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某医院重组人粒细胞刺激因子注射液的临床应用分析 预览
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作者 张永娜 贺宝霞 +2 位作者 赵秀莉 张振鑫 张文周 《安徽医药》 CAS 2019年第10期2094-2097,共4页
目的对某医院重组人粒细胞刺激因子(rhG?CSF)注射液的使用情况进行调查分析与点评,为临床合理用药提供参考。方法简单随机抽样法抽取郑州大学附属肿瘤医院2017年1月至2018年1月应用rhG?CSF注射液的住院病人病历1 203份进行回顾性调查,... 目的对某医院重组人粒细胞刺激因子(rhG?CSF)注射液的使用情况进行调查分析与点评,为临床合理用药提供参考。方法简单随机抽样法抽取郑州大学附属肿瘤医院2017年1月至2018年1月应用rhG?CSF注射液的住院病人病历1 203份进行回顾性调查,统计其相关用药信息,并对其临床应用合理性进行分析。结果在抽取的1 203份病历中,不合理病例有438份,占总病例数的36.4%,其中主要集中在适应证、用药时机、用药剂量及疗程等方面。结论该医院rhG?CSF注射液临床应用存在不合理现象,临床药师要与临床医师共同促进rhG?CSF注射液的规范使用。 展开更多
关键词 粒细胞集落刺激因子 重组蛋白质类 处方不当 重组人粒细胞刺激因子
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基于重组水疱性口炎病毒载体的寨卡疫苗构建及免疫原性评价
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作者 卢建博 郑文铝 +3 位作者 陈文文 余硕 刘珠果 戴秋云 《军事医学》 CAS 北大核心 2019年第3期192-197,共6页
目的建立表达寨卡病毒E蛋白或含prM蛋白的G蛋白缺失型重组水疱性口炎病毒(rVSV)载体疫苗,评价其免疫效果。方法选取E蛋白或含prM蛋白基因,分别构建入prVSVΔG和prVSV骨架质粒,通过反向遗传学操作得到2种缺失VSV-G蛋白的重组病毒疫苗(rVS... 目的建立表达寨卡病毒E蛋白或含prM蛋白的G蛋白缺失型重组水疱性口炎病毒(rVSV)载体疫苗,评价其免疫效果。方法选取E蛋白或含prM蛋白基因,分别构建入prVSVΔG和prVSV骨架质粒,通过反向遗传学操作得到2种缺失VSV-G蛋白的重组病毒疫苗(rVSV△G-E、rVSV△G-prM-2A-E)和2种含VSV-G蛋白的重组病毒疫苗(rVSV-E、rVSV-prM-2A-E),免疫BALB/c小鼠后进行体液免疫及细胞免疫水平检测,比较4种重组病毒疫苗免疫差异。结果rVSV△G-prM-2A-E免疫后诱导产生的特异性抗体与rVSV-prM-2A-E免疫后抗体水平相当(P>0.05),但显著高于rVSV△G-E免疫组(P<0.05);rVSV△G-prM-2A-E免疫诱导产生的中和抗体略高于rVSV△G-E和rVSVE免疫组,但低于rVSV-prM-2A-E免疫组;4种重组疫苗免疫后能有效诱导细胞分泌淋巴细胞因子白细胞介素-2(IL-2)、γ-干扰素(IFN-γ)产生,但诱导产生的IFN-γ水平无显著差异(P>0.05);rVSV△G-prM-2A-E及rVSV△G-E的扩增需要添加VSV-G。结论提供额外的VSV-G可成功包装并扩增rVSV△G-prM-2A-E,且该疫苗诱导产生较高中和抗体及细胞免疫反应,可进一步研发成实用疫苗。 展开更多
关键词 寨卡病毒 病毒包膜蛋白质类 重组蛋白质类 水疱性口炎 免疫原性 疫苗
小鼠抗人LSECtin单克隆抗体的制备与鉴定
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作者 彭贵林 刘静 +1 位作者 柳迪 唐丽 《军事医学》 CAS 北大核心 2019年第6期431-435,共5页
目的制备并鉴定小鼠抗人LSECtin(肝、淋巴结窦内皮细胞凝集素)单克隆抗体,为深入研究其功能奠定基础。方法利用CHO细胞制备人LSECtin-His融合蛋白,将其作为抗原免疫BALB/c小鼠,通过电融合获得能产生人LSECtin单克隆抗体的杂交瘤细胞。用... 目的制备并鉴定小鼠抗人LSECtin(肝、淋巴结窦内皮细胞凝集素)单克隆抗体,为深入研究其功能奠定基础。方法利用CHO细胞制备人LSECtin-His融合蛋白,将其作为抗原免疫BALB/c小鼠,通过电融合获得能产生人LSECtin单克隆抗体的杂交瘤细胞。用LSECtin重组蛋白作为检测原,筛选分泌LSECtin单克隆抗体的杂交瘤细胞株。分别通过流式检测和Western印迹实验(WB),对LSECtin单克隆抗体进行鉴定。结果获得分泌LSECtin单克隆抗体的杂交瘤细胞系。流式细胞术结果显示,共有5株抗体可特异性识别细胞表面表达的LSECtin;有2株可用于WB实验。结论获得了能应用于流式细胞术和WB实验的LSECtin单克隆抗体,为LSECtin的功能性研究奠定了基础。 展开更多
关键词 LSECtin 杂交瘤细胞 单克隆抗体 CHO细胞 重组蛋白质类 流式细胞术
牛妊娠相关糖蛋白1(bPAG1)的真核表达及纯化 预览
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作者 刘长彬 卢春霞 +2 位作者 杨华 张云生 石国庆 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第8期1944-1949,共6页
[目的]本研究旨在构建PCDNA3.1(-)-bPAG1重组表达载体,并在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞细胞中转染表达。[方法]通过基因优化和PCR法扩增得到bPAG1的全基因序列,经T4连接酶将载体PCDNA3.1(-)与酶切bPAG1片段连接,构建PCDNA3.1(-)-bPAG1重组载... [目的]本研究旨在构建PCDNA3.1(-)-bPAG1重组表达载体,并在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞细胞中转染表达。[方法]通过基因优化和PCR法扩增得到bPAG1的全基因序列,经T4连接酶将载体PCDNA3.1(-)与酶切bPAG1片段连接,构建PCDNA3.1(-)-bPAG1重组载体后转染到CHO细胞,经SDS-PAGE和Western Blot检测重组牛妊娠相关糖蛋白1(rbPAG1)的表达效果。[结果]PCR扩增得到1218 bp的bPAG1基因片段,构建的重组质粒PCDNA3.1(-)-bPAG1经双酶切获得约5400和1218 bp的2条片段,与预期相符;对重组载体测序,与优化后的基因序列完全一致;SDS-PAGE和Western Blot鉴定显示,获得相对分子质量约为62 kDa的bPAG1重组蛋白,通过Ni柱亲和层析纯化后,rbPAG1纯度可达88%。[结论]本研究为bPAG抗体的制备和奶牛早孕诊断技术的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 牛妊娠相关糖蛋白 重组蛋白 真核表达 PCDNA3.1(-)
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Sema4D血清水平与肥厚性心肌病心室重构的相关性研究
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作者 孙文恒 张天琦 《智慧健康》 2019年第18期5-6,共2页
目的研究肥厚型心肌病血清可溶性Sema4D(sSema4D)水平与后期出现左心室扩大后血清可溶性Sema4D(sSema4D)水平的变化,探讨其与肥厚型心肌病后期心事重构的相关性。方法测定42名肥厚型心肌病患者血清sSema4D、MMP14、B型利钠肽原(proBNP)... 目的研究肥厚型心肌病血清可溶性Sema4D(sSema4D)水平与后期出现左心室扩大后血清可溶性Sema4D(sSema4D)水平的变化,探讨其与肥厚型心肌病后期心事重构的相关性。方法测定42名肥厚型心肌病患者血清sSema4D、MMP14、B型利钠肽原(proBNP)水平;及心脏彩超:左心房内径(LAD),左室射血分数(LVEF),左心室短轴缩短率(LVFS),右心室内径(RVD),以及左心室舒张末期内径(LVDd)。结果①左室扩张组组血清sSema4D水平分别与左心室舒张末期内径(r=0.543,P<0.000),血清MMP14水平均呈正相关(r=0.352,P<0.001)。②两组之间血清sSema4D水平差异均有统计学意义(P<0.001)。结论肥厚型心肌病左室扩张患者MMP14蛋白水平与血清sSema4D蛋白两者呈正相关。并且血清sSema4D蛋白与左心室舒张末期内径(LVDd)呈正相关。 展开更多
关键词 重组蛋白质类 基质金属蛋白酶14 肥厚性心肌病 左室扩张
利用黑曲霉高效表达外源蛋白策略
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作者 段成宝 刘钢 《菌物研究》 CAS 2019年第3期147-154,共8页
黑曲霉Aspergillus niger作为一种广泛存在于自然界的丝状真菌,是极为重要的工业微生物,不仅是重要的柠檬酸生产菌,同时还在表达多种蛋白和生产次级代谢产物等方面应用广泛。虽然黑曲霉用于商业化生产外源蛋白已经有很长的历史,但大多... 黑曲霉Aspergillus niger作为一种广泛存在于自然界的丝状真菌,是极为重要的工业微生物,不仅是重要的柠檬酸生产菌,同时还在表达多种蛋白和生产次级代谢产物等方面应用广泛。虽然黑曲霉用于商业化生产外源蛋白已经有很长的历史,但大多数外源蛋白的表达水平不高,亟需研究高效表达外源蛋白的策略。文中概述了通过选用强启动子、增加基因拷贝数、使用蛋白酶缺陷菌株、采用基因融合表达、增加糖基化修饰等策略来增强黑曲霉表达外源蛋白的进展,旨在为深入开展该领域的研究工作提供参考。 展开更多
关键词 黑曲霉 重组蛋白 异源表达
Bst DNA聚合酶的纯化及等温扩增检测体系的构建 预览
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作者 谭拥军 吴莎莎 +1 位作者 谭桂湘 向勤 《湖南大学学报:自然科学版》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第12期98-106,共9页
Bst DNA聚合酶是等温扩增反应中的一个关键酶,但由于专利限制,目前国内实验室所使用的Bst DNA聚合酶大多需要从国外进口,价格昂贵且长途运输影响酶活性,因此亟需自主生产出Bst DNA聚合酶应用于等温扩增检测技术.通过构建Bst Fragement... Bst DNA聚合酶是等温扩增反应中的一个关键酶,但由于专利限制,目前国内实验室所使用的Bst DNA聚合酶大多需要从国外进口,价格昂贵且长途运输影响酶活性,因此亟需自主生产出Bst DNA聚合酶应用于等温扩增检测技术.通过构建Bst Fragement的原核表达质粒,采用原核蛋白表达系统和His-Tag亲和纯化手段,制备成本低,活性高,特异性强的Bst DNA聚合酶.同时,针对特定的模板,对自制Bst DNA聚合酶的扩增反应进行了进一步优化,用不同的产物鉴定方法对扩增效果进行检测,并最终筛选出该酶最优的扩增反应条件为60 mM K^+、30 mM(NH4)2SO4、pH为9.0.最后,验证了Bst DNA聚合酶能用于快速准确检测肺炎支原体、肺炎衣原体,降低了相关病原体核酸检测的成本,为之后核酸检测在基层医疗的更广泛应用提供了条件. 展开更多
关键词 BST DNA聚合酶 重组蛋白 扩增 核酸检测
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高等植物叶绿体表达重组蛋白研究进展
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作者 林优红 程霞英 +2 位作者 杨东风 梁宗锁 杨宗岐 《生物工程学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期631-643,共13页
近年来,基因工程技术发展迅速,许多重组蛋白得以表达。其中利用植物生物反应器表达特异药物蛋白为人类一些重要疾病的预防和治疗提供了新途径。植物叶绿体遗传转化和表达系统成为目前植物生物反应器的研究热点。因结构和遗传上的特殊性... 近年来,基因工程技术发展迅速,许多重组蛋白得以表达。其中利用植物生物反应器表达特异药物蛋白为人类一些重要疾病的预防和治疗提供了新途径。植物叶绿体遗传转化和表达系统成为目前植物生物反应器的研究热点。因结构和遗传上的特殊性,高等植物叶绿体在重组蛋白表达方面具有独特优势,外源基因表达量高、定点整合,而且叶绿体母系遗传特性保证了生物安全性。很多重要药用蛋白质在植物叶绿体中表达成功。烟草作为高等植物叶绿体转化模式植物,在疫苗抗原、抗体等药物蛋白和其他重要重组蛋白表达方面取得显著进展。高等植物叶绿体遗传转化也为叶绿体基因的表达和调控机制的研究提供新的技术和方法。文中从叶绿体遗传转化原理、载体构建、重组蛋白和重要药物蛋白在叶绿体中的表达以及重组蛋白表达对植物代谢和性状影响等多个角度,对高等植物叶绿体遗传转化体系研究的新进展进行了综述,以期为叶绿体表达平台的开发和重要药用蛋白质的表达提供新思路。 展开更多
关键词 高等植物 叶绿体表达 生物反应器 重组蛋白
一种高效制备人β2微球蛋白标准物质的方法和应用 预览
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作者 邹丽辉 王萌 +3 位作者 黄薇 张恩毅 肖飞 王玉梅 《中国医药生物技术》 2018年第5期412-417,共6页
目的构建重组人β2微球蛋白表达体系,高效快速获取β2微球蛋白,为临床实验室检测参考物质的制备奠定基础。方法优化人β2微球蛋白序列,人工合成优化序列片段并与麦芽糖结合蛋白(MBP)分别克隆至pRSF-Duet载体以构建重组人β2做球蛋... 目的构建重组人β2微球蛋白表达体系,高效快速获取β2微球蛋白,为临床实验室检测参考物质的制备奠定基础。方法优化人β2微球蛋白序列,人工合成优化序列片段并与麦芽糖结合蛋白(MBP)分别克隆至pRSF-Duet载体以构建重组人β2做球蛋A表达质粒。使用大肠杆菌E.coli BL21(DE3)对重组质粒进行诱导表达,TEV蛋白酶切除MBP,全自动生化仪测定β2微球蛋白浓度。对重组蛋A在4℃和-20℃储存条件下的稳定性进行检测,对β2做球蛋白纯品与校准品的互通性进行分析。结果成功构建重组人β2微球蛋白表达质粒,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)成功诱导重组蛋白表达,MBP-β2微球蛋白(MBP-β2-MG)浓度可达100mg/L,β2微球蛋白浓度可达185mg/L。在4℃和-20℃储存条件下监测64周,β2微球蛋白稳定存在。β2微球蛋白纯品与RANDOX生化校准品互通性良好。结论通过密码子优化,成功构建了重组β2微球蛋白的高效表达系统,β2微球蛋白可溶性高,稳定性好,与国际通用校准品互通性好,可充分满足该产品诊断试剂制备的需求。 展开更多
关键词 Β2微球蛋白 重组蛋白质类 参考物质
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重组人肝再生因子可溶性表达及活性鉴定
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作者 李春男 毛羚羽 +5 位作者 黄瑞麟 高慧英 岳鹏升 丁可盺 贾东明 崔春萍 《军事医学》 CSCD 北大核心 2018年第5期339-343,共5页
目的探索重组人肝细胞生成素Cn(HPPCn)蛋白可溶性表达方法和纯化工艺,提高其比活性和蛋白产量,为发展新的急性肝病治疗药物奠定基础。方法利用分子生物学方法构建4个HPPCn原核表达栽体。分另q与不同的分子伴侣融合表达,助其表达后... 目的探索重组人肝细胞生成素Cn(HPPCn)蛋白可溶性表达方法和纯化工艺,提高其比活性和蛋白产量,为发展新的急性肝病治疗药物奠定基础。方法利用分子生物学方法构建4个HPPCn原核表达栽体。分另q与不同的分子伴侣融合表达,助其表达后正确折叠。利用亲和层析方法纯化获得的融合蛋白,MTS法检测所得重组蛋白促进细胞增殖活性。结果成功构建了4个HPPCn表达载体,其中pMBP-P-HPPCn实现了rhHPPCn的可溶性表达。结论首次建立了重组HPPCn蛋白的可溶性生产方法,并对其蛋白活性进行分析和鉴定。 展开更多
关键词 肝细胞生长因子 肝细胞生成素Cn 重组蛋白质类 可溶性表达 MBP融合蛋白 蛋白纯化 肝细胞增殖
抗肿瘤重组蛋白疫苗的研究进展
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作者 孙田华 徐静 张云涛 《国际生物制品学杂志》 CAS 2018年第1期16-20,共5页
肿瘤疫苗包括肽或蛋白疫苗、肿瘤细胞疫苗、抗独特型疫苗、树突状细胞疫苗、DNA疫苗及病毒载体类疫苗等.重组蛋白疫苗是通过对目的抗原基因的重组、构建、表达得到抗原蛋白,最终制备成的疫苗.随着重组技术及表达纯化技术的日益成熟,重... 肿瘤疫苗包括肽或蛋白疫苗、肿瘤细胞疫苗、抗独特型疫苗、树突状细胞疫苗、DNA疫苗及病毒载体类疫苗等.重组蛋白疫苗是通过对目的抗原基因的重组、构建、表达得到抗原蛋白,最终制备成的疫苗.随着重组技术及表达纯化技术的日益成熟,重组蛋白疫苗为肿瘤免疫治疗研究提供了一种研发思路.此文针对肿瘤抗原的重组蛋白疫苗做一综述. 展开更多
关键词 癌症疫苗 重组蛋白质类 抗原 肿瘤
重组人血小板源性生长因子对人视网膜血管内皮细胞生物学行为的促进作用及其机制 预览 被引量:1
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作者 李丹 刘高勤 +2 位作者 陈磊 王梦娇 陆培荣 《中华实验眼科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第1期34-39,共6页
目的探讨重组人血小板源性生长因子-BB(rhPDGF-BB)对人视网膜血管内皮细胞(hRVECs)增生和迁移的影响及其作用机制。方法采用含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养液培养hRVECs,分别将10、50和200 ng/ml rhPDGF-BB加入对数生长期hRVECs... 目的探讨重组人血小板源性生长因子-BB(rhPDGF-BB)对人视网膜血管内皮细胞(hRVECs)增生和迁移的影响及其作用机制。方法采用含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养液培养hRVECs,分别将10、50和200 ng/ml rhPDGF-BB加入对数生长期hRVECs的培养液,未添加rhPDGF-BB者作为正常对照组。采用细胞计数试剂盒-8(CCK8)法检测各组细胞的增生情况;采用细胞划痕法检测细胞相对迁移面积(迁移后无细胞区面积/划痕初期无细胞区面积);采用逆转录PCR法检测hRVECs中rhPDGF-BB受体(rhPDGF-BBR)mRNA的相对表达量;采用实时荧光定量PCR法检测hRVECs中VEGF mRNA和整合素mRNA相对表达量。结果培养的hRVECs生长良好,用rhPDGF-BBR引物能扩增出与引物设计长度相符的表达条带。正常对照组及10、50和200 ng/ml rhPDGF-BB组培养细胞后24 h细胞增生值(A)分别为1.01±0.05、1.09±0.04、1.10±0.02和1.13±0.05,10、50和200 ng/ml rhPDGF-BB组A值明显高于正常对照组,差异均有统计学意义(t=2.504、3.430、3.483,均P〈0.05);细胞划痕试验后24 h,正常对照组及10、50和200 ng/ml rhPDGF-BB组细胞相对迁移面积分别为0.42±0.10、0.38±0.09、0.55±0.06和0.61±0.05,划痕试验后48 h细胞相对迁移面积分别为0.75±0.06、0.81±0.02、0.87±0.02和0.98±0.02,总体比较差异均有统计学意义(F分组=16.283,P=0.000;F时间=209.129,P=0.000),随着rhPDGF-BB剂量增加和作用时间延长,细胞相对迁移面积均明显增加;实时荧光定量PCR法检测显示正常对照组及10、50和200 ng/ml rhPDGF-BB组hRVECs中整合素mRNA相对表达量分别为1.06±0.02、1.30±0.10、1.20±0.16和1.27±0.08,VEGF mRNA相对表达量分别为0.97±0.05、1.06±0.16、1.58±0.18和1.66±0.21,其中50 ng/ml和200 ng/ml rhPDGF-BB组细胞中整合素mRNA及VEGF mRNA相对表达量均明显高于正常对照组,差异均有统计学意义(整合素mRNA:t=3.900 展开更多
关键词 血管内皮细胞/细胞学 病理性新生血管/代谢 血小板源性生长因子 血小板源性生长因子受体 重组蛋白 细胞培养 整合素 血管内皮生长因子
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CHO细胞重组抗体表达载体的构建策略及进展
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作者 李艳梅 田政伟 +4 位作者 徐丹华 王稳 王小引 张贵虎 王天云 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2018年第11期1958-1964,共7页
近年来,重组蛋白被用来治疗多种不同的疾病,其中重组单克隆抗体是增长最快速的一类生物治疗性重组蛋白。中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞是目前最常用的重组抗体生产的宿主细胞。表达载体是重组抗体表达的重要部分,直接... 近年来,重组蛋白被用来治疗多种不同的疾病,其中重组单克隆抗体是增长最快速的一类生物治疗性重组蛋白。中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary, CHO)细胞是目前最常用的重组抗体生产的宿主细胞。表达载体是重组抗体表达的重要部分,直接影响抗体表达的水平和质量。目前, CHO细胞重组抗体表达载体的构建策略主要有单顺反子表达载体、多启动子表达载体、IRES连接载体、Furin-2A连接载体、抗体融合蛋白等。其中, Furin-2A连接载体由于具有多种优点而逐渐成为表达重组抗体的一种重要策略,尤其是其具有较高的自剪切效率、连接的两个基因表达较为平衡、基因序列短小等优点。该文概括了目前构建CHO细胞重组抗体表达载体的策略、优缺点及其进展。 展开更多
关键词 重组蛋白 CHO细胞 单克隆抗体 IRES Furin-2A
Suppression of colorectal tumorigenesis by recombinant Bacteroides fragilis enterotoxin-2 in vivo 预览
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作者 You Lv Tao Ye +6 位作者 Hui-Peng Wang Jia-Ying Zhao Wen-Jie Chen Xin Wang Chen-Xia Shen Yi-Bin Wu Yuan-Kun Cai 《世界胃肠病学杂志:英文版》 SCIE CAS 2017年第4期603-613,共11页
AIM To evaluate the impact of recombinant Bacteroides fragilis enterotoxin-2(BFT-2, or Fragilysin) on colorectal tumorigenesis in mice induced by azoxymethane/dextran sulfate sodium(AOM/DSS).METHODS Recombinant pro BF... AIM To evaluate the impact of recombinant Bacteroides fragilis enterotoxin-2(BFT-2, or Fragilysin) on colorectal tumorigenesis in mice induced by azoxymethane/dextran sulfate sodium(AOM/DSS).METHODS Recombinant pro BFT-2 was expressed in Escherichia coli strain Rosetta(DE3) and BFT-2 was obtained and tested for its biological activity via colorectal adenocarcinoma cell strains SW-480. Seventy C57BL/6J mice were randomly divided into a blank(BC; n = 10), model(AD; n = 20), model + low-dose toxin(ADLT; n = 20, 10 μg), and a model + high-dose toxin(ADHT; n = 20, 20 μg) group. Mice weight, tumor formation and pathology were analyzed. Immunohistochemistrydetermined Ki-67 and Caspase-3 expression in normal and tumor tissues of colorectal mucosa.RESULTS Recombinant BFT-2 was successfully obtained, along with its biological activity. The most obvious weight loss occurred in the AD group compared with the ADLT group(21.82 ± 0.68 vs 23.23 ± 0.91, P < 0.05) and the ADHT group(21.82 ± 0.68 vs 23.57 ± 1.06, P < 0.05). More tumors were found in the AD group than in the ADLT and ADHT groups(19.75 ± 3.30 vs 6.50 ± 1.73, P < 0.05; 19.75 ± 3.30 vs 6.00 ± 2.16, P < 0.05). Pathology showed that 12 mice had adenocarcinoma and 6 cases had adenoma in the AD group. Five mice had adenocarcinoma and 15 had adenoma in the ADLT group. Four mice had adenocarcinoma and 16 had adenoma in the ADHT group. The incidence of colorectal adenocarcinoma in both the ADHT group and the ADHT group was reduced compared to that in the AD group(P < 0.05, P < 0.05). The positive rate of Ki-67 in the ADLT group and the ADHT group was 50% and 40%, respectively, both of which were lower than that found in the AD group(94.44%, P < 0.05, P < 0.05). Caspase-3 expression in the ADLT group and the ADHT group was 45% and 55%, both of which were higher than that found in the BC group(16.67%, P < 0.05, P < 0.05).CONCLUSION Oral administration with lower-dose biologically active recombinant BFT-2 inhibited colorectal tumorigenesis in mice. 展开更多
关键词 Colorectal Bacteroides fragilis 毒素 Fragilysin Recombinant 蛋白质 老鼠
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Green Fluorescent Protein Recombinant Nisin as a Probe for Detection of Gram-Positive Bacteria 预览
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作者 Xiqian Tan Ye Han +1 位作者 Huazhi Xiao Zhijiang Zhou 《天津大学学报:英文版》 EI CAS 2017年第4期334-339,共6页
A great amount of foodborne pathogens were Gram-positive (G?) bacteria, a threat to public health. In this study, considering the binding ability of nisin towards G-bacteria and the stable fluorescent ability of EGFPp... A great amount of foodborne pathogens were Gram-positive (G?) bacteria, a threat to public health. In this study, considering the binding ability of nisin towards G-bacteria and the stable fluorescent ability of EGFPprotein, a fluorescent nisin–EGFP protein probe was constructed by a gene engineering method. Nisin and EGFP were used as the receptor and fluorophore, respectively, to detect G? bacteria. The nisin and egfp gene were amplified separately according to the sequence published in GenBank using unique primers. The two genes were cloned into a pET-28b(?) vector resulting in a pET-28b(?)–nisin–egfp vector. The vector was transferred into Escherichia coli (E. coli) BL21 (DE3) for expression. The expressed protein was extracted, purified by a Ni–NTA column, and then tested by the SDS-PAGE method to confirm its molecular weight. Listeria monocytogenes (L.monocytogenes), Staphylococcus aureus (S. aureus), and Micrococcus luteus (M. luteus) were used as the representations of G? bacteria. E. coli O157, representing the gram-negative (G-) bacteria, was used as a negative control. The binding specificity of the recombinant protein was performed on two types of bacteria and then detected through fluorescent microscopy. The results indicated that the nisin–EGFP probe could detect G? bacteria at 108 CFU/mL. 展开更多
关键词 Nisin–EGFP GRAM-POSITIVE bacteria Fluorescent DETECTION PROBE
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血清可溶性Sema4D水平与扩张型心肌病心室重构的相关性研究 预览 被引量:12
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作者 唐俊燕 杨国杰 +4 位作者 李栋博 魏子寒 李国栋 秦鹏 朱晨恺 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2017年第1期63-66,共4页
目的 :研究扩张型心肌病慢性心力衰竭患者血清可溶性Sema4D(s Sema4D)与基质金属蛋白酶14(MMP14)水平的变化,探讨s Sema4D与扩张型心肌病慢性心力衰竭心室重构的相关性。方法 :选取86例新入院的扩张型心肌病慢性心力衰竭患者为扩... 目的 :研究扩张型心肌病慢性心力衰竭患者血清可溶性Sema4D(s Sema4D)与基质金属蛋白酶14(MMP14)水平的变化,探讨s Sema4D与扩张型心肌病慢性心力衰竭心室重构的相关性。方法 :选取86例新入院的扩张型心肌病慢性心力衰竭患者为扩张型心肌病组,32例健康体检者为正常对照组。酶联免疫吸附法检测血清s Sema4D、MMP14、B型利钠肽原(pro BNP)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平;彩色多普勒超声心动仪检测左心房内径(LAD)、右心室内径(RVD)、左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期内径(LVDd)、左心室短轴缩短率(LVFS)。对s Sema4D、MMP14及左心室重构指标进行相关性分析。结果 :两组间血清s Sema4D、MMP14水平差异均有统计学意义(P〈0.001)。扩张型心肌病组血清s Sema4D水平分别与血清MMP14水平、左心室舒张末期内径呈正相关(r=0.462,P〈0.001;r=0.643,P〈0.000)。结论 :扩张型心肌病慢性心力衰竭患者血清s Sema4D蛋白与MMP14蛋白水平、左心室舒张末期内径呈正相关。 展开更多
关键词 重组蛋白质类 基质金属蛋白酶14 心肌病 扩张型 心力衰竭
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重组人乳铁蛋白诱导人口腔癌Tea8113细胞自噬及凋亡 预览
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作者 肖莉 张继斌 李宝霞 《中华口腔医学研究杂志(电子版)》 CAS 2017年第6期346-353,共8页
目的 研究重组人乳铁蛋白(rhLF)对人口腔癌Tca8113细胞增殖及凋亡的影响.方法 MTT法检测不同浓度的rhLF作用细胞不同时间对其增殖的影响,并分别用不同浓度的rhLF处理细胞后观察其对集落克隆形成的影响;不同浓度的rhLF处理细胞后线粒... 目的 研究重组人乳铁蛋白(rhLF)对人口腔癌Tca8113细胞增殖及凋亡的影响.方法 MTT法检测不同浓度的rhLF作用细胞不同时间对其增殖的影响,并分别用不同浓度的rhLF处理细胞后观察其对集落克隆形成的影响;不同浓度的rhLF处理细胞后线粒体膜电位的变化.采用免疫荧光技术检测rhLF处理前后自噬体的形成情况.免疫蛋白印迹法(Western blot)检测不同浓度rhLF处理细胞后细胞自噬相关蛋白P62和LC3表达变化,AnnexinⅤ-PI双染色检测rhLF对细胞凋亡的影响;Western blot检测不同浓度的rhLF处理细胞后聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达变化.所有数据采用SPSS 13.0统计软件包进行统计学分析.结果 rhLF对口腔癌Tca8113细胞的增殖及存活有明显的增殖抑制作用,并呈药物浓度和时间依赖性,且各药物处理组与对照组相比有统计学意义(P〈0.05).rhLF抑制口腔癌Tca8113细胞克隆形成;JC-1荧光检测显示口腔癌Tca8113细胞经rhLF处理后其线粒体膜电位下降;rhLF处理后形成自噬体,不同浓度rhLF处理细胞后细胞自噬相关蛋白P62表达下降及LC3-Ⅱ表达增加,0、100、200μg/ml的rhLF处理口腔癌Tca8113细胞48 h的凋亡率为3.9%、8.2%、42.6%,组间差异有统计学意义(P〈0.05).Western blot结果显示,rhLF处理口腔癌Tca8113细胞后PARP、Caspase-3被激活.结论 rhLF能显著抑制Tca8113细胞的增殖并诱导其细胞凋亡,其机制与线粒体凋亡途径的激活应激有关. 展开更多
关键词 口腔肿瘤 乳铁蛋白 重组蛋白类 细胞凋亡 聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3
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重组4-1BB配体对治疗性重组人乳头瘤病毒16型蛋白疫苗的佐剂作用
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作者 高孟 高丽美 +5 位作者 朱赟 陈刚 吴洁 许玲敏 罗永能 庄昉成 《国际生物制品学杂志》 CAS 2017年第2期68-74,共7页
目的研究重组4-1BB配体(recombinant 4-1BB ligand,r4—1BBL)作为佐剂对治疗性重组人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirus16,HPVl6)蛋白疫苗(HPVl6蛋白疫苗)免疫效果的影响。方法对4-1BBL胞外功能区进行密码子优化,并通过NdeI... 目的研究重组4-1BB配体(recombinant 4-1BB ligand,r4—1BBL)作为佐剂对治疗性重组人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirus16,HPVl6)蛋白疫苗(HPVl6蛋白疫苗)免疫效果的影响。方法对4-1BBL胞外功能区进行密码子优化,并通过NdeI和XhoI酶切位点定向插入pET28a表达载体。将获得的重组表达载体转化至大肠埃希菌BL21(DE3),并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导重组蛋白表达。用蛋白质印迹法对重组蛋白进行鉴定,并用非还原性十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和电子显微镜分析重组蛋白结构。用CCK-8试剂盒检测纯化r4-IBBL对小鼠T细胞体外增殖的影响。同时将r4-1BBL与HPV16蛋白疫苗联合免疫C57BL/6小鼠,用酶联免疫斑点试验检测小鼠的细胞免疫应答水平,观察r4-1BBL对HPV16蛋白疫苗抑制肿瘤生长的影响。结果密码子优化的4-1BBL胞外功能区能在重组表达载体中表达,且表达产物同时以包涵体和可溶性形式存在。可溶性产物的结构主要为二聚体,电子显微镜下可以观察到类似亚单位的结构。纯化r4-1BBL可促进小鼠脾淋巴细胞的体外增殖。与单纯HPV16蛋白疫苗相比,r4—1BBL联合HPV16蛋白疫苗能诱导更强的特异性细胞免疫应答(t=3.525,P=0.024)和产生更明显的肿瘤生长抑制作用(t=2.534,P=0.021)。结论r4-1BBLL在小鼠中提高HPV16蛋白疫苗的免疫效果,具有作为HPV16蛋白疫苗佐剂的潜力。 展开更多
关键词 重组蛋白类 佐剂 免疫 人乳头瘤病毒16 乳头状瘤病毒疫苗
重组蛋白正确折叠与修饰的提高策略 被引量:4
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作者 李家冬 王弘 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期591-600,共10页
随着分子生物学的研究和不断发展,基因表达技术有了很大的进步。到目前为止,人们已经研究出多种表达系统用以生产重组蛋白,但没有一种表达系统能够完全满足当前需要,各种活性肽和蛋白质类药物的需求逐年攀升,不仅对表达量有要求,更需要... 随着分子生物学的研究和不断发展,基因表达技术有了很大的进步。到目前为止,人们已经研究出多种表达系统用以生产重组蛋白,但没有一种表达系统能够完全满足当前需要,各种活性肽和蛋白质类药物的需求逐年攀升,不仅对表达量有要求,更需要正确的翻译后折叠、修饰,使表达蛋白和天然构象更加接近,具有更高的活性和稳定性。结合目前的研究工作从表达系统与宿主、分泌表达、共表达、融合表达和培养条件等方面综述了其对重组蛋白正确折叠以及翻译后修饰的影响,并提出可能改进的策略。 展开更多
关键词 重组蛋白 表达系统 折叠 翻译后修饰
抗IL-4R单链抗体原核表达载体的构建与表达 预览 被引量:1
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作者 杨光勇 刘茜明 +2 位作者 刘莉莉 王文佳 何光志 《天津医药》 CAS 2017年第9期897-901,共5页
目的 通过BL21(DE3)原核表达系统制备抗白细胞介素-4受体(IL-4R)鼠抗人单链抗体(scFv).方法在前期研究结果的基础上优化抗IL-4R scFv序列,优化后分析scFv序列,构建重组质粒pET-32a-scFv,将该重组质粒酶切鉴定,将其转入BL21(DE3... 目的 通过BL21(DE3)原核表达系统制备抗白细胞介素-4受体(IL-4R)鼠抗人单链抗体(scFv).方法在前期研究结果的基础上优化抗IL-4R scFv序列,优化后分析scFv序列,构建重组质粒pET-32a-scFv,将该重组质粒酶切鉴定,将其转入BL21(DE3)原核表达菌进行诱导表达,并进行SDS-PAGE分析检测,对表达蛋白进行纯化和复性,通过SDS-PAGE分析抗IL-4R单链抗体的分子质量,运用Western blot检测融合蛋白的特异性.结果插入pET-32a载体的scFv序列长度761 bp,抗IL-4R单链抗体的分子质量在45 ku左右,重组蛋白具有较高的特异性.结论本实验成功构建pET32a-scFv原核表达系统,重组蛋白具有较高的免疫反应性,为进一步研究抗IL-4R单链抗体作为药物靶点提供了工作基础. 展开更多
关键词 受体 白细胞介素4 重组蛋白质类 电泳 聚丙烯酰氨凝胶 单链抗体 原核表达 INTERLEUKIN-4
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