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表达猪瘟病毒E2和猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白重组腺病毒动物免疫保护试验 认领
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作者 华思红 熊贝佳 +2 位作者 樊钰莹 孙永科 杨玉艾 《动物医学进展》 北大核心 2018年第11期7-13,共7页
为研究共表达猪瘟病毒(CSFV)E2基因和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5基因的重组腺病毒(rAd-E2-GP5)的免疫保护效果,将rAd-E2-GP5免疫34日龄~38日龄的健康断奶仔猪2次(间隔20d),同时设商品苗和空白对照组,二免21d后攻毒。ELISA结果显... 为研究共表达猪瘟病毒(CSFV)E2基因和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5基因的重组腺病毒(rAd-E2-GP5)的免疫保护效果,将rAd-E2-GP5免疫34日龄~38日龄的健康断奶仔猪2次(间隔20d),同时设商品苗和空白对照组,二免21d后攻毒。ELISA结果显示,rAd-E2-GP5免疫后可检测到抗CSFV特异性血清抗体,未检测到抗PRRSV特异性血清抗体。组织核酸RT-PCR检测、临床症状和病理变化观察结果显示,重组腺病毒组分别攻击CSFV、PRRSV、CSFV+PRRSV强毒,死亡率为0,分别有0/5、4/5、4/5头表现临床症状,2/5、5/5、5/5头有眼观病变,0/5、4/5、4/5头检出PRRSV;商品苗组分别攻击CSFV、PRRSV、CSFV+PRRSV强毒,死亡率为0,分别有0/5、1/5、1/5头表现临床症状,3/5、4/5、3/5头有眼观病变,0/5、1/5、1/5头检出PRRSV;重组腺病毒组和商品苗对照组组织中均未检测到CSFV;空白对照组5/5头表现典型临床症状,5/5头死亡,5/5头检出PRRSV或CSFV。说明构建的rAd-E2-GP5能保护致死量的CSFV、PRRSV和CSFV+PRRSV强毒的攻击,但大部分猪有临床症状和病理变化。后续的研究中仍需要进一步加强重组疫苗对PRRS保护效果的试验,为CSF和PRRS联合疫苗的研发和实际应用奠定基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 E2基因 GP5基因 重组腺病毒 保护效果
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2015—2017年我国猪繁殖与呼吸综合征流行毒株遗传变异分析 认领 被引量:1
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作者 刘晓东 熊伯立 +7 位作者 杜元钊 王小龙 杨旭兵 马振乾 刘红祥 张学伟 朱小丽 高丰 《中国动物检疫》 CAS 2018年第7期6-9,53共5页
为进一步了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在国内的分子遗传进化情况,从而对我国猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)防控提供依据,对2015—2017年国内分离的58株PRRSV野毒株与疫苗毒株的GP5基因进行分析比较。结果显示:我国现有PRRSV毒株... 为进一步了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在国内的分子遗传进化情况,从而对我国猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)防控提供依据,对2015—2017年国内分离的58株PRRSV野毒株与疫苗毒株的GP5基因进行分析比较。结果显示:我国现有PRRSV毒株主要集中于第一亚群、第四亚群、第五亚群及新亚群;同一亚群和不同亚群毒株间的中和表达位点、毒力位点以及N-糖基化位点均存在一定的变异。结果表明:我国PRRSV毒株存在易变异和多样性等特点,这为该病防疫带来较大压力;PRRS防控必须进行田间的毒株检测和基因分析,然后选择相应基因型毒株疫苗进行免疫。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 基因亚群 变异分析 GP5基因
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1株NSP2蛋白5个氨基酸缺失的PRRSV遗传进化分析 认领 被引量:1
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作者 张勋 赵庆亮 +4 位作者 杨素芳 陈新凯 吴鹏 梁田 盛金良 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2017年第2期37-43,共7页
【目的】研究新疆猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的遗传变异情况。【方法】提取PRRSV感染病猪肺脏RNA,通过RT-PCR方法对PRRSV NSP2部分基因和ORF5基因进行扩增、克隆和测序,分析其分子变异特征。【结果】成功克隆到1株PRRSV,命名为XJ... 【目的】研究新疆猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的遗传变异情况。【方法】提取PRRSV感染病猪肺脏RNA,通过RT-PCR方法对PRRSV NSP2部分基因和ORF5基因进行扩增、克隆和测序,分析其分子变异特征。【结果】成功克隆到1株PRRSV,命名为XJzx1株,其NSP2基因编码蛋白第472~476位存在5个氨基酸的连续缺失,有别于高致病毒株第482、533~561位30个氨基酸的典型缺失,位于经典毒株HB-2(sh)/2002第471~482位12个氨基酸缺失区域内;XJzx1与HK13株NSP2部分基因核苷酸序列相似性最高,为87.5%,系统进化树分析显示,XJzx1株与我国高致病毒株JXA1、HUN4、SX2009等同属一个分支;XJzx1 ORF5基因与我国经典毒株CH-1a、BJ-4、HK6等同属一个分支,其GP5蛋白不存在氨基酸的缺失或插入,而表现为多位点的突变。【结论】PRRSV XJzx1株具有独特的遗传进化特征,其毒性较经典毒株有所加强,推测为新型变异株。 展开更多
关键词 PRRSV NSP2基因缺失 GP5基因 序列分析
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猪繁殖与呼吸综合征病毒乌鲁木齐分离株GP5基因遗传变异分析 认领
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作者 蔡扩军 李爱巧 +4 位作者 何生 杨启元 韩义忠 陈发喜 梁望旺 《中国兽医杂志》 北大核心 2017年第5期20-22,共3页
为对乌鲁木齐市猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的分子遗传变异情况进行研究与分析,应用RT-PCR方法对疑似感染PRRSV猪的组织脏器进行PRRSV GP5基因的扩增,将阳性样品PCR产物进行克隆和测序,并应用分子生物学软件对测序结果进行比对和... 为对乌鲁木齐市猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的分子遗传变异情况进行研究与分析,应用RT-PCR方法对疑似感染PRRSV猪的组织脏器进行PRRSV GP5基因的扩增,将阳性样品PCR产物进行克隆和测序,并应用分子生物学软件对测序结果进行比对和遗传进化分析。结果显示,5株病毒分离株GP5基因全长均为603 bp,与JXA1株亲缘关系较近,同属于美洲株的同一基因亚群。本试验结果为掌握乌鲁木齐市PRRSV的分子遗传变异情况提供了依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5基因 遗传变异
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山东省猪繁殖与呼吸综合征病毒流行毒株GP5基因遗传变异分析 认领 被引量:3
5
作者 范玉凤 白娟 姜平 《家畜生态学报》 北大核心 2017年第4期63-67,共5页
为了解山东省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的分子特征,收集临床发病猪群肺脏样品31份,应用RT-PCR方法检测其遗传变异情况。结果表明,25份肺脏样品检测呈阳性(阳性率80.6%),分离获得16个毒株。通过对分离株GP5基因序列进... 为了解山东省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的分子特征,收集临床发病猪群肺脏样品31份,应用RT-PCR方法检测其遗传变异情况。结果表明,25份肺脏样品检测呈阳性(阳性率80.6%),分离获得16个毒株。通过对分离株GP5基因序列进行分析,表明16株PRRSV均为美洲型,分布于4个基因亚型,其中7株PRRSV与高致病性PRRSV处于同一分枝,同源性介于78.2%-99.2%,6株PRRSV与NADC30毒株处于同一分枝,同源性介于85.0%-95.8%间。因此,山东省PRRSV流行毒株呈现基因多样化,在该病防控中应加强新变异株监测,加强猪场生物安全措施与病毒净化。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5基因 序列分析
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陕西及周边地区PRRSV Nsp2与GP5基因变异分析 认领
6
作者 吴旭锦 朱小甫 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2016年第12期1-8,共8页
【目的】了解陕西及周边省份部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2和GP5的变异情况。【方法】采用套式RT-PCR方法,从肝、脾、肺和血清中直接扩增Nsp2、GP5基因并克隆测序,将获得的PRRSV流行毒株序列与GenBank中30个PRRSV参考毒... 【目的】了解陕西及周边省份部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2和GP5的变异情况。【方法】采用套式RT-PCR方法,从肝、脾、肺和血清中直接扩增Nsp2、GP5基因并克隆测序,将获得的PRRSV流行毒株序列与GenBank中30个PRRSV参考毒株进行比对分析,构建进化树。【结果】获得了13株PRRSV的Nsp2基因序列(GenBank登录号KM233849~KM233861)和12株GP5基因序列(GenBank登录号KM233862~KM233873)。基因进化树分析显示所有测定PRRSV流行毒株均属北美洲型。对Nsp2基因序列分析发现,12株PRRSV为氨基酸缺失毒株,1株PRRSV为经典毒株。发现GSXF毒株有可能是一株重组毒株。PRRSV变异株与经典株相比,GP5蛋白中存在多处氨基酸点突变。【结论】陕西猪场PRRSV流行毒株以变异株为主,同时存在经典毒株和重组毒株。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP2基因 GP5基因 陕西及周边省份
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2014—2016年广东省PRRSV GP5基因遗传变异分析 认领 被引量:1
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作者 蒋智勇 蔡汝健 +1 位作者 李艳 李春玲 《广东农业科学》 CAS 2016年第12期90-95,共6页
为监测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的遗传变异情况,采集了2014—2016年间广东地区46个猪场317份疑患PRRS的临床样品进行检测,并对阳性样品的GP5基因进行了RT-PCR扩增、克隆和测序,选出21株PRRSV GP5基因进行序列比对和遗传进化分... 为监测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的遗传变异情况,采集了2014—2016年间广东地区46个猪场317份疑患PRRS的临床样品进行检测,并对阳性样品的GP5基因进行了RT-PCR扩增、克隆和测序,选出21株PRRSV GP5基因进行序列比对和遗传进化分析。结果表明:所分离的PRRSV均属于美洲株,21株PRRSV GP5基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为82.4%-98.7%和78.6%-98.5%,其中2株与美国NADC30分离株同属亚群Ⅲ,10株与近几年广东省内分离的PRRSV毒株QYYZ和GM2同属于亚群Ⅳ。PRRSV GP5基因的遗传进化分析结果表明,亚群Ⅲ和亚群Ⅳ是近几年在广东省内流行的新兴亚群,研究结果将为PRRSV疫苗的选择以及防控方案的制定提供参考。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) GP5基因 遗传变异
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猪繁殖与呼吸综合征病毒部分Nsp2基因及GP5基因的克隆与序列分析 认领 被引量:4
8
作者 孙春亮 赵敬慧 +2 位作者 赵立峰 刘月 蔡锦顺 《延边大学农学学报》 2014年第3期192-198,共7页
为掌握目前长春及周边地区高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行动态及遗传变异规律,选取PRRSV CC-13株的部分Nsp2和GP5蛋白基因为研究对象,通过RT-PCR方法扩增获得这些基因片段,对其进行克隆、测序,再用MEGA(4.0)等生物软... 为掌握目前长春及周边地区高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行动态及遗传变异规律,选取PRRSV CC-13株的部分Nsp2和GP5蛋白基因为研究对象,通过RT-PCR方法扩增获得这些基因片段,对其进行克隆、测序,再用MEGA(4.0)等生物软件分别对其核苷酸及其推导氨基酸序列与从GenBank中选取的10余株代表毒株的相应序列进行比较。这不仅为CC-13分离毒株的遗传变异特性及来源提供了解,同时也为本地区PRRS的防制及进一步研究本地区PRRSV的分子生物学特性提供数据依据。 展开更多
关键词 PRRSV NSP2基因 GP5蛋白基因 序列分析
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PRRSV—GP5蛋白对干扰素调节因子-3磷酸化的影响 认领 被引量:1
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作者 牛晓芸 王艳丽 +3 位作者 熊志轩 张显浩 李康宁 贺东生 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第1期17-20,205共5页
为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)-GP5蛋白对干扰素调节因子-3(IRF-3)磷酸化的影响,试验根据PRRSVCH-la毒株核苷酸序列,设计并合成用于扩增PRRSV—GP5基因的特异引物,将目的基因扩增产物与真核表达载体pcDNA3.1(+)连... 为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)-GP5蛋白对干扰素调节因子-3(IRF-3)磷酸化的影响,试验根据PRRSVCH-la毒株核苷酸序列,设计并合成用于扩增PRRSV—GP5基因的特异引物,将目的基因扩增产物与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,转染Marc-145细胞,间接免疫荧光试验鉴定目的蛋白的表达,应用SDS—PAGE和Western—blot分析GP5对IRF-3的影响。结果表明:经RT—PCR扩增,得到的GP5基因大小与预期一致;间接免疫荧光试验证明,GP5蛋白在Marc-145细胞中成功表达;SDS—PAGE和Western—blot分析显示,GP5基因可以抑制IRF一3的磷酸化。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) GP5基因 真核表达 干扰素调节因子-3(IRF-3)
猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因的克隆和原核表达 认领 被引量:5
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作者 袁庄川 王鲁彦 +2 位作者 梅匀安 张敏 王晓杜 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第12期17-21,共5页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)可引起各种年龄猪的呼吸系统和母猪繁殖机能障碍,导致猪场损失严重,其中GP5蛋白在PRRSV病毒侵入、致病及免疫保护中发挥重要作用。提取猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组RNA,反转录合成cDNA,PCR扩增获得GP5... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)可引起各种年龄猪的呼吸系统和母猪繁殖机能障碍,导致猪场损失严重,其中GP5蛋白在PRRSV病毒侵入、致病及免疫保护中发挥重要作用。提取猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组RNA,反转录合成cDNA,PCR扩增获得GP5基因,片段大小为600bp。将GP5基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1上,菌落PCR和限制性内切酶双酶切鉴定,重组质粒PGEX-6P-1-GP5构建成功,重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析重组蛋白的表达,Western blot分析重组蛋白的反应原性。结果表明,重组融合蛋白His-GP5分子质量约为41ku,主要以包涵体的形式存在,表达量占菌体总蛋白的35%以上,纯化后的重组蛋白占总蛋白的75%以上;并且该重组蛋白能与猪的阳性血清反应,说明其具有较好的免疫原性。研究结果为基因工程疫苗的研发和GP5的抗体制备奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5基因 原核表达 纯化
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猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因的亚克隆及原核表达 认领 被引量:1
11
作者 李建辉 左玉柱 +1 位作者 孙彦欣 范京惠 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第1期 19-22,共4页
本研究从河北省保定地区6份疑似感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)病猪的肺脏中,通过RT-PCR获得PRRSV GP5蛋白完整的基因片段,克隆至pMD18-T载体。经测序鉴定正确后,再设计一对引物从重组载体pMD18-T-GP5中扩增出缺失了N端30个氨基... 本研究从河北省保定地区6份疑似感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)病猪的肺脏中,通过RT-PCR获得PRRSV GP5蛋白完整的基因片段,克隆至pMD18-T载体。经测序鉴定正确后,再设计一对引物从重组载体pMD18-T-GP5中扩增出缺失了N端30个氨基酸残基的dGP5的编码序列dORF5,克隆至原核表达载体pGEX-6p-1,构建原核重组质粒(pGEX-6p-dGP5),转化至E.coli BL21感受态细胞。经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳可检测到分子质量为40ku的目的蛋白。经Western blot分析表明,该蛋白与PRRS阳性血清具有良好的免疫反应性,为进一步研究PRRS新型基因工程疫苗和诊断试剂奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5基因 原核表达
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猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5和M基因重组腺病毒的构建及表达 认领 被引量:1
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作者 高博 马玲 +7 位作者 张念 毛燕 陈凤莲 张守峰 刘烨 张菲 扈荣良 吴健敏 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第1期 23-27,共5页
为构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组腺病毒活载体疫苗,本研究将PRRSV GP5和M基因串联表达盒定向克隆至穿梭质粒pacAd5CMVK-NpA多克隆位点处,获得重组穿梭质粒pacAd5CMVK-NpA-GP5-M,与骨架质粒pacAd5 9.2-100共转染293AD细胞,包... 为构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组腺病毒活载体疫苗,本研究将PRRSV GP5和M基因串联表达盒定向克隆至穿梭质粒pacAd5CMVK-NpA多克隆位点处,获得重组穿梭质粒pacAd5CMVK-NpA-GP5-M,与骨架质粒pacAd5 9.2-100共转染293AD细胞,包装出含有GP5和M基因的重组腺病毒rAd5-GP5-M。应用PCR技术、间接免疫荧光、Western blot分析,结果表明,GP5和M基因已经被成功整合到了腺病毒基因组上,且GP5和M蛋白在293AD细胞上均得到了表达;滴度测定表明,该重组腺病毒rAd5v-GP5-M的TCID50为10-6.5/mL;连续传代试验表明该重组腺病毒可在细胞内稳定繁殖,有效地转录并表达GP5和M蛋白,具有较高的遗传稳定性。该研究为PRRSV重组腺病毒疫苗的研制打下了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5基因 M基因 重组腺病毒
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猪繁殖与呼吸综合征病毒7个分离株全基因序列测定及遗传进化分析 认领 被引量:7
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作者 罗俊 刘业兵 +1 位作者 姜晓晨 宁宜宝 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期 176-179,共4页
为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的变异情况,本研究利用RT-PCR方法对2006年~2009年在我国部分地区分离鉴定的7株PRRSV分别进行9段基因片段扩增,测序分析表明,获得的病毒全基因序列与PRRSVJXAl变异株高度同源。并与GenBank中... 为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的变异情况,本研究利用RT-PCR方法对2006年~2009年在我国部分地区分离鉴定的7株PRRSV分别进行9段基因片段扩增,测序分析表明,获得的病毒全基因序列与PRRSVJXAl变异株高度同源。并与GenBank中登录的其他70株PRRSV全基因序列进行遗传分析,根据构建的遗传进化树分析表明,中国大陆PRRSV分离株包含美洲型和欧洲型,美洲型可分为3个亚群,亚群1主要为以JXAl株为代表的病毒株,本研究中的7个分离株均为亚群1,其GP5主要中和抗原表位高度变异;亚群2主要为以CH-la株为代表的病毒株;亚群3主要为以VR-2332株为代表的病毒株。欧洲型病毒株BJEU06.1、NMEU09-1分属于不同亚型。本实验为深入研究该病毒的遗传与变异及其分子流行病学研究奠定基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5基因 遗传与变异 分子流行病学
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PRRSV GP5基因的优化、表达及其表达产物的免疫学活性分析 认领 被引量:1
14
作者 黄园媛 邹灵秀 +1 位作者 李能章 彭远义 《西南大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期 1-5,共5页
PRRSV GP5基因含有一段信号肽及3个跨膜功能区,这些区域可以使翻译的GP5停留在内质网,从而抑制其表达.根据实验室分离测定的PRRSV T1株GP5基因序列进行优化设计,通过人工合成获得GP5-ShortDNA并构建表达载体pGEX-GP5,将其转入大肠杆菌BL... PRRSV GP5基因含有一段信号肽及3个跨膜功能区,这些区域可以使翻译的GP5停留在内质网,从而抑制其表达.根据实验室分离测定的PRRSV T1株GP5基因序列进行优化设计,通过人工合成获得GP5-ShortDNA并构建表达载体pGEX-GP5,将其转入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达获得约41kD的目的融合蛋白.通过Western-blot检测,结果显示该融合蛋白可与PRRSV阳性血清发生特异性反应,表明该蛋白具有免疫学活性.研究结果为PRRSV基因工程苗的研究奠定了基础,同时也为基因的优化提供了借鉴. 展开更多
关键词 PRRSV GP5 基因合成 原核表达 免疫学活性
猪繁殖与呼吸综合征病毒PCR-DHPLC检测新技术的建立及应用 认领 被引量:3
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作者 杨春华 祝建新 +4 位作者 钟毅 孙思扬 沈艳 陈庆富 王川庆 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期 167-171,共5页
应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),根据PRRSV GP5基因的序列特点设计特异性引物,PCR扩增产物经DHPLC技术进行快速检测。以猪细小病毒、猪圆环病毒Ⅱ型、猪流感病毒、猪瘟病毒和猪伪狂犬病... 应用PCR结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),根据PRRSV GP5基因的序列特点设计特异性引物,PCR扩增产物经DHPLC技术进行快速检测。以猪细小病毒、猪圆环病毒Ⅱ型、猪流感病毒、猪瘟病毒和猪伪狂犬病毒进行特异性试验,无交叉反应,具有较好的特异性和重复性;对阳性标准品的检测结果表明,所建立的PCR-DHPLC法灵敏度可达1.0×101拷贝/μL。对16份疑似病料分别应用本试验所建立的PCR-DHPLC法与SYBR GreenⅠ实时荧光PCR法、PCR-凝胶电泳法、病毒培养法进行检测,发现有15份荧光定量PCR阳性,15份PCR-DHPLC阳性,12份PCR-凝胶电泳阳性。结果表明,建立的PCR-DHPLC法具有特异、敏感、快速、重复性好等优点,可用于临床PRRSV感染的早期诊断以及分子流行病学调查。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5基因 变性高效液相色谱 实时荧光PCR
2005年-2010年我国部分地区PRRSV流行毒株的遗传变异分析 认领 被引量:10
16
作者 范培虎 危艳武 +3 位作者 郭龙军 吴洪丽 黄立平 刘长明 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第3期 1-7,共7页
为了掌握高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的变异情况,揭示该病的发生规律,根据GenBank登录的PRRSV基因序列设计引物,采用RT-PCR法对2005年-2010年间送检的282份病料进行了PRRSV核酸检测,对其中9份阳性样品进行了ORF5-7基因片... 为了掌握高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的变异情况,揭示该病的发生规律,根据GenBank登录的PRRSV基因序列设计引物,采用RT-PCR法对2005年-2010年间送检的282份病料进行了PRRSV核酸检测,对其中9份阳性样品进行了ORF5-7基因片段扩增和测序,所得序列与GenBank下载的PRRSV CH-1a、VR2332、HB-2、LV株的ORF5序列进行同源性比较,并与国内已发表的27株PRRSV ORF5序列进行遗传进化树分析,对GP5蛋白潜在糖基化位点和数目进行预测与分析。结果表明,病料PRRSV核酸阳性检出率为18.8%(53/282);9个流行毒株同属于一个基因亚群,其ORF5序列同源性为95.0%-99.2%,氨基酸序列同源性为92.0%-99.0%;与4个参考毒株的ORF5序列同源性依次为93.4%-95.5%、87.6%-89.4%、91.2%-92.7%和63.0%-64.0%,氨基酸序列的同源性依次为91.0%-94.0%、85.6%-88.6%、89.6%-92.0%和54.7%-58.2%;GP5糖基化位点分析表明,5个糖基化位点有3株,4个糖基化位点有5株,3个糖基化位点有1株;这些糖基化位点分布在第30位-第55位氨基酸之间,以第44、55位点保守,另3个位点存在变异。我国猪群中PRRSV流行毒株变异幅度较大,GP5糖基化位点不同可能与毒力存在一定联系。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5基因 遗传变异
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PRRSV GP5蛋白及猪IL-18基因共表达核酸疫苗免疫原性试验 认领 被引量:4
17
作者 沈宪文 王中华 +2 位作者 高磊 李国江 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期 1543-1549,共7页
本试验通过分子克隆技术分别构建了单独表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5基因以及PRRSVGP5基因和猪IL-18基因共表达的重组核酸疫苗质粒(pEGFP—GP5和pEGFP—ILl8-GP5),并进行仔猪免疫原性研究,对构建的PRRSV核酸疫苗所诱导... 本试验通过分子克隆技术分别构建了单独表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5基因以及PRRSVGP5基因和猪IL-18基因共表达的重组核酸疫苗质粒(pEGFP—GP5和pEGFP—ILl8-GP5),并进行仔猪免疫原性研究,对构建的PRRSV核酸疫苗所诱导的体液免疫和细胞免疫水平进行检测,进一步研究了PRRSV核酸疫苗免疫效果以及猪IL-18基因对PRRSV核酸疫苗免疫调节作用的影响。同时,调查了商业上应用不同类型的PRRSV疫苗诱导的免疫效果,并与核酸疫苗免疫效果进行比较。结果表明,IL-18作为免疫佐剂在疫苗免疫猪后诱导的病毒特异性细胞免疫反应方面具有很好的调节作用,共表达IL18-GP5蛋白能够明显的改善DNA疫苗的免疫效力,增强抗PRRSV的免疫保护。因此,DNA疫苗做为一种新一代疫苗可用于对抗高致病性PRRSV感染。 展开更多
关键词 PRRSV GP5基因 猪IL-18 DNA疫苗
PRRSV-GP5基因的克隆及其蛋白结构和B细胞表位预测 认领 被引量:3
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作者 陈军义 王开功 +6 位作者 罗险峰 周碧君 文明 程振涛 张双翔 路宪礼 刘飞 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期769-773,共5页
应用RT-PCR扩增PRRSV-GP5目的基因,将纯化DNA与pMD18-T载体连接并转化入DH5α菌株,将阳性重组质粒进行测序和同源性对比。以此基因为材料,应用同源模型化的方法建立其3D结构和DNAStar软件预测其二级结构、亲水性、抗原指数、表面可及性... 应用RT-PCR扩增PRRSV-GP5目的基因,将纯化DNA与pMD18-T载体连接并转化入DH5α菌株,将阳性重组质粒进行测序和同源性对比。以此基因为材料,应用同源模型化的方法建立其3D结构和DNAStar软件预测其二级结构、亲水性、抗原指数、表面可及性及柔韧性,并综合分析了其B细胞抗原表位。结果表明,该基因高度保守,同时PRRSV-GP5蛋白呈现较规则的空间结构,其肽段32~36、51~53、140~142、146~151和196~197可能是其优势B细胞抗原表位区域,该结果将为PRRSV-GP5基因工程疫苗的研究和体外表达产物的应用提供理论依据。 展开更多
关键词 PRRSV GP5基因 克隆 蛋白结构 B细胞抗原表位
盐城市PRRS流行病学分析 认领
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作者 刘靖清 袁涛 张亮 《中兽医医药杂志》 2011年第1期 13-16,共4页
用核酸分子检测及序列分析技术,对江苏盐城市蓝耳病分离株的GP5基因进行分子克隆、序列测定及同源性比较,依此绘制PRRS病毒GP5基因系统发生树,进而对该地区猪蓝耳病疫情进行分子流行病学分析。研究发现盐城分离株Yancheng1、2的GP5基因... 用核酸分子检测及序列分析技术,对江苏盐城市蓝耳病分离株的GP5基因进行分子克隆、序列测定及同源性比较,依此绘制PRRS病毒GP5基因系统发生树,进而对该地区猪蓝耳病疫情进行分子流行病学分析。研究发现盐城分离株Yancheng1、2的GP5基因与国内Jiangxi1、HuB1、SD、LN-5核苷酸同源性分别为86.1%~97%,氨基酸同源性分别为86%~92%。Yancheng1、2核苷酸同源性为98%,氨基酸同源性为97%。Yancheng1、2与CH1-a遗传关系较近,同源性为97%、97.5%;与欧洲代表株LV核苷酸同源性为56%,氨基酸同源性为54%,表明Yancheng1、2属于美洲型;而与疫苗株BJ-4、RespPRRSMLV遗传关系稍远,核苷酸、氨基酸同源性分别为86.6%~88.1%,分属于不同的基因亚型。由此推测,在盐城市散发的猪蓝耳病并非外来,也不是疫苗株逃逸或毒力返强的结果,而是原有田间流行毒株发生了某种重要变异所致。 展开更多
关键词 蓝耳病 GP5基因 分子流行病学
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靶向GP5基因脱氧核酶抑制PRRSV在MARC-145细胞中的复制 认领 被引量:3
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作者 宋德武 袁洁 +5 位作者 李鑫 郭育培 杨建新 宣华 王贵平 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期 1695-1701,共7页
针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)JL/07/SW株GP5基因设计了4个脱氧核酶,经体外切割试验筛选得到具有体外切割活性的脱氧核酶,并通过RT-PCR、TCID50、CPE、间接免疫荧光(IFA)检测具有切割活性的脱氧核酶抑制PRRSV复制效果进行评价... 针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)JL/07/SW株GP5基因设计了4个脱氧核酶,经体外切割试验筛选得到具有体外切割活性的脱氧核酶,并通过RT-PCR、TCID50、CPE、间接免疫荧光(IFA)检测具有切割活性的脱氧核酶抑制PRRSV复制效果进行评价。结果针对GP5基因的Dz-GP5-10抑制效率最高可达到82.4%,Dz-GP5-12也表现良好的抑制效果,表明GP5基因的这2个位点可能是PRRSV复制所必需的。本研究为PRRSV复制及基因组功能研究、抗病毒药物开发和转基因动物研究奠定了基础。 展开更多
关键词 PRRSV 脱氧核酶 GP5基因
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