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N-乙酰半胱氨酸活性炭缓释微囊对幼鼠非酒精性脂肪肝病miRNA的影响 预览 被引量:2
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作者 周红萍 杨兴鑫 +7 位作者 庄让笑 邵益丹 席建军 廖莉 任白鹭 王萍萍 余舒莹 史婷婷 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2018年第3期263-270,共8页
目的:初步研究N-乙酰半胱氨酸活性炭缓释微囊对幼鼠非酒精性脂肪肝病的保护作用,并且探讨其对mi RNA及相应的靶基因的影响。方法:采用高脂饲料喂养的方法复制幼鼠非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)模型... 目的:初步研究N-乙酰半胱氨酸活性炭缓释微囊对幼鼠非酒精性脂肪肝病的保护作用,并且探讨其对mi RNA及相应的靶基因的影响。方法:采用高脂饲料喂养的方法复制幼鼠非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)模型。HE染色观察幼鼠肝组织脂肪变性程度;micro RNA芯片检测肝组织的mi RNA表达谱;荧光定量PCR对mi RNA进行验证;采用荧光定量PCR和Western blot法对目标mi RNA进行靶基因预测并进行验证。结果:根据检测结果,初步确定mi RNA199a-5p和mi RNA-378-5p是NAFLD的关键mi RNA,脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,Lpl)是mi RNA199a-5p的靶基因,固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element binding proteins-1,Srebp1)、CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT enhancer binding protein alfa,C/EBP-α)是mi RNA-378-5p的靶基因。结论:推测N-乙酰半胱氨酸活性炭缓释微囊可能通过上调Lpl表达水平,下调Srebp1和C/EBP-α表达水平。这些基因与脂肪肝密切相关,可能对幼鼠NAFLD具有保护作用。 展开更多
关键词 N-乙酰半胱氨酸 非酒精性脂肪肝病 MIRNA LPL Srebp1 C/EBP-α
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鸡C/EBP—α基因表达载体的构建及抗血清制备 被引量:3
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作者 王娉 王启贵 +1 位作者 李辉 张富春 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期 978-981,共4页
目的:构建鸡C/EBP-α基因原核和真核表达载体及制备高效价的抗血清,为在蛋白质水平研究鸡C/EBP—α基因的功能以及与其他脂肪细胞分化调控基因间的时空协同关系奠定基础。方法:采用RT—PCR的方法,根据已知鸡的C/EBP—α基因cDNA... 目的:构建鸡C/EBP-α基因原核和真核表达载体及制备高效价的抗血清,为在蛋白质水平研究鸡C/EBP—α基因的功能以及与其他脂肪细胞分化调控基因间的时空协同关系奠定基础。方法:采用RT—PCR的方法,根据已知鸡的C/EBP—α基因cDNA序列,获取鸡C/EBP—α基因的cDNA片段,测序正确后分别克隆到原核表达载体pGEX-4T-1和真核表达载体pcDNA3中。重组质粒pGEX-4T-1/C/EBP—α转化大肠杆菌B121(DE3),不同浓度的IPTG诱导后,用SDS—PAGE检测蛋白表达情况;真核表达载体pcDNA3/C/EBP—α应用水压转染法,经RT—PCR检测外源C/EBP—α基因在小鼠肝脏中的表达情况,然后采用“DNA prime—protein boost”策略免疫小鼠,制备高效价的抗血清,应用Western blot检测抗血清的特异性。结果:构建了鸡C/EBP—α基因的原核和真核表达载体;SDS—PAGE显示C/EBP—α得到了特异性的表达;RT—PCR结果提示C/EBP—dmRNA在小鼠肝脏中表达;ELISA和Western blot结果表明基因免疫小鼠产生了高效价和特异性强的抗血清。结论:成功构建了鸡C/EBP—α基因的原核pGEX-4T-1/C/EBP—α和真核表达载体pcDNA3/C/EBP—α,外源基因C/EBP—dmRNA能在小鼠肝脏中有效表达,同时制备了高效价、特异性强的抗血清。 展开更多
关键词 家鸡 C/EBPα基因 载体构建 抗体
三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中PRMT1通过C/EBPα调控c-myc表达 预览
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作者 林群 刘丽铭 +2 位作者 代辉 张艳君 张业 《基础医学与临床》 CSCD 2019年第7期949-953,共5页
目的研究在三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中精氨酸甲基转移酶PRMT1通过C/EBPα调控c-myc表达的机制。方法在MDA-MB-231细胞中分别过表达C/EBPα和敲低PRMT1,在蛋白和mRNA水平检测c-myc表达量;ChIP-qPCR和EMSA检测C/EBPα与c-myc启动子... 目的研究在三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中精氨酸甲基转移酶PRMT1通过C/EBPα调控c-myc表达的机制。方法在MDA-MB-231细胞中分别过表达C/EBPα和敲低PRMT1,在蛋白和mRNA水平检测c-myc表达量;ChIP-qPCR和EMSA检测C/EBPα与c-myc启动子的结合能力;荧光素酶双报告基因检测PRMT1和C/EBPα对c-myc启动子的调控作用。结果过表达C/EBPα、敲低PRMT1后,c-myc表达明显下降;C/EBPα蛋白3个甲基化位点35位、156位和165位精氨酸突变为苯丙氨酸后(3RF),C/EBPα对c-myc启动子的转录抑制明显减弱。而3个位点同时突变成赖氨酸后(3RK),PRMT1对c-myc的调控作用消失。结论在三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中,PRMT1通过甲基化C/EBPα调控c-myc的转录。 展开更多
关键词 PRMT1 C/EBPΑ C-MYC 精氨酸甲基化
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C/EBPα基因在老年多发性骨髓瘤中的表达及临床意义
4
作者 臧玉柱 陈香丽 +2 位作者 白炎亮 张文荟 于润红 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期123-128,共6页
目的:研究C/EBPα基因在老年多发性骨髓瘤(MM)中的表达变化及其临床预后意义。方法:自2015年2月-2017年10月在我院接受治疗的69例老年MM患者作为MM组,同时选取38例健康体检者作为对照组,采集2组人员骨髓并分离单个核细胞。采用RT-PCR方... 目的:研究C/EBPα基因在老年多发性骨髓瘤(MM)中的表达变化及其临床预后意义。方法:自2015年2月-2017年10月在我院接受治疗的69例老年MM患者作为MM组,同时选取38例健康体检者作为对照组,采集2组人员骨髓并分离单个核细胞。采用RT-PCR方法检测样本中单个核细胞的C/EBPα基因表达水平,采用Western blot方法检测C/EBPα蛋白表达水平,采用免疫组织化学方法检测骨髓组织中的C/EBPα水平,探讨C/EBPα基因表达与MM患者临床特征及生存期的相关性。结果:MM患者中C/EBPα基因mRNA及其蛋白表达水平均明显低于对照组(P <0. 05)。C/EBPα表达水平与MM患者的ISS分期、CRP、Ca2+、β2-MG、LDH及骨髓瘤细胞比例均有明显相关性(P <0. 05)。C/EBPα基因的表达与MM患者的性别、年龄、免疫球蛋白分型、Hb水平无相关性(P>0. 05)。通过免疫组织化学实验发现,对照组骨髓样本染色较深,CR、PR及复发的MM患者骨髓样本染色依次减轻。通过Western blot检测发现,CR组MM患者C/EBPα蛋白的水平均显著高于PR和复发组患者(P <0. 05)。KaplanMeier生存分析发现,C/EBPα基因高表达的患者组OS和DFS均优于低表达组(P <0. 05)。多因素Cox回归分析表明,CRP、骨髓瘤细胞比例及C/EBPα基因表达水平是影响OS及PFS独立因素(P <0. 05)。结论:C/EBPα基因在MM患者中表达水平较低,其低水平表达可能刺激MM的发生;C/EBPα基因表达与MM疾病发展密切相关。 展开更多
关键词 C/EBPα基因 多发性骨髓瘤 临床预后
肺泡Ⅱ型上皮细胞CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)的161位赖氨酸存在小泛素化修饰
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作者 郝晓波 卢红艳 +2 位作者 朱玥 万峰云 万雪晴 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期158-161,共4页
目的明确人肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)中CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)能否发生小泛素相关修饰物(SUMO)修饰,并进一步鉴定其修饰位点。方法采用免疫荧光双标法检测C/EBPα和SUMO1在人AECⅡ中的表达情况。免疫共沉淀(Co-IP)检测C/EBPα和... 目的明确人肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)中CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)能否发生小泛素相关修饰物(SUMO)修饰,并进一步鉴定其修饰位点。方法采用免疫荧光双标法检测C/EBPα和SUMO1在人AECⅡ中的表达情况。免疫共沉淀(Co-IP)检测C/EBPα和SUMO1在AECⅡ中的相互作用,明确人AECⅡ中C/EBPα能否发生SUMO化修饰。利用SUMOsp软件预测人C/EBPα的SUMO化修饰位点为C/EBPα上第161位赖氨酸(即K161),构建野生型GFP-C/EBPα质粒和突变型GFP-K161R质粒并转染AECⅡ,采用Co-IP鉴定C/EBPα的SUMO化位点。结果免疫荧光双标发现AECⅡ中SUMO1和C/EBPα存在共定位现象,且主要定位于细胞核中;C/EBPα和SUMO1的Co-IP结果出现C/EBPα-SUMO条带,提示C/EBPα能与SUMO1相互作用。野生型GFP-C/EBPα转染的AECⅡ中,可检测到C/EBPα-SUMO特异性条带,而突变型GFP-C/EBPα转染的AECⅡ中,不能检测到C/EBPα-SUMO特异性条带,提示C/EBPα的SUMO化修饰位点为C/EBPα第161位赖氨酸。结论人AECⅡ中C/EBPα能发生SUMO化修饰且其修饰位点为C/EBPα第161位赖氨酸。 展开更多
关键词 CCAAT增强子结合蛋白α SUMO 蛋白相互作用 肺泡Ⅱ型上皮细胞
高脂饮食对小鼠转录因子C/EBPα表达的影响 预览
6
作者 耿蓓 邬文正 +2 位作者 汪世君 彭瑾瑾 汪全海 《中国医学创新》 CAS 2018年第27期1-4,共4页
目的:研究高脂饮食对小鼠转录因子CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding protein-α,C/EBPα)表达的影响。方法:60只(sprague dawley,SD)雄性小鼠适应性饲养1周,之后随机均分成两组:高脂饮食组(30只)和正常饮食组(3... 目的:研究高脂饮食对小鼠转录因子CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding protein-α,C/EBPα)表达的影响。方法:60只(sprague dawley,SD)雄性小鼠适应性饲养1周,之后随机均分成两组:高脂饮食组(30只)和正常饮食组(30只),分别给予高脂饲料及普通饲料喂养,每周记录各组小鼠的体重,8周后用酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定两组小鼠血清中C/EBPα表达情况。采用SPSS 13.0统计学软件进行统计学分析,分析高脂饮食与正常饮食组之间血清C/EBPα表达的差异。结果:高脂饮食组小鼠血清C/EBPα浓度明显低于正常饮食组[(50.03±10.07)pg/mL vs (56.55±10.28)pg/mL,t=2.482,P=0.016)。随着喂养的进行,高脂饮食组小鼠每周体重明显增加,8周时高脂饮食组小鼠体质量与正常饮食组相比显著增加[(53.46±7.15)g vs(41.96±5.44)g,t=7.011,P=0.000],呈明显肥胖态。结论:高脂饮食可能减少C/EBPα的表达。 展开更多
关键词 高脂饮食 转录因子 C/EBPΑ 体重 肥胖
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三阴性乳腺癌TCL诱导THP-1细胞活化及分化的研究 预览
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作者 董博翰 丁园园 +2 位作者 戴广丽 王贝茹 张思远 《皖南医学院学报》 CAS 2018年第3期205-209,共5页
目的:研究三阴性乳腺癌细胞裂解物(TCL)对单核细胞活化和分化所产生的影响,以及裂解物诱导单核细胞分化的机制。方法:选取三阴性乳腺癌细胞系HCC1937制备细胞裂解物,以人单核细胞系THP-1作为研究对象。将HCC1937细胞裂解物作用于TH... 目的:研究三阴性乳腺癌细胞裂解物(TCL)对单核细胞活化和分化所产生的影响,以及裂解物诱导单核细胞分化的机制。方法:选取三阴性乳腺癌细胞系HCC1937制备细胞裂解物,以人单核细胞系THP-1作为研究对象。将HCC1937细胞裂解物作用于THP-1细胞,检测细胞培养上清液中TNF-α、IL-12的分泌情况,并确定促进细胞因子分泌的最佳裂解物剂量和时间点。流式检测HCC1937细胞裂解物作用的THP-1细胞形态及细胞表面CD68表达的改变,并利用Q-PCR的方法检测裂解物作用后THP-1细胞中促分化关键因子转录因子CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)和PU.1蛋白的表达情况。结果:HCC1937细胞裂解物活化的THP-1细胞,大量合成分泌TNF-α、IL-12(P〈0.05)。THP-1细胞在裂解物作用后细胞体积、颗粒度等会发生增大,细胞表面CD68表达上调(P〈0.05),上述表现符合巨噬细胞的特征。与此同时,作用后THP-1细胞中C/EBPα表达出现上调(P〈0.05),而PU.1表达出现下调(P〈0.05)。结论:三阴性乳腺癌HCC1937细胞裂解物活化人单核细胞THP-1,并通过促进分化因子C/EBPα的表达和抑制PU.1的表达诱导THP-1向巨噬细胞分化。 展开更多
关键词 三阴性乳腺癌 肿瘤细胞裂解物 THP-1 C/EBPΑ PU.1
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穿心莲内酯通过下调PPARγ-C/EBPα抑制脂滴形成 预览
8
作者 栗茜 彭莎 +7 位作者 候宁 刘敏 李晶 张宇昕 张乔 王石峰 张燕玲 乔延江 《天津中医药》 CAS 2018年第6期454-459,共6页
[目的]探讨穿心莲内酯抑制脂肪细胞分化和脂滴堆积作用及机制。[方法]将不同浓度穿心莲内酯分别作用于3T3-L1脂肪细胞,采用高内涵细胞成像技术,分析穿心莲内酯对脂滴形成的作用,并通过检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和CCA... [目的]探讨穿心莲内酯抑制脂肪细胞分化和脂滴堆积作用及机制。[方法]将不同浓度穿心莲内酯分别作用于3T3-L1脂肪细胞,采用高内涵细胞成像技术,分析穿心莲内酯对脂滴形成的作用,并通过检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)表达分析穿心莲内酯的分子作用机制。[结果]穿心莲内酯剂量依赖降低脂滴堆积,在30μmol/L可显著降低PPARγ和C/EBPα表达(P〈0.01),无显著的细胞抑制作用(P〉0.05)。[结论]穿心莲内酯通过降低PPARγ-C/EBPα表达抑制脂肪细胞分化,降低脂滴过度堆积,具有潜在的减轻肥胖作用。 展开更多
关键词 穿心莲内酯 3T3-L1脂肪细胞 PPARΓ C/EBPΑ 脂代谢
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紫苏叶提取物对3T3-L1脂肪细胞的影响
9
作者 郑峰 权海燕 +1 位作者 全吉淑 尹学哲 《时珍国医国药》 CSCD 北大核心 2018年第2期281-284,共4页
目的探讨紫苏叶提取物(Perillae folium extract,PFE)对3T3-L1脂肪细胞的影响。方法将3T3-L1脂肪细胞培养在不同浓度的PFE(100,250和500μg/ml)中,通过MTS法测定PFE的无毒性细胞浓度,通过Western blot法测定过氧化物酶体增殖物激活... 目的探讨紫苏叶提取物(Perillae folium extract,PFE)对3T3-L1脂肪细胞的影响。方法将3T3-L1脂肪细胞培养在不同浓度的PFE(100,250和500μg/ml)中,通过MTS法测定PFE的无毒性细胞浓度,通过Western blot法测定过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)和CAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)的蛋白表达水平变化,通过RT-PCR法测定PPAR-γ、C/EBPα、固醇调节元件结合蛋白1C(SREBP-1c),硬脂酰辅酶脱氢酶1(SCD1),脂肪酸合成酶(FAS),甘油-3-磷酸酰基转移酶(GPAT)和肉碱棕榈酰转移酶1(CPT1)等基因的mRNA表达水平变化。结果通过MTS法得出PFE的无毒性细胞浓度。在Western blot实验中,PPAR-γ和C/EBPα蛋白量的表达随着PFE浓度的升高而减少。在RT-PCR结果中,PPAR-γ、C/EBPα、SREBP-1c和GPAT等基因的表达随着PFE浓度的升高而减少,SCD1和FAS的基因表达水平也降低,CPT1基因的表达水平是随着PFE的浓度而逐渐增加的。此结果说明PPAR-γ和C/EBPα的基因和蛋白表达是受到抑制的。结论 PFE是通过抑制PPARγ、C/EBPα和SREBP1及其靶基因的表达影响脂肪细胞的生成及形成,调节脂肪组织脂质代谢,对以后研究肥胖症具有一定的参考意义。 展开更多
关键词 紫苏叶提取物 3T3-L1 PPAR-Γ C/EBPΑ
C/EBPα蛋白对结肠癌组织中癌细胞的作用研究 预览
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作者 郑晓丽 向兴朝 贺建华 《医学理论与实践》 2018年第7期951-953,共3页
研究C/EBPα蛋白对结肠癌组织中癌细胞的作用。收集2015年9月-2017年9月我院确诊为结肠癌60例患者的临床资料,检测患者癌组织及癌旁正常组织中的C/EBPα表达,对比C/EBPα低表达及高表达之间存在的病理参数差异,观察低表达C/EBPα与高表... 研究C/EBPα蛋白对结肠癌组织中癌细胞的作用。收集2015年9月-2017年9月我院确诊为结肠癌60例患者的临床资料,检测患者癌组织及癌旁正常组织中的C/EBPα表达,对比C/EBPα低表达及高表达之间存在的病理参数差异,观察低表达C/EBPα与高表达C/EBPα对癌组织侵袭相关蛋白产生的影响。结果:癌旁正常组织低表达C/EBPα率低于癌组织,差异有统计学意义(P<0.05);低表达C/EBPα与高表达在性别及年龄方面对比,差异无统计学意义(P>0.05);低表达C/EBPα肿瘤直径长,且肿瘤TNM分期晚,比较差异有统计学意义(P<0.05);经Western blot实验发现,C/EBPα低表达患者的肿瘤直径大,肿瘤TNM分期晚,而高表达C/EBPα患者SW480细胞MMP-2、MMP-9、KLF5表达越低,E钙蛋白表达越高,划痕实验指出,在48h后,低表达C/EBPα的SW480细胞迁移率为53.1%,高于高表达的22.51%。低表达C/EBPα同结肠癌患者的肿瘤TNM分期及肿瘤转移之间有着密切相关性,C/EBPα高表达利于降低结肠SW480细胞的侵袭性,可作为未来结肠癌临床治疗研究的重要方向。 展开更多
关键词 结肠癌 C/EBPα蛋白 癌细胞 作用机制
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C/EBPα对糖尿病肾病足细胞保护作用的研究 被引量:1
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作者 周芳芳 张沥文 +5 位作者 刘剑 应霁 刘韵子 仲芳 王伟铭 陈楠 《中华肾脏病杂志》 CSCD 北大核心 2018年第5期355-360,共6页
目的构建足细胞C/EBPα条件性敲除小鼠,进一步构建糖尿病肾病模型,研究C/EBPα敲除后对糖尿病肾病足细胞的影响及机制。方法将C/EBPαlwp/loxp与podocin—cre小鼠进行杂交,得到F1代杂合子后继续繁殖直至得到纯合子小鼠(C/EBPα... 目的构建足细胞C/EBPα条件性敲除小鼠,进一步构建糖尿病肾病模型,研究C/EBPα敲除后对糖尿病肾病足细胞的影响及机制。方法将C/EBPαlwp/loxp与podocin—cre小鼠进行杂交,得到F1代杂合子后继续繁殖直至得到纯合子小鼠(C/EBPαf/f)。分别通过常规喂养或45%高脂饮食喂养25周,并用低剂量链脲佐菌素(STZ,100mg/kg)处理小鼠后构建糖尿病肾病模型,检测小鼠血尿生化指标以及观察各组肾脏组织形态学改变,并检测。肾组织纤维化、氧化应激调控因子和线粒体功能相关蛋白的表达。结果成功构建足细胞C/EBPα特异性敲除小鼠,并在此基础上成功构建2型糖尿病肾病模型。8月龄的C/EBPaf/f小鼠。肾脏无明显组织形态学异常,但糖尿病。肾病的C/EBPαf/f小鼠具有明显的肾脏损伤、炎症和氧化应激反应。与野生型糖尿病肾病小鼠相比,糖尿病肾病C/EBPαf/f小鼠Nephrin和E—cadherin表达极度降低(均p〈0.01),Fibronectin显著升高(P〈0.01),Nrf2显著升高(P〈0.05),Keapl降低(P〈0.05),且磷酸化AMPK水平降低(P〈0.05),线粒体功能相关基因Pgc-1α也显著降低(P〈0.05)。结论足细胞C/EBPα基因敲除通过促进纤维化并抑制Pgc—1α介导的线粒体抗氧化功能加重糖尿病肾病。 展开更多
关键词 糖尿病肾病 足细胞 小鼠 基因敲除 CCAAT增强子结合蛋白
C/EBPα在炎症疾病中的研究 预览
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作者 朱冯婷 王彦卓 +1 位作者 娄晓丽(综述) 侯彦强(审校) 《国际检验医学杂志》 CAS 2018年第15期1887-1890,共4页
CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)是CCAAT增强子结合蛋白家族的一员,该家族属于碱性亮氨酸拉链(bZIP)蛋白家族,在细胞增殖分化、细胞周期调控、免疫应答、炎性反应、能量代谢、肿瘤发生及凋亡等过程中发挥重要作用。C/EBPα主要分布... CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)是CCAAT增强子结合蛋白家族的一员,该家族属于碱性亮氨酸拉链(bZIP)蛋白家族,在细胞增殖分化、细胞周期调控、免疫应答、炎性反应、能量代谢、肿瘤发生及凋亡等过程中发挥重要作用。C/EBPα主要分布于肺、皮肤、肝脏、乳腺和造血系统中,能作为转录激活剂在分化后期介导基因表达。该文将从C/EBPα在炎症疾病中的作用展开综述。 展开更多
关键词 C/EBPΑ 炎性反应 基因表达调控
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板蓝根水提物对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响 预览
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作者 李吉萍 张文友 +2 位作者 孙婷婷 冯薏婷 刘墨祥 《中国药理学通报》 CSCD 北大核心 2017年第8期1159-1164,共6页
目的探讨板蓝根水提物(water extract of Radix Isatidis,WERI)对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响及其作用机制。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞,MTT法和流式细胞技术检测WERI对细胞增殖的影响;鸡尾酒诱导剂诱导3T3-L1前脂肪细胞,油红... 目的探讨板蓝根水提物(water extract of Radix Isatidis,WERI)对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响及其作用机制。方法体外培养3T3-L1前脂肪细胞,MTT法和流式细胞技术检测WERI对细胞增殖的影响;鸡尾酒诱导剂诱导3T3-L1前脂肪细胞,油红O染色和比色分析法观察WERI对前脂肪细胞分化及脂肪积累的影响;采用RT-PCR检测脂肪细胞的过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)及CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer-binding proteinα,C/EBPα)mRNA的表达;Western blot法检测PPARγ及C/EBPα蛋白表达。结果WERI在一定浓度范围内能有效抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖,同时细胞周期呈现G0/G1向S期阻滞;与空白组相比,用不同浓度的WERI处理后,3T3-L1前脂肪细胞的分化受到明显抑制,且细胞内脂滴生成量明显减少;PCR及Western blot结果显示,WERI还可以抑制脂肪细胞PPARγ和C/EBPα基因及蛋白的表达。结论 WERI具有抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖作用,并可通过下调PPARγ和C/EBPαmRNA及蛋白表达来抑制细胞成脂分化。 展开更多
关键词 板蓝根水提物 3T3-L1前脂肪细胞 增殖 分化 PPARΓ C/EBPΑ 脂肪积累
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不同品种猪PPARγ和C/EBPα基因表达规律与肌内脂肪含量的相关 预览 被引量:4
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作者 盘道兴 王振 +5 位作者 杨茂林 廖乔平 杨昌平 吴宇萍 王金洲 刘若余 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期171-182,共12页
【目的】研究PPARγ和C/EBPα基因在猪不同组织、月龄和品种中mRNA的表达规律,结合屠宰试验分析PPARγ和C/EBPα mRNA表达水平对肌内脂肪沉积的影响。【方法】选取3—7月龄的江口萝卜猪、从江香猪和大白猪为试验材料,提取心、肝、脾、... 【目的】研究PPARγ和C/EBPα基因在猪不同组织、月龄和品种中mRNA的表达规律,结合屠宰试验分析PPARγ和C/EBPα mRNA表达水平对肌内脂肪沉积的影响。【方法】选取3—7月龄的江口萝卜猪、从江香猪和大白猪为试验材料,提取心、肝、脾、肺、肾、小肠、背最长肌和皮下脂肪的总RNA,应用实时荧光定量PCR技术检测PPARγ和C/EBPα基因在3个品种不同月龄各组织中mRNA的相对表达量,同时测定背最长肌中的肌内脂肪含量。【结果】PPARγ、C/EBPα在大白猪3-7月龄各组织中均有表达,其中肝、小肠、背最长肌、皮下脂肪的表达水平较高,心、脾、肺、肾的表达水平较低。其中PPARγ在小肠、背最长肌、皮下脂肪中3、4月龄分别与6、7月龄的表达量差异极显著(P〈0.01),C/EBPα在肝、肺、小肠、皮下脂肪中3月龄与6、7月龄均差异极显著(P〈0.01);PPARγ、C/EBPα在江口萝卜猪心、脾、肺、肾、背最长肌的表达量最低,在皮下脂肪中最高,具有组织特异性。其表达量随月龄递增而上升,皮下脂肪的增加幅度最大。其中PPARγ在小肠、背最长肌、皮下脂肪中3、4月龄与6、7月龄的表达量差异极显著(P〈0.01)。C/EBPα在小肠、皮下脂肪中3月龄与5、6、7月龄的表达量均差异极显著(P〈0.01);PPARγ、C/EBPα在从江香猪心、肝、脾、肺、肾、小肠、背最长肌的表达量较低,在皮下脂肪的表达量最高,PPARγ的表达量随月龄增加而上升的幅度较小,C/EBPα的表达量在各组织中的表达量随时间增加而上升。其在小肠、皮下脂肪、背最长肌中3、4月龄与6、7月龄的表达量差异极显著(P〈0.01);PPARγ和C/EBPα基因在各组织均有表达,组织间的表达量存在差异,其中在肝、小肠、皮下脂肪中为高丰度表达。随着月龄的增加,PPARγ和C/EBPα基因mRNA的表达模式基本相同,总体呈现上升趋势,6、7月龄的表达水平较高,即随� 展开更多
关键词 PPARΓ C/EBPΑ 基因表达 肌内脂肪
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前脂肪细胞增殖分化在高脂膳食诱导大鼠肥胖及运动预防肥胖中的作用
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作者 刘绍生 赵永军 +3 位作者 张琳静 贾志友 连军超 何玉秀 《中国运动医学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第8期667-674,共8页
目的:探讨前脂肪细胞增殖分化在高脂膳食诱导大鼠肥胖及运动预防肥胖过程中的作用。方法:40只雄性SD大鼠分为普通膳食安静组(C组,n=8)、普通膳食运动组(E组,n=8)、高脂膳食安静组(H组,n=14)和高脂膳食运动组(HE组,n=10)。C组... 目的:探讨前脂肪细胞增殖分化在高脂膳食诱导大鼠肥胖及运动预防肥胖过程中的作用。方法:40只雄性SD大鼠分为普通膳食安静组(C组,n=8)、普通膳食运动组(E组,n=8)、高脂膳食安静组(H组,n=14)和高脂膳食运动组(HE组,n=10)。C组和H组不运动,E组和HE组大鼠进行跑台运动,运动强度约为75%VO2max水平。12周干预后,记录各组大鼠体重,取附睾、肾周和腹后壁的脂肪垫分别称重,并计算总脂肪量;体视学方法检测脂肪细胞数目及平均直径;Western Blot检测脂肪组织过氧化物酶增殖物受体γ(PPARγ)和CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)的蛋白表达水平。结果:(1)H组大鼠体重及腹腔内总脂重均显著高于C组(P〈0.01),E组和HE组大鼠肾周、腹后壁脂肪垫重及腹腔内总脂肪量均分别显著低于C组和和H组的相应部位(P〈0.01)。(2)H组大鼠腹腔内脂肪总数目显著高于C组(P〈0.01)。E组大鼠肾周及腹后壁脂肪细胞平均直径均分别显著低于C组的相应部位(P〈0.05,P〈0.01),HE组大鼠附睾、肾周及腹壁脂肪细胞平均直径均分别显著低于H组的相应部位(P〈0.01)。(3)与C组相比,E组及H组大鼠附睾、肾周及腹壁脂肪组织PPARγ蛋白表达显著升高(P〈0.01);H组大鼠附睾及肾周脂肪组织C/EBPα蛋白表达显著高于C组的相应部位(P〈0.01),E组大鼠肾周及腹后壁脂肪组织C/EBPα蛋白表达显著高于C组的相应部位(P〈0.01),但HE组大鼠肾周脂肪组织C/EBPα蛋白表达显著低于H组(P〈0.01)。结论:前脂肪细胞增殖分化能力在高脂膳食诱导肥胖及运动预防肥胖过程中均增强,但其作用及机制皆不同。高脂膳食诱导肥胖过程中前脂肪细胞增殖分化能力的增强可使脂肪细胞数目增多,是机体为适应体脂增多的代偿机制;运动预防肥胖过程中前脂肪细胞增殖分化能力的增强可促进脂肪细胞更新,� 展开更多
关键词 前脂肪细胞 增殖分化 高脂膳食 PPARΓ C/EBPΑ 有氧运动
高氧调节早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞CCAAT增强子结合蛋白α和肺泡表面活性蛋白的表达 被引量:5
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作者 卢衍敏 卢红艳 +3 位作者 刘姜艳 常明 王秋霞 唐炜 《细胞与分子免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第6期767-771,共5页
目的探讨高氧状态下早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AEC2)中CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)和肺泡表面活性蛋白A(SP-A)、SP-B、SP-C、SP-D的表达及两者相关性。方法原代培养早产大鼠AEC2,利用950 mL/LO_2建立高氧细胞损伤模型,随机分... 目的探讨高氧状态下早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AEC2)中CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)和肺泡表面活性蛋白A(SP-A)、SP-B、SP-C、SP-D的表达及两者相关性。方法原代培养早产大鼠AEC2,利用950 mL/LO_2建立高氧细胞损伤模型,随机分为空气对照组和高氧实验组。分别于空气及高氧暴露后24、48、72 h,收获各组细胞。采用倒置相差显微镜观察各组细胞形态变化,实时荧光定量PCR及Western blot法分别检测C/EBPα和SP-A、SP-B、SP-C、SP-D mRNA及蛋白水平;CCK-8法检测细胞增殖。结果随培养时间延长,空气组细胞C/EBPαmRNA及蛋白表达逐渐降低,SP-A、SP-B、SP-C、SP-D mRNA和蛋白水平及AEC2增殖逐渐升高。高氧组细胞C/EBPα、SP-A、SP-B、SP-C、SP-D mRNA和蛋白水平及AEC2增殖呈先递增后递减趋势。与空气组相比,高氧组细胞C/EBPα、SP-A、SP-B、SP-C、SP-D mRNA和蛋白水平及AEC2增殖在高氧48 h明显增加。高氧组细胞C/EBPα蛋白水平与SP-A、SP-B、SP-C、SP-D蛋白水平及AEC2增殖呈正相关(r=0.96、0.98、0.92、0.97、0.90)。结论高氧暴露早期,C/EBPα可促进肺泡表面活性蛋白分泌,参与机体保护性调节作用,但随高氧暴露时间延长,丧失代偿保护作用。 展开更多
关键词 高氧 肺泡Ⅱ型上皮细胞(AEC2) C/EBPΑ 肺泡表面活性蛋白 增殖 大鼠
新乌头碱对K562细胞及耐柔红霉素的K562细胞凋亡的诱导作用及其机制 预览 被引量:1
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作者 关心 杨同华 +1 位作者 张超然 冯帅 《华中科技大学学报:医学版》 CSCD 北大核心 2017年第3期281-284,共4页
目的观察温阳药新乌头碱对白血病细胞K562和K562耐柔红霉素细胞株(K562/DNR)的抑制作用及可能的分子机制。方法应用MTT法,结合流式细胞术检测不同浓度新乌头碱对K562和K562/DNR增殖和凋亡的影响。通过Real-time PCR检测不同浓度新乌... 目的观察温阳药新乌头碱对白血病细胞K562和K562耐柔红霉素细胞株(K562/DNR)的抑制作用及可能的分子机制。方法应用MTT法,结合流式细胞术检测不同浓度新乌头碱对K562和K562/DNR增殖和凋亡的影响。通过Real-time PCR检测不同浓度新乌头碱作用72h对K562和K562/DNR细胞C/EBPα、Caspase-3、p53凋亡相关基因表达的影响。结果 K562和K562/DNR细胞的增殖抑制率随着新乌头碱浓度增加及作用时间延长而上升,呈浓度、时间依赖性(均P〈0.05)。新乌头碱能引起K562和K562/DNR细胞凋亡,且随着药物浓度增加,凋亡率也逐渐升高,差异均有统计学意义(均P〈0.05)。Real-time PCR结果显示,经50μmol/L新乌头碱作用72h,K562和K562/DNR细胞的C/EBPα表达下调,Caspase-3、p53表达上调,与正常对照组相比差异均有统计学意义(均P〈0.05)。结论新乌头碱能够引起K562和K562/DNR细胞发生凋亡,并且凋亡机制可能与下调C/EBPa基因及上调Caspase-3、p53基因有关。 展开更多
关键词 新乌头碱 白血病 细胞凋亡 C/EBPα基因 CASPASE-3基因 P53基因
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紫苏叶提取物对肥胖小鼠的影响及作用机制 被引量:2
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作者 朴颖 费宏扬 权海燕 《中华中医药杂志》 CSCD 北大核心 2017年第9期3992-3996,共5页
目的:研究紫苏叶提取物(PFE)对高脂饲料诱导肥胖模型小鼠脂肪组织中脂肪生成及脂质合成相关基因表达的影响,探讨PFE影响脂肪脂质代谢的可能机制。方法:5周龄的雄性ICR小鼠,适应性喂养1周后,随机分为正常饲料(RD)组和高脂饲料(HFD)组,HFD... 目的:研究紫苏叶提取物(PFE)对高脂饲料诱导肥胖模型小鼠脂肪组织中脂肪生成及脂质合成相关基因表达的影响,探讨PFE影响脂肪脂质代谢的可能机制。方法:5周龄的雄性ICR小鼠,适应性喂养1周后,随机分为正常饲料(RD)组和高脂饲料(HFD)组,HFD+PFE(150、300mg/kg)组,每天灌胃给药1次,RD组灌服等量蒸馏水,每周测2次体质量,连续4周。实验结束后,分别称量内脏脂肪和附睾脂肪重量;检测血浆血糖、胰岛素、HOMA-IR指数、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、非游离脂肪酸(NEFA)、谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)。用Western blot法和RT-PCR法检测过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)和CAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)的表达。此外,检测脂肪合成转录因子SREBP1及其靶基因(FAS、SCD1、GPAT)的基因表达。结果:与HFD组比较,治疗4周后,PFE显著降低了小鼠体质量、内脏脂肪量及附睾脂肪量,血糖、胰岛素水平均显著下降,HOMA-IR也得到改善。血脂(TG、TC、NEFA)和肝功(s AST和s ALT)在给PFE后均显著降低。与RD组比较,脂肪生成转录因子PPAR-γ、C/EBPα和脂肪合成转录因子SREBP1及其靶基因在HFD组增强,而在PFE组上述基因表达均显著被抑制。结论:PFE通过抑制脂肪生成转录因子PPAR-γ、C/EBPα和脂肪合成转录因子SREBP1及其靶基因的表达来降低脂肪和体质量,调节脂肪组织脂质代谢。 展开更多
关键词 紫苏叶提取物 ICR小鼠 过氧化物酶体增殖物激活受体-Γ CCAT/增强子结合蛋白α SREBP1
vdac-1基因调控多发性骨髓瘤细胞表达髓系分化抗原CD33实验研究
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作者 许超平 周涛 +2 位作者 胡桂英 何莉 刘尚勤 《临床血液学杂志》 CAS 2017年第3期368-371,共4页
目的:探讨线粒体外膜电压依赖阴离子通道-1(vdac-1)基因对多发性骨髓瘤(MM)细胞表达髓系分化抗原CD33的影响,为MM的治疗提供新的思路。方法:应用细胞转染技术将携带vdac-1基因的质粒转染不表达Pax5和CD45的骨髓瘤细胞系U266细胞中... 目的:探讨线粒体外膜电压依赖阴离子通道-1(vdac-1)基因对多发性骨髓瘤(MM)细胞表达髓系分化抗原CD33的影响,为MM的治疗提供新的思路。方法:应用细胞转染技术将携带vdac-1基因的质粒转染不表达Pax5和CD45的骨髓瘤细胞系U266细胞中,蛋白印迹检测其vdac-1蛋白及髓系细胞重要转录因子C/EBPα的表达;显微镜观察细胞形态的改变;流式细胞术检测细胞表面CD45及CD33分子的表达。结果:CD45-的U266细胞转染vdac-1基因后,高水平表达vdac-1基因和蛋白,并且髓系细胞重要转录因子C/EBPα表达增加;显微镜下观察发现细胞发生类似于髓系细胞形态学改变,如胞浆突起、胞核折叠;流式细胞术检测发现转染vdac-1基因的U266细胞不表达CD45,而CD33表达增加,其中CD33阳性细胞占细胞总数的30%以上。结论:vdac-1基因能够调控MM细胞表达髓系分化抗原CD33,使细胞发生髓系细胞形态学改变,CD33有望成为MM治疗新靶点。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 vdac-1基因 C/EBPΑ CD33
C/EBPs和内质网应激相关分子在高三酰甘油血症性急性胰腺炎大鼠胰腺中的表达
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作者 郑俊媛 吴江红 +4 位作者 陈静 刘杰 胡国勇 王兴鹏 曾悦 《中华胰腺病杂志》 CAS 2016年第2期103-109,共7页
目的探讨C/EBPα、C/EBPβ和内质网应激相关分子(IRE1α和sXBP1)在高三酰甘油血症(HTG)相关性急性胰腺炎(AP)大鼠胰腺中的表达变化。方法96只SD大鼠按数字表法随机分为对照组、HTG组(高脂饮食2周)、AP组、HTG+AP组,每组24只... 目的探讨C/EBPα、C/EBPβ和内质网应激相关分子(IRE1α和sXBP1)在高三酰甘油血症(HTG)相关性急性胰腺炎(AP)大鼠胰腺中的表达变化。方法96只SD大鼠按数字表法随机分为对照组、HTG组(高脂饮食2周)、AP组、HTG+AP组,每组24只。采用腹腔注射雨蛙肽方法制备AP模型,造模后3、6、9、24 h分批处死大鼠。观察胰腺病理变化并予评分,检测血清TG、总胆固醇(TC)及血浆IL-1β、IL-6、TNF-α水平,实时PCR法检测胰腺组织IRE1α、sXBP1、C/EBPα、C/EBPβ mRNA表达,蛋白质印迹法检测胰腺组织IRE1α、sXBP1、NF-κB、C/EBPα和C/EBPβ蛋白表达,免疫组化法检测胰腺组织C/EBPα和C/EBPβ蛋白表达。结果高脂饮食2周后,HTG组、HTG+AP组大鼠血清TG和TC均较对照组明显升高,差异有统计学意义(P值均〈0.05)。HTG+AP组胰腺病理变化较AP组更严重,以9 h点表现最为显著(P〈0.05)。与AP组比较,HTG+AP组血浆IL-1β、IL-6和TNF-α水平明显升高,9 h点差异有统计学意义(P值分别为0.011、0.034、0.027)。AP组和HTG+AP组胰腺组织IRE1α、sXBP1、C/EBPα、C/EBPβ mRNA表达均于3 h点开始升高,分别于24、9、6、6 h点达峰值。与AP组比较,HTG+AP组IRE1α、sXBP1、C/EBPα、C/EBPβ mRNA表达明显更高,其中IRE1α、sXBP1 mRNA 3、6、9、24 h点,C/EBPα mRNA 6、9、24 h点,C/EBPβ mRNA 6、9 h点差异均有统计学意义(P值均〈0.05)。AP组和HTG+AP组胰腺组织IRE1α、sXBP1、NF-κB蛋白表达均于3 h点开始上调,9 h点达最高水平,HTG+AP组较AP组上调更显著;HTG+AP组6、9 h点C/EBPα、C/EBPβ蛋白高表达,AP组则无表达。结论C/EBPα、C/EBPβ、IRE1α、sXBP1基因参与HTG相关性AP的发病,内质网应激通路IRE1α/sXBP1和C/EBPα、C/EBPβ可能共同介导HTG性AP的胰腺病理损伤和炎症过程。 展开更多
关键词 胰腺炎 C/EBPΑ C/EBPΒ 内质网应激 高酯血症 大鼠
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