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牦牛去饱和脂肪酶1(SCD1)基因的克隆及分析 被引量:1
1
作者 罗毅皓 孙万成 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2017年第9期237-240,共4页
为了获得牦牛去饱和脂肪酶1基因全长序列,试验采用SMART的测序方法进行测序。结果表明:其作用于脂肪酸碳链△9位,使其变成双键,牦牛去饱和脂肪酶1基因序列全长为1300bp,开放阅读框(ORF)长1080bp,可以编码359个氨基酸,共含有20... 为了获得牦牛去饱和脂肪酶1基因全长序列,试验采用SMART的测序方法进行测序。结果表明:其作用于脂肪酸碳链△9位,使其变成双键,牦牛去饱和脂肪酶1基因序列全长为1300bp,开放阅读框(ORF)长1080bp,可以编码359个氨基酸,共含有20种氨基酸,其中亮氨酸含量最丰富,为11.7%,其次为苏氨酸7%,半胱氨酸含量最低为0.8%。起始密码子为ATG,终止密码子为TGA,编码的成熟蛋白的分子质量为4l706.0U,等电点为9.22。牦牛去饱和脂肪酶1基因序列已发表到GenBank(登录号为KC352711)上。 展开更多
关键词 去饱和脂肪酶1(SCDl) 基因克隆 序列分析 牦牛 SMART法
一种构建载体的新方法:一步式混合胶回收连接法
2
作者 李顺姬 胡珏 +2 位作者 刘双清 成小文 黄国华 《湖南农业大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期58-61,共4页
以构建原核表达载体重组质粒G4FPAGB1为例,介绍了一种新的载体构建方法。棉铃虫单核衣壳核多角体病毒G4毒株基因组上的Ha–FP–A片段用Hin dⅢ和Eco RⅤ双酶切,Ha–FP–B片段用XhoⅠ和Bam HⅠ双酶切,绿色荧光蛋白(Green fluorescent pr... 以构建原核表达载体重组质粒G4FPAGB1为例,介绍了一种新的载体构建方法。棉铃虫单核衣壳核多角体病毒G4毒株基因组上的Ha–FP–A片段用Hin dⅢ和Eco RⅤ双酶切,Ha–FP–B片段用XhoⅠ和Bam HⅠ双酶切,绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)基因片段用Eco RⅤ和XhoⅠ双酶切,载体质粒p Bluescript SK(+)用Hin dⅢ和Bam HⅠ双酶切。酶切产物经电泳检测后,将所有含目的片段的胶块切下,放在同一个离心管中进行DNA回收,得到的混合DNA产物直接加入连接酶进行连接、转化。结果表明,3个目的片段均成功连接到载体质粒上。本方法可高效、简单地构建包含多个目的片段的重组质粒。 展开更多
关键词 载体构建 克隆方法 一步式混合胶回收
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利用分析Unigene在转录组中表达模式的方法拼接盐角草铵转运基因
3
作者 肖薪龙 张选 +2 位作者 吴晓朦 马金彪 姚银安 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1763-1773,共11页
RNA-seq技术能够全面快速地获得物种在某一状态下的转录本序列信息,但测序并组装后的大量Unigene往往不包含完整ORF(Open reading frame)。转录组库具有一定的冗余性,存在着属于同一个转录本的Unigene,这些Unigene因为无重叠区不能拼... RNA-seq技术能够全面快速地获得物种在某一状态下的转录本序列信息,但测序并组装后的大量Unigene往往不包含完整ORF(Open reading frame)。转录组库具有一定的冗余性,存在着属于同一个转录本的Unigene,这些Unigene因为无重叠区不能拼接而存在转录组库中。基于这种情况,为了拼接铵转运蛋白家族Unigene,首先挑选注释为AMT(Ammonium transporter)且ORF不完整的所有Unigene(5条),通过分析Unigene在4个转录组的表达模式,其中2条Unigene(Uni4和Uni5)具有相同的表达模式,推测可能来自同一转录本。然后通过NCBI blastx将这2条Unigene与参考物种的AMT蛋白质比对,确定其在转录本的位置及序列相互间没有交叠(如果两条编码序列相互交叠则不能组成同一个转录本)。结果发现Uni4和Uni5分别位于参考转录本5′端和3′端位置,因此假定它们属于同一个转录本,中间空缺约120 bp未知序列。通过试验验证,分别在Uni4和Uni5上设计单正向引物和单反向引物,PCR扩增得到约800 bp片段,将其测序并与两条Unigene比对,证实Uni4和Uni5属于同一转录本且获得了缺失的未知序列。最终拼接得到1 667 bp序列,包含1 482 bp完整ORF,编码494个氨基酸,通过系统进化分析将其归类为amt1亚家族,命名为Seamt1。生物信息学手段预测Se AMT1蛋白与已知的其他物种AMT性质相似。本研究采用转录组Unigene表达模式聚类的方法挖掘潜在的同一转录本Unigene,并且通过另外两组Unigene检验了该方法的可行性。这一便捷方法有助于转录组中Unigene的延伸和拼接,有助于完整ORF的获得及后期基因功能研究。 展开更多
关键词 转录组测序 基因表达 序列组装 克隆方法 RPKM 氮吸收
一种启动子克隆的改良Adaptor—PCR方法及在橡胶树上的应用实例 预览 被引量:3
4
作者 辛鲁生 阳江华 唐朝荣 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期 296-303,共8页
真核生物通过顺式作用元件和反式作用因子相互作用实现基因的转录调控,而启动子区域含有多种顺式元件,作为基因表达调控网络的枢纽控制着基因转录的起始与效率,一直是基因表达调控研究的重点。本文提供了一种改良的基于Adaptor-PCR... 真核生物通过顺式作用元件和反式作用因子相互作用实现基因的转录调控,而启动子区域含有多种顺式元件,作为基因表达调控网络的枢纽控制着基因转录的起始与效率,一直是基因表达调控研究的重点。本文提供了一种改良的基于Adaptor-PCR启动子克隆方法,改进了接头序列,设计了适合两步法PCR的接头引物。选取了25种限制性内切酶对橡胶树基因组DNA进行酶切,在所有酶切产物都平端化后,与改进的接头连接,成功构建了以Adaptor—PCR为基础的橡胶树基因启动子克隆文库,并利用此文库成功克隆了橡胶树6个蔗糖转运蛋白基因、1个转化酶基因和1个海藻糖合酶基因的启动子。本文研究结果为橡胶树基因启动子克隆提供了一个高效平台,也为其他生物基因启动子克隆提供了有益的参考。 展开更多
关键词 橡胶树 启动子克隆 Adaptor—PCR 方法改良 应用实例
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大鼠外周血淋巴细胞和脾淋巴细胞HPRT基因突变的比较 预览
5
作者 崔凤梅 赵经涌 +3 位作者 胡明江 宁萍 劳勤华 王六一 《苏州大学学报:医学版》 CAS 北大核心 2005年第4期 547-550,共4页
目的克隆法研究放射性核素内照射诱发大鼠体细胞HPRT基因突变,比较不同体细胞HPRT基因突变频率.方法大鼠尾静脉注入晚期混合裂变产物,克隆法检测不同累积剂量的放射性核素内照射诱发的外周血淋巴细胞和脾淋巴细胞HPRT基因突变.结果外周... 目的克隆法研究放射性核素内照射诱发大鼠体细胞HPRT基因突变,比较不同体细胞HPRT基因突变频率.方法大鼠尾静脉注入晚期混合裂变产物,克隆法检测不同累积剂量的放射性核素内照射诱发的外周血淋巴细胞和脾淋巴细胞HPRT基因突变.结果外周血淋巴细胞和脾淋巴细胞的克隆效率均随内照射剂量的增加而降低,HPRT基因突变频率均随放射性核素内照射剂量的增加而增加.相同条件下,脾淋巴细胞HPRT基因突变比外周血淋巴细胞敏感.结论克隆法是一种敏感的检测辐射诱发HPRT基因突变的方法,脾淋巴细胞HPRT基因突变比外周血淋巴细胞敏感. 展开更多
关键词 放射性核素 内照射 基因突变 克隆法
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植物基因克隆方法在作物上的应用 预览 被引量:2
6
作者 孙艳琼 段红平 《广西农业科学》 2005年第3期 275-279,共5页
本文在参考大量文献的基础上,综述了包括功能克隆、定位克隆、表型克隆、PCR扩增以及DNA芯片技术等植物基因克隆的方法及其在作物上的应用,并对各种方法的应用进行了比较,展望了它们的应用发展前景.
关键词 植物 基因克隆 方法 应用 作物
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放射性核素内照射诱发大鼠脾淋巴细胞的HPRT基因突变 预览
7
作者 崔凤梅 赵经涌 +3 位作者 劳勤华 王六一 宁萍 洪承皎 《工业卫生与职业病》 CAS 北大核心 2005年第3期 140-143,共4页
目的探讨克隆法研究放射性核素内照射诱发大鼠脾淋巴细胞HPRT基因突变的可行性.方法大鼠尾静脉注入晚期混合裂变产物,克隆法检测不同累积剂量和不同剂量率的内照射诱发的脾淋巴细胞HPRT基因突变,拟合剂量-效应方程.结果随着累积剂量和... 目的探讨克隆法研究放射性核素内照射诱发大鼠脾淋巴细胞HPRT基因突变的可行性.方法大鼠尾静脉注入晚期混合裂变产物,克隆法检测不同累积剂量和不同剂量率的内照射诱发的脾淋巴细胞HPRT基因突变,拟合剂量-效应方程.结果随着累积剂量和剂量率的增加,HPRT基因突变频率随之上升,剂量-效应关系和剂量率-效应关系均符合线性平方模型,分别为:y=4.506 0+0.563 5D+0.060 6 D2,y=2.663 8+0.517 7D-0.000 8D2.结论克隆法是一种敏感的检测辐射诱发HPRT基因突变的方法,脾淋巴细胞的HPRT基因突变对辐射敏感. 展开更多
关键词 克隆法 放射性核素 内照射 基因突变 剂量-效应关系
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人快速收缩骨骼肌肌钙蛋白Ⅰ在大肠杆菌中的表达及建立其快速复性方法 预览 被引量:3
8
作者 颜明 华子春 《东南大学学报:医学版》 CAS 2005年第1期 36-38,共3页
目的:在大肠杆菌中克隆和表达人快速收缩骨骼肌肌钙蛋白Ⅰ(troponin Ⅰ,Tn Ⅰ),建立一种Tn Ⅰ快速复性方法。方法:通过PCR方法将人Tn Ⅰ基因克隆在大肠杆菌表达质粒pET28a中,经过PCR和DNA序列测定验证,并通过IPTG诱导表达。结果... 目的:在大肠杆菌中克隆和表达人快速收缩骨骼肌肌钙蛋白Ⅰ(troponin Ⅰ,Tn Ⅰ),建立一种Tn Ⅰ快速复性方法。方法:通过PCR方法将人Tn Ⅰ基因克隆在大肠杆菌表达质粒pET28a中,经过PCR和DNA序列测定验证,并通过IPTG诱导表达。结果:通过PCR和DNA核酸序列分析,证实获得的基因片段为TnⅠ全编码序列,TnⅠ被克隆在大肠杆菌表达质粒pET28a中,重组表达质粒在大肠杆菌BI2l(DE3)中经IPTG诱导获得表达,表达水平为占菌体总蛋白的40%,TnⅠ包涵体产物经过对1mmol·L^-1透析复性,获得了抑制血管新生的生物活性。结论:构建了TnⅠ表达菌株,经诱导获得TnⅠ的高效表达,建立了简易的TnⅠ体外复性方法,为TnⅠ的深入研究和应用奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 肌钙蛋白Ⅰ 骨骼肌 大肠杆菌表达 复性 ET 诱导 质粒 IPTG 克隆和表达 高效表达
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放射性核素内照射诱发大鼠外周血淋巴细胞HPRT基因突变 预览
9
作者 崔凤梅 赵经涌 +3 位作者 劳勤华 王六一 杨淑琴 胡明江 《中华放射医学与防护杂志》 CAS 北大核心 2004年第6期 538-540,共3页
目的用克隆法研究放射性核素内照射诱发的大鼠外周血淋巴细胞HPRT基因突变情况.方法大鼠尾静脉注入晚期混合裂变产物,克隆法检测不同累积剂量和不同剂量率的内照射诱发的外周血淋巴细胞HPRT基因突变,并拟合剂量效应关系.结果随着累积剂... 目的用克隆法研究放射性核素内照射诱发的大鼠外周血淋巴细胞HPRT基因突变情况.方法大鼠尾静脉注入晚期混合裂变产物,克隆法检测不同累积剂量和不同剂量率的内照射诱发的外周血淋巴细胞HPRT基因突变,并拟合剂量效应关系.结果随着累积剂量和剂量率的增加,HPRT基因突变频率随之上升,其剂量效应关系符合线性平方模型.结论克隆法是一种较敏感的检测辐射诱发HPRT基因突变的方法,HPRT基因突变可能作为辐射生物剂量计. 展开更多
关键词 HPRT基因突变 外周血淋巴细胞 辐射诱发 内照射 大鼠 剂量效应关系 放射性核素 累积 克隆 合剂
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克隆法检测大鼠体细胞HPRT基因突变探讨 预览 被引量:3
10
作者 崔凤梅 赵经涌 +2 位作者 劳勤华 王六一 杨淑琴 《苏州大学学报:医学版》 CAS 2003年第4期 385-387,共3页
目的探讨克隆法检测大鼠体细胞HPRT基因突变,为后续研究打下基础.方法参照文献提供的克隆法,靶细胞为外周血淋巴细胞或脾淋巴细胞时,选取自体或异体的外周血淋巴细胞或脾淋巴细胞作为滋养细胞,比较相应的克隆率.结果无论靶细胞为外周血... 目的探讨克隆法检测大鼠体细胞HPRT基因突变,为后续研究打下基础.方法参照文献提供的克隆法,靶细胞为外周血淋巴细胞或脾淋巴细胞时,选取自体或异体的外周血淋巴细胞或脾淋巴细胞作为滋养细胞,比较相应的克隆率.结果无论靶细胞为外周血淋巴细胞还是脾淋巴细胞,自体来源的滋养细胞组的克隆率高于异体来源的滋养细胞组,脾淋巴细胞为滋养细胞时克隆率较高.结论自体来源的滋养细胞优于异体来源的滋养细胞,滋养细胞为脾淋巴细胞时有更好的克隆效果. 展开更多
关键词 HPRT基因 克隆法 滋养细胞 克隆率
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启动子克隆概述 预览 被引量:36
11
作者 孙晓红 陈明杰 潘迎捷 《食用菌学报》 2002年第3期 57-62,共6页
启动子是基因表达调控的重要顺式元件,也是基因工程表达载体的一个重要元件.笔者阐述了启动子的结构、分类、克隆方法及其意义,并介绍了目前食用菌中已分离到的启动子.
关键词 启动子 克隆 结构 分类 食用菌
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从植物抗病基因的克隆看其基因结构、功能和进化 预览 被引量:7
12
作者 俞志华 祝水金 夏英武 《浙江大学学报:农业与生命科学版》 CAS 北大核心 2002年第1期 107-113,共7页
对植物抗病基因的克隆技术及已克隆的一些抗病基因作了概述,归纳了抗病基因的类型、产物结构和功能,对抗病基因进化的可能分子机制也作了讨论.
关键词 植物抗病基因 克隆技术 进行机制
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cDNA文库和PCR技术相结合的方法克隆目的基因 预览 被引量:9
13
作者 鲁国东 王宗华 《农业生物技术学报》 CAS 1998年第3期 257-262,共6页
建立了一个以PCR为基础,结合cDNA文库构建来克隆基因的方法。即通过寻找基因的保过区段,设计合成一对特异性引物。以双链cNA-pBluescriptⅡSK载体连接物为模板,利用载体上的标准测序引物和基因的特异引物,... 建立了一个以PCR为基础,结合cDNA文库构建来克隆基因的方法。即通过寻找基因的保过区段,设计合成一对特异性引物。以双链cNA-pBluescriptⅡSK载体连接物为模板,利用载体上的标准测序引物和基因的特异引物,PCR扩增出包含cDNA两末端部分的基因。运用该方法我们克隆了稻瘟病菌的3-磷酸甘油醛脱氢酶基因。与其它克隆方法相比,该方法不但稳定而且有快速与简便的优点。 展开更多
关键词 基因克隆方法 CDNA文库 PCR技术 稻瘟病菌
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稻瘟病菌3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(gpd)的快速克隆(英文)
14
作者 鲁国东 王宗华 +1 位作者 谢联辉 郑学勤 《浙江大学学报:农业与生命科学版》 CAS 北大核心 1998年第5期14-20,
本文描述了一种简便而有效的克隆基因未知5'和3'末端序列的方法,并用此方法克隆了稻瘟病菌的3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(gpd).即通过比较12种真菌的已知gpd基因序列,寻找内部的保守区段,设计并合成一对特异性引物.... 本文描述了一种简便而有效的克隆基因未知5'和3'末端序列的方法,并用此方法克隆了稻瘟病菌的3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(gpd).即通过比较12种真菌的已知gpd基因序列,寻找内部的保守区段,设计并合成一对特异性引物.引物P1为靠近基因5'端的一个特异性序列,引物P2则与3'端的一段特异性序列互补.以双链cDNA-pBluescriptⅡSK载体连接物为模板,利用基因的特异性引物P1和载体上的标准测序引物T7,PCR扩增出包含cDNA3'末端的序列;利用特异性引物P2和标准测序引物T3,扩增出包含cDNA5'末端的序列.将两片段分别克隆、测序和合并后,得到全长1011bp的稻瘟病菌3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(gpd)的编码区序列.该序列及其相应的氨基酸序列与已知真菌的gpd基因序列有着61.4%-86.6%和64.6%-86.3%的同源性.特别在酶的活性功能区不同真菌间有着近乎相同的氨基酸序列. 展开更多
关键词 稻瘟病菌 3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(gpd) 克隆方法
全文增补中
利用不依赖连接反应的克隆方法构建PCHF3-MAP65-1-YFP和pCHF3-MAP65-2-YFP表达载体 预览
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作者 王培培 韩榕 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期266-270,共5页
利用不依赖于连接反应的克隆(Ligation-independent cloning,LIC)方法构建了pCHF3-MAP65-1-YFP和PCHF3-MAP65-2-YFP载体,用于研究拟南芥微管结合蛋白MAP65-1和MAP65-2在细胞中的定位及UV-B辐射下有丝分裂异常现象的产生机制。试验结果表... 利用不依赖于连接反应的克隆(Ligation-independent cloning,LIC)方法构建了pCHF3-MAP65-1-YFP和PCHF3-MAP65-2-YFP载体,用于研究拟南芥微管结合蛋白MAP65-1和MAP65-2在细胞中的定位及UV-B辐射下有丝分裂异常现象的产生机制。试验结果表明,相对于传统载体构建方法,LIC方法试验设计操作简便,耗时短,转化率高,可减少后期重组子筛选工作。 展开更多
关键词 LIC方法 拟南芥 MAP65-1 MAP65-2
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基于能量攻击的FPGA克隆技术研究 预览
16
作者 许纪钧 严迎建 《电子技术应用》 北大核心 2017年第4期47-50,共4页
针对FPGA克隆技术展开研究,指出其关键问题在于对加密密钥的攻击,并以Xilinx公司7系列FPGA为列,讨论了采用AES-256 CBC模式解密条件下的攻击点函数选择方法,通过单比特功耗模型实施差分能量攻击,成功恢复了256 bit密钥。同时,针对不可... 针对FPGA克隆技术展开研究,指出其关键问题在于对加密密钥的攻击,并以Xilinx公司7系列FPGA为列,讨论了采用AES-256 CBC模式解密条件下的攻击点函数选择方法,通过单比特功耗模型实施差分能量攻击,成功恢复了256 bit密钥。同时,针对不可直接代入密钥检验正确性的问题,设计了一种基于DPA攻击相关系数极性的检验方法,避免了密钥错误引起FPGA错误配置,实验表明,该方法能够有效消除相关系数的"假峰"现象。 展开更多
关键词 FPGA克隆 能量攻击 AES-256 CBC 相关系数 结果检验
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家蚕胆碱激酶基因的原核表达与蛋白质纯化及在农药残留检测中的应用
17
作者 翁宏飚 沈卫锋 +1 位作者 牛宝龙 孟智启 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期67-75,共9页
乙酰胆碱酯酶(Ach E)是有机磷(OP)和氨基甲酸酯类农药的作用靶蛋白,在体外胆碱激酶(choline kinase)可专一性地以三磷酸腺苷(ATP)作为磷酸的供体,催化Ach E的酶促反应产物氯化胆碱发生磷酸化。依据家蚕基因组数据库中的胆碱激... 乙酰胆碱酯酶(Ach E)是有机磷(OP)和氨基甲酸酯类农药的作用靶蛋白,在体外胆碱激酶(choline kinase)可专一性地以三磷酸腺苷(ATP)作为磷酸的供体,催化Ach E的酶促反应产物氯化胆碱发生磷酸化。依据家蚕基因组数据库中的胆碱激酶基因(Bmcok)序列(Gen Bank登录号:AK378994.1)设计合成特异引物,从家蚕5龄第3天幼虫头部克隆了家蚕胆碱激酶基因,在大肠杆菌中进行原核表达并纯化目的蛋白质,获得质量浓度约1.03 mg/m L的家蚕胆碱激酶液。纯化的家蚕胆碱激酶在30℃、p H 9.5时的活性最高,约为115.6 U/mg。通过耦合Ach E和家蚕胆碱激酶的酶催化反应,并结合ATP-荧光素发光反应,建立酶抑制-发光快速检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的方法。该方法对甲胺磷残留的检测限可达0.05μg/m L,灵敏度高于现有的酶抑制色卡法和酶抑制分光光度计法,初步表明了将家蚕胆碱激酶应用于有机磷和氨基甲酸酯类农药残留快速检测的可行性。 展开更多
关键词 家蚕 胆碱激酶 基因克隆 原核表达 农药残留 酶抑制法 发光检测
View-Aware Image Object Compositing and Synthesis from Multiple Sources
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作者 Xiang Chen Wei-Wei Xu +1 位作者 Sai-Kit Yeung Kun Zhou 《计算机科学技术学报:英文版》 SCIE EI CSCD 2016年第3期463-478,共16页
图象 compositing 广泛地被用来从分开的来源图象把视觉元素合为一幅单个图象。尽管最近的图象 compositing 技术能够完成从不同来源的视觉元素的光滑的相配,他们中的大多数含蓄地假设来源图象在一样的观点被拿。在这份报纸,我们在场... 图象 compositing 广泛地被用来从分开的来源图象把视觉元素合为一幅单个图象。尽管最近的图象 compositing 技术能够完成从不同来源的视觉元素的光滑的相配,他们中的大多数含蓄地假设来源图象在一样的观点被拿。在这份报纸,我们在场从多重来源的 compositing 小说图象目标的一条途径想象哪个有不同观点。我们的关键想法是为来源图象目标的有意义的部件构造 3D 代理,并且使用这些 3D 部件代理在一样的观点一起弄歪并且无缝地合并部件。认识到这个想法,我们介绍一个并列框架的基于的单个看法的照相机刻度算法处理图象对象的一般类型,得到长方体的一个结构知道的长方体优化算法正确结构关系地为图象对象部件代理,并且最后, 3D 代理转变指导了图象变弯缝对象部件的算法。我们进一步基于这条 compositing 途径描述一个新奇应用程序自动地综合从一套模范的很多图象对象。试验性的结果证明我们的 compositing 途径能被用于许多图象目标,例如椅子,杯,灯,和机器人,并且合成申请能从模范的一个小集合与重要形状和风格变化创造新奇图象目标。 展开更多
关键词 图像合成 图像对象 视觉元素 结构关系 合成方法 合成技术 标定算法 坐标框架
适用于基因全长克隆的灰毡毛忍冬不同器官总RNA提取方法筛选 预览
19
作者 刘湘丹 徐玉琴 +2 位作者 王珊 童巧珍 周日宝 《湖南中医药大学学报》 CAS 2015年第12期60-63,共4页
目的获取灰毡毛忍冬不同器官总RNA的最佳提取方法。方法以灰毡毛忍冬叶、茎、花蕾为材料,分别采用SDS法、Trizol法、改良CTAB法、多糖多酚试剂盒法提取总RNA,比较分析实验结果。结果 SDS法不适用于三种器官样品总RNA的提取;Trizol法仅... 目的获取灰毡毛忍冬不同器官总RNA的最佳提取方法。方法以灰毡毛忍冬叶、茎、花蕾为材料,分别采用SDS法、Trizol法、改良CTAB法、多糖多酚试剂盒法提取总RNA,比较分析实验结果。结果 SDS法不适用于三种器官样品总RNA的提取;Trizol法仅适用于叶总RNA的提取;改良CTAB法对茎总RNA提取效果最佳;而多糖多酚试剂盒法提取的花蕾总RNA质量高、完整性较好,且通过RT-PCR扩增能获得特异性条带。结论 Trizol法最适于灰毡毛忍冬叶总RNA提取;改良CTAB法最适于茎总RNA提取;多糖多酚试剂盒法最适于花蕾总RNA提取;3种方法提取出来的总RNA均能满足灰毡毛忍冬中相关基因全长克隆及时空表达分析的要求。 展开更多
关键词 灰毡毛忍冬 基因全长克隆 总RNA 不同器官 提取方法
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利用改良RACE方法克隆木薯淀粉合成关键酶AGPase小亚基基因的研究 预览
20
作者 郭雅静 罗兴录 +1 位作者 钟建崑 陈会鲜 《中国农学通报》 CSCD 2014年第27期252-257,共6页
首次从木薯中分离克隆出AGPase小亚基的基因5’端cDNA序列,最终为进一步成功获得木薯淀粉合成关键酶AGPase小亚基基因的cDNA全长序列提供依据。本研究以木薯作为试验材料,设计锚定引物,并根据木薯AGPase小亚基基因已知序列设计PCR特异引... 首次从木薯中分离克隆出AGPase小亚基的基因5’端cDNA序列,最终为进一步成功获得木薯淀粉合成关键酶AGPase小亚基基因的cDNA全长序列提供依据。本研究以木薯作为试验材料,设计锚定引物,并根据木薯AGPase小亚基基因已知序列设计PCR特异引物,利用逆转录引物AUP1反转录总RNA,然后分离纯化反转录产物,通过对三大酶促反应(逆转录反应,TdT加尾,巢式及降落PCR技术)的具体改良,并将其与传统方法进行比较。利用改良后方法,首次成功获得木薯淀粉合成关键酶AGPase小亚基基因5’端cDNA序列。同时,本研究通过对RACE技术的改良与传统方法相比,在操作上更加简单、快速;在序列获得上更加高效;在试验成本上更加低廉。本研究可以高效且快速的成功获得木薯淀粉关键酶AGPase小亚基基因5’端序列,具有一定的实用性及简便性。 展开更多
关键词 木薯 AGPase小亚基基因 克隆 5’端 改良RACE方法
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