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X连锁核糖体S6激酶4在乳腺癌发生发展中的作用及其机制 预览 被引量:1
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作者 霍虹 李秋云 +7 位作者 刘剑仑 杨华伟 姬逸男 韦薇 廖晓明 唐玮 周晓 蒋奕 《广西医学》 CAS 2019年第2期206-211,220共7页
目的探讨X连锁核糖体S6激酶4(RSK4)在乳腺癌发生发展的作用及其机制。方法(1)检测乳腺癌组织及癌旁正常组织、乳腺癌细胞(T47D、ZR-75-1、SK-BR-3、MDA-MB-231、MDA-MB-436、MCF-7)及乳腺正常细胞MCF-10A中RSK4mRNA及蛋白的表达水平。(2... 目的探讨X连锁核糖体S6激酶4(RSK4)在乳腺癌发生发展的作用及其机制。方法(1)检测乳腺癌组织及癌旁正常组织、乳腺癌细胞(T47D、ZR-75-1、SK-BR-3、MDA-MB-231、MDA-MB-436、MCF-7)及乳腺正常细胞MCF-10A中RSK4mRNA及蛋白的表达水平。(2)将MDA-MB-231细胞分为实验组、阴性对照组和空白组,其中实验组、阴性对照组分别转染过表达RSK4的慢病毒载体、不含RSK4的慢病毒载体,空白组未进行转染。检测3组细胞RSK4mRNA及蛋白、蛋白激酶(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)、细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)、E-钙黏蛋白和波形蛋白的表达水平,以及细胞迁移和侵袭能力。(3)检测MDA-MB-231细胞及去甲基化的MDA-MB-231细胞的甲基化程度,比较两种细胞RSK4mRNA的表达水平。(4)将12只裸鼠随机分为实验组及对照组各6只,分别在裸鼠乳房脂肪垫中注射实验组、阴性对照组MDA-MB-231细胞混悬液,比较两组接种后1~6周的瘤体体积及6周后的瘤体重量。结果(1)乳腺癌组织RSK4mRNA及蛋白的表达水平均低于癌旁正常组织(均P<0.05)。MCF-10A细胞的RSK4mRNA及蛋白表达水平均高于6种乳腺癌细胞(均P<0.05)。在6种乳腺癌细胞中,MCF-7细胞的RSK4mRNA及蛋白表达水平最高,MDA-MB-231细胞的RSK4mRNA及蛋白表达水平最低(均P<0.05)。(2)与阴性对照组和空白组比较,实验组细胞的RSK4mRNA及蛋白、E-钙黏蛋白表达水平升高,细胞迁移数、细胞侵袭数以及p-AKT、p-ERK、波形蛋白表达水平降低(均P<0.05)。(3)去甲基化的MDA-MB-231细胞中RSK4mRNA表达水平高于MDA-MB-231细胞(P<0.05)。(4)在第3、4、5、6周,实验组裸鼠的体重均高于对照组(均P<0.05),在第2、3、4、5、6周,实验组裸鼠的瘤体体积均小于对照组(均P<0.05)。结论RSK4乳腺癌的发生发展过程中起抑制作用,其在乳腺癌中低表达可能由其启动子异常甲基化引起的。RSK4可能通过AKT/ERK信号通路调节乳腺癌细胞的上皮间� 展开更多
关键词 乳腺癌 核糖体S6激酶4 DNA甲基化 蛋白激酶 细胞外信号调节激酶 上皮间质转化
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蛋白磷酸化修饰在植物-病原微生物互作中的作用研究进展
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作者 刘雅琼 侯岁稳 《植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期168-184,共17页
蛋白磷酸化修饰是植物细胞信号调控的普遍机制。植物-病原微生物互作过程中,关键调控蛋白的磷酸化状态影响免疫信号的激活。多种病原微生物通过干扰宿主蛋白的磷酸化状态攻击免疫系统,以提高致病性。该文对植物免疫调控过程中关键元件... 蛋白磷酸化修饰是植物细胞信号调控的普遍机制。植物-病原微生物互作过程中,关键调控蛋白的磷酸化状态影响免疫信号的激活。多种病原微生物通过干扰宿主蛋白的磷酸化状态攻击免疫系统,以提高致病性。该文对植物免疫调控过程中关键元件的磷酸化修饰及其在免疫信号中的调控作用进行了综述。研究植物-病原菌互作过程中关键蛋白的磷酸化修饰,有助于深入探讨植物-病原微生物互作的分子机理。该文将为寻找广谱抗病的新途径提供理论依据。 展开更多
关键词 蛋白磷酸化修饰 蛋白激酶 蛋白磷酸酶 植物-病原微生物互作
不同钙离子浓度体外条件下磷酸化对肌联蛋白降解的影响 预览
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作者 王颖 李欣 +3 位作者 李铮 朱杰 张社奇 张德权 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第16期52-57,共6页
以羊背最长肌中肌联蛋白为原料,添加蛋白激酶A和碱性磷酸酶体外孵育使肌联蛋白发生磷酸化和去磷酸化反应。反应后添加μ-钙蛋白酶,在钙离子浓度分别为0.05 mmol/L和2 mmol/L条件下,4℃孵育2 d。测定孵育体系pH值、肌联蛋白磷酸化水平及... 以羊背最长肌中肌联蛋白为原料,添加蛋白激酶A和碱性磷酸酶体外孵育使肌联蛋白发生磷酸化和去磷酸化反应。反应后添加μ-钙蛋白酶,在钙离子浓度分别为0.05 mmol/L和2 mmol/L条件下,4℃孵育2 d。测定孵育体系pH值、肌联蛋白磷酸化水平及其降解程度。结果表明:不同处理组孵育体系pH值差异不显著(P>0.05);蛋白激酶A组肌联蛋白磷酸化水平显著高于对照组,对照组肌联蛋白磷酸化水平显著高于碱性磷酸酶组(P<0.05);当钙离子浓度为0.05 mmol/L时,蛋白激酶A组和对照组未检测到分子质量为1 200 kDa的降解条带,而碱性磷酸酶组在孵育12 h检测到该条带;当钙离子浓度为2 mmol/L时,蛋白激酶A组和对照组均在孵育12 h检测到1 200 kDa降解条带,而碱性磷酸酶组在孵育0.5 h时检测到该条带。结论:蛋白激酶A和碱性磷酸酶能够促进肌联蛋白发生磷酸化和去磷酸化反应;随着钙离子浓度增加,肌联蛋白降解速率加快;并且在相同钙离子浓度下,肌联蛋白在碱性磷酸酶组降解较快,表明去磷酸化可以促进肌联蛋白的降解。 展开更多
关键词 肌联蛋白 蛋白激酶A 碱性磷酸酶 磷酸化 降解
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2-氯乙醇经NMDAR/cAMP/PKA信号通路致星形胶质细胞AQP4蛋白表达增强
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作者 罗超红 郭静静 +2 位作者 徐天胜 李坤阳 金亚平 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2019年第1期15-21,共7页
目的探讨N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)/环磷酸腺苷(cAMP)/cAMP依赖性蛋白激酶A(PKA)信号通路在2-氯乙醇上调星形胶质细胞(AS)表达水通道蛋白-4(AQP4)中的作用。方法①取对数生长期的AS予剂量为0.0、7.5、15.0和30.0 mmol/L 2-氯乙醇(... 目的探讨N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)/环磷酸腺苷(cAMP)/cAMP依赖性蛋白激酶A(PKA)信号通路在2-氯乙醇上调星形胶质细胞(AS)表达水通道蛋白-4(AQP4)中的作用。方法①取对数生长期的AS予剂量为0.0、7.5、15.0和30.0 mmol/L 2-氯乙醇(设为相应剂量组)刺激12 h后,收集细胞进行检测。②取对数生长期的AS为空白对照组、抑制剂(MK-801或H89)对照组、2-氯乙醇组、抑制剂(MK-801或H89)干预组。空白对照组不予任何处理;抑制剂对照组仅予浓度为10.0μmmol/L MK-801或15.0μmmol/L H89处理;MK-801干预组以浓度为10.0μmmol/L的MK-801提前干预30 min,H89干预组以浓度为15.0μmmol/L的H89提前干预1 h;干预结束后,2-氯乙醇组和MK-801、H89干预组AS均予浓度为30.0 mmol/L的2-氯乙醇刺激12 h。③收集各组AS,采用蛋白免疫印迹法和实时荧光定量聚合酶链式反应法检测AS内AQP4、NMDAR受体主亚基(NR1)、NMDAR受体2B亚基(NR2B)、钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的蛋白和mRNA的表达,采用蛋白免疫印迹法检测磷酸化CaMKⅡ(p-CaMKⅡ)和PKA的表达;采用比色法检测AS内钙离子(Ca^2+)浓度,采用酶联吸附试验检测腺苷酸环化酶(AC)活力和cAMP水平。结果①30.0 mmol/L剂量组AS内AQP4、NR1、NR2B的蛋白与mRNA,PKA蛋白、CaMKⅡmRNA的相对表达水平以及p-CaMKⅡ/CaMKⅡ蛋白比值、Ca^2+浓度、AC活力、cAMP水平均高于0.0 mmol/L剂量组(P<0.05)。PKA蛋白相对表达水平和Ca^2+浓度均随着2-氯乙醇剂量的增加而增加(P<0.05)。②2-氯乙醇组AS内AQP4蛋白相对表达水平、Ca^2+浓度均高于空白对照组和MK-801对照组(P<0.05),MK-801干预组AS内AQP4蛋白相对表达水平和Ca^2+浓度均低于2-氯乙醇组(P<0.05);2-氯乙醇组AS内AQP4和PKA蛋白相对表达水平均高于空白对照组和H89对照组(P<0.05),H89干预组AS内AQP4和PKA蛋白相对表达水平均低于2-氯乙醇组(P<0.05)。结论 2-氯乙醇可通过激活NMDAR/cAMP/PKA信号通路诱导AS中AQ 展开更多
关键词 2-氯乙醇 水通道蛋白-4 星形胶质细胞 N-甲基-D-天冬氨酸受体 环磷酸腺苷 蛋白激酶A
高频重复经颅磁刺激改善全脑缺血大鼠学习记忆及机制研究
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作者 任丽君 吴碧华 +2 位作者 刘黎明 张梅 杨兴 《中华神经科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期537-542,共6页
目的研究高频重复经颅磁刺激(rTMS)对全脑缺血大鼠学习记忆的影响并探讨其机制。方法将体重210~250g的35只雄性SD大鼠(8~10周龄)按随机区组法随机分为假手术组(8只)、模型组(9只)、rTMS组(9只)、假刺激组(9只),采用改良四血管阻断法制... 目的研究高频重复经颅磁刺激(rTMS)对全脑缺血大鼠学习记忆的影响并探讨其机制。方法将体重210~250g的35只雄性SD大鼠(8~10周龄)按随机区组法随机分为假手术组(8只)、模型组(9只)、rTMS组(9只)、假刺激组(9只),采用改良四血管阻断法制作全脑缺血大鼠模型,其中rTMS组给予连续2周的10HzrTMS刺激,假刺激组给予假刺激。利用Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,多通道在体记录技术采集海马CA1区局部场电位(local field potentials,LFPs)分析θ和γ节律振荡,免疫组织化学和蛋白免疫印迹法检测海马组织蛋白激酶A(PKA)、磷酸化环磷腺苷效应元件结合蛋白(p-CREB)表达。结果模型组与假手术组相比,平均逃避潜伏期延长[(35.16±0.80)s与(16.57±0.74)s,k=3.723,P=0.013]、跨越平台次数减少[(1.14±0.42)次与(4.46±0.23)次,k=3.185,P=0.042]以及原平台象限游泳时间缩短[(14.46±0.73)s与(29.31±0.42)s,k=3.027,P=0.047],海马CA1区LFPsθ和γ功率谱密度均值降低[分别为(-68.48±2.61)Hz与(-59.38±2.25)Hz,k=2.958,P=0.048;(-82.23±4.60)Hz与(-70.50±4.25)Hz,k=3.729,P=0.021],免疫组织化学染色显示海马PKA、p-CREB表达减少(分别为7184.26±975.12与25137.35±1010.62,k=3.588,P=0.027;1803.73±336.18与20175.25±727.23,k=2.912,P=0.049);rTMS组与模型组相比,平均逃避潜伏期缩短[(24.69±1.01)s与(35.16±0.80)s,k=4.082,P=0.034]、跨越平台次数增加[(2.42±0.31)次与(1.14±0.42)次,t=3.296,P=0.039]及原平台象限游泳时间延长[(23.07±0.67)s与(14.46±0.73)s,k=4.323,P=0.012],海马CA1区LFPsθ和γ功率谱密度均值升高[分别为(-63.81±3.12)Hz与(-68.48±2.61)Hz,k=3.582,P=0.015;(-75.80±4.58)Hz与(-82.23±4.60)Hz,k=4.051,P=0.026],免疫组织化学染色显示海马PKA、p-CREB表达增加(分别为13065.32±1045.18与7184.26±975.12,k=3.923,P=0.031;11032.83±562.86与1803.73±336.18,k=3.178,P=0.038)。结论高频rTMS可能通过增强海马CA1区θ和γ振荡和提高海马PKA、p-CREB蛋白表达, 展开更多
关键词 脑缺血 学习记忆 重复经颅磁刺激 蛋白激酶A 环磷腺苷效应元件结合蛋白 局部场电位
鸡豆黄素A对围绝经期抑郁症大鼠的神经保护作用及机制研究 预览
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作者 杨琴 梁枫 +4 位作者 李正姐 贺志鹏 黄超娟 丁楚涵 尹艳艳 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第1期15-20,共6页
目的探讨鸡豆黄素A(Bioch A)对围绝经期抑郁症(PDD)模型大鼠行为学影响及神经保护机制。方法采用大鼠双侧卵巢摘除(OVX)与慢性不可预知性温和应激(CUMS)两步法制备PDD动物模型。采用旷场实验、强迫游泳实验观察大鼠行为学变化;高效液相... 目的探讨鸡豆黄素A(Bioch A)对围绝经期抑郁症(PDD)模型大鼠行为学影响及神经保护机制。方法采用大鼠双侧卵巢摘除(OVX)与慢性不可预知性温和应激(CUMS)两步法制备PDD动物模型。采用旷场实验、强迫游泳实验观察大鼠行为学变化;高效液相色谱-电化学检测法测定大鼠海马组织多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NA)及五羟色胺(5-HT)的含量;Western blot检测海马白细胞介素-1β(IL-1β)、半胱氨酸天门冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、蛋白激酶A(PKA)、磷酸化蛋白激酶A(p-PKA)、cAMP反应元件结合蛋白(CREB)、磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(pCREB)、脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸蛋白激酶B(TrkB)的表达。结果与模型组相比,给予Bioch A和氟西汀治疗后,抑郁症大鼠水平和竖直运动得分均明显增加,强迫游泳不动时间显著降低(P<0.05,P<0.01),海马IL-1β、Caspase-1表达水平均不同程度降低(P<0.05,P<0.01),5-HT的含量明显升高,PKA及CREB磷酸化水平及BDNF、TrkB mRNA表达水平均不同程度升高(P<0.05,P<0.01)。结论BiochA对PDD有一定的对抗作用,其机制主要与增加海马5-HT含量及上调海马cAMP-CREB-BDNF信号通路蛋白表达有关。 展开更多
关键词 鸡豆黄素A 围绝经期抑郁症 蛋白激酶A CAMP反应元件结合蛋白 脑源性神经营养因子 酪氨酸蛋白激酶B
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小鼠原代哺乳期乳腺细胞中TSH对钠碘同向转运体的调节作用 预览
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作者 史新竹 申红梅 《沈阳医学院学报》 2019年第3期244-246,283共4页
目的:探讨原代哺乳期乳腺细胞中促甲状腺激素(TSH)对钠碘同向转运体(sodium iodide symporter,NIS)的调节作用。方法:在不同浓度TSH 作用下培养小鼠原代哺乳期乳腺细胞,采用实时荧光定量PCR 和Western blot 法检测NIS mRNA和蛋白的表达;... 目的:探讨原代哺乳期乳腺细胞中促甲状腺激素(TSH)对钠碘同向转运体(sodium iodide symporter,NIS)的调节作用。方法:在不同浓度TSH 作用下培养小鼠原代哺乳期乳腺细胞,采用实时荧光定量PCR 和Western blot 法检测NIS mRNA和蛋白的表达;Western blot法检测沉默细胞的促甲状腺激素受体(TSHR)后NIS蛋白的表达以及抑制细胞的蛋白激酶A(PKA)后NIS蛋白的表达。结果:小鼠原代哺乳期乳腺细胞TSH高剂量组NIS mRNA表达量最高(P<0.05),NIS蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);沉默TSHR后各组NIS蛋白表达之间差异无统计学意义(P>0.05);PKA抑制组NIS蛋白表达低于TSH组和空白组(P<0.05)。结论:高浓度TSH对小鼠哺乳期乳腺细胞NIS表达具有一定调节作用;PKA可上调NIS的表达。 展开更多
关键词 哺乳期妇女 哺乳期乳腺细胞 促甲状腺激素 钠碘同向转运体 蛋白激酶A
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溶血磷脂酸刺激可影响成骨细胞表达结缔组织生长因子 预览
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作者 胡广 张开伟 徐远坤 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第19期2959-2964,共6页
背景:溶血磷脂酸可刺激上皮细胞和成肌细胞表达结缔组织生长因子2,但涉及的分子机制至今仍不清楚。成骨细胞是骨发育和骨折愈合中的重要细胞,其也表达溶血磷脂酸的受体,骨折局部高表达溶血磷脂酸和成骨细胞,且结缔组织生长因子2在骨折... 背景:溶血磷脂酸可刺激上皮细胞和成肌细胞表达结缔组织生长因子2,但涉及的分子机制至今仍不清楚。成骨细胞是骨发育和骨折愈合中的重要细胞,其也表达溶血磷脂酸的受体,骨折局部高表达溶血磷脂酸和成骨细胞,且结缔组织生长因子2在骨折愈合中发挥主要作用。目的:研究外源性溶血性磷脂酸对成骨细胞中结缔组织生长因子2表达水平的影响及其分子机制。方法:①体外培养MC3T3-E1细胞,将细胞分为对照组和实验组,对照组仅给予矿化诱导液,实验组在矿化诱导液中加入终浓度为20μmol/L的溶血磷脂酸,刺激0.5,1,2,4,6,8及12 h,提取RNA并检测结缔组织生长因子2 mRNA表达水平;②MC3T3-E1细胞预先经蛋白激酶A抑制剂(H-89)和蛋白激酶C抑制剂(Staurosporine)处理0.5 h,再加入溶血磷脂酸。定量PCR检测结缔组织生长因子2 mRNA表达水平、Western Blot法检测结缔组织生长因子2蛋白表达水平,Westernblot法和免疫荧光检测细胞蛋白激酶C转位情况。结果与结论:①溶血磷脂酸作用于MC3T3-E1细胞后,可迅速引起细胞内结缔组织生长因子2 mRNA和蛋白表达水平提高,刺激后2 h其表达量达到峰值,随后表达水平随时间逐渐降低,至8 h和12 h已基本恢复至刺激前的表达水平;②Staurosporine可明显减弱溶血磷脂酸刺激成骨细胞表达结缔组织生长因子2的能力;而H-89则可以使溶血磷脂酸刺激成骨细胞表达结缔组织生长因子2的能力进一步增强;③成骨细胞经溶血磷脂酸刺激15 min后,溶血磷脂酸可明显提高细胞膜蛋白激酶C表达水平,同时胞浆中蛋白激酶C表达水平降低;④结果提示,溶血磷脂酸可刺激成骨细胞表达结缔组织生长因子2,这一过程可能涉及蛋白激酶A和蛋白激酶C途径。 展开更多
关键词 溶血磷脂酸 骨折愈合 成骨细胞 骨形成 结缔组织生长因子 蛋白激酶A 蛋白激酶C 骨缺损
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从“V2R-cAMP-PKA-AQP2”通路探讨肾气丸上调NRK细胞AQP2表达的作用机制
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作者 何嘉娜 王博林 +5 位作者 姬丽婷 周小杰 陈红淑 陈宜涛 杨元宵 李昌煜 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期2412-2416,共5页
目的:观察肾气丸对NRK细胞水通道蛋白2(AQP2)表达的影响,探讨肾气丸在NRK细胞'V2RcAMP-PKA-AQP2'通路上的主要作用环节。方法:首先采用H-89、SQ22536、Tolvaptan分别抑制蛋白激酶A(PKA)、环磷酸腺苷(cAMP)及V2R,再合用cAMP抑制... 目的:观察肾气丸对NRK细胞水通道蛋白2(AQP2)表达的影响,探讨肾气丸在NRK细胞'V2RcAMP-PKA-AQP2'通路上的主要作用环节。方法:首先采用H-89、SQ22536、Tolvaptan分别抑制蛋白激酶A(PKA)、环磷酸腺苷(cAMP)及V2R,再合用cAMP抑制剂SQ22536与PKA激动剂8-Br-cAMP干预NRK细胞,通过qPCR法和Western Blot法观察NRK细胞AQP2 mRNA表达水平及AQP2、p-PKA蛋白表达的变化。结果:10%肾气丸含药血清能显著上调NRK细胞AQP2 mRNA和蛋白的表达(P<0.01,P<0.05),加入PKA抑制剂H-89、cAMP抑制剂SQ22536或V2R拮抗剂Tolvaptan后,10%肾气丸含药血清促进AQP2、p-PKA表达的作用被显著抑制(P<0.01,P<0.05);SQ22536能显著抑制p-PKA、p-AQP2蛋白的表达(P<0.05),加入肾气丸含药血清或PKA激动剂8-BrcAMP后,p-PKA、p-AQP2蛋白表达均显著上调(P<0.01,P<0.05)。结论:V2R和PKA可能是肾气丸上调NRK细胞AQP2表达的重要靶点。 展开更多
关键词 肾气丸 水通道蛋白2 蛋白激酶A 抑制剂 激动剂
加味当归芍药散对高催乳素血症大鼠环磷酸腺苷和蛋白激酶A及多巴胺受体水平的影响
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作者 刘琛 黄淑娴 +1 位作者 赖珊珊 王惠珍 《中国医药》 2019年第2期297-300,共4页
目的探讨加味当归芍药散对高催乳素血症(HPRL)大鼠环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)及多巴胺受体水平的影响。方法选取无特定病原体级雌性健康成年未孕SD大鼠96只,完全随机分成空白对照组、阴性对照组、阳性对照组、高浓度组、中浓度... 目的探讨加味当归芍药散对高催乳素血症(HPRL)大鼠环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)及多巴胺受体水平的影响。方法选取无特定病原体级雌性健康成年未孕SD大鼠96只,完全随机分成空白对照组、阴性对照组、阳性对照组、高浓度组、中浓度组和低浓度组,每组16只。除了空白对照组不予处理,其余5组进行HPRL造模。造模成功后,空白对照组不给药,阴性对照组将0.9%氯化钠注射液按1 mg/(kg·d)剂量灌胃,阳性对照组将0.9%氯化钠注射液和甲磺酸溴隐亭片配成悬浊液,按0.833 mg/(kg·d)剂量灌胃,高、中、低浓度组将加味当归芍药散按60、30、15 g/(kg·d)剂量灌胃。灌胃30 d后,比较各组大鼠下丘脑中多巴胺D1、D2受体和PKA水平及血清中cAMP及催乳素水平。结果与阴性对照组比较,阳性对照组和高、中浓度组D1受体表达水平增加(P<0.05或P<0.01);与阳性对照组比较,中、低浓度组D1受体表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。与阴性对照组比较,其他5组D2受体表达水平均增加(P<0.05或P<0.01);与阳性对照组比较,中、低浓度组D2受体表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。与阴性对照组比较,阳性对照组和高、中、低浓度组PKA表达水平均明显降低(均P<0.01);与阳性对照组比较,高、中、低浓度组PKA表达水平均降低(P<0.01或P<0.05)。阳性对照组与高、中浓度组血清cAMP、催乳素水平均明显低于阴性对照组[(0.811±0.782)、(0.898±0.745)、(1.052±0.427)比(1.371±0.002),(236.2±4.1)、(242.0±8.5)、(260.2±4.8)ng/L比(332.3±9.5)ng/L](P<0.05或P<0.01)。结论加味当归芍药散通过影响cAMP-PKA信号通路中的多巴胺D2受体来调控治疗大鼠HPRL。 展开更多
关键词 高催乳素血症 加味当归芍药散 环磷酸腺苷 蛋白激酶A 多巴胺D2受体
低频脉冲电磁场对大鼠成骨细胞骨形成的影响及作用机制 预览
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作者 王媛媛 葸慧荣 +2 位作者 石文贵 周建 陈克明 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期21-27,共7页
目的观察低频脉冲电磁场(PEMFs)对大鼠成骨细胞(ROBs)骨形成的影响,探讨了环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/环磷腺苷效应结合蛋白(CREB)信号通路的作用机制。方法取新生Wistar大鼠颅骨,通过多次酶消化法获得ROBs并进行传代融合。采用50... 目的观察低频脉冲电磁场(PEMFs)对大鼠成骨细胞(ROBs)骨形成的影响,探讨了环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/环磷腺苷效应结合蛋白(CREB)信号通路的作用机制。方法取新生Wistar大鼠颅骨,通过多次酶消化法获得ROBs并进行传代融合。采用50Hz0.6mTPEMFs处理3、6、9d后,检测ROBs内的碱性磷酸酶(ALP)浓度;处理0、15、30、60、90、120min后,检测ROBs内骨形成相关因子(RUNX2)和成骨相关转录因子(OSX)蛋白表达,cAMP浓度,p-PKA、p-CREB和CREB蛋白表达。观察p-CREB核转位情况。采用RNA干扰法干扰IFT88后,检测ROBs内RUNX2、OSX、p-PKA和p-CREB蛋白表达情况。结果PEMFs处理ROBs3、6、9d后,ALP活性值分别为24.356±4.911、37.688±2.151和39.922±5.486,均明显高于相应对照组的18.531±2.401(P=0.0121)、33.675±4.366(P=0.0324)和36.574±1.339(P=0.0134)。PEMFs处理30(P=0.0042和P=0.0058)、60(P=0.0097和P=0.0079)、90min(P=0.0083和P=0.0098)时,ROBs内的RUNX2和OSX活性均显著高于未处理组;PEMFs处理30(P=0.0012)和60min(P=0.0035)时,ROBs内的cAMP浓度明显高于未处理时;PEMFs处理15(P=0.0018)、30(P=0.0087)、90(P=0.0250)和120min(P=0.0350)时,ROBs内的p-PKA水平明显高于未处理组;PEMFs处理15(P=0.0075)、30(P=0.0017)、60(P=0.0074)和90min(P=0.0096)时,ROBs内的p-CREB水平明显高于未处理组。PEMFs处理ROBs15min后,CREB发生磷酸化并聚集于细胞核内。将PKA、p-PKA与初级纤毛共定位染色,结果发现p-PKA定位于初级纤毛上。RNA干扰去除初级纤毛后,干扰组的p-PKA(F=78.602,P=0.0270)和p-CREB(F=76.082,P=0.0089)蛋白表达量及RUNX2(F=41.064,P=0.0230)和OSX(F=57.524,P=0.0310)蛋白表达量均明显低于未干扰组。结论PEMFs可能是通过初级纤毛相关的cAMP/PKA/CREB信号通路促进ROBs骨形成。 展开更多
关键词 低频脉冲电磁场 大鼠成骨细胞 初级纤毛 环磷酸腺苷 蛋白激酶A 环磷腺苷效应结合蛋白
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小桐子SnRK1 蛋白激酶α亚基基因的克隆及原核表达分析 预览
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作者 王海波 郭俊云 田雪莲 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期39-47,共9页
植物蔗糖非发酵-1 型相关蛋白激酶1(Sucrose non-fermenting-1 related protein kinase 1,SnRK1)与酵母SNF1 及哺乳动物AMPK 同属进化上保守的SNF1 蛋白激酶家族,参与响应由胞内低能量/低糖状态所引起的信号转导过程。基于小桐子基因组... 植物蔗糖非发酵-1 型相关蛋白激酶1(Sucrose non-fermenting-1 related protein kinase 1,SnRK1)与酵母SNF1 及哺乳动物AMPK 同属进化上保守的SNF1 蛋白激酶家族,参与响应由胞内低能量/低糖状态所引起的信号转导过程。基于小桐子基因组数据,利用生物信息学方法鉴定到小桐子SnRK1 蛋白激酶α亚基基因,并克隆到该基因的全长cDNA 序列,命名为JcSnRK1α。结果表明,该cDNA 序列全长1 700 bp,完整开放阅读框1 545 bp,编码514 个氨基酸,分子量为58.8 kD,理论等电点为8.57。基因结构显示,其包含11 个外显子与10 个内含子。具有包含T-loop 区域的激酶结构域、自抑制调控结构域UBA 及激酶相关结构域KA1。另外,在该基因启动子序列中鉴定到TATA 框、CAAT 框及响应高温、低温、干旱、创伤、赤霉素等应答元件。qRTPCR分析显示,小桐子JcSnRK1α基因具有器官表达特异性,在茎与根中表达量较高,而在叶片中表达量相对较低,同时,在茎与根中都属于低温诱导表达基因,分别在低温胁迫3 h 与0.5 h 达到最大表达量,较对照提高2.04 与3.16 倍。构建其原核表达载体pGEX-4T-1-JcSnRK1α,并在Rosetta 中诱导表达,得到84.8 kD 的蛋白条带,与理论融合蛋白的分子量一致。本研究为开展小桐子JcSnRK1α基因的功能鉴定以及其在信号转导与逆境应答中的机制奠定了基础。 展开更多
关键词 小桐子 蛋白激酶 SnRK1 基因克隆 原核表达??
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植物多功能调控因子SnRK2研究进展 预览
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作者 苗丽丽 刘秀林 +2 位作者 张宏纪 毛新国 景蕊莲 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期787-793,共7页
蔗糖非发酵相关蛋白激酶2(sucrose non-fermenting 1-related protein kinase 2,SnRK2)是植物特有的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,其主要通过磷酸化底物来调节下游基因表达及蛋白质活性。本文综述了蛋白激酶SnRK2的研究进展,包括其结构、... 蔗糖非发酵相关蛋白激酶2(sucrose non-fermenting 1-related protein kinase 2,SnRK2)是植物特有的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,其主要通过磷酸化底物来调节下游基因表达及蛋白质活性。本文综述了蛋白激酶SnRK2的研究进展,包括其结构、分类、调控机制和生物学功能。SnRK2作为典型的多功能调节因子,不仅参与响应各种逆境胁迫,还参与调控植物生长发育。目前有关SnRK2的研究主要集中在ABA依赖信号通路,而对其在非ABA依赖信号通路中的研究很少,未来研究应该聚焦这一领域。SnRK2作用机理的全面解析对提高作物的抗逆性和改良产量性状都具有重要意义。 展开更多
关键词 蛋白激酶 SnRK2 信号转导 抗逆 生长发育
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小桐子CDPK及相关激酶基因家族的全基因组鉴定及表达分析 预览
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作者 王海波 郭俊云 +4 位作者 辛胡 刘潮 高永 代冬琴 唐利洲 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期105-116,共12页
基于小桐子基因组数据库,在全基因组水平对小桐子CDPK及相关激酶基因家族进行鉴定,并对其系统进化、基因结构、保守结构域、染色体定位以及器官与低温胁迫表达进行分析,为深入开展小桐子CDPK及相关激酶基因的功能鉴定及其在小桐子遗传... 基于小桐子基因组数据库,在全基因组水平对小桐子CDPK及相关激酶基因家族进行鉴定,并对其系统进化、基因结构、保守结构域、染色体定位以及器官与低温胁迫表达进行分析,为深入开展小桐子CDPK及相关激酶基因的功能鉴定及其在小桐子遗传改良中的应用提供依据。利用CDPK结构域的隐马尔可夫模型对小桐子蛋白质数据库进行相似性检索,经过Pfam与CDD在线工具的验证获得小桐子CDPK及相关激酶基因家族成员。利用不同的工具对CDPK及相关激酶基因进行生物信息学对比分析。通过小桐子器官与低温表达谱数据进行CDPK及相关激酶基因的表达分析。小桐子基因组中共检索到17个CDPK基因、5个CRK基因、2个PPCK基因、4个PEPRK基因以及1个CCaMK基因,各基因家族成员的基因长度、蛋白质等电点及亚细胞定位等理化参数具有家族特异性。序列比对与系统进化分析显示,5个基因家族都单独聚类,而CDPK与PEPRK基因家族又分别聚类为4个与2个亚族,且鉴定到小桐子CDPK家族成员的N-端可变区、激酶结构区、自抑区及EF-hand调控区4个保守结构域以及其他激酶成员的激酶结构域。同时,分别有21个与24个CDPK及相关激酶可能发生N-豆蔻酰化与N-十六烷酰化的修饰。染色体定位表明,小桐子CDPK及相关激酶基因不均匀地分布于10条染色体上,且存在JcCDPK7/JcCDPK9串联复制现象。转录组表达分析表明,29个CDPK及相关激酶基因中,有24个基因在叶片、根及种子中都有表达,而JcCDPK3、JcCDPK11、JcCRK3及JcCCaMK属于低温诱导高表达基因,与小桐子的抗冷性直接相关。 展开更多
关键词 小桐子 CA^2+ 蛋白激酶 CDPK基因 基因家族 表达分析
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蛋白激酶C在七氟醚预处理高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤模型中的作用 预览
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作者 王丽丽 常冰梅 张文颉 《中国药物与临床》 CAS 2019年第11期1777-1778,共2页
目的观察七氟醚预处理高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤模型中蛋白激酶C(PKC)活性变化,并探讨其意义。方法原代培养HUVECs并鉴定;将HUVECs细胞生长至70%~80%融合时分为4组:正常糖浓度对照组,高糖组,甘露醇组(高渗对照),高糖+七... 目的观察七氟醚预处理高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤模型中蛋白激酶C(PKC)活性变化,并探讨其意义。方法原代培养HUVECs并鉴定;将HUVECs细胞生长至70%~80%融合时分为4组:正常糖浓度对照组,高糖组,甘露醇组(高渗对照),高糖+七氟醚组;各组细胞培养72 h时采用非放射性PKC活性试剂盒检测4组细胞PKC活性。结果各组的细胞增殖水平差异无统计学意义,高糖组的细胞凋亡增加,高糖+七氟醚组水平细胞存活数量增多,4组细胞PKC活性分别为0.143±0.047,0.231±0.037、0.151±0.043,0.189±0.037,高糖组和高糖+七氟醚组与正常血糖组相比较,差异有统计学意义(P<0.05),高糖组与高糖+七氟醚相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论七氟醚对高糖诱导的HUVECs细胞损伤有保护作用,PKC活性水平可能起到重要作用。 展开更多
关键词 蛋白激酶C 内皮细胞 细胞凋亡
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不同糖源对葡萄试管苗蛋白激酶相关基因表达的影响 预览
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作者 梁国平 李文芳 +6 位作者 陈佰鸿 左存武 马丽娟 何红红 万鹏 安泽山 毛娟 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1119-1135,共17页
【目的】探究不同外源糖对葡萄试管苗生长发育及蛋白激酶基因转录调控的影响,应用转录组测序挖掘蛋白质磷酸化过程中的基因,为葡萄蛋白激酶相关基因功能的验证奠定一定基础。【方法】在基本培养基中分别添加2%的蔗糖、葡萄糖和果糖,以... 【目的】探究不同外源糖对葡萄试管苗生长发育及蛋白激酶基因转录调控的影响,应用转录组测序挖掘蛋白质磷酸化过程中的基因,为葡萄蛋白激酶相关基因功能的验证奠定一定基础。【方法】在基本培养基中分别添加2%的蔗糖、葡萄糖和果糖,以无糖为对照,分别命名为S20、G20、F20和CK,经过37 d培养后,测定不同处理的地上和地下鲜重,并采用Illumina HiSeqTM 2000对各处理叶片进行转录组测序,通过综合生物信息学分析(参考基因组比对、差异基因(DEGs)筛选、COG(Cluster of Orthologous Groups of proteins)注释、GO(Gene Ontology)注释等)筛选出蛋白激酶相关基因,通过qRT-PCR分析该蛋白激酶相关基因的表达特性。【结果】F20、G20和S20处理下的葡萄(‘红地球’)试管苗与CK相比,地上鲜重具有明显差异,且F20最高,而G20地下鲜重最高。SNP统计发现,转换是主要的变异类型,颠换次之,且发生在基因间区的SNP数量最多,其次是下游;剪接位点供体和同义终止发生的基因数量最少且相等。4个样品中共获得了2 633个差异基因,3个处理与CK相比,共有差异基因180个且被聚类为3组,第一组中127个基因仅在CK中高表达,第二组19个基因仅在G20下高表达,而第三组34个基因在3个处理下表达模式不尽相同。这些共有的差异基因在COG中注释到了26个基因并分在11个功能类别中,且主要注释在一般的功能类别中。在GO分类中,共有的基因分别被注释在分子功能、生物学过程和细胞组分的14、22和13个功能类别中。共筛选出7种蛋白激酶,分别为葡萄糖激酶(Glucokinase,GK)、丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases,MAPKs)、钙调蛋白激酶(Calcineurin protein kinase,CBL)、蛋白磷酸酶2(Protein phosphatase 2,PP2A)、己糖激酶(Hexokinase,HXK)、组氨酸蛋白激酶(Histidine protein kinase,HPK)和酪氨酸激酶(Tyrosine kinase,TK),其不同激酶的基因在不同处理� 展开更多
关键词 RNA-SEQ 外源糖 蛋白激酶 信号转导
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七叶皂苷钠对糖尿病模型大鼠血-视网膜屏障损伤的保护作用及机制研究 预览
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作者 陈珍 俞颂平 +1 位作者 李俊 兰淑琴 《浙江中西医结合杂志》 2019年第7期530-533,I0002共5页
目的观察七叶皂苷钠(ESC)对糖尿病(DM)模型大鼠血-视网膜屏障(BRB)的保护作用,探讨其作用机制。方法采用链脲佐菌素(STZ)诱导SD(Sprague Dawley)大鼠建立糖尿病性视网膜病变(DR)模型,予以七叶皂苷钠(1.5mg·kg^-1·d^-1)灌胃处... 目的观察七叶皂苷钠(ESC)对糖尿病(DM)模型大鼠血-视网膜屏障(BRB)的保护作用,探讨其作用机制。方法采用链脲佐菌素(STZ)诱导SD(Sprague Dawley)大鼠建立糖尿病性视网膜病变(DR)模型,予以七叶皂苷钠(1.5mg·kg^-1·d^-1)灌胃处理,通过检测视网膜中伊文思蓝(EB)渗漏量评估ESC对DR大鼠BRB的影响,采用Western blot法检测视网膜组织Occludin蛋白、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)蛋白及磷酸化肌球蛋白轻链(P-MLC)蛋白的表达。结果与DM组比较,ESC能够减少DR大鼠BRB渗漏情况[实验4周:(13.27±0.77)比(26.23±2.00),实验8周:(18.01±1.77)比(29.78±1.78),实验12周:(21.05±1.50)比(34.08±3.03),P<0.01],增加Occludin蛋白表达[实验4周:(4.58±0.53)比(3.59±0.64),实验8周:(3.65±0.71)比(2.26±0.45),实验12周:(3.45±0.58)比(1.23±0.47),P<0.01],同时抑制ROCK/P-MLC通路的激活[实验4周:(1.05±0.49)比(1.45±0.53)、(0.71±0.49)比(0.95±0.62),实验8周:(1.84±0.71)比(2.76±0.32)、(1.01±0.61)比(1.96±0.59),实验12周:(2.34±0.51)比(3.82±0.49)、(1.54±0.51)比(2.67±0.65),P<0.01]。结论七叶皂苷钠对糖尿病模型大鼠BRB具有保护作用,其机制可能与增加DR大鼠视网膜组织Occludin蛋白的表达,同时抑制炎性信号通路的激活有关。 展开更多
关键词 大鼠 七叶皂苷钠 糖尿病视网膜病变 血-视网膜屏障 蛋白激酶
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小桐子MAPKKKK基因家族的全基因组鉴定及表达分析
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作者 王海波 郭俊云 唐利洲 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期367-377,共11页
促分裂原活化蛋白激酶激酶激酶激酶(mitogen-activated protein kinase kinase kinase kinase, MAPKKKK)属Ser/Thr类蛋白激酶,参与典型MAPK级联系统与其它信号转导途径,从而调节植物光周期、花器官生长及抗逆性等生物学过程。本研究基... 促分裂原活化蛋白激酶激酶激酶激酶(mitogen-activated protein kinase kinase kinase kinase, MAPKKKK)属Ser/Thr类蛋白激酶,参与典型MAPK级联系统与其它信号转导途径,从而调节植物光周期、花器官生长及抗逆性等生物学过程。本研究基于序列比对的方法,在全基因组水平对小桐子MAPKKKK基因家族进行鉴定,并对其基因结构、系统进化、表达特性及潜在功能进行了解析。结果表明,小桐子基因组中共鉴定到6个MAPKKKK基因,主要定位细胞核,蛋白序列长度分布在513~812 aa,等电点分布在5.12~6.72。序列比对都发现激酶结构域及保守基序-TFVGTPxWMAPEV-,除JcMAPKKKK4激酶结构域位于序列中部外,其它成员都位于N端。与拟南芥、葡萄MAPKKKK共聚类与系统进化分析显示, MAPKKKK聚类为8个亚组,且各亚组内成员存在蛋白序列长度、外显子数量、等电点特异性。基因结构分析表明,除JcMAPKKKK6仅含有1个外显子,其它5个小桐子MAPKKKK基因包含18~22个外显子。表达分析显示,JcMAPKKKK1、JcMAPKKKK2及JcMAPKKKK5在叶片中表达量较高,而JcMAPKKKK3与JcMAPKKKK6在根中表达量较高。同时,JcMAPKKKK3与JcMAPKKKK6是响应小桐子抗冷性的主要基因。蛋白互作分析表明,小桐子MAPKKKK与WNK、Mo25及Mob家族蛋白具有广泛的互作关系,并可能参与植物极性生长、细胞分裂及ABA信号转导等过程。以上结果为开展小桐子MAPKKKK基因的功能鉴定与信号转导机制研究提供了参考。 展开更多
关键词 小桐子 蛋白激酶 MAPKKKK 基因家族 表达分析
茶树蛋白激酶基因CsCIPK的克隆与表达特性分析
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作者 刘昊 王文丽 +4 位作者 滕瑞敏 李辉 王瑜 王永鑫 庄静 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期96-106,共11页
以茶树品种‘龙井43’作为材料,利用RT-PCR方法,从茶树的cDNA中克隆得到1个编码蛋白激酶的基因,命名为CsCIPK。序列分析表明,CsCIPK开放阅读框长度为1 341 bp,编码446个氨基酸,蛋白质分子量为414234。蛋白功能域预测和多重对比显示,CsC... 以茶树品种‘龙井43’作为材料,利用RT-PCR方法,从茶树的cDNA中克隆得到1个编码蛋白激酶的基因,命名为CsCIPK。序列分析表明,CsCIPK开放阅读框长度为1 341 bp,编码446个氨基酸,蛋白质分子量为414234。蛋白功能域预测和多重对比显示,CsCIPK蛋白含有1个保守的N端激酶结构域和1个相对不保守的C端调节结构域,即丝氨酸/苏氨酸激酶结构域和NAF结构域。理化性质、亲/疏水性、无序化分析显示,CsCIPK属于疏水性蛋白,理论等电点为7.04,有4段无序化区域,其二级结构分析显示主要由α螺旋、不规则卷曲组成。通过实时荧光定量PCR对‘龙井43’和‘安吉白茶’中的CsCIPK表达特性进行分析。结果显示‘龙井43’中CsCIPK的相对表达量在高温、干旱及盐处理4 h、低温处理24 h时达到最高。‘安吉白茶’中CsCIPK的相对表达量在高温及盐处理4 h、低温及干旱处理1h时达到最高。CsCIPK在‘龙井43’的根中,‘安吉白茶’茎中表达量最高。不同浓度的GA和IBA处理‘龙井43’茶苗,结果显示0.2 mmol·L-1 GA处理后,CsCIPK表达量先升高后下降,6 d时处理组为对照组的62倍;0.6 mmol·L-1 IBA处理后,CsCIPK的表达量在3 d时显著高于对照组;不同浓度GA和IBA处理后,9 d时CsCIPK表达量均显著低于对照。 展开更多
关键词 茶树 蛋白激酶 CsCIPK 组织表达 非生物胁迫 激素处理
GLP-1减轻糖基化终末产物对肾小管上皮细胞(HK-2)重吸收功能的影响 预览
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作者 尹卫芹 许世清 +2 位作者 翟敏 王在 娄晋宁 《中日友好医院学报》 2018年第3期159-164,F0002共7页
目的:研究GLP-1对糖基化终末产物(AGEs)引起人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞)损伤的影响及机制。方法:将HK-2细胞分成4组:正常对照组,AGEs处理组,AGEs+GLP-1处理组和AGEs+Insulin处理组,分别培养24h。检测各组细胞对荧光标记白... 目的:研究GLP-1对糖基化终末产物(AGEs)引起人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞)损伤的影响及机制。方法:将HK-2细胞分成4组:正常对照组,AGEs处理组,AGEs+GLP-1处理组和AGEs+Insulin处理组,分别培养24h。检测各组细胞对荧光标记白蛋白的吸收能力。结果:与正常组相比,AGEs处理组细胞吸收白蛋白的能力减弱,与重吸收相关的通道蛋白Megalin和Cubilin表达降低。AGEs+GLP-1处理组细胞吸收白蛋白的能力与正常对照组相似,给予胰岛素无明显保护作用,与AGEs处理组无差别。进一步研究发现,AGEs处理组较正常对照组的PKA表达降低,PKC表达升高;同时诱导型一氧化氮合酶(iNOS)升高,超氧化物歧化酶(SOD)降低。给予GLP-1可减轻AGEs的作用。采用信号通路激活剂或阻断剂后发现,抑制PKA或激活PKC可以拮抗GLP-1对iNOS和SOD的调节作用。结论:GLP-1可能通过调节PKA和PKC水平降低AGEs引起的肾小管上皮细胞氧化应激,从而维持通道蛋白的表达,改善细胞对白蛋白的重吸收功能。 展开更多
关键词 胰高糖素样肽1 糖基化终末产物 肾小管上皮细胞 氧化应激 蛋白激酶C 蛋白激酶A
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