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抗人Kv1.5胞外环肽段E215抗体的制备与鉴定
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作者 戴芝银 刘坤 +8 位作者 曾秋棠 刘金平 祝聪聪 杨晓芳 廖玉华 王敏 陈志坚 黄丹 刘鸿涛 《临床心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期389-392,共4页
目的:为研究新的人Kv1.5(hKv1.5)通道/超快激活延迟整流钾通道(Ikur)阻滞剂,通过免疫法制备抗hKv1.5胞外环肽段E215的特异性抗体,并进行鉴定。方法:雄性新西兰大白兔,随机分为免疫组和假性免疫组。从hKv1.5胞外环中筛选出一段短肽... 目的:为研究新的人Kv1.5(hKv1.5)通道/超快激活延迟整流钾通道(Ikur)阻滞剂,通过免疫法制备抗hKv1.5胞外环肽段E215的特异性抗体,并进行鉴定。方法:雄性新西兰大白兔,随机分为免疫组和假性免疫组。从hKv1.5胞外环中筛选出一段短肽E215作为抗原肽免疫动物。免疫组予抗原免疫,2周1次,假性免疫组予0.9%氯化钠溶液免疫,方法同前。实验63 d处死,留取血清,亲合层析法提取、纯化抗肽段E215抗体。酶联免疫吸附法(ELISA)动态地观察抗体在体内的产生及效价,免疫荧光组织化学及免疫印迹(Western-blot)观察制备的抗体与人心房肌细胞膜及hKv1.5/Ikur通道蛋白的结合。结果:ELISA结果表明,免疫组于实验第28、42、56、63 d血清抗体滴度分别达到1∶6 400、1∶6 400、1∶6 400、1∶12 800;免疫荧光组织化学显示,制备的抗体能结合于人心房肌细胞的细胞膜;Western-blot结果表明,此抗体能特异性结合人心房肌细胞膜上分子量为75000的蛋白(hKv1.5/Ikur通道蛋白)。而假性免疫组未发现相同抗体产生。结论:所制备胞外环肽段E215的抗体能与人心房肌细胞膜上hKv1.5/Ikur通道特异性结合,为下一步实验提供了新的药理学干预手段。 展开更多
关键词 抗体 人心房肌细胞 KV1.5 胞外环
二氯醋酸钠对模拟高原肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞Kv1.5亚型的作用研究 预览 被引量:2
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作者 徐贤华 彭华生 +6 位作者 孙梅芹 王万华 张汝 肖欣荣 胡猛 胡健 何晓英 《中国呼吸与危重监护杂志》 CAS 2010年第1期 53-56,共4页
目的研究电压门控性钾通道亚型(Kv1.5)在高原低压低氧性肺动脉高压中的作用,观察二氯醋酸钠(DCA)对高原低压低氧性肺动脉高压大鼠肺小动脉平滑肌细胞(PASMCs)电压门控性钾通道Kv1.5亚型基因表达的影响和肺动脉高压的降压作用... 目的研究电压门控性钾通道亚型(Kv1.5)在高原低压低氧性肺动脉高压中的作用,观察二氯醋酸钠(DCA)对高原低压低氧性肺动脉高压大鼠肺小动脉平滑肌细胞(PASMCs)电压门控性钾通道Kv1.5亚型基因表达的影响和肺动脉高压的降压作用。方法24只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(N组,8只)、高原低压低氧组(HA组,8只)及DCA干预组(DCA组,8只)。N组置于平原处室内喂养,HA组和DCA组均同时置于模拟的海拔5000m高原环境,DCA组大鼠予以DCA70mg·kg^-1·d^-1灌胃。21d后测量三组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、肺小动脉平滑肌和心脏壁厚度,用荧光定量PCR法检测三组大鼠PASMCsKv1.5mRNA,免疫组织化学和免疫印迹法观察大鼠PASMCsKv1.5蛋白的表达。结果模拟高原5000m21d后,HA组大鼠mPAP明显高于N组(P〈0.01),其肺小动脉管壁增厚,管腔狭窄,表现为管壁厚度占外径的百分比(WT%)、管壁面积占总面积的百分比(WA%)和右心室与左心室加室间隔之比(RV/LV+S)较N组明显升高(P均〈0.01)。与HA组相比,DCA组mPAP则明显降低(P〈0.01),表现血管重构减弱,WT%和WA%明显下降(P〈0.01),RV/LV+S下降(P〈0.01)。HA组Kv1.5mRNA明显低于N组(P〈n01),DCA组Kv1.5mRNA则明显恢复表达(P〈0.01)。HA组肺小动脉壁Kv1.5平均光密度低于N组(P〈0.01),DCA组则明显高于HA组(P〈0.01)。蛋白表达呈现相似结果。结论高原低压低氧性大鼠PASMCsKv1.5表达明显受到抑制,DCA具有恢复Kv1.5表达、阻止肺小动脉重塑及降低肺动脉压的作用。 展开更多
关键词 高原 低压低氧 肺动脉高压 电压门控性钾通道Kv1.5亚型 二氯醋酸钠
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心房颤动与Kv1.5钾通道阻滞剂及其研究进展 被引量:1
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作者 公英子 刘晓霞 +2 位作者 吴捷 丁维光 李学奇 《现代生物医学进展》 CAS 2015年第12期2386-2389,共4页
心房颤动是临床常见的心律失常,药物是心房颤动的主要治疗方法。胺碘酮和心律平等药物虽然可以治疗和转复心房颤动,但长期应用会引起恶性心律失常和心脏外的副作用。抑制Kv1.5钾通道电流,可选择性延长心房肌动作电位时程及有效不应期,... 心房颤动是临床常见的心律失常,药物是心房颤动的主要治疗方法。胺碘酮和心律平等药物虽然可以治疗和转复心房颤动,但长期应用会引起恶性心律失常和心脏外的副作用。抑制Kv1.5钾通道电流,可选择性延长心房肌动作电位时程及有效不应期,改善心房肌的电重构和组织重构。近年来关于Kv1.5钾通道及其阻滞剂的研究迅速发展并引起广泛关注。为进一步探讨Kv1.5钾通道是否可能成为心房颤动的治疗靶点,我们对目前相关研究进展作一综述。 展开更多
关键词 心房颤动 Kv1.5钾通道 Kv1.5钾通道阻滞剂
丹参酮Ⅱ-A磺酸钠对房颤大鼠模型心房肌细胞Kv1.5钾通道表达影响的研究 预览 被引量:2
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作者 刘维琴 杨娟 李卫松 《中医临床研究》 2013年第9期10-13,共4页
目的:观察丹参酮 Ⅱ-A 磺酸钠对房颤大鼠心房肌细胞电重构及细胞膜钾离子通道的影响。方法:制备房颤动物模型,荧光定量 PCR 技术测定心房肌细胞 Kv1.5钾通道基因表达,HE 染色观察心房肌细胞超微结构变化。结果:丹参酮 Ⅱ-A磺酸钠... 目的:观察丹参酮 Ⅱ-A 磺酸钠对房颤大鼠心房肌细胞电重构及细胞膜钾离子通道的影响。方法:制备房颤动物模型,荧光定量 PCR 技术测定心房肌细胞 Kv1.5钾通道基因表达,HE 染色观察心房肌细胞超微结构变化。结果:丹参酮 Ⅱ-A磺酸钠、胺碘酮能明显改善房颤大鼠心房肌细胞钾通道Kv1.5基因表达减低水平(P〈0.05)及心房肌细胞组织超微结构。结论:丹参酮Ⅱ-A磺酸钠能够通过改善房颤大鼠钾通道Kv1.5基因表达下调所引发的心房电重构,从而预防和治疗房颤。 展开更多
关键词 丹参酮Ⅱ-A磺酸钠 房颤 心房电重构 Kv1.5钾通道
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胎兔动脉导管平滑肌细胞氧敏感性钾通道mRNA的表达 被引量:4
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作者 余忠琴 李涛 《武汉大学学报:医学版》 CAS 北大核心 2009年第1期21-23,51,I0002共5页
目的:建立胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外培养方法,并检测其细胞膜氧敏感性钾通道亚型(Kv1.5)mRNA的表达。方法:采用组织块改良贴壁法(玻片压迫组织块贴壁方法)进行胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外原代培养,并行免疫组织化学法对... 目的:建立胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外培养方法,并检测其细胞膜氧敏感性钾通道亚型(Kv1.5)mRNA的表达。方法:采用组织块改良贴壁法(玻片压迫组织块贴壁方法)进行胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外原代培养,并行免疫组织化学法对培养的细胞进行鉴定,用RT-PCR的方法检测其细胞膜氧敏感性钾通道亚型(Kv1.5)的表达。结果:经10-14d培养后,培养皿底及盖玻片上铺满梭状细胞,免疫组织化学法鉴定确认为胎兔动脉导管平滑肌细胞,其细胞膜存在Kv1.5基因表达。结论:植块改良贴壁法可以成功的进行胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外培养,且本法简便、可靠,短时间内可以获得大量细胞,从而为动脉导管未闭发病机制的研究奠定了实验基础。同时,动脉导管平滑肌细胞膜上存在氧敏感性钾通道mRNA的表达,从而为从氧敏感性钾通道层面来研究动脉导管未闭的发生机制提供了实验基础。 展开更多
关键词 氧敏感性钾通道(Kv1.5)mRNA 平滑肌细胞 动脉导管 细胞培养 胎兔
替米沙坦对表达在卵母细胞上Kv4.5通道的抑制效应 被引量:1
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作者 涂丹娜 廖玉华 +4 位作者 邹安若 肖华 杜以梅 郭和平 王敏 《临床心血管病杂志》 CSCD 北大核心 2008年第11期859-863,共5页
目的:研究替米沙坦对表达在卵母细胞上的克隆人类Kv1.5通道的作用,探讨其在心脏复极中的潜在效应。方法:在非洲爪蟾卵母细胞上异源表达克隆人类Kv1.5通道基因,使用双电极电压钳技术记录全细胞电流,检测药物对Ikur电流的影响。结... 目的:研究替米沙坦对表达在卵母细胞上的克隆人类Kv1.5通道的作用,探讨其在心脏复极中的潜在效应。方法:在非洲爪蟾卵母细胞上异源表达克隆人类Kv1.5通道基因,使用双电极电压钳技术记录全细胞电流,检测药物对Ikur电流的影响。结果:替米沙坦以电压依赖性和浓度依赖性方式抑制Kv1.5通道电流,且对峰电流及1.5s末端电流的抑制效应不同,在1umol/L浓度下,抑制效应分别达到(7.75±2.39)%和(52.64±3.77)%,其半抑制浓度(IC50)分别为(2.25±0.97)umol/L和(0.82±0.39)umol/L。替米沙坦对通道的稳态失活没有显著改变,在对照条件下,V啪的值为(14.47±3.71)mV,斜坡因子k为(23.24±3.86)mV;在1umol/L替米沙坦作用下,V1/2和k的值分别为(14.38±4.62)mV和(26.26±5.04)mV(n=6,P〉0.05)。同时,替米沙坦显著加速了Kv1.5通道的失活。在对照条件下,Kv1.5通道的失活慢时间常数是(693.74±23.16)ms,在应用1umol/L替米沙坦后,其失活的慢时间常数下降为(523.85±10.28)ms(n=5,P(0.05)。结论:替米沙坦在临床有效浓度范围内能显著抑制表达在卵母细胞上的Ikur电流,提示它兼有选择性阻滞Kv1.5通道的作用。 展开更多
关键词 替米沙坦 Kvl.5钾通道 卵母细胞 Ikur电流
加兰他敏对稳定表达的Kv2.1和KVl.5通道的作用 预览 被引量:2
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作者 王晓良 张海霞 《中国药理通讯》 2003年第3期 71,共1页
关键词 加兰他敏 Kv2.1通道 KVl.5通道 胆碱酯酶抑制剂 全细胞膜片钳技术 老年痴呆症
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