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贵州省高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离鉴定及遗传变异分析
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作者 郭倩妤 石远菊 +7 位作者 汤德元 曾智勇 王彬 黄涛 杨伟 叶丽 廖少山 张森 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第7期67-74,共8页
利用已建立的猪呼吸和繁殖障碍类病毒性疫病多重PCR检测方法对2017年以来贵州9个不同地区采集的150份病料进行检测,对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)检测为阳性的病料采用细胞接毒培养技术、病毒的形态结构观察和间接免疫荧光试验等分... 利用已建立的猪呼吸和繁殖障碍类病毒性疫病多重PCR检测方法对2017年以来贵州9个不同地区采集的150份病料进行检测,对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)检测为阳性的病料采用细胞接毒培养技术、病毒的形态结构观察和间接免疫荧光试验等分离鉴定PRRSV,并对其ORF5和Nsp2基因的核苷酸和氨基酸序列进行差异性分析。结果表明:分别接种Marc-145细胞并连传5代,获得5株PRRSV,分别命名为GZ-Fq、GZ-Bj、GZ-Kl、GZ-Hz和GZ-Zy;病毒粒子在电镜下呈球形或卵圆形,直径约30~80nm;5株毒株与近年来国内各地流行的高致病性PRRSV(HP-PRRSV)同源性较高,分别为96.2%~100%和97.1%~98.6%,其中,ORF5基因的第13位氨基酸均为精氨酸(R),第137位氨基酸均为丝氨酸(S),Nsp2基因的氨基酸均存在第481位和532-560位氨基酸2处不连续的缺失位点;其ORF5基因及Nsp2基因均与2008年之后流行的HP-PRRSV亲缘关系较近。研究表明,贵州省PRRSV发生了变异,与近年来国内各个地区的HP-PRRSV序列的变异位点一致,属于美洲型PRRSV的变异株。 展开更多
关键词 HP-PRRSV 分离鉴定 ORF5基因 NSP2基因 遗传变异
健康断奶仔猪携带猪繁殖与呼吸综合征病毒的流行病学调查 预览
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作者 饶继红 何彪 +3 位作者 涂长春 张家宁 葛淑敏 龚文杰 《安徽农业科学》 CAS 2019年第11期111-114,118共5页
为进一步了解我国规模化猪场健康断奶仔猪携带猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的情况,对2017年采自我国25个省(市)38个规模化猪场的断奶仔猪咽拭子、肛拭子、血清共4059份样品进行了高通量测序,然后对检测到的病毒进行RT-PCR或PCR验证。... 为进一步了解我国规模化猪场健康断奶仔猪携带猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的情况,对2017年采自我国25个省(市)38个规模化猪场的断奶仔猪咽拭子、肛拭子、血清共4059份样品进行了高通量测序,然后对检测到的病毒进行RT-PCR或PCR验证。基于高通量测序的宏基因组学结果显示,健康断奶仔猪的咽拭子、肛拭子、血清中共出现1706条动脉炎病毒科的病毒基因Reads,其中包括PRRSV。通过RT-PCR扩增从咽拭子和肛拭子中共检测出46个PRRSV样品,样品阳性率为1.1%,猪场阳性率为39.5%。同时,试验成功扩增出7个毒株的ORF5基因,并进行了序列测定。基于ORF5基因核苷酸序列的系统进化分析发现,该试验获得的PRRSV流行毒株为高致病性毒株,属于TypeⅡ中的Subgroup4。对健康断奶仔猪携带PRRSV的研究结果可为猪繁殖与呼吸综合征的防控提供科学数据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 断奶仔猪 ORF5 遗传进化分析
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2014-2017年山东省部分规模化猪场PRRSV ORF5基因的遗传演化分析 预览
3
作者 曲向阳 孙英军 +7 位作者 张洪亮 周磊 刘媛媛 任夫波 赖清华 夏天 周明明 杨汉春 《中国兽医杂志》 北大核心 2018年第9期12-15,18共5页
为了解山东省规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的流行情况及其分子特征,对2014—2017年其省内96个规模化养殖场的236份疑似PRRSV感染猪的肺脏、淋巴结、脾脏等病料进行RT—PCR检测,并对PRRSV阳性样品进行ORF5基因的克隆测序和遗传演... 为了解山东省规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的流行情况及其分子特征,对2014—2017年其省内96个规模化养殖场的236份疑似PRRSV感染猪的肺脏、淋巴结、脾脏等病料进行RT—PCR检测,并对PRRSV阳性样品进行ORF5基因的克隆测序和遗传演化分析。共检测到阳性样品122份,阳性率51.7%,测序获得122条ORF5基因序列。所检测PRRSV ORF5核苷酸序列同源性与氨基酸同源性分别是:78.9%~99.7%和73.7%~99.5%。遗传演化分析结果表明,山东地区主要存在4个Lineage的PRRSV毒株,以Lineage 1(NADC30-like)、Lineage 5(VR-2332)和Lineage 8(HuN4)的毒株为主要流行株,其中Lineage 1检出率最高(46.7%)。本研究在2014年检测到的Lineage 1毒株是国内首次报道,可能由美国引入,尚未在我国广泛流行。氨基酸比对分析表明,ORF5基因存在较大变异,但各Lineage毒株在ORF5基因的进化上具有保守性,均具有独特的氨基酸特性。通过对PRRSV ORF5遗传演化分析,表明山东地区PRRS的流行具有广泛的毒株变异特性,毒株的持续变异,增大了PRRS临床防控的难度,同时该研究为PRRS的防控提供一定的数据支持。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 山东 监测 ORF5 遗传演化
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华东部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查 预览
4
作者 范玉凤 邹敏 +4 位作者 张玉玉 杨旭兵 宋健兰 吴发兴 吴家强 《中国兽医杂志》 北大核心 2018年第7期16-19,共4页
为了解华东部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株变异情况,本研究以RT-PCR技术对山东、福建发病猪场的41份组织样品进行PRRSV检测和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)相关毒株(HP-PRRSVLike)检测,对阳性样品进... 为了解华东部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株变异情况,本研究以RT-PCR技术对山东、福建发病猪场的41份组织样品进行PRRSV检测和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)相关毒株(HP-PRRSVLike)检测,对阳性样品进行PRRSV分离、ORF5基因测序及变异分析。结果显示,福建、山东样品的阳性率分别为56%、74%;共分离到16个美洲型毒株(福建10株、山东6株),分属于Lineage 8、Lineage 5、Lineage 3、Lineage 1四个谱系,其中以Lineage 8为主。这表明PRRSV流行毒株多样化,跨谱系毒株重组值得警惕。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5 序列分析
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一例猪蓝耳病的实验室诊断 预览
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作者 邓莉 阳坤 +7 位作者 唐青海 吴思雯 韩涛涛 易程 滕威 谢璇 杨海 王芳宇 《湖南畜牧兽医》 2018年第6期17-21,共5页
运用实验室分子诊断技术对湖南岳阳某猪场一例疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染病例进行确诊,测定并分析其基因序列,为猪蓝耳病的防控提供依据。采集病猪淋巴组织提取RNA,采用逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)检测病毒核酸,构建重... 运用实验室分子诊断技术对湖南岳阳某猪场一例疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染病例进行确诊,测定并分析其基因序列,为猪蓝耳病的防控提供依据。采集病猪淋巴组织提取RNA,采用逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)检测病毒核酸,构建重组载体,经序列测定,利用DNAStar等生物信息学软件进行序列分析。结果显示,RT-PCR产物大小为657bp,同源性比较结果显示,此毒株ORF5基因核苷酸序列与与经典美洲型毒株VR-2332的同源性为83.4%,与我国经典毒株CH-1a株的同源性为85.4%,与高致病性代表株HUN4和JXA1的同源性分别为84.5%和84.3%,与欧洲经典型毒株LV的同源性为62.8%,与GDZS2016和GD/YJ/2014的同源性分别为95.0%和95.9%。遗传进化分析表明,此毒株属美洲型毒株;美洲型毒株下分两个亚群,以近年来新流行的GDZS2016和GD/YJ/2014毒株为代表的Ⅰ亚群和以HuN4、JXA1和VR-2332等为代表的Ⅱ亚群,此毒株与GDZS2016和GD/YJ/2014等同属Ⅰ亚群。结果表明,此次病例是由美洲型PRRSV毒株感染引起,将此毒株命名为HuNYY201805。 展开更多
关键词 PRRSV ORF5 RT-PCR
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PRRSV SC-GY变异株Nsp2、ORF5、ORF3基因遗传变异分析 被引量:3
6
作者 陈希文 李莲 +6 位作者 尹苗 赖守勋 汪谦 罗文涛 叶兆美 王雄清 周杰珑 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第8期1433-1441,共9页
为了监测PRRSV流行毒株的基因变异情况,采用RT—PCR方法对四川省广元市某疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)发病猪场病料进行分子鉴定,获得1株PRRSV命名为SC—GY株,并对SC—GY株的Nsp2、ORF5及ORF3基因进行测序比对和系统进化树... 为了监测PRRSV流行毒株的基因变异情况,采用RT—PCR方法对四川省广元市某疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)发病猪场病料进行分子鉴定,获得1株PRRSV命名为SC—GY株,并对SC—GY株的Nsp2、ORF5及ORF3基因进行测序比对和系统进化树构建。结果表明,SC—GY株为Nsp2基因发生30个氨基酸不连续缺失、ORF3基因第17位插入1个丝氨酸(S)的美洲型高致病性PRRSV变异毒株,其Nsp2、ORF5、ORF3基因与VR2332、SC2012、CH-1a、JXA1、HUN4、NADC30、HENAN-XINX等国内外代表毒株的核苷酸同源性分别为70.3%-97.9%,82.4%-97.6%,83.1%-98.2%,编码氨基酸同源性分别为62.3%-96.3%,78.0%-95.7%,81.6%-96.5%;而与LV等欧洲型毒株的核苷酸同源性分别为18.9%,60.8%,63.7%,编码氨基酸同源性分别为14.0%,54.9%,57.2%。基因遗传进化树分析表明,SC—GY株与JxAl、TJ、HUN4等前期分离的毒株以及近期在四川周边分离的SC2012、SCwhn09CD、SCwhn14DY等毒株都相距较远。由此表明,该地区PRRSV在当前高频度活疫苗免疫下,流行毒株基因仍在不断变异,猪场应减少PRRSV活疫苗的免疫并加强对临床PRRSV流行毒株的监测。 展开更多
关键词 PRRSV NSP2 ORF5 ORF3 遗传变异
2014年~2016年某大型规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒的遗传演化分析 预览 被引量:3
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作者 李真 张洪亮 +10 位作者 张晶 张文立 刘春晓 相丽润 冷超粮 彭金美 王倩 安同庆 童光志 蔡雪辉 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期10-14,共5页
为研究近年来猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在规模化猪场的变异情况,本研究对华北某规模化猪场2014年~2016年采集的117份疑似PRRS的病料进行PCR检测,结果阳性病料57份,并对阳性病料中PRRSV的NSP2基因和ORF5基因测序分析。结果显示,4... 为研究近年来猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在规模化猪场的变异情况,本研究对华北某规模化猪场2014年~2016年采集的117份疑似PRRS的病料进行PCR检测,结果阳性病料57份,并对阳性病料中PRRSV的NSP2基因和ORF5基因测序分析。结果显示,43份阳性病料中的PRRSV为NSP2缺失1+29个氨基酸,与HP-PRRSV的缺失相同,其NSP2基因区与HP-PRRSV Hu N4株的同源性为93.6%~99.6%;而其余的14份阳性样品中的病毒NSP2则为缺失111+1+19个氨基酸,与PRRSV NADC30株的缺失相同,NSP2基因区同源性为92.3%~92.9%,ORF5基因同源性为93.8%~94.8%。此外,在2016年检测到的4份阳性病料,基于NSP2基因构建的系统进化树显示其属于HP-PRRSV亚群,但基于ORF5基因构建的系统进化树结果显示,这些病毒则与国内近年来在香港、台湾以及华南地区流行的低致病力PRRSV GM2株(谱系3)同源性最高,核苷酸同源性为96.7%~97.0%。以上结果表明2014年以来同一猪场内的PRRSV变异呈多样性,并且出现了两类新的PRRSV变异株。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP2 ORF5 分子流行病学
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湖北省某规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征的诊断及流行毒株GP5基因特性分析 预览
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作者 李孝文 章洪皲 +1 位作者 樊翠华 姜平 《中国动物检疫》 CAS 2017年第9期11-15,共5页
2016年湖北省某猪场暴发一起疫情。通过病史调查、临床观察、实验室诊断,确诊该疫情为猪繁殖与呼吸综合征。对病原测序分析的结果显示:其Nsp2基因存在30个氨基酸缺失;ORF5基因与WUH1野毒株同源性最高。此外,生产母猪群和后备猪群血... 2016年湖北省某猪场暴发一起疫情。通过病史调查、临床观察、实验室诊断,确诊该疫情为猪繁殖与呼吸综合征。对病原测序分析的结果显示:其Nsp2基因存在30个氨基酸缺失;ORF5基因与WUH1野毒株同源性最高。此外,生产母猪群和后备猪群血清样品的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ELISAN蛋白抗体S/P值离散度较大,证明该病原为高致病性PRRSV。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 诊断 ORF5 感染状态
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2015-2016年我国部分地区猪繁殖与呼吸综合征的分子流行病学调查 被引量:1
9
作者 徐晓杰 张乔亚 +2 位作者 谈晨 白娟 姜平 《畜牧与兽医》 北大核心 2017年第6期153-156,共4页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是猪的一种重要的病原,给全球养猪业造成重大的经济损失。本研究采集2015-2016年我国12省市362份临床发病猪肺脏病料用RT-PCR检测RRRSV,结果有191份为阳性,阳性率为52.8%。34个毒株ORF5基因测序结果表明... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是猪的一种重要的病原,给全球养猪业造成重大的经济损失。本研究采集2015-2016年我国12省市362份临床发病猪肺脏病料用RT-PCR检测RRRSV,结果有191份为阳性,阳性率为52.8%。34个毒株ORF5基因测序结果表明,所有的毒株均属美洲型,分为4个亚型,其中2个毒株形成一个新的亚型Ⅳ;6个毒株与美国NADC30株有高度同源性,形成了亚型Ⅲ。研究表明我国PRRSV毒株存在遗传多样性,为猪繁殖与呼吸综合征的防治提供了理论依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) ORF5基因 亚型
辽宁地区猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株ORF5基因的遗传变异分析 预览
10
作者 关淼 赵晓彤 +5 位作者 曹东 顾贵波 杨本勇 李树博 申贯男 魏萍 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第8期137-141,146共6页
为研究辽宁地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因的生物学特性及遗传变异情况,通过RT-PCR方法对PRRSV阳性样品的ORF5基因进行扩增,应用DNA Star软件对检测的序列进行比对和遗传变异分析。结果显示,分离的8株PRRSV的ORF5基因... 为研究辽宁地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因的生物学特性及遗传变异情况,通过RT-PCR方法对PRRSV阳性样品的ORF5基因进行扩增,应用DNA Star软件对检测的序列进行比对和遗传变异分析。结果显示,分离的8株PRRSV的ORF5基因全长为603 bp,均属北美型,不同分离株间的核苷酸、氨基酸同源性分别为91.5%~99.0%、88.1%~98.5%;遗传变异分析表明,分离株处于不同的进化分支,但均属于亚群3,为高致病性PRRSV。以上结果表明,辽宁地区主要流行毒株为高致病性PRRSV,在不同地区有不同的PRRSV毒株同时流行,但具有相同的进化来源。 展开更多
关键词 辽宁地区 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5 遗传变异
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PRRSV上海浦东南汇分离株Nsp2与ORF5基因遗传演化分析
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作者 郁星星 朱爱军 +4 位作者 邢涛 王海根 张红飞 周光胜 李金贵 《畜牧与兽医》 北大核心 2017年第7期74-78,共5页
对上海浦东南汇地区某规模猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)疑似病料进行处理,提取病毒总RNA,采用RT-PCR方法扩增Nsp2/ORF5基因,并进行基因测序。序列分析结果表明,浦东南汇分离株Nsp2蛋白均缺失481位和第533~561位30个不连续的氨... 对上海浦东南汇地区某规模猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)疑似病料进行处理,提取病毒总RNA,采用RT-PCR方法扩增Nsp2/ORF5基因,并进行基因测序。序列分析结果表明,浦东南汇分离株Nsp2蛋白均缺失481位和第533~561位30个不连续的氨基酸,同时在Nsp2编码区出现与高致病性PRRSV(HP-PRRSV)代表株JXA1相同的遗传变异现象。同源性分析表明,6株Nsp2、ORF5氨基酸序列与VR-2332、CH-1a、HB-2以及JXA1株的同源性分别为:40.3%~55.3%,73.5%~89.5%;54.7%~75.1%,75.5%~92.5%;50.9%~67.3%,73.5%~90.5%;72.8%~91.5%,81.5%~98.5%;而与欧洲型代表株LV株的同源性分别仅为26.2%~35.9%和44.8%~56.4%。遗传演化分析表明,浦东南汇分离株与国内株(CH-1a、HB-2)和VR-2332美洲代表株各自处于相对独立的分支,遗传关系较远且不存在交叉现象,而与JXA1变异株处于同一进化分支。研究表明,浦东南汇分离株为美洲型HP-PRRSV毒株,具有一定的地理衍变特性,已从PRRSV遗传进化树中分离,出现一个新的遗传独立群体。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 鉴定 NSP2 ORF5 序列分析
欧洲型PRRSV辽宁株LNEU12的分离及其ORF5的序列分析
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作者 李冰 卢赫 《畜牧与兽医》 北大核心 2017年第7期88-93,共6页
从辽宁某猪场疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病猪全血中分离到1株病毒,经Marc-145细胞5次传代后出现稳定的细胞病变(CPE),电镜观察病毒粒子直径约55 nm,并命名为LNEU12。采用RT-PCR方法扩增分离毒的ORF5全序列,再将目的基因克隆入p M... 从辽宁某猪场疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病猪全血中分离到1株病毒,经Marc-145细胞5次传代后出现稳定的细胞病变(CPE),电镜观察病毒粒子直径约55 nm,并命名为LNEU12。采用RT-PCR方法扩增分离毒的ORF5全序列,再将目的基因克隆入p MD18-T载体进行测序,并与国内外已发表的毒株序列进行比较。结果表明:分离毒的ORF5基因与LV、Amervac株的核酸同源性分别为87.1%和87.6%,与国内分离的欧洲型毒株同源性为83.5%~94.2%。与LV株比较,分离毒GP5有22个氨基酸发生了变异,并存在3个潜在N-糖基化位点。基因系统发育树分析表明:分离毒LNEU12与BJEU06-1、NVDC-NM1-2011株的亲缘关系很近,而与VR2332美洲株处于不同的分支,由此推断分离毒LNEU12为欧洲型PRRSV。 展开更多
关键词 PRRSV 欧洲型 分离 ORF5 序列分析
6株高致病性PRRSVORF5基因的遗传变异分析 被引量:5
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作者 陈希文 李莲 +6 位作者 尹苗 赖守勋 汪谦 罗文涛 叶兆美 周杰珑 王雄清 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第10期1817-1824,共8页
为了监测猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV)流行毒株的基因变异情况,对四川省2014—2015年蓝耳病发病猪场分离到的6株PRRSV毒株ORF5基因进行了克隆测序及序列分析。同源性分析表明,6... 为了监测猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV)流行毒株的基因变异情况,对四川省2014—2015年蓝耳病发病猪场分离到的6株PRRSV毒株ORF5基因进行了克隆测序及序列分析。同源性分析表明,6株PRRSV分离株ORF5基因核苷酸(氨基酸)与VR2332株的同源性为88.9%~89.4%(86.5%~88.7%),与CH—1a株同源性为93.7%~94.7%(90%~92%),与jxAt株同源性为97.2%~98.5%(95%~97%),与美国新出现的变异株NADC30同源性为85.90,4~86.7%(85.5%~87.5%),与欧洲型代表株Lelystadvirus同源性为62.7%~63.7%(56.5%~57.5%)。遗传进化树分析表明,6株PRRSV与jxAl、HuN4等高致病毒株亲缘关系近,并位于同一分支。氨基酸序列分析表明,6株PRRSVORF5基因编码氨基酸在PRRSV毒力相关住点aa13、aa151和区分野毒与疫苗毒的位点aa137均与JXAl、HUN4等强毒株相同,表明6个分离株均为较强的野毒株。在中和表位(aa37~aa45)和非中和表位(aa27~aa30,aa180~aa197)等区域与国内外参考毒株vR2332、CH-1a、JXAl、HUN4、NADC30、HENAN—XINX、JL580等相比,也出现了不同程度的变异。抗原性分析结果表明,6株PRRSVORF5基因编码产物的抗原表位主要位于aa30~aa39,aa50~aa60,aa128~aa132,aa136~aa141,aa146~aa155,aa161~aa183,aa191~aa200,与jxAl具有相似的抗原性特征,而与VR2332差异较大,主要表现在aa30~aa39相较于vR2332株抗原区域明显变窄。而在6个分离株中,SN9的抗原表位明显低于其他任何毒株。本研究结果表明,四川省PRRSV流行毒株仍然为JXA1变异株,但在当前高频度活疫苗免疫下,其基因的变异和抗原表住的改变在加剧,需加强对PRRSV基因变异的监控。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) ORF5 遗传变异 序列分析
华北地区猪繁殖与呼吸综合征病毒变异分析 预览 被引量:2
14
作者 焦文强 白献晓 +9 位作者 徐引弟 王克领 郎利敏 朱文豪 李海利 张青娴 张立宪 游一 王治方 许峰 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第10期128-131,共4页
为了解华北地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的遗传变异情况,通过对2014—2016年从河南、河北、山东、山西4省采集的疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病料进行检测,将扩增得到的PRRS阳性样品的ORF5基因进行测序,分析华北地区2014—2... 为了解华北地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的遗传变异情况,通过对2014—2016年从河南、河北、山东、山西4省采集的疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病料进行检测,将扩增得到的PRRS阳性样品的ORF5基因进行测序,分析华北地区2014—2016年PRRSV的变异情况。结果表明,2014—2016年华北地区流行毒株与国内外代表性毒株核苷酸同源性在84.6%~99.8%;抗原位点比对结果显示,变异株中和表位第37—44位氨基酸为SH(I/L/F)QLIY(N/K),诱骗表位27—30位氨基酸为(V/A)L(V/A)N;系统进化树分析表明,以CH-1a为代表的变异株、以VR-2332为代表的经典毒株以及NADC30毒株在华北地区同时存在。可见,华北地区PRRSV流行情况复杂。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5 序列分析 进化
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PRRSV HuN-2011株ORF5和ORF7基因的序列分析
15
作者 贺冬梅 谭树义 +4 位作者 陈朝喜 徐静伟 田语诗 魏玉情 曹宗喜 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第4期188-191,共4页
为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的遗传进化特点,试验采用RT—PCR技术,扩增PRRSVHuN-2011株的ORF5和ORF7基因,并对其进行序列测定,利用生物信息学软件进行遗传进化分析。结果表明:PRRSVHuN-2011株属于美洲型变异株,其ORF5... 为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的遗传进化特点,试验采用RT—PCR技术,扩增PRRSVHuN-2011株的ORF5和ORF7基因,并对其进行序列测定,利用生物信息学软件进行遗传进化分析。结果表明:PRRSVHuN-2011株属于美洲型变异株,其ORF5和ORF7与EF112447HEBl、JX23537011GZ—GD、KF751237 BJ11020、KJ546412 HeNan—A9、GQ359108SD—CXA-2008等PRRSV变异株等位基因核苷酸的相似性分别为95.0%-96.4%、97.0%~99.5%,推导氨基酸的相似性分别为83.6%~91.5%、98.4%~100%;与经典毒株AY262352HB-2(sh)2002核苷酸的相似性为90.4%、93.5%,推导氨基酸的相似性为94.5%、91.9%;与两株美洲型经典毒株VR-2332核苷酸的相似性为87.4%和86.7%、94.4%和93.8%,推导氨基酸的相似性为88.6%和94.5%、96.0%和95.2%;进化树分析表明,HuN一2011株与Jx23537011GZ—GD的遗传距离最近,与经典毒株AY262352HB-2(sh)2002和EF536003 VR2332属于同一亚群,但与欧洲型GU737264 07V063和GU067771 Amervac PRRS属于不同亚群。说明HuN-2011株为美洲型变异株。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) HuN-2011株 ORF5 ORF7 序列分析 基因缺失
一例猪蓝耳病的实验室诊断及NSP2、ORF5基因序列分析 预览
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作者 李原野 李凤琴 +1 位作者 徐志文 朱玲 《猪业科学》 2017年第4期80-82,共3页
为诊断四川眉山某猪场暴发的疑似猪蓝耳病。利用RT-PCR方法对其进行分子诊断,在确认为阳性结果的基础上针对PRRSV的ORF5和Nsp2基因分别设计特异性引物,扩增基因片段进行测序然后对其进行遗传进化分析。结果表明,该疫情由PRRSV引起,... 为诊断四川眉山某猪场暴发的疑似猪蓝耳病。利用RT-PCR方法对其进行分子诊断,在确认为阳性结果的基础上针对PRRSV的ORF5和Nsp2基因分别设计特异性引物,扩增基因片段进行测序然后对其进行遗传进化分析。结果表明,该疫情由PRRSV引起,遗传进化分析表明该PPRSV毒株的ORF5和Nsp2无明显变异,现有防控措施有效。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 ORF5 NSP2 RT-PCR诊断
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2014年华南地区PRRSV ORF5基因的遗传变异分析 预览
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作者 邓胜朝 冯嘉萍 +5 位作者 崔进 陈耀 崔甜甜 白小磊 石庆伟 张桂红 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第6期3-6,共4页
为了研究华南地区PRRSV的遗传变异情况,本研究对2014年华南地区16份PRRSV阳性样品的ORF5基因进行了RT-PCR扩增、克隆和测序,并将其进行序列比对和遗传进化分析。结果表明:本研究检测的16株PRRSV ORF5基因的核苷酸同源性为82.8%-100%,与... 为了研究华南地区PRRSV的遗传变异情况,本研究对2014年华南地区16份PRRSV阳性样品的ORF5基因进行了RT-PCR扩增、克隆和测序,并将其进行序列比对和遗传进化分析。结果表明:本研究检测的16株PRRSV ORF5基因的核苷酸同源性为82.8%-100%,与JXA1,CH-1a以及VR2332核苷酸同源性分别为84.4%-99.3%,85.9%-95.0%和83.6%-89.2%。遗传进化树分析显示,所获得16株毒株序列中有13株属于以JXA1为代表的变异株亚群,另外3株属于以GM2,QYYZ为代表的新分支亚群。GP5氨基酸位点分析发现新分支亚群存在较为广泛的变异,尤其在信号肽区,诱导表位,中和表位及高变区。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸障碍综合征 华南地区 ORF5 遗传变异
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荧光定量RT-PCR检测PRRSV方法的建立及初步应用 被引量:3
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作者 周一媚 劳秀杰 +7 位作者 黄巧莲 徐露凝 郑悦 叶笑 王晓杜 邵春艳 杨永春 宋厚辉 《畜牧与兽医》 北大核心 2016年第1期34-39,共6页
以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5保守区域为靶基因,基于SYBR Green构建了以RNA为模板、反转录和PCR扩增一步完成的荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法。该方法对质粒和细胞培养物中病毒的检测限分别为1×100copies/μL和1×1... 以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5保守区域为靶基因,基于SYBR Green构建了以RNA为模板、反转录和PCR扩增一步完成的荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法。该方法对质粒和细胞培养物中病毒的检测限分别为1×100copies/μL和1×10-2TCID50/m L;组内和组间差异系数(CV)均小于5%。利用本方法检测126份临床组织样品,PRRSV阳性率为42.06%,与传统RT-PCR检测结果具有较好的一致性(Kappa=0.918),且敏感性显著高于传统RT-PCR。本研究建立的qRT-PCR方法为猪繁殖与呼吸综合征的临床诊断提供了技术手段。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 荧光定量RT-PCR(qRT-PCR) ORF5
豫南地区部分猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒检测及ORF5遗传变异分析 预览 被引量:1
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作者 连慧香 王俊锋 +4 位作者 易本驰 刘涛 曲哲会 程丰 陈斌 《家畜生态学报》 北大核心 2016年第8期61-66,共6页
为了解豫南地区猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行情况和流行毒株基因的遗传变异规律,本研究对2013年~2014年豫南地区部分发病猪场进行PRRSV检测,同时对分离株ORF5基因进行RT-PCR扩增、克隆和测序,并将其进行序列比对和遗传进化... 为了解豫南地区猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行情况和流行毒株基因的遗传变异规律,本研究对2013年~2014年豫南地区部分发病猪场进行PRRSV检测,同时对分离株ORF5基因进行RT-PCR扩增、克隆和测序,并将其进行序列比对和遗传进化分析。结果表明:本研究检测的275份病料中,检测阳性样本为86份,阳性率为31.3%;测序的13株流行毒株,遗传关系上均属于美洲株;与VR2332毒株序列比对,13株分离株糖基化位点和抗原表位都有不同程度的变异;另外,遗传进化树分析表明,13株分离株中12株与2006年中国高致病PRRSV代表毒株JXA1同属一个亚群,1株与HB-1(sh)/2002毒株同源性较高,表明目前豫南地区以高致病性PRRSV毒株流行为主,同时还有少部分过渡性毒株存在。研究结果为豫南地区PRRS的防治及新型疫苗的研制提供了依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 ORF5 遗传变异
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屎肠球菌ORF5基因缺失株的构建及鉴定
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作者 熊建英 韩泽平 +2 位作者 陈武嘉 肖钘 杨晓燕 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第21期4869-4872,共4页
目的 构建屎肠球菌ORF5基因缺失株,证实其可能是屎肠球菌感染中较为重要的致病因子,为屎肠球菌的预防和治疗提供理论依据。方法 通过重叠延伸PCR技术将ORF5基因上游同源臂、卡纳霉素基因、下游同源臂连接成一个片段,克隆入自杀质粒PCVD4... 目的 构建屎肠球菌ORF5基因缺失株,证实其可能是屎肠球菌感染中较为重要的致病因子,为屎肠球菌的预防和治疗提供理论依据。方法 通过重叠延伸PCR技术将ORF5基因上游同源臂、卡纳霉素基因、下游同源臂连接成一个片段,克隆入自杀质粒PCVD442,将重组质粒电转化入屎肠球菌中,通过卡纳霉素以及菌落PCR筛选得到ORF5基因缺失株,进行PCR以及测序鉴定;比较突变株与野生株体外生存能力以及对膀胱癌细胞的粘附率。结果 利用重叠延伸PCR技术将ORF5基因上游同源臂、卡纳霉素基因、下游同源臂连接成一个片段,并连接至PCVD442自杀质粒;重组自杀质粒进入屎肠球菌后出现了同源重组事件,ORF5基因被卡纳霉素基因替代,通过PCR及测序分析证实基因组ORF5基因已敲除;通过细胞培养证实野生株对膀胱癌细胞的粘附率高于突变株。结论 成功构建屎肠球菌ORF5基因突变株,突变株黏附膀胱癌细胞能力减弱,初步证实ORF5基因与屎肠球菌的致病力有关。 展开更多
关键词 屎肠球菌 ORF5 基因缺失 自杀质粒
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