-59,共5页
目的 明确先天性巨结肠患者携带的5个SEMA3C/SEMA3D基因错义突变对Semaphporin 3蛋白表达的影响作用.方法 将野生型和突变型AP-tagged SEMA3质粒分别转染HEK293T细胞,72h后收集细胞培养液上清并提取细胞总蛋白,利用融合蛋白N-末端含有... 目的 明确先天性巨结肠患者携带的5个SEMA3C/SEMA3D基因错义突变对Semaphporin 3蛋白表达的影响作用.方法 将野生型和突变型AP-tagged SEMA3质粒分别转染HEK293T细胞,72h后收集细胞培养液上清并提取细胞总蛋白,利用融合蛋白N-末端含有的碱性磷酸酶在底物PNPP存在时可以发生颜色变化的特性,通过对各野生型和突变型质粒转染后所表达的AP-SEMA3蛋白在特定波长的吸光值进行检测以达到蛋白定量的目的.结果 5个错义突变中的4个(SEMA3C:V337M;SEMA3D:H424Q、V457I、P615T)都会不同程度地影响相应Semaphorin 3蛋白的表达和分泌,说明它们可能通过严重影响蛋白的表达量而妨碍蛋白功能的正常行使.结论 Semaphorin 3作为一类经典的神经元轴突导向因子,很可能参与了肠神经系统的发育调控并在功能失常的情况下引发先天性巨结肠缺陷表型. 展开更多
关键词 先天性巨结肠 SEMAPHORIN 3基因 错义突变 碱性磷酸酶 蛋白表达
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靶向S1P2基因的siRNA有效片段慢病毒载体的筛选 预览
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作者 晏萧 夏纪毅 +2 位作者 程波 朱永生 姜睿 《中国病理生理杂志》 CSCD 北大核心 2017年第7期1338-1344,共7页
目的:筛选能显著抑制原代培养的自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)阴茎海绵体平滑肌细胞内1-磷酸鞘氨醇受体2(sphingosine-1-phosphate receptor 2,S1P2)基因表达的siRNA慢病毒载体。方法:SHR及SD大鼠各5只... 目的:筛选能显著抑制原代培养的自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)阴茎海绵体平滑肌细胞内1-磷酸鞘氨醇受体2(sphingosine-1-phosphate receptor 2,S1P2)基因表达的siRNA慢病毒载体。方法:SHR及SD大鼠各5只用于原代培养阴茎海绵体平滑肌细胞并分成6组,每组5个样本,每个样本约1.0×105个细胞,分别为携带靶向S1P2基因的siRNA-1~3号靶点的SHR慢病毒转染组(SHR siRNA-1、SHR siRNA-2和SHR siRNA-3组)、携带慢病毒空载体的SHR转染组(SHR GFP组)、SHR未转染对照组(SHR control组)和SD大鼠对照组(SD control组)。将靶向S1P2的siRNA片段的慢病毒载体,以感染复数(MOI)=60转染各组SHR阴茎海绵体平滑肌细胞,于转染72 h后荧光显微镜下观察细胞荧光表达情况,用Western blot分析各组S1P2、ROCK1、ROCK2和eNOS在阴茎海绵体平滑肌细胞内的表达变化,RT-PCR检测各组阴茎海绵体平滑肌细胞S1P2、ROCK1和ROCK2的mRNA的表达。结果:荧光显微镜下观察SHR siRNA-1、SHR siRNA-2、SHR siRNA-3和SHR GFP组细胞转染效率均〉80%;SHR GFP组与SHR control组相比,S1P2、ROCK1和ROCK2的mRNA和蛋白表达无明显差异,SHR siRNA-1、SHR siRNA-2、SHR siRNA-3和SD control组均显著低于SHR control组(P〈0.05)。而SHR siRNA-1、SHR siRNA-2、SHR siRNA-3和SHR GFP组eNOS蛋白表达与SHR control组相比均无显著差别,但SD control组显著高于SHR control组(P〈0.05)。结论:3组针对S1P2的siRNA慢病毒载体均能显著抑制SHR阴茎海绵体平滑肌细胞内S1P2的表达,下调ROCK1和ROCK2表达,其中靶向S1P2的siRNA-1抑制效率最高。 展开更多
关键词 自发性高血压大鼠 1-磷酸鞘氨醇受体2 小干扰RNA 慢病毒载体
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VEGF、PCNA在非小细胞肺癌组织中的表达及意义 预览 被引量:6
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作者 杨宏刚 刘建军 杨敏 《新疆医科大学学报》 CAS 2009年第2期 159-160,164,共3页
目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)、增殖细胞核抗原(PCNA)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化SP法检测了40例非小细胞肺癌和10例正常肺组织中VEGF、PCNA的表达情况,并分析其与临床病理分期的关系... 目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)、增殖细胞核抗原(PCNA)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化SP法检测了40例非小细胞肺癌和10例正常肺组织中VEGF、PCNA的表达情况,并分析其与临床病理分期的关系。结果:40例非小细胞肺癌的VEGF阳性表达率为72.5%,明显高于正常对照组(20%),差异有统计学意义(P〈0.05),但临床Ⅲ~Ⅳ期的VEGF阳性表达率(80%)与Ⅰ~Ⅱ期的表达率(65%)相比,差异无统计学意义(P〉0.05)。PCNA在非小细胞肺癌中的阳性表达率为62.5%,明显高于正常对照组(20%),差异有统计学意义(P〈0.05),但临床Ⅲ~Ⅳ期的PCNA阳性表达率(65%)与Ⅰ~Ⅱ期的表达率(60%)之间无明显差异(P〉0.05)。结论:VEGF和PCNA可以作为评价非小细胞肺癌预后的重要指标。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 血管内皮生长因子 增殖细胞核抗原 免疫组织化学
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抗转化生长因子β诱导蛋白单克隆抗体的制备
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作者 李宗波 王玉亮 《生物医学工程与临床》 CAS 2012年第5期486-488,共3页
转化生长因子β诱导蛋白(transforming growthfactor-β-induced protein,TGFBIp)是一个多功能细胞外基质分子,在细胞黏附、迁移、增殖、分化中起十分重要作用[1,2]。近期Kim HJ等[3]及Rowley JW等[4]研究显示,TGFBIp可作为一种血小... 转化生长因子β诱导蛋白(transforming growthfactor-β-induced protein,TGFBIp)是一个多功能细胞外基质分子,在细胞黏附、迁移、增殖、分化中起十分重要作用[1,2]。近期Kim HJ等[3]及Rowley JW等[4]研究显示,TGFBIp可作为一种血小板来源蛋白,在血小板活化、促进血栓形成中发挥重要作用。因此,制备抗TGFBIp单克隆抗体将更好地理解血小板活化及血栓形成,为发展新的抗血栓治疗提供有价值的手段。1材料与方法1.1材料与动物1.1.1主要试剂 展开更多
关键词 转化生长因子Β 单克隆抗体 诱导蛋白 制备 血小板活化 PROTEIN 细胞外基质分子 血栓形成
小鼠卡英酸颞叶癫痫慢性发作期的磷酸化蛋白组学研究 预览
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作者 孙智明 陈倩 +3 位作者 李明华 马维宁 赵旭阳 黄卓 《北京大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期197-205,共9页
目的:探究小鼠颞叶癫痫慢性发作期蛋白质功能和信号通路的改变。方法:(1)制备小鼠卡英酸颞叶癫痫模型,行为学达到Racine分级4分判定为造模成功。28 d后,取对照组和实验组小鼠海马组织进行磷酸化蛋白组学实验;(2)选取检出密度大于10 6 ... 目的:探究小鼠颞叶癫痫慢性发作期蛋白质功能和信号通路的改变。方法:(1)制备小鼠卡英酸颞叶癫痫模型,行为学达到Racine分级4分判定为造模成功。28 d后,取对照组和实验组小鼠海马组织进行磷酸化蛋白组学实验;(2)选取检出密度大于10 6 的数据进行统计分析;(3)利用GO(Gene Ontology)数据库、KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)数据库和STRING数据库对磷酸化蛋白组学数据进行统计分析;(4)结合文献对组学结果进行分析。结果:(1)质谱共检测出12 697个蛋白质磷酸化位点,其中159个位点变化差异具有统计学意义( P <0.05);(2)在蛋白质功能层面,磷酸化水平显著性变化的蛋白质的分子功能主要是结合(39.5%)和催化活性(35.7%),这些蛋白质参与细胞交流(20.8%)、初级代谢和含磷酸盐化合物代谢等生化过程;(3)在信号通路层面,这些蛋白质参与10条信号转导通路,包括谷氨酸能突触信号通路、Ras信号通路、长时程增强信号通路等;(4)在蛋白质相互作用层面,这些蛋白质形成以Grin1和Dlg3为核心,以Arhgef 2、Arhgap33和Tiam1为核心与以Spnb1/3/4、Add3和Ank2为核心的蛋白质相互作用网;(5)磷酸化蛋白组学数据显示,Grin1、Arhgef2、Arhgap33、 Tiam1 、Sptbn1/2/4和Ank2等磷酸化水平在癫痫慢性发作期显著升高。结论:磷酸化蛋白组学的结果从蛋白质功能、信号通路和蛋白质相互作用3个层面阐明了小鼠颞叶癫痫慢性发作期海马体蛋白质的变化,验证了磷酸化蛋白组学研究的可靠性,并提示多巴胺功能和Kir3.1钾通道功能可能与癫痫发生相关。 展开更多
关键词 磷酸化蛋白组学 颞叶癫痫 癫痫发生
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多壁碳纳米管抑制RAW264.7巨噬细胞的吞噬功能 预览
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作者 李慧 祝红 +3 位作者 闫莉 谷婧丽 郝维 曹济民 《医学研究杂志》 2014年第11期20-24,共5页
目的 观察多壁碳纳米管(MWCNT)对巨噬细胞吞噬功能的影响.方法 采用常规细胞培养技术培养RAW264.7巨噬细胞;用流式细胞术定量检测RAW264.7巨噬细胞吞噬异硫氰酸荧光素标记的大肠杆菌(FITC-tagged E.coli k-12)的情况.结果 MWCNT剂... 目的 观察多壁碳纳米管(MWCNT)对巨噬细胞吞噬功能的影响.方法 采用常规细胞培养技术培养RAW264.7巨噬细胞;用流式细胞术定量检测RAW264.7巨噬细胞吞噬异硫氰酸荧光素标记的大肠杆菌(FITC-tagged E.coli k-12)的情况.结果 MWCNT剂量依赖性地抑制RAW264.7细胞吞噬大肠杆菌,随着MWCNT浓度的增加,RAW264.7细胞吞噬大肠杆菌的量(用平均荧光强度表示)降低.此外,MWCNT抑制RAW264.7细胞吞噬大肠杆菌亦呈时间依赖性:用MWCNT(75 μg/ml)孵育RAW264.7细胞12h后,RAW264.7细胞吞噬大肠杆菌的量与对照组相比降低了约70.4% (P <0.01),同时参与吞噬活动的RAW264.7细胞的百分比也从对照组的98.6%降低到了92.4% (P<0.05).即使用低剂量的MWCNT(25 μg/ml)孵育RAW264.7细胞较长时间(24h)后,RAW264.7细胞吞噬大肠杆菌的量与对照组相比仍降低了约77.1% (P <0.01),同时参与吞噬活动的RAW264.7细胞的百分比也从71.2%降低到了43.4% (P <0.01).用脂多糖(LPS,10μg/ml)激活RAW264.7细胞后,其吞噬能力明显增强,而MWCNT仍可剂量依赖性地抑制LPS激活的RAW264.7细胞的吞噬能力,与LPS组相比,MWCNT(75 μg/ml)和LPS共孵育组吞噬大肠杆菌的量降低了70.9% (P <0.01).结论 MWCNT可明显抑制RAW264.7巨噬细胞的吞噬功能. 展开更多
关键词 多壁碳纳米管 巨噬细胞 吞噬 大肠杆菌 流式细胞术
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Ajuba对肝糖异生相关基因表达的影响 预览 被引量:1
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作者 樊红延 侯照远 董莹 《上海交通大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期637-641,共5页
目的观察Lim家族成员Ajuba对糖异生关键基因转录水平的影响,探讨Ajuba参与肝糖代谢调节的分子机制。方法 1慢病毒感染人肝癌细胞系Hep G2,筛选低表达和过表达Ajuba的稳转细胞,通过Western blotting鉴定Ajuba表达情况。2real-time PCR检... 目的观察Lim家族成员Ajuba对糖异生关键基因转录水平的影响,探讨Ajuba参与肝糖代谢调节的分子机制。方法 1慢病毒感染人肝癌细胞系Hep G2,筛选低表达和过表达Ajuba的稳转细胞,通过Western blotting鉴定Ajuba表达情况。2real-time PCR检测Hep G2稳转细胞中糖异生关键酶磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)和葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)基因mRNA表达。3分离培养C57BL/6小鼠原代肝细胞并以慢病毒感染法筛选低表达Ajuba的细胞,real-time PCR检测Pepck和G6p mRNA水平。结果 1Western blotting结果显示,低表达和高表达Ajuba的Hep G2细胞均构建成功。2与对照组相比,低表达Ajuba的Hep G2细胞中PEPCK和G6P mRNA水平明显降低,而过表达细胞中则显著升高(P〈0.05)。3低表达Ajuba的小鼠原代肝细胞中Pepck和G6p mRNA水平明显降低(P〈0.05)。结论 Lim蛋白Ajuba能够通过促进肝糖异生关键基因PEPCK和G6P的表达参与糖代谢调节,且该作用不具有种属特异性。 展开更多
关键词 Ajuba 糖异生 HEP G2 小鼠原代肝细胞 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 葡萄糖-6-磷酸酶
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缺氧和营养缺乏对软骨终板干细胞凋亡的影响及相关机制
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作者 浦路桥 刘杰 +2 位作者 袁超 贾敏 王建 《中国脊柱脊髓杂志》 CSCD 北大核心 2017年第5期449-455,共7页
目的:观察缺氧和营养缺乏对软骨终板干细胞(cartilage endplate-derived stem cells,CESCs)凋亡的影响,探讨B细胞淋巴瘤/白血病-2/腺病毒E1B 19-kDa结合蛋白3(Bcl-2/adenovirus E1B 19-kDa-interacting protein 3,BNIP3)信号通... 目的:观察缺氧和营养缺乏对软骨终板干细胞(cartilage endplate-derived stem cells,CESCs)凋亡的影响,探讨B细胞淋巴瘤/白血病-2/腺病毒E1B 19-kDa结合蛋白3(Bcl-2/adenovirus E1B 19-kDa-interacting protein 3,BNIP3)信号通路在其中的作用。方法:从临床获取退变椎间盘软骨终板标本,分离培养软骨终板细胞,使用琼脂糖筛选获得CESCs并进行干细胞标志物鉴定,将第三代细胞分别在常氧/完全培养基(对照组)与缺氧和营养缺乏(实验组)条件下培养48h,通过流式细胞术检测细胞凋亡率,CCK-8法检测细胞活性,Western Blot检测BNIP3、Bcl-2关联x蛋白(Bax)、Bcl-2关联k蛋白(Bak)和低氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白表达水平。使用BNIP3小干扰RNA(siRNA)干扰CESCs中BNIP3基因,同时设置阴性干扰对照组(Scramble siRNA),同前分组处理后再次检测细胞凋亡率、细胞活性及BNIP3、Bax、Bak蛋白的表达水平。结果:对5例标本获得的CESCs进行了干细胞标志物鉴定,其中细胞表面粘附分子44(CD44)、CD73、CD90和CD105为阳性,CD34、CD45、CD11b、CD19和HLA-DR为阴性,提示CESCs具有干细胞特性。实验组细胞凋亡率为(29.12±0.65)%显著高于对照组的(14.87±2.03)%(P〈0.05);实验组的细胞增殖活性明显降低,为对照组的56.18%(P〈0.05)。与对照组相比,实验组BNIP3、Bax、Bak蛋白的表达均显著上调(P〈0.05)。使用BNIP3 siRNA干扰后,缺氧和营养缺乏引起的细胞凋亡增加和细胞增殖活力下降均被明显抑制;同时,缺氧和营养缺乏导致CESCs中BNIP3、Bax和Bak的蛋白表达升高也被显著逆转(P〈0.05)。结论:缺氧和营养缺乏能够诱导CESCs发生凋亡,此过程可能是通过上调BNIP3、Bax和Bak蛋白表达而发挥作用的。 展开更多
关键词 软骨终板干细胞 缺氧和营养缺乏 凋亡 B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)腺病毒E1B 19-kDa结合蛋白 Bcl-2关联x蛋白 Bcl-2关联k蛋白
检测结直肠癌患者血清中长链非编码RNA-SchLAP1和DEK表达的临床意义 预览
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作者 刘东楠 张锦辉 +5 位作者 夏荣钧 王慧莹 张娟 殷玉龙 尹铭旋 林黎娟 《辽东学院学报:自然科学版》 CAS 2017年第2期120-124,共5页
为了研究长链非编码RNA-Sch LAP1在结直肠癌(CRC)患者血清中的表达及临床意义,收集CRC患者血清标本60例、健康人血清标本20例,利用RT-PCR方法检测Sch LAP1和DEK的表达情况,分析二者与CRC患者临床病理学参数及生存期的相关性。结果显示... 为了研究长链非编码RNA-Sch LAP1在结直肠癌(CRC)患者血清中的表达及临床意义,收集CRC患者血清标本60例、健康人血清标本20例,利用RT-PCR方法检测Sch LAP1和DEK的表达情况,分析二者与CRC患者临床病理学参数及生存期的相关性。结果显示,Sch LAP1和DEK在CRC患者血清中的表达水平均明显高于健康人群;Sch LAP1高表达率与临床分期明显相关,而DEK高表达与组织分化程度及临床分期明显相关,两种基因的高表达率经Spearmans检验具有明显相关性;Sch LAP1和DEK同时高表达的患者5年生存率和无瘤生存率明显低于单独一种表达或两种均不表达者。因此,检测血清中Sch LAP1和DEK基因的表达对评估CRC预后均有一定的临床意义,二者同时检测时价值更明显。 展开更多
关键词 LncRNA SchLAP1 DEK 结直肠癌 血清
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ZNF580过表达对内皮细胞血管内皮生长因子的表达及增殖能力的影响 预览 被引量:1
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作者 韦淑萍 侯兵 +1 位作者 孙慧燕 张文成 《武警后勤学院学报:医学版》 2013年第1期1-4,11,F0003共6页
【目的】研究人锌指蛋白新基因ZNF580过表达对人脐静脉内皮细胞株EA.hy926血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达及增殖能力的变化,为探讨ZNF580基因功能提供科学依据。【方法】重组质粒pEGFP-ZNF580经Lip... 【目的】研究人锌指蛋白新基因ZNF580过表达对人脐静脉内皮细胞株EA.hy926血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达及增殖能力的变化,为探讨ZNF580基因功能提供科学依据。【方法】重组质粒pEGFP-ZNF580经LipofectamineTM2000脂质体转染法转染EA.hy926细胞,48h后荧光显微镜下观察ZNF580-EGFP在内皮细胞中的表达情况;应用半定量RT-PCR、Western blotting及ELISE法检测转染前后内皮细胞ZNF580和VEGFmRNA、蛋白表达的变化;运用MTT实验检测转染前后内皮细胞增殖能力的改变。【结果】荧光显微镜下示融合蛋白ZNF580-EGFP在EA.hy926细胞核中表达;ZNF580基因过表达后,内皮细胞VEGFmRNA及蛋白的表达均上调(P〈0.05),且其增殖能力显著升高(P〈0.01)。【结论】ZNF580可以调控EA.hy926细胞VEGF的表达,且ZNF580在内皮细胞增殖过程中具有重要的调节作用。 展开更多
关键词 锌指蛋白 内皮细胞 ZNF580 血管内皮生长因子 增殖
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APOBEC3C的研究进展 预览
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作者 吴小霞 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期240-243,共4页
与APOBEC3s其他成员相比,APOBEC3C是特殊的,因为APOBEC3C的抗病毒和抗逆转录元件的功能较弱。APOBEC3C只有一个与锌离子协调的胞嘧啶脱氨酶域,并根据氨基酸特异性被划分为A3Z2。与APOBEC3G相比,APOBEC3C引发HIV-1DNA上胞嘧啶脱氨基的数... 与APOBEC3s其他成员相比,APOBEC3C是特殊的,因为APOBEC3C的抗病毒和抗逆转录元件的功能较弱。APOBEC3C只有一个与锌离子协调的胞嘧啶脱氨酶域,并根据氨基酸特异性被划分为A3Z2。与APOBEC3G相比,APOBEC3C引发HIV-1DNA上胞嘧啶脱氨基的数目较少,所以降低了其抑制HIV-1逆转录及整合的能力。APOBEC3C可在靶细胞引起G→A突变,而G→A突变能导致病毒多样性却无法抑制病毒复制。人类APOBEC3C编码的S188I多态性增强了蛋白质的酶促活性及其抑制HIV-1的能力。另外,人类APOEC3C酶的二聚化增加了单链DNA的持续合成能力,可导致体外和细胞内逆转录过程中的大量突变。APOBEC3C已在灵长类的正选择下进化,是病毒在天然感染过程中必须对抗的重要屏障。因此,对APOBEC3C的研究可为抗病毒和抗癌症的治疗设计提供一些思路。 展开更多
关键词 APOBEC3C APOBEC3 HIV-1 VIF
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IL-23通过PDK/AKT途径诱导甲状腺上皮细胞凋亡
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作者 郑婷婷 许铖铖 +5 位作者 毛朝明 卜玲 吴菲 罗璇 路庆艳 周月鹏 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期954-957,共4页
目的探讨白细胞介索23(IL-23)对人甲状腺上皮细胞增殖、凋亡的影响。方法用(10、50、100)ng/mL IL-23处理Nthy-ori 3-1甲状腺上皮细胞24h后,用MTY法检测细胞增殖能力改变,藻红蛋白标记的膜联素V/7-氨基放线菌素D(annexin V-PE... 目的探讨白细胞介索23(IL-23)对人甲状腺上皮细胞增殖、凋亡的影响。方法用(10、50、100)ng/mL IL-23处理Nthy-ori 3-1甲状腺上皮细胞24h后,用MTY法检测细胞增殖能力改变,藻红蛋白标记的膜联素V/7-氨基放线菌素D(annexin V-PE/7-AAD)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡水平变化,Western blot法检测磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)、磷脂酰肌醇3激酶(P13K)、Bcl-2、Bcl-xL、活化caspase-3蛋白的水平。结果与对照组相比,随着IL-23剂量增加,甲状腺上皮细胞的增殖能力逐渐下降;IL-23下调P13K/AKT信号蛋白的磷酸化水平并促进甲状腺上皮细胞凋亡。结论IL-23通过调节P13K/AKT途径促进甲状腺上皮细胞凋亡。 展开更多
关键词 白细胞介素23(IL-23) 磷脂酰肌醇3激酶(PI3K) 蛋白激酶B 细胞凋亡
Betatrophin重组腺病毒过表达载体的构建 预览
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作者 蒋丹 薛颢颖 +10 位作者 王苏 杨奇超 刘媛馨 杨玲 王东 尹卫 庄若 钱唯韵 赵双霞 周丽斌 袁国跃 《江苏大学学报:医学版》 CAS 2016年第2期124-127,131共5页
目的:应用基因同源重组技术,构建及鉴定携带小鼠betatrophin基因Gm6484(NM_001080940)的复制缺陷型重组腺病毒载体,为进一步研究betatrophin的功能奠定基础。方法:根据基因库中登录的小鼠betatrophin基因Gm6484(NM_001080940)序列... 目的:应用基因同源重组技术,构建及鉴定携带小鼠betatrophin基因Gm6484(NM_001080940)的复制缺陷型重组腺病毒载体,为进一步研究betatrophin的功能奠定基础。方法:根据基因库中登录的小鼠betatrophin基因Gm6484(NM_001080940)序列,经化学合成得到含Bam HⅠ/AgeⅠ酶切位点的小鼠betatrophin基因全长c DNA质粒,将其酶切后插入到带有增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的GV314载体CMV-MCS-3FLAG-SV40-EGFP中,得到重组病毒穿梭质粒p GV314-betatrophin;经Bam HⅠ/AgeⅠ双酶切后,与线性化的p DC315病毒基因组质粒体外同源重组,构建含有目的基因的腺病毒载体Ad-betatrophin,酶切线性化重组腺病毒质粒后转染HEK293T细胞包装成重组病毒颗粒,经在HEK293T细胞反复扩增数代后,利用聚合酶链式反应(PCR)、蛋白质印迹法及测序鉴定重组的腺病毒。结果:阳性克隆质粒Ad-betatrophin在HEK293T细胞中成功包装出重组病毒,经PCR、蛋白质印迹及测序检测表明重组腺病毒包装成功。结论:成功构建了携带小鼠betatrophin基因的复制缺陷型重组腺病毒过表达载体。 展开更多
关键词 betatrophin 增强型绿色荧光蛋白 同源重组
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STAT3-siRNA慢病毒表达载体的制备及其在SW480细胞中的表达 预览
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作者 于利人 史娜 +1 位作者 陈立军 靳秋月 《武警后勤学院学报:医学版》 2014年第1期23-26,F0003共5页
【目的】通过慢病毒感染SW480细胞观察RNAi对细胞内STAT3基因表达的影响。【方法】制备STAT3干扰质粒,与其它3种质粒共同转染至293T细胞中组装为STAT3-siRNA慢病毒表达载体。流式测定病毒滴度后选择最适滴度感染SW480细胞并进行分选。Re... 【目的】通过慢病毒感染SW480细胞观察RNAi对细胞内STAT3基因表达的影响。【方法】制备STAT3干扰质粒,与其它3种质粒共同转染至293T细胞中组装为STAT3-siRNA慢病毒表达载体。流式测定病毒滴度后选择最适滴度感染SW480细胞并进行分选。Real-time PCR及Western blotting分析该慢病毒在SW480细胞中对于STAT3基因表达的影响。【结果】测序结果说明制备的慢病毒表达载体符合实验预期。该siSTAT3慢病毒感染SW480细胞后,流式细胞仪检测发现SW480细胞凋亡比率增加,Real-time PCR检测发现慢病毒对于STAT3 mRNA表达量的干扰效率为78.68%,Western blotting检测发现STAT3蛋白表达量下降,与对照组相比差异有统计学意义(P〈0.05)。【结论】本研究制备的STAT3-siRNA慢病毒表达载体,能够有效干扰结直肠癌SW480细胞株STAT3表达。 展开更多
关键词 STAT3 慢病毒表达载体 SIRNA SW480
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人参皂苷Rb1激活Nrf2/ARE通路对术后疲劳综合征老年大鼠骨骼肌氧化应激损伤的影响 预览 被引量:2
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作者 毛翔宇 庄成乐 +6 位作者 陈伟哲 刘舒 朱江 吴天添 张昌静 陈必成 余震 《医学研究杂志》 2014年第5期26-30,共5页
目的研究人参皂苷Rb1激活Nrf2/ARE通路来减轻术后疲劳综合征老年大鼠骨骼肌氧化应激损伤,探讨人参皂苷Rb1的抗疲劳机制。方法以70%中段小肠切除用以制备术后大鼠疲劳综合征模型。老年SD大鼠随机分为对照组、模型组和人参皂苷Rb1干预... 目的研究人参皂苷Rb1激活Nrf2/ARE通路来减轻术后疲劳综合征老年大鼠骨骼肌氧化应激损伤,探讨人参皂苷Rb1的抗疲劳机制。方法以70%中段小肠切除用以制备术后大鼠疲劳综合征模型。老年SD大鼠随机分为对照组、模型组和人参皂苷Rb1干预组,每组再分别按时间点分为术后6h,第1、3、7天组。在术后对应时间点进行旷场实验检测行为学变化后取骨骼肌,分光光度法测超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,RT—PCR检测Nrf2及下游Ⅱ相解毒酶基因Nqol表达。Westernblot检测Nrf2核转位情况。结果旷场实验显示,相比于对照组,模型组术后穿越格子数降低(第1、3天,P〈0.05),休息时间增加(第1、3、7天,P〈0.05);相比于模型组,干预组穿越格子数术后增加(第1、3天,P〈0.05)。相比于对照组,模型组SOD活性在术后增加(第3、7天,P〈0.05),MDA含量增加(第1、3、7天,P〈0.05);相比于模型组,干预组SOD活性术后增加(第3、7天,P〈0.05),MDA含量术后降低(第3、7天,P〈0.05)。RT—PCR结果表明,相比于对照组,模型组Nrf2术后表达增加(第1、3天,P〈0.05),Nqol术后表达有上升倾向(第1、3天,P〉0.05);相比于模型组,干预组Nrf2术后表达增加(6h、第1天、第3天,P〈0.05),Nqol表达增加(6h、第1天,P〈0.05)。Westernblot结果表明,相比于对照组,模型组核内Nrf2术后表达增加(6h、第1、3、7天,P〈0.05);相比于模型组,干预组核内Nrf2术后表达增加(6h、第1天、第3天,P〈0.05)。结论通过激活Nrf2/ARE通路,人参皂苷Rb1能减轻老年大鼠术后疲劳综合征骨骼肌氧化应激所致损伤,这可能是其抗术后疲劳的一种机制。 展开更多
关键词 人参皂苷RB1 术后疲劳综合征 NRF2 ARE信号通路 老年大鼠 氧化应激
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