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LRP16转基因小鼠的繁殖与鉴定
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作者 王春萌 柏苗苗 +4 位作者 伍志强 李小雷 李祥 梅倩 韩为东 《解放军医学院学报》 CAS 2014年第3期255-257,265共4页
目的:繁殖和鉴定携带有外源LRP16基因的转基因小鼠,为体内研究LRP16的生物学功能提供动物模型。方法首先将构建好的LRP16转基因重组质粒转染到293T细胞,鉴定该质粒是否可以有效表达目的蛋白,随后利用原核显微注射方法将线性化的重... 目的:繁殖和鉴定携带有外源LRP16基因的转基因小鼠,为体内研究LRP16的生物学功能提供动物模型。方法首先将构建好的LRP16转基因重组质粒转染到293T细胞,鉴定该质粒是否可以有效表达目的蛋白,随后利用原核显微注射方法将线性化的重组质粒注射入品系为FVB的小鼠受精卵中,获得F0代小鼠。应用PCR方法对F0代小鼠进行鉴定,并将阳性F0代小鼠继续繁殖。结果 LRP16转基因重组质粒在293T细胞中可以有效表达,经PCR鉴定获得3只阳性F0代小鼠,阳性率为6.23%,选取其中1只整合有LRP16基因的F0代雄鼠,通过其与野生型FVB小鼠杂交获得7只F1代子鼠,其中4只为阳性鼠,阳性率为57.14%。从F1代中再次选取其中1只阳性雄鼠与野生型小鼠杂交繁殖获得5只F2代子鼠,PCR鉴定结果显示2只为阳性,阳性率为40%。结论 LRP16基因成功整合到小鼠基因组中,并且能够稳定遗传,为后续在动物整体水平研究LRP16的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 LRP16基因 转基因小鼠 繁殖 基因鉴定
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LRP16基因在子宫内膜癌组织中的表达及其对细胞增殖的作用 预览
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作者 张宇骄 刘玲 +4 位作者 汪春燕 詹平 伍宗惠 何雯 王定玉 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第25期2983-2985,共3页
目的研究LRPl6在子宫内膜癌组织中的表达变化及其对子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖的影响。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT_PCR)检测26例正常子宫内膜组织及10例子宫内膜癌组织中LRPl6mRNA的表达;LRPl6转染细胞,RT—PCR证实转染的成功性... 目的研究LRPl6在子宫内膜癌组织中的表达变化及其对子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖的影响。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT_PCR)检测26例正常子宫内膜组织及10例子宫内膜癌组织中LRPl6mRNA的表达;LRPl6转染细胞,RT—PCR证实转染的成功性,WST-1法观察细胞增殖的变化。结果子宫内膜癌组织中LRP16 mRNA的阳性表达率及表达水平(分别为83.33%、0.82±0.21)明显高于正常子宫内膜组织(分别为30.00%、0.47±0.18),二者比较差异有统计学意义(P〈0.05)。RT—PCR检测结果显示转染后细胞LRP16 mRNA表达明显增加。转染组HEC-1-B细胞在体外能继续增殖,但增殖能力并没有增强。结论LRPl6的异常表达可能与子宫内膜癌的发生、发展密切相关,LRP16基因用于子宫内膜癌基因治疗可能具有潜在价值。 展开更多
关键词 子宫内膜肿瘤 LRP16基因 HEC-1-B细胞
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真核表达质粒EX-Y2069-M29的构建与LRP16在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达及作用 预览
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作者 张宇骄 刘玲 +2 位作者 刘蔚 詹平 何雯 《四川医学》 CAS 2013年第5期587-589,共3页
目的构建真核表达质粒EX-Y2069-M29,检测其在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达,并观察LRP16对细胞增殖的影响。方法从HEC-1-B细胞中提取总RNA,应用PCR技术,扩增获得LRP16基因编码序列片段,克隆入真核表达载体EX-Y2069-M29,对重组质粒进... 目的构建真核表达质粒EX-Y2069-M29,检测其在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达,并观察LRP16对细胞增殖的影响。方法从HEC-1-B细胞中提取总RNA,应用PCR技术,扩增获得LRP16基因编码序列片段,克隆入真核表达载体EX-Y2069-M29,对重组质粒进行酶切和测序鉴定后,以脂质体介导法转染至HEC-1-B细胞,采用Westernblot法检测LRP16蛋白的表达,用WST-1法检测细胞增殖情况。结果酶切和测序结果证明真核表达质粒EX-Y2069-M29的DNA序列完全正确,将其转染HEC-1-B细胞后,LRP16蛋白表达明显增加;转染后HEC-1-B细胞在体外能继续增殖,但增殖能力明显下降。结论 LRP16基因重组真核表达质粒EX-Y2069-M29构建成功,并能在HEC-1-B细胞中表达,为进一步研究LRP16基因奠定了基础;转染LRP16后并没有促进HEC-1-B细胞体外增殖,LRP16基因用于子宫内膜癌基因治疗可能具有潜在价值。 展开更多
关键词 LRP16基因 真核表达质粒 HEC-1-B细胞 细胞增殖
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白血病相关基因LRP16真核表达质粒的构建及其在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达
4
作者 张宇骄 詹平 +1 位作者 王定玉 毛熙光 《肿瘤预防与治疗》 2013年第3期117-121,共5页
目的:构建白血病相关基因LRP16真核表达质粒,并检测其在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达。方法:从人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中提取总RNA,应用PCR技术,扩增获得LRP16基因编码序列片段,克隆入真核表达载体EX—Y2069-M29,对重组质... 目的:构建白血病相关基因LRP16真核表达质粒,并检测其在人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中的表达。方法:从人子宫内膜癌HEC-1-B细胞中提取总RNA,应用PCR技术,扩增获得LRP16基因编码序列片段,克隆入真核表达载体EX—Y2069-M29,对重组质粒进行酶切和测序鉴定后,以脂质体介导法转染至HEC-1-B细胞,采用Westernblot法检测LRP16蛋白的表达。结果:酶切和测序结果证明LRP16基因真核表达质粒EX-Y2069-M29的DNA序列完全正确,将其转染HEC-1-B细胞后,LRP16蛋白表达明显增加。结论:LRP16基因重组真核表达质粒EX—Y2069-M29构建成功,并能在HEC-1-B细胞中表达,为进一步研究LRP16基因奠定了基础。 展开更多
关键词 LRP16基因 真核表达质粒 HEC-1-B细胞
抑制LRP16增加Hela细胞对足叶乙甙的敏感性 被引量:6
5
作者 段玉坤 伍志强 +3 位作者 马晓星 赵亚力 韩为东 孟元光 《军医进修学院学报》 CAS 2012年第3期 248-250,254,共4页
目的探明LRP16的表达与化疗药物足叶乙甙所诱导的肿瘤细胞凋亡是否产生作用以及可能的分子机制。方法首先将抑制LRP16表达的小干扰RNA,control,siRNA,siRNA-374(抑制率90%),siRNA-668(抑制率60%),对照分别转染入Hela细胞内,并通过... 目的探明LRP16的表达与化疗药物足叶乙甙所诱导的肿瘤细胞凋亡是否产生作用以及可能的分子机制。方法首先将抑制LRP16表达的小干扰RNA,control,siRNA,siRNA-374(抑制率90%),siRNA-668(抑制率60%),对照分别转染入Hela细胞内,并通过足叶乙甙处理的细胞而导致DNA损伤。之后用CCK-8检测细胞活力;用流式细胞技术测定抑制LRP16的表达对Hela细胞凋亡率的影响;通过RT-PCR检测抑制LRP16表达之后核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)凋亡相关的下游靶基因的mRNA水平。结果在足叶乙甙(100μmol)的作用下,抑制LRP16的表达能够明显抑制细胞的增长(P〈0.05),并呈浓度依赖性,同时增加细胞的凋亡率(P〈0.05)。RT-PCR结果显示,下调LRP16的表达减弱NF-κB的转录活性,进而对其下游靶基因的水平进行调节。结论 LRP16在足叶乙甙导致的凋亡起重要作用,而且可能是通过下调NF-κB的活性来发挥化疗药物抵抗效应。我们的实验结果初步证实抑制LRP16增加Hela细胞对足叶乙甙的敏感性。 展开更多
关键词 肿瘤 核转录因子-ΚB LRP16基因
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SKOV3卵巢癌细胞中雌激素对LRP16的调控作用及其影响 预览 被引量:4
6
作者 田丽媛 赵亚力 +3 位作者 韩为东 孟元光 伍志强 杨洁 《现代肿瘤医学》 CAS 2010年第1期 4-8,共5页
目的:研究雌激素受体ER阳性的卵巢癌细胞系中,E2对LRP16的调控作用以及LRP16对细胞增殖的影响。方法:Northern Blot、Western Blot方法分别检测RNA、蛋白表达水平;生长曲线测定过表达或抑表达LRP16对SKOV3细胞生长特性的影响。结果... 目的:研究雌激素受体ER阳性的卵巢癌细胞系中,E2对LRP16的调控作用以及LRP16对细胞增殖的影响。方法:Northern Blot、Western Blot方法分别检测RNA、蛋白表达水平;生长曲线测定过表达或抑表达LRP16对SKOV3细胞生长特性的影响。结果:雌激素敏感的BG-1细胞系中,E2正调控LRP16的表达;而不同浓度雌激素处理雌激素不敏感SKOV3细胞,LRP16蛋白的表达下降,而ICI182 780对其作用相反;LRP16对SKOV3细胞的生长、增殖有微弱的调节作用。结论:在雌激素不敏感的SKOV3细胞系中,E2对LRP16的调节作用及LRP16发挥的生长调节作用与雌激素敏感的BG-1卵巢癌细胞系及乳腺癌体外研究结果不同。提示雌激素不敏感浆液性卵巢癌中E2对LRP16的调控可能存在新的机制,可能用来解释部分卵巢癌对内分泌治疗敏感性不同的原因。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 雌激素受体 基因 LRP16 细胞增殖 基因表达调控
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LRP16基因启动子顺式调控元件分析 被引量:5
7
作者 卢学春 楼方定 +1 位作者 韩为东 于力 《生物信息学》 2009年第1期 5-8,共4页
为分析LRP16基因启动子区顺式调控元件,为深入研究LRP16基因的表达调控机制奠定基础。首先在NCBI的人类基因组数据库中截取并下载LRP16基因转录起始位点5’侧翼区2.6kb的基因组序列,设计PCR引物,从健康外周血单个核细胞中扩增LRP16... 为分析LRP16基因启动子区顺式调控元件,为深入研究LRP16基因的表达调控机制奠定基础。首先在NCBI的人类基因组数据库中截取并下载LRP16基因转录起始位点5’侧翼区2.6kb的基因组序列,设计PCR引物,从健康外周血单个核细胞中扩增LRP16基因的启动子分子;然后构建包含长度为2.6kb的LRP16基因启动子分子的pG13-LRP16启动子荧光素酶报道重组子,转染入Hela细胞后检测荧光素酶活性;最后利用Genomatix MatInspector Release professional 5.3、RSA—tools和TESS3个启动子顺式调控元件数据库对LRP16基因启动子进行分析。结果表明LRP16基因启动子DNA序列具有真核启动子活性,该区域既有通用启动子结构,又具有与肿瘤发生、细胞周期调控和急性反应期蛋白有关的顺式调控元件,包括:Spl、T—Ag、ZF5、CAC盒、PU.1、c—Ets、XPF-1、IL-6受体、雌激素受体和视黄醇受体。 展开更多
关键词 LRP16基因 启动子 视黄醇受体 雌激素受体 IL-6受体
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抑制lrp16基因表达药物的生物信息学筛查 预览 被引量:2
8
作者 迟小华 刘丽宏 +2 位作者 卢学春 杨波 董蒙 《中国实验血液学杂志》 CAS 2009年第4期953-956,共4页
本研究通过分析lrp16基因启动子的DNA序列,在负性调控功能区内寻找顺式元件,为筛选有抑制lrp16基因表达的药物奠定基础。以人类基因组数据库和计算机互联网为平台,钓取lrp16基因5’侧翼区3000bp非编码DNA序列和mRNA序列中的ORF序列... 本研究通过分析lrp16基因启动子的DNA序列,在负性调控功能区内寻找顺式元件,为筛选有抑制lrp16基因表达的药物奠定基础。以人类基因组数据库和计算机互联网为平台,钓取lrp16基因5’侧翼区3000bp非编码DNA序列和mRNA序列中的ORF序列;利用TESS和Genomax等在线启动子分析软件在人类转录因子数据库中搜索可能存在的顺式结构;利用SAGE和GEO数据库对影响lrp16基因表达的相关药物作用进行分析。结果发现,lrp16基因在长度为3000bp的启动子区内,在负向表达调控区域存在多个顺式结构,其中包括T—Ag、Pu.1、c—Ets、XPF-1、AP2αA、IL6-6RE和RAR。培养的体外细胞系在激素类物质皮质酮、他莫昔芬、毛喉素或去氧肾上腺素、炎性细胞因子IL4或TNFα或化疗药物5-氟尿嘧啶的作用下,lrp16基因的表达水平明显下降。结论:T—Ag、PU.1、c—Ets、XPF-1、AP2αA、IL6—6RE和RAR等转录因子可能抑制lrp16基因的表达;激素类物质皮质酮、他莫昔芬、毛喉素或去氧肾上腺素,炎性细胞因子IL6、IL4或TNFα,或化疗药物5-氟尿嘧啶可能具有抑制lrp16基因表达的作用。 展开更多
关键词 LRP16基因 生物信息学 白血病
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LRP16基因对慢性髓系白血病K562细胞促增殖作用的研究 预览 被引量:1
9
作者 杨波 卢学春 +3 位作者 迟小华 韩为东 于力 楼方定 《中国实验血液学杂志》 CAS 2009年第5期1154-1158,共5页
本研究探讨超表达LRP16基因对人慢性髓系白血病K562细胞增殖的影响。采用RT—PCR法扩增人LRP16基因开放阅读框(open reading frame,ORF)片段,将其连接到pGEM—T质粒以构建LRP16基因ORF—pGEM—T重组载体。再将测序鉴定过的LRP16基因... 本研究探讨超表达LRP16基因对人慢性髓系白血病K562细胞增殖的影响。采用RT—PCR法扩增人LRP16基因开放阅读框(open reading frame,ORF)片段,将其连接到pGEM—T质粒以构建LRP16基因ORF—pGEM—T重组载体。再将测序鉴定过的LRP16基因ORF插入pcDNA3.1^+质粒以构建LRP16基因ORF—pcDNA3.1^+重组表达质粒,转染K562细胞,建立稳定超表达LRP16基因的K562细胞系。用M1Tr法测定细胞存活率并绘制生长曲线,流式细胞术检测细胞周期。结果表明:成功扩增出人LRP16基因ORF片段,并构建LRP16基因ORF—pcDNA3.1^+重组表达质粒;建立稳定超表达LRPl6基因的K562细胞系;超表达LRPl6基因具有促进K562细胞增殖的作用,且这种促增殖作用部分是通过促进细胞由G0期进入S期而实现的。结论:超表达LRP16基因可促进K562细胞增殖。 展开更多
关键词 LRP16基因 K562细胞 细胞增殖 慢性髓系白血病
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酵母双杂交系统中LRP16诱饵质粒的构建
10
作者 杨 伍志强 +1 位作者 韩为东 赵亚力 《军医进修学院学报》 CAS 北大核心 2008年第1期 17-19,共3页
目的:在酵母细胞中构建LRP16诱饵质粒,以期从人cDNA文库中钓取可与LRP16相互作用的蛋白。方法:pLPC-LRP16质粒经酶切、琼脂糖凝胶电泳、回收,获得LRP16的基因片段,将其连接至酵母双杂交系统诱饵载体pGBKT7中,经酶切验证其正确插... 目的:在酵母细胞中构建LRP16诱饵质粒,以期从人cDNA文库中钓取可与LRP16相互作用的蛋白。方法:pLPC-LRP16质粒经酶切、琼脂糖凝胶电泳、回收,获得LRP16的基因片段,将其连接至酵母双杂交系统诱饵载体pGBKT7中,经酶切验证其正确插入方向后,将重组诱饵质粒转化酵母菌AH109和Y187,并检测其在酵母中有无自激活作用和毒性。随后提取转化后的酵母总蛋白,经Westernblot检测诱饵质粒在酵母中的表达情况,以鉴定其作为诱饵蛋白的可行性。结果:重组诱饵质粒经酶切验证,片段大小和插入方向均正确,将其转化人酵母菌后无自激活作用和毒性,Westernblot证实在酵母中重组诱饵质粒可正确表达人LRP16蛋白。结论:构建的重组质粒pGBKT7-LRP16能够在酵母细胞中正确表达,可作为酵母双杂交系统的诱饵质粒。 展开更多
关键词 LRP16基因 质粒 酵母 双杂交技术
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LRP16在肝硬化组织、癌旁组织及癌组织中的表达及意义
11
作者 王涛 刘荣 +2 位作者 母义明 魏东 高春芳 《军医进修学院学报》 CAS 北大核心 2008年第5期400-401,共2页
目的:探讨白血病相关蛋白16(LRP16)在肝癌中的表达规律,寻求其作为肝癌早期诊断及判断临床预后指标的可能性。方法:用Western印迹杂交法检测42例肝癌标本或新鲜组织中LRP16的表达情况,分析其与病理因素的关系。结果:LRP16在肝硬... 目的:探讨白血病相关蛋白16(LRP16)在肝癌中的表达规律,寻求其作为肝癌早期诊断及判断临床预后指标的可能性。方法:用Western印迹杂交法检测42例肝癌标本或新鲜组织中LRP16的表达情况,分析其与病理因素的关系。结果:LRP16在肝硬化组织、癌旁组织及癌组织中均有表达,但表达量依次减少。LRP16高表达者一般肿瘤直径较小,具有完整的包膜,一般无血管侵犯,多为中低分化腺癌。结论:LRP16高表达者具有较好的生物学特性。LRP16可能在判断肝癌生物学特性方面具有一定前景。 展开更多
关键词 白血病相关蛋白16 雌激素受体a 免疫印迹法 肝肿瘤
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LRP16基因的多克隆抗体制备及表达的探索 被引量:1
12
作者 黄柯 孟元光 +3 位作者 韩为东 赵亚力 李琦 宋磊 《军医进修学院学报》 CAS 北大核心 2007年第2期 87-89,共3页
目的:制备人LRP16蛋白多克隆抗体并利用该抗体检测LRP16蛋白表达及亚细胞定位.方法:利用已构建的pRSET-C载体和LRP16基因组成的连接产物转化BL-21缺陷型大肠杆菌.诱导该基因原核表达,快速蛋白免疫法获取相应的多克隆抗体,利用免疫组... 目的:制备人LRP16蛋白多克隆抗体并利用该抗体检测LRP16蛋白表达及亚细胞定位.方法:利用已构建的pRSET-C载体和LRP16基因组成的连接产物转化BL-21缺陷型大肠杆菌.诱导该基因原核表达,快速蛋白免疫法获取相应的多克隆抗体,利用免疫组化法观察LRP16基因产物在人多种组织中的表达差异.结果:成功获得高效的LRP16抗体,利用该抗体初步证实LRP16基因编码产物的在不同雌激素受体水平的组织分布特点.结论:制备的LRP16抗体及其全长基因可用于LRP16基因的生理功能及病理学研究,初步发现LRP16基因的表达与雌激素受体呈正相关. 展开更多
关键词 LRP16基因 雌激素类 多克隆抗体
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雌激素受体α与其靶基因LRP16相互作用的研究 被引量:1
13
作者 韩为东 伍志强 +5 位作者 赵亚力 孟元光 李琦 司艺龄 郝好杰 母义明 《军医进修学院学报》 CAS 北大核心 2007年第5期 345-347,共3页
目的:既往研究表明LRP16是雌激素受体α(ERα)诱导表达的一个靶基因,但可以反馈激活ERα介导的转录活性,本研究目的在于探讨该反馈效应的分子机制。方法:GST—pulldown与免疫共沉淀(CoIP)方法检测LRP16与ERα体内外的相互作用... 目的:既往研究表明LRP16是雌激素受体α(ERα)诱导表达的一个靶基因,但可以反馈激活ERα介导的转录活性,本研究目的在于探讨该反馈效应的分子机制。方法:GST—pulldown与免疫共沉淀(CoIP)方法检测LRP16与ERα体内外的相互作用。结果:GST—pulldown与CoIP实验结果均表明LRP16与ERα可以直接结合,并且表明该相互作用不依赖于雌激素的存在,但雌激素可以增强二者的结合。结论:LRP16不仅是ERα的一个下游靶基因,而且是ERα的一个共激活因子。 展开更多
关键词 雌激素受体Α LRP16 基因打靶 反式激活因子类
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应用酵母双杂交方法筛选LRP16相互作用蛋白 被引量:4
14
作者 韩为东 赵亚力 伍志强 田丽媛 陈美霞 张燕 《军医进修学院学报》 CAS 北大核心 2007年第6期 439-441,共3页
目的:应用酵母双杂交技术筛选人乳腺癌细胞MCF-7中可与LRP16相互作用的蛋白。方法:将诱饵质粒pGBKT7-LRP16、MCF-7双链cDNA文库片段及线性化质粒pGADT7-Rec共转化AH109酵母菌,营养缺陷型培养基(SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade)筛选阳性菌... 目的:应用酵母双杂交技术筛选人乳腺癌细胞MCF-7中可与LRP16相互作用的蛋白。方法:将诱饵质粒pGBKT7-LRP16、MCF-7双链cDNA文库片段及线性化质粒pGADT7-Rec共转化AH109酵母菌,营养缺陷型培养基(SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade)筛选阳性菌落。提取阳性克隆质粒进行PCR,将PCR产物测序,并将酵母质粒转化感受态大肠杆菌Top10获得与诱饵质粒有相互作用的单个文库质粒,测序后回复验证其在酵母中的相互作用。结果:获得8个与LRP16相互作用的候选蛋白,选取4个在酵母中进行回复验证,其中有3个可生长出阳性克隆。结论:应用酵母双杂交技术筛选出一族功能基本明确的可与LRP16相互作用的候选蛋白,为研究LRP16的病理生理功能和分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 LRP16 质粒 双杂交技术 基因文库
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LRP16基因启动子活性分析 预览 被引量:11
15
作者 卢学春 楼方定 +4 位作者 韩为东 朱旭东 母义明 徐周敏 于力 《中国实验血液学杂志》 CAS 2006年第1期 146-149,共4页
本研究的目的在于分析LRP16基因不同启动子区域的活性,为深入研究LRP16基因的表达调控机制奠定基础。在NCBI的人类基因组数据库中截取并下载LRP16基因转录起始位点5侧翼区2.7kb的基因组序列,设计PCR引物,从健康外周血单个核细胞中... 本研究的目的在于分析LRP16基因不同启动子区域的活性,为深入研究LRP16基因的表达调控机制奠定基础。在NCBI的人类基因组数据库中截取并下载LRP16基因转录起始位点5侧翼区2.7kb的基因组序列,设计PCR引物,从健康外周血单个核细胞中克隆和亚克隆了LRP16基因的启动子分子。对各个长度相差400bp左右的亚克隆启动子片段调控荧光素酶表达的作用强度进行比较分析。结果获得了与GeneBank序列一致、长度为2.6kb的LRP16基因启动子DNA序列,其主要调控序列在LRP16基因转录起始位点5侧翼区的-200至-600bp。结论:LRP16基因启动子是一个典型的Ⅱ型启动子,其启动子活性在-200至-600bp区域最强。 展开更多
关键词 LRP16基因 启动子 基因表达
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Sp1介导雌激素上调LRP16基因表达的研究
16
作者 司艺玲 韩为东 +4 位作者 赵亚力 李琦 郝好杰 宋海静 母义明 《军事医学科学院院刊》 北大核心 2006年第1期18-21,共4页
目的:研究Sp1在雌激素上调LRP16基因表达中的作用。方法:采用ERd,Sp1特异性单抗对雌激素作用不同时间点的MCF-7细胞进行染色质免疫共沉淀,snPCR扩增沉淀DNA上LRP16基因启动子区;化学合成Sp1小干扰RNA,与ps10荧光素酶报告重组子共... 目的:研究Sp1在雌激素上调LRP16基因表达中的作用。方法:采用ERd,Sp1特异性单抗对雌激素作用不同时间点的MCF-7细胞进行染色质免疫共沉淀,snPCR扩增沉淀DNA上LRP16基因启动子区;化学合成Sp1小干扰RNA,与ps10荧光素酶报告重组子共转染MCF-7细胞,双荧光素酶测定法检测Sp1—SiRNA对LRP16基因表达的抑制作用。结果与结论:染色质免疫共沉淀结果提示Sp1蛋白直接结合于LRP基因-213bp至-24bp区域,雌激素激活的ERa增强其与DNA的结合力上调LRP16基因表达;应用Sp1小干扰RNA有效抑制了LRP16基因的雌激素反应性,明确了Sp1所结合的DNA顺式元件,从反面证实了Sp1蛋白对LRP16基因启动子区域递呈E2转激活活性的增强效应。 展开更多
关键词 SP1 LRP16基因 小干扰RNA 雌激素 基因表达
小鼠LRP16基因打靶载体的构建和胚胎干细胞同源重组克隆鉴定 预览
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作者 伍志强 韩为东 +4 位作者 赵亚力 司艺玲 母义明 孟元光 Masatoshi Nomura 《中国实验动物学报》 CAS 2006年第3期 167-171,共5页
目的既往研究表明LRP16基因是一个雌激素反应基因,其表达水平与乳腺癌细胞增殖及侵袭密切相关。为对该基因进行生理功能研究,本文构建了针对小鼠LRP16基因的打靶载体,转染胚胎干细胞(embryonic stemcell,EScells)并筛选同源重组... 目的既往研究表明LRP16基因是一个雌激素反应基因,其表达水平与乳腺癌细胞增殖及侵袭密切相关。为对该基因进行生理功能研究,本文构建了针对小鼠LRP16基因的打靶载体,转染胚胎干细胞(embryonic stemcell,EScells)并筛选同源重组克隆。方法PCR方法筛选129品系小鼠基因组文库中LRP16克隆,在第5外显子内插入SA-RIES-βgeo序列,构建插入失活型打靶载体并转染Es细胞,经G418筛选,挑取抗性克隆,Southern blot方法鉴定同源重组ES细胞克隆。结果将包含第5至11外显子的LRP16基因组片段亚克隆到pBluescript SK Ⅱ+载体,SA-IRES-βgeo序列的正确插入第五外显子中,打靶载体成功转染ES细胞,Southem blot结果显示具有一个打靶序列同源重组型插入的ES细胞克隆。结论成功构建了第五外显子插入失活型LRP16基因打靶载体并筛选到同源重组型ES细胞,为下一步建立LRP16缺失型小鼠并为从整体水平研究LRP16基因的生理功能奠定基础。 展开更多
关键词 LRP16 基因打靶 ES细胞
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LRP16融合蛋白载体的构建及其原核表达 预览
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作者 孟元光 韩为东 +3 位作者 黄柯 李琦 伍志强 宋磊 《中国肿瘤临床与康复》 2006年第3期 212-214,共3页
目的观察和鉴定LRP16在大肠杆菌中的表达,并分离、纯化其蛋白产物。方法应用DNA重组技术,用RT—PCR方法从正常人血液中扩增出LRP16基因全长及其抗原表位区,构建重组表达质粒pRSET—C—LRP16,IPTG诱导表达并纯化融合蛋白采用SDS-PAG... 目的观察和鉴定LRP16在大肠杆菌中的表达,并分离、纯化其蛋白产物。方法应用DNA重组技术,用RT—PCR方法从正常人血液中扩增出LRP16基因全长及其抗原表位区,构建重组表达质粒pRSET—C—LRP16,IPTG诱导表达并纯化融合蛋白采用SDS-PAGE凝胶电泳进行鉴定。结果成功构建LRP16基因融合蛋白载体,SDS-PAGE显示pRSET-C-LRP16表达于原核细胞,蛋白经电泳分离,切胶后获得纯化的LRP16蛋白。结论制备的高纯度的LRP16蛋白,可在大肠杆菌中稳定表达。 展开更多
关键词 LRP16基因 融合蛋白
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小鼠LRP16基因打靶载体的构建
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作者 伍志强 韩为东 +4 位作者 孟元光 司艺玲 赵亚力 母义明 Masatoshi Nomura 《军事医学科学院院刊》 北大核心 2006年第4期315-318,共4页
目的:为利用基因敲除技术进行LRP16基因生理功能的研究,本研究构建了针对小鼠LRP16基因的打靶载体。方法:通过PCR方法筛选129品系小鼠基因组文库中LRP16克隆,在第5外显子内插入SA-RIES-β geo序列,构建插入失活型打靶载体。结果:... 目的:为利用基因敲除技术进行LRP16基因生理功能的研究,本研究构建了针对小鼠LRP16基因的打靶载体。方法:通过PCR方法筛选129品系小鼠基因组文库中LRP16克隆,在第5外显子内插入SA-RIES-β geo序列,构建插入失活型打靶载体。结果:将包含第5至11外显子的LRP16基因组片段亚克隆到pBluescript SKⅡ^+载体,SA-IRES-β geo序列正确插入第5外显子中。结论:成功构建了第5外显子插入失活型LRP16基因打靶载体,为下一步筛选同源重组ES细胞奠定基础。 展开更多
关键词 LRP16 基因打靶 载体
小鼠LRP16基因同源重组ES细胞克隆的鉴定
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作者 韩为东 伍志强 +4 位作者 赵亚力 司艺玲 母义明 孟元光 Masatoshi Nomura 《军医进修学院学报》 CAS 北大核心 2006年第6期 406-408,共3页
目的:为深入研究LRP16基因的生理功能,本研究将小鼠LRP16基因特异打靶载体pBA16转染小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell),并筛选同源重组克隆。方法:通过电转染方法将LRP16插入失活型打靶载体导入ES细胞,经G418筛选,挑取抗性... 目的:为深入研究LRP16基因的生理功能,本研究将小鼠LRP16基因特异打靶载体pBA16转染小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell),并筛选同源重组克隆。方法:通过电转染方法将LRP16插入失活型打靶载体导入ES细胞,经G418筛选,挑取抗性克隆,Southern blot方法鉴定同源重组ES细胞克隆。结果:打靶载体成功转染ES细胞,Southern blot筛选100个抗性克隆,结果显示有一个打靶序列同源重组型插入的Es细胞克隆。结论:筛选到同源重组型ES细胞,为下一步建立LRP16缺失型小鼠并为从整体水平研究LRP16基因的生理功能奠定基础。 展开更多
关键词 LRP16 基因打靶 ES细胞
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