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F10蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备 被引量:9
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作者 付欣 邹东霆 +2 位作者 周问渠 邢福祺 李冰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期 856-858,共3页
目的:表达F10蛋白,并制备兔抗F10多克隆抗体。方法:利用PCR方法扩增F10基因片段,经BamHⅠ和EcoRⅠ酶切后连接人pET-GST原核表达载体,构建的pET-GST/F10融合重组表达质粒转化大肠杆菌B121,经IPTG诱导表达蛋白,并以亲和层析的方... 目的:表达F10蛋白,并制备兔抗F10多克隆抗体。方法:利用PCR方法扩增F10基因片段,经BamHⅠ和EcoRⅠ酶切后连接人pET-GST原核表达载体,构建的pET-GST/F10融合重组表达质粒转化大肠杆菌B121,经IPTG诱导表达蛋白,并以亲和层析的方法进行纯化。表达产物用SDS—PAGE电泳和Western blot进行分析鉴定。以纯化的F10蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔抗F10的多克隆抗体,并以ELISA法检测抗体效价。结果:经酶切和核酸序列分析证实重组质粒包含有正确编码的F10读码框。SDS—PAGE电泳分析显示pET—GST/F10诱导后表达一相对分子质量(Mr)约为61000的融合蛋白,与预期结果相符。目的蛋白纯化后的纯度达90%以上,Western blot证实该蛋白是GST/F10的融合蛋白。将纯化的GST/F10融合蛋白免疫家兔,得到的兔抗F10抗体效价达1:20000。结论:成功构建了人F10基因原核表达载体,并获得了高纯度的F10重组蛋白及兔抗F10抗体,为下一步研究F10基因功能奠定了实验基础。 展开更多
关键词 f10基因 原核表达 抗体
RNAi下调F10基因表达对KLE细胞凋亡的影响 被引量:8
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作者 崔艳国 全松 邢福祺 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期 317-319,共3页
目的探讨小分子双链RNA对KLE细胞中F10基因的沉默效应,并确定F10基因沉默对KLE细胞凋亡的影响。方法采用体外转录法制备针对F10基因的dsRNA;脂质体转染KLE细胞,荧光定量PCR检测dsRNA转染KLE细胞不同时间后细胞中F10基因的表达水平;... 目的探讨小分子双链RNA对KLE细胞中F10基因的沉默效应,并确定F10基因沉默对KLE细胞凋亡的影响。方法采用体外转录法制备针对F10基因的dsRNA;脂质体转染KLE细胞,荧光定量PCR检测dsRNA转染KLE细胞不同时间后细胞中F10基因的表达水平;流式细胞仪检测F10基因沉默后KLE细胞凋亡的改变。结果体外转录法能制备足够的dsRNA;F10基因表达水平的检测证实转染KLE细胞的dsRNA下调了F10基因表达,20nmol/L dsRNA转染48h的效应最为显著.基因下调达到83%;20nmol/L dsRNA转染48h,KLE细胞凋亡百分率从0.36%增加至8.91%。结论体外转录制备的针对F10基因的dsRNA能特异有效沉默KLE细胞中的F10基因;F10基因的表达下调可诱导KLE细胞的凋亡。 展开更多
关键词 f10基因 RNAI KLE细胞
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F10基因对细胞中PCNA和Cyclin D1表达的影响 预览 被引量:7
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作者 曹晓敏 庞战军 +1 位作者 全松 邢福祺 《中山大学学报:医学科学版》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期 6-9,14,共5页
【目的】确定F10基因表达对细胞生长的影响,明确F10基因的功能。【方法】构建F10基因的真核表达载体,转染重组pRc-CMV2-F10质粒于肺癌细胞系A549,筛选并获得稳定表达F10基因的细胞克隆A549-F10。通过MTT实验和流式细胞检测F10对细胞生... 【目的】确定F10基因表达对细胞生长的影响,明确F10基因的功能。【方法】构建F10基因的真核表达载体,转染重组pRc-CMV2-F10质粒于肺癌细胞系A549,筛选并获得稳定表达F10基因的细胞克隆A549-F10。通过MTT实验和流式细胞检测F10对细胞生长的影响;通过免疫组化检测细胞中增殖核抗原(PCNA)和细胞周期素D1(cyclinD1)的表达。【结果】转基因的G418抗性克隆能够检测到F10表达。MTT和流式结果显示F10有促进细胞增殖的作用。阳性克隆的细胞株中PCNA和cyclinD1相对较高水平的表达。【结论】F10基因通过上调PCNA和cyclinD1的表达,促进细胞的生长增殖。 展开更多
关键词 f10基因 增殖细胞核抗原 细胞周期素D1
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F10基因与绿色荧光蛋白融合载体的构建及亚细胞定位 预览 被引量:5
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作者 付欣 周问渠 +1 位作者 邢福祺 李冰 《广州医学院学报》 2005年第5期 1-5,共5页
目的:构建F10基因与绿色荧光蛋白的融合蛋白表达载体,进而观察F10基因编码蛋白在细胞内的定位情况.方法:运用RT-PCR技术从葡萄胎组织中分离F10基因的完整ORF,构建pEGFP-N2/F10和pEGFP-C2/F10的融合表达载体,以LipofectA MINE 2000为介导... 目的:构建F10基因与绿色荧光蛋白的融合蛋白表达载体,进而观察F10基因编码蛋白在细胞内的定位情况.方法:运用RT-PCR技术从葡萄胎组织中分离F10基因的完整ORF,构建pEGFP-N2/F10和pEGFP-C2/F10的融合表达载体,以LipofectA MINE 2000为介导剂,将重组载体转染入人乳腺癌细胞MCF-7,并在荧光显微镜和共聚焦显微镜下观察表达的融合蛋白.结果:显微镜下观察到,GFP/F10融合蛋白呈不规则的颗粒状、环状分布于细胞核,或细胞浆,或者在核浆中均有分布,而且在细胞浆中主要分布在细胞器中.而对照的pEGFP蛋白均匀分布在整个细胞浆和细胞核.结论:F10蛋白在细胞的不同周期分布不同,或在细胞核,或在细胞胞浆中,或者在核浆中均有分布. 展开更多
关键词 fIO基因 绿色荧光蛋白 转染
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葡萄胎病理相关新基因F10重组蛋白的表达及鉴定 预览 被引量:5
5
作者 庞战军 周君桂 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2014年第6期577-581,共5页
目的 F10是从葡萄胎组织中克隆的新基因,前期研究显示F10基因可能与滋养细胞侵袭性有关,为进一步研究F10基因功能,拟构建原核质粒表达葡萄胎相关新基因F10重组蛋白,分离纯化并鉴定。方法用逆转录聚合酶链反应法从人组织中扩增F10基因编... 目的 F10是从葡萄胎组织中克隆的新基因,前期研究显示F10基因可能与滋养细胞侵袭性有关,为进一步研究F10基因功能,拟构建原核质粒表达葡萄胎相关新基因F10重组蛋白,分离纯化并鉴定。方法用逆转录聚合酶链反应法从人组织中扩增F10基因编码序列,将其克隆到pET28a原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)内进行诱导表达F10基因重组蛋白,用层析柱予以纯化并采用SDS-PAGE电泳鉴定。结果成功构建了pET28a/F10原核表达质粒,并获得高纯度的重组F10蛋白。结论表达及纯化的重组F10蛋白纯度高,适合作为制备单克隆抗体的抗原,可用于F10功能的进一步研究。 展开更多
关键词 f10基因 f10重组蛋白 葡萄胎
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葡萄胎发病相关新基因F10功能的初步研究 被引量:5
6
作者 曹晓敏 庞战军 +1 位作者 全松 邢福祺 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期 722-724,728,共4页
目的研究与葡萄胎发病相关的新基因F10的功能。方法培养A549细胞,实验分4组:正向F10基因、反向F10基因、空载体分别转染A549细胞组、空白细胞组。转染24h提取细胞mRNA,用差异显示(DDPCR)方法筛选4组之间差异表达的基因。结果获得... 目的研究与葡萄胎发病相关的新基因F10的功能。方法培养A549细胞,实验分4组:正向F10基因、反向F10基因、空载体分别转染A549细胞组、空白细胞组。转染24h提取细胞mRNA,用差异显示(DDPCR)方法筛选4组之间差异表达的基因。结果获得差异表达的条带,二次PCR扩增后产物连接T载体并测序分析,结果与GenBank数据库中的序列进行同源比较,筛选出几个差异表达的基因,经荧光定量PCR证实annexinI(钙依赖、磷脂结合蛋白)、STAT1(信号转导子与转录激活子)、BASP1在正向F10基因转染组高表达。IPLA2、DATF1在正向F10基因转染组低表达。结论F10基因可能是与细胞增殖和凋亡相关的基因。 展开更多
关键词 葡萄胎 f10基因 差异显示PCR 实时定量PCR 细胞增殖 凋亡
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F10基因过表达及沉默对绒癌细胞系 JAR 侵袭相关蛋白酶表达的影响 预览 被引量:3
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作者 苏晓华 庞战军 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2015年第4期350-354,共5页
目的: F10基因是本研究前期发现在葡萄胎中高表达的新基因,本文为明确F10过表达和沉默对绒癌细胞系JAR侵袭性的影响,探讨F10基因与部分侵袭相关蛋白的关系。方法通过细胞转染技术及RNA干扰技术,分别建立和筛选出F10基因稳定过表达... 目的: F10基因是本研究前期发现在葡萄胎中高表达的新基因,本文为明确F10过表达和沉默对绒癌细胞系JAR侵袭性的影响,探讨F10基因与部分侵袭相关蛋白的关系。方法通过细胞转染技术及RNA干扰技术,分别建立和筛选出F10基因稳定过表达及沉默的绒癌细胞系JAR。取SPF级裸鼠30只,随机均分为F10过表达组、未处理组、F10沉默组,每组10只,依次接种F10基因过表达的JAR细胞、未处理的JAR细胞和F10基因沉默的JAR细胞株,于接种5周后处死裸鼠收获皮下肿瘤,采用免疫组织化学及Western blot检测方法,比较不同组瘤体组织中基质金属蛋白酶( matrix metalloproteinase, MMPs)及金属蛋白酶组织抑制物-1( tissue inhibitors of metalloproteinases-1, TIMP-1),血浆纤溶酶原激活物抑制因子( plasmino-gen activator inhibitor-1, PAI-1)等侵袭相关蛋白酶的表达差异。结果免疫组化法检测结果显示:F10、MMP-2、8、11、16、19在F10过表达组、未处理组、F10沉默组中间的表达依次递减,差异有统计学意义( P<0.05),TIMP-1、PAI-1在F10过表达组中分别为0.118±0.029、0.174±0.005,在未处理组中分别为0.214±0.028、0.289±0.009,在F10沉默组中分别为0.430±0.017、0.517±0.074,3组间的表达差异有统计学意义( P<0.05)。 Western blot结果显示,F10、MMP-2、8、11、16、19蛋白在F10沉默组、未处理组、F10过表达组依次递增( P<0.001),而TIMP-1及PAI-1蛋白表达水平依次递减( P<0.001)。结论 F10通过上调MMP-2、8、11、16、19的表达,下调TIMP-1、PAI-1表达,参与调节绒癌细胞的增殖,从而可能参与调节绒癌的侵袭和转移。 展开更多
关键词 绒癌 f10基因 基质金属蛋白酶 血浆纤溶酶原激活物抑制因子 JAR细胞
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F10基因真核细胞稳定表达系统的构建与鉴定 被引量:2
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作者 曹晓敏 庞战军 +1 位作者 全松 邢福祺 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期 57-59,共3页
目的检测葡萄胎发病新基因F10在人多种细胞系中转录水平的表达,从中选取F10低表达的细胞株,构建F10稳定转染的表达系统.研究F10的功能。方法荧光定量PCR检测F10在人A549、16HBE、Bel7402、HIC、HepG2、293、PC、MGC细胞株中的表达差... 目的检测葡萄胎发病新基因F10在人多种细胞系中转录水平的表达,从中选取F10低表达的细胞株,构建F10稳定转染的表达系统.研究F10的功能。方法荧光定量PCR检测F10在人A549、16HBE、Bel7402、HIC、HepG2、293、PC、MGC细胞株中的表达差异。采用电穿孔介导基因转染技术将已构建的pRc—CMV2-F10、pRc—CMV2转染A549细胞系。经G418筛选获得阳性单克隆细胞。细胞扩大培养后,荧光定量PCR技术鉴定F10基因在阳性克隆细胞中的表达。结果新基因F10在人的8种细胞系中呈不同程度的表达,其中在Bel7402、PC、MGC中呈高表达,在HepG2、HIC中表达次之,293中表达量较低,16HBE、A549中表达量最低;稳定转染细胞株A549具有F10基因的整合和相应mRNA的高表达。结论成功构建了稳定表达外源新基因F10的肺癌细胞系,为进一步研究F10基因的生物学功能提供了实验材料。 展开更多
关键词 葡萄胎 f10基因 稳定转染
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四环素及其衍生物诱导表达的pTet-On肺癌细胞系A549的建立 预览 被引量:1
9
作者 曹晓敏 林仲秋 +2 位作者 庞战军 全松 邢福祺 《数理医药学杂志》 2009年第2期 158-160,共3页
目的:构建可受四环素诱导调控的高表达外源基因的真核表达体统A549pTevOn细胞系。用于F10基因的功能研究。方法:将pTet-On质粒用脂质体介导法转染A549细胞,利用G418的药物选择特性,对转染的A549细胞进行压力筛选后的克隆用有限稀释... 目的:构建可受四环素诱导调控的高表达外源基因的真核表达体统A549pTevOn细胞系。用于F10基因的功能研究。方法:将pTet-On质粒用脂质体介导法转染A549细胞,利用G418的药物选择特性,对转染的A549细胞进行压力筛选后的克隆用有限稀释法进行单克隆化,单克隆分别扩增后,瞬时转染pTREquc(编码荧光素酶蛋白)质粒,Dox诱导表达后,检测荧光素酶活性,逐一筛选四环素调控高表达外源基因的A549pTet-On细胞株。结果:成功构建了一株受Dox调控的高表达低背景的A549pTet—On细胞株。结论:筛选的A549细胞为F10基因表达能被pTet-on诱导表达系统调控的细胞系,为研究F10基因功能提供了理想的细胞模型。适合在此基础上对F10基因进行深入的研究。 展开更多
关键词 四环素 f10基因 基因调控
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F10基因沉默及过表达对绒癌细胞系JAR细胞周期的影响 被引量:1
10
作者 杨金娣 庞战军 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期351-355,共5页
目的探讨F10基因功能与部分细胞周期蛋白表达的关系。方法选择已建立并筛选的F10基因沉默、稳定过表达绒癌细胞系JAR,以未处理JAR细胞为对照组,采用流式细胞仪检测细胞周期,Western blotting及免疫荧光细胞化学技术检测细胞周期蛋白(cy... 目的探讨F10基因功能与部分细胞周期蛋白表达的关系。方法选择已建立并筛选的F10基因沉默、稳定过表达绒癌细胞系JAR,以未处理JAR细胞为对照组,采用流式细胞仪检测细胞周期,Western blotting及免疫荧光细胞化学技术检测细胞周期蛋白(cyclin)和细胞周期蛋白依赖激酶(CDKs)的表达水平差异。结果流式细胞仪检测细胞周期显示,F10过表达组的JAR细胞细胞周期较沉默组及未处理组缩短。Western blotting检测结果显示,在F10沉默组、未处理组及F10过表达组的JAR细胞中cyclinA2、cyclinB1、cyclinD1、cyclinE、CDK2、CDK6、CDK7表达递增,过表达组及沉默组的蛋白表达水平与未处理组相比较差异有统计学意义(P〈0.05),CDK4除外。免疫荧光细胞技术实验结果与Western-Blot检测结果基本一致。结论 F10基因通过上调细胞周期蛋白cyclinA2、cyclinB1、cyclinD1、cyclinE、CDK2、CDK6、CDK7的表达,加快细胞周期进程,促进细胞增殖,从而参与调节绒癌细胞的侵袭与转移。 展开更多
关键词 绒癌 f10基因 细胞周期蛋白 CDKS JAR细胞系
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F10蛋白及mRNA在部分正常组织及癌组织中的表达
11
作者 付欣 李熹翀 +4 位作者 周问渠 洪玮 邹东霆 王健 李冰 《现代生物医学进展》 CAS 2014年第30期5859-5861,5854共4页
目的:了解F10基因在部分正常组织及肿瘤组织中的表达情况。方法:利用原位杂交和免疫组化方法对F10在部分正常组织和肿瘤组织中的mRNA和蛋白表达情况进行分析。结果:F10基因不仅在腺癌组织中表达呈阳性,在鳞癌组织中表现出较腺癌更强... 目的:了解F10基因在部分正常组织及肿瘤组织中的表达情况。方法:利用原位杂交和免疫组化方法对F10在部分正常组织和肿瘤组织中的mRNA和蛋白表达情况进行分析。结果:F10基因不仅在腺癌组织中表达呈阳性,在鳞癌组织中表现出较腺癌更强的强阳性,并且在正常组织中也有一定的表达。结论:F10是一个在多种组织普遍表达的细胞内蛋白,其功能可能与物质转运相关。 展开更多
关键词 f10基因 腺癌 鳞癌 正常组织
葡萄胎发病新基因F10在不同肿瘤组织的表达 预览 被引量:15
12
作者 周瑾 梁卫华 +6 位作者 李冰 陈士岭 邢福祺 庞战军 周问渠 付欣 丁彦青 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期 596-597,共2页
目的研究葡萄胎差异表达新基因F10在不同组织的表达情况及其与恶性肿瘤之间的关系.方法采用原位杂交方法检测不同肿瘤组织和正常组织的F10基因mRNA表达.结果F10基因在卵巢腺癌、子宫内膜癌、乳腺癌、肝癌、胃癌等腺癌中阳性表达,不同腺... 目的研究葡萄胎差异表达新基因F10在不同组织的表达情况及其与恶性肿瘤之间的关系.方法采用原位杂交方法检测不同肿瘤组织和正常组织的F10基因mRNA表达.结果F10基因在卵巢腺癌、子宫内膜癌、乳腺癌、肝癌、胃癌等腺癌中阳性表达,不同腺癌之间阳性表达差异无显著性(P>0.05).子宫内膜、宫颈上皮等正常组织、肝癌癌旁组织中F10基因阴性表达.结论葡萄胎差异表达新基因F10不仅与滋养细胞肿瘤密切相关,可能还在某些腺癌发生发展中起重要作用. 展开更多
关键词 肿瘤组织 新基因 葡萄胎 基因mRNA表达 发病 原位杂交方法 滋养细胞肿瘤 差异表达 正常组织 10基因 子宫内膜癌 恶性肿瘤 表达情况 卵巢腺癌 阳性表达 表达差异 宫颈上皮 阴性表达 癌旁组织 发生发展 乳腺癌 显著性 肝癌
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安徽汉族人群IL-1F10-3基因rs3811058位点单核甘酸多态性与强直性脊柱炎患者遗传易感性研究 预览 被引量:3
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作者 张立 潘发明 +9 位作者 曾臻 段振华 王笙 李建平 刘萍 李桂兴 徐胜前 徐建华 张天琛 邹延峰 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2012年第3期 308-310,共3页
目的了解IL-1F10-3基因rs3811058位点的单核苷酸多态性与强直性脊柱炎遗传易感性的关系。方法采用病例对照研究设计,通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对基因型筛查并进行基因组测序验证,检测151例强直性脊柱炎患... 目的了解IL-1F10-3基因rs3811058位点的单核苷酸多态性与强直性脊柱炎遗传易感性的关系。方法采用病例对照研究设计,通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对基因型筛查并进行基因组测序验证,检测151例强直性脊柱炎患者和155例正常对照基因型,并分析基因型及等位基因频率在两组中的分布。结果 IL-1F10-3基因rs3811058位点的等位基因频率和基因型频率在病例组和对照组中的分布差异均无统计学意义。结论安徽地区汉族人群强直性脊柱炎患者遗传易感性可能与IL-1F10-3基因rs3811058位点单核苷酸多态性无关。 展开更多
关键词 强直性脊柱炎 单核苷酸 多态性 IL-1f10-3基因
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强直性脊柱炎易感性与IL-1F10基因多态性关系 被引量:2
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作者 廖芳芳 潘发明 +5 位作者 夏果 徐胜前 徐建华 梅杨 葛锐 朱立炜 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期421-423,共3页
目的探讨强直性脊柱炎易感性与白细胞介素-1F10(IL-1F10)基因中rs6743376和rs6761276位点基因多态性的关系。方法收集2007-2008年安徽医科大学附属第一医院门诊确诊的强直性脊柱炎患者161例和同期正常健康献血人群对照178人,采用基于... 目的探讨强直性脊柱炎易感性与白细胞介素-1F10(IL-1F10)基因中rs6743376和rs6761276位点基因多态性的关系。方法收集2007-2008年安徽医科大学附属第一医院门诊确诊的强直性脊柱炎患者161例和同期正常健康献血人群对照178人,采用基于高温连接酶的连接酶检测反应(LDR)方法检测其IL-1F10 rs6743376和rs6761276位点的单核苷酸多态性,分析比较其等位基因频率及基因型频率在2组中的分布。结果病例组和对照组的rs6743376位点A等位基因频率分别为74.2%,71.6%;C等位基因频率分别为25.8%,28.4%;2组的rs6761276位点C等位基因频率分别为21.1%,18.0%;T等位基因频率分别为78.9%,82.0%;2个位点等位基因在2组人群中的分布差异均无统计学意义(均P〉0.05);基因型频率在2组间的分布差异也无统计学意义。结论安徽籍汉族人群强直性脊柱炎易感性与IL-1F10基因rs6743376和rs6761276位点单核苷酸多态性无关。 展开更多
关键词 强直性脊柱炎 白细胞介素-1f10基因 基因多态性
F10下调通过细胞色素C促进KLE细胞凋亡 预览 被引量:1
15
作者 崔艳国 全松 邢福祺 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期 533-535,共3页
目的建立F10基因表达稳定下调的KLE细胞系,探讨F10基因沉默对KLE细胞凋亡的影响及机制。方法将两条合成的寡核苷酸退火后形成的双链DNA连接到逆转录病毒载体pRetroQ上构建表达质粒pRetroQ-i F10,脂质体转染KLE细胞,嘌呤霉素筛选,获... 目的建立F10基因表达稳定下调的KLE细胞系,探讨F10基因沉默对KLE细胞凋亡的影响及机制。方法将两条合成的寡核苷酸退火后形成的双链DNA连接到逆转录病毒载体pRetroQ上构建表达质粒pRetroQ-i F10,脂质体转染KLE细胞,嘌呤霉素筛选,获得单细胞克隆;荧光定量RT-PCR鉴定阳性克隆。流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光定量RT-PCR和western blot检测细胞色素c和Bc1-2表达。结果两个抗性克隆呈现F10mRNA表达显著下调。F10基因沉默的KLE细胞克隆凋亡率较对照组增加近9倍,细胞色素CmRNA表达上调、胞浆细胞色素c表达增加,Bc1-2mRNA和蛋白表达下调。结论成功构建F10基因表达稳定下调的KLE细胞系,F10基因表达下调导致细胞凋亡;细胞色素c的释放可能是F10沉默诱导KLE细胞凋亡的途径之一。 展开更多
关键词 f10基因 KLE细胞 RNA干扰
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腺病毒CD—80基因转导B16—F10细胞的体外生物学特征 预览
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作者 田长富 李殿俊 +5 位作者 刘旭 任丽君 TIAN Chang-fu LI Dian-jun LIU Xu REN Li-jun 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 2002年第4期 263-266,F003,共5页
目的探讨含hB7-1基因的重组腺病毒hCD80rAd对B16-F10肿瘤细胞体外生物学特性的影响.方法以腺病毒为载体,将CD80基因导入B16-F10肿瘤细胞后,以PCR方法检测基因导入,以电镜、FACS等方法观察对其体外生物学特性的影响.结果重组腺病毒的滴... 目的探讨含hB7-1基因的重组腺病毒hCD80rAd对B16-F10肿瘤细胞体外生物学特性的影响.方法以腺病毒为载体,将CD80基因导入B16-F10肿瘤细胞后,以PCR方法检测基因导入,以电镜、FACS等方法观察对其体外生物学特性的影响.结果重组腺病毒的滴度可达1010PFU/mL,20MOIs rAd可使95%以上的B16-F10细胞被感染.转染CD80基因后,B16-F10细胞的生长能力、克隆形成能力等均无变化,电镜下,细胞表面结构及胞内超微结构有轻微变化.结论重组腺病毒hCD80rAd可以有效地将hCD80基因导入肿瘤细胞而不会引起明显的生物学特性改变,制备肿瘤疫苗是可行的. 展开更多
关键词 体外生物学特征 重组腺病毒 B16-f10 CD80 基因治疗 肿瘤疫苗
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阳离子脂质体介导IL-15基因治疗小鼠肺转移模型的实验研究 被引量:1
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作者 滕秀 周西坤 +4 位作者 张印兵 邱吉 毛咏秋 邓洪新 李炯 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期 148-152,共5页
目的:用阳离子脂质体(CL)包裹pcDNA3.1-IL15制备阳离子脂质体质粒DNA复合物CL-IL15,观察其抗小鼠B16-F10肺转移瘤的治疗作用,并初步探讨其作用机制。方法:构建hIL-15真核表达载体,测定脂质体-质粒DNA复合物的最佳包封率;将该复合物... 目的:用阳离子脂质体(CL)包裹pcDNA3.1-IL15制备阳离子脂质体质粒DNA复合物CL-IL15,观察其抗小鼠B16-F10肺转移瘤的治疗作用,并初步探讨其作用机制。方法:构建hIL-15真核表达载体,测定脂质体-质粒DNA复合物的最佳包封率;将该复合物转染CHO-K1细胞株,West-ern blott检测体外转染条件下IL-15蛋白的表达情况,MTT法检测细胞转染上清对CTLL-2细胞株的增殖刺激作用;建立B16-F10小鼠黑色素瘤肺转移模型,尾静脉给药,每隔1 d给药1次,共6次,治疗结束24 h后观察各组肿瘤肺转移情况;LDH释放法(乳酸脱氢酶释放法)检测脾淋巴细胞的杀伤作用,冰冻切片免疫荧光法观察NK细胞对肿瘤组织的浸润。结果:成功构建hIL-15表达载体,并验证其与阳离子脂质体的质量比为1∶5时,包裹后形成的复合物具有较好的包封率;可以在体外有效转染并表达具生物活性的分泌型IL-15蛋白;CL-IL15复合物治疗小鼠肿瘤肺转移模型,可以显著减少肿瘤肺转移结节数目,提高脾细胞对肿瘤细胞杀伤活性(P〈0.05),增加NK细胞在肿瘤组织中的浸润比例。结论:阳离子脂质体质粒DNA复合物CL-IL15可有效地抑制小鼠B16-F10肺转移瘤,其作用机制可能与IL-15诱导脾细胞对肿瘤细胞的杀伤、激活NK(natural killer)细胞对肿瘤组织的浸润等机制有关。 展开更多
关键词 阳离子脂质体 IL-15 B16-f10 肺转移 基因治疗
F10基因过表达及沉默对绒癌细胞系JEG-3侵袭性的影响 被引量:1
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作者 苏晓华 庞战军 《中华实用诊断与治疗杂志》 2015年第5期444-447,共4页
目的探讨F10基因过表达及沉默对绒癌细胞系JEG-3侵袭相关蛋白酶表达的影响。方法采用细胞转染技术及RNA干扰技术,分别建立和筛选出F10基因稳定过表达及沉默的绒癌细胞系JEG-3。将SPF级裸鼠(4~5周龄)30只随机分为F10过表达组、F10沉默... 目的探讨F10基因过表达及沉默对绒癌细胞系JEG-3侵袭相关蛋白酶表达的影响。方法采用细胞转染技术及RNA干扰技术,分别建立和筛选出F10基因稳定过表达及沉默的绒癌细胞系JEG-3。将SPF级裸鼠(4~5周龄)30只随机分为F10过表达组、F10沉默组和未处理组各10只,分别接种F10基因过表达的JEG-3细胞、F10基因沉默的JEG-3细胞和未处理的JEG-3细胞。于接种5周后处死裸鼠取皮下肿瘤,采用免疫组织化学法和Western blot法检测各组瘤体组织中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)、基质金属蛋白酶组织抑制物-1(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase,TIMP-1),血浆纤溶酶原激活物抑制因子(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)等侵袭相关蛋白酶的表达,并进行比较。结果免疫组织化学结果显示,F10过表达组成瘤组织中MMP-2、MMP-8、MMP-11、MMP-16、MMP-19蛋白表达水平(0.332±0.037、0.473±0.089、0.441±0.031、0.470±0.040、0.548±0.062)高于未处理组(0.209±0.021、0.314±0.108、0.207±0.025、0.400±0.057、0.466±0.038)和F10沉默组(0.049±0.013、0.168±0.034、0.149±0.024、0.240±0.024、0.175±0.029)(P〈0.05),未处理组高于F10沉默组(P〈0.05);F10过表达组TIMP-1(0.191±0.027)和PAI-1蛋白(0.130±0.020)表达水平低于未处理组(0.249±0.036、0.284±0.020)和F10沉默组(0.310±0.018、0.463±0.115)(P〈0.05),未处理组低于F10沉默组(P〈0.05)。wesrern blot检测结果显示,上述侵袭相关蛋白酶在3组间比较差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论 F10通过上调MMP-2、MMP-8、MMP-11、MMP-16、MMP-19表达,下调TIMP-1、PAI-1表达,促进绒癌细胞增殖、侵袭和转移。 展开更多
关键词 绒癌 f10基因 基质金属蛋白酶 血浆纤溶醇原激活物抑制因子 JEG-3细胞
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