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金雀异黄素调控miR-21表达促进LPS活化的RAW264.7细胞凋亡
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作者 向丽萍 丛丽 +5 位作者 张勇 刘素娟 谢小林 柏萍娟 向雪萍 符晓华 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期281-287,共7页
本文旨在研究金雀异黄素(genistein, GEN)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)活化的RAW264.7细胞凋亡的影响,探讨GEN抗动脉粥样硬化的药理学作用机制。应用LPS活化RAW264.7细胞, qRT-PCR检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, ... 本文旨在研究金雀异黄素(genistein, GEN)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)活化的RAW264.7细胞凋亡的影响,探讨GEN抗动脉粥样硬化的药理学作用机制。应用LPS活化RAW264.7细胞, qRT-PCR检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)和白介素-6 (interleukin 6, IL-6) mRNA表达, Western blot检测环氧合酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthases, iNOS)蛋白表达。使用GEN预处理细胞2 h,再与LPS共孵育24 h后, CCK8检测细胞活力, Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡, qRT-PCR检测CHOP、caspase-3和miR-21基因表达, Western blot检测CHOP和caspase-3蛋白表达。结果显示, 1 000 ng·mL-1 LPS上调RAW264.7细胞TNF-α、IL-6、COX-2和iNOS基因或蛋白表达;GEN呈浓度依赖性下调LPS活化的RAW264.7细胞活力,增加凋亡率,上调CHOP和caspase-3表达,并下调miR-21表达;慢病毒介导的miR-21 up抑制LPS活化的RAW264.7细胞CHOP和caspase-3表达,与GEN作用相反;慢病毒介导的miR-21 down促进LPS活化的RAW264.7细胞CHOP和caspase-3表达,与GEN具有协同作用。这些结果提示,金雀异黄素能够促进LPS活化的RAW264.7细胞凋亡,其作用机制可能与下调miR-21表达,激活内质网应激反应性凋亡途径有关。 展开更多
关键词 金雀异黄素 RAW264.7细胞 脂多糖 MIR-21 凋亡
PARP抑制剂PJ34在绿脓菌素引起的巨噬细胞损伤中的作用 预览
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作者 祝飞美 何瑾晨 +1 位作者 黄宁 王祎 《四川生理科学杂志》 2019年第1期5-8,共4页
目的:研究多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly(ADP-ribose)polymerase,PARP)抑制剂PJ34对绿脓菌素(Pyocyanin,PCN)引起的腹腔来源巨噬细胞RAW264.7损伤的保护作用。方法:分别采用800nM的PJ34预处理细胞2h(对照组给与0.1% Dimethyl sulfoxide... 目的:研究多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly(ADP-ribose)polymerase,PARP)抑制剂PJ34对绿脓菌素(Pyocyanin,PCN)引起的腹腔来源巨噬细胞RAW264.7损伤的保护作用。方法:分别采用800nM的PJ34预处理细胞2h(对照组给与0.1% Dimethyl sulfoxide,DMSO)后,不同浓度的PCN(50μM,100μM)刺激24h,MTT法检测绿脓菌素及PJ34对RAW264.7细胞存活率的影响;采用800nM的PJ34预处理细胞2h(对照组给与0.1%DMSO),给与PCN(100μM,3h)刺激,荧光显微镜及流式细胞术检测细胞内活性氧自由基(Reactive oxidant species,ROS)的水平,并采用激光共聚焦显微镜观察RAW264.7细胞内钙离子水平;或加入18μg·mL-1碳颗粒继续共孵育2h,显微镜下观察RAW264.7细胞吞噬碳颗粒的情况。结果:PJ34预处理组细胞与单用PCN处理组比较,细胞存活率提高近20%;PJ34预处理缓解了PCN刺激诱导的RAW264.7细胞内ROS和Ca2+水平的升高(P<0.05),并降低了RAW264.7细胞由PCN刺激引起的吞噬功能损伤。结论:PJ34通过抑制PCN引起的RAW264.7细胞内ROS和Ca2+水平升高,提高细胞的存活率并增强细胞的吞噬功能。 展开更多
关键词 绿脓菌素 氧化应激 RAW264.7细胞 PJ34
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冰片对脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型的影响 预览
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作者 孙淑萍 杜云艳 +4 位作者 锁孝国 王洋 张家豪 吴晨光 张梦圆 《通化师范学院学报》 2019年第4期61-68,共8页
目的:探究冰片的体外抗炎活性及其相关的分子机制.方法:选取对数生长期的RAW264.7巨噬细胞,使用不同浓度(0.03μg/mL、0.3μg/mL、3μg/mL、30μg/mL、300μg/mL、600μg/mL)冰片和不同浓度(0.5μg/mL、1μg/mL、1.5μg/mL、2μg/mL)脂... 目的:探究冰片的体外抗炎活性及其相关的分子机制.方法:选取对数生长期的RAW264.7巨噬细胞,使用不同浓度(0.03μg/mL、0.3μg/mL、3μg/mL、30μg/mL、300μg/mL、600μg/mL)冰片和不同浓度(0.5μg/mL、1μg/mL、1.5μg/mL、2μg/mL)脂多糖(LPS)分别作用细胞24h,采用CCK-8法检测细胞活力,筛选出活力较好的冰片和LPS浓度.LPS刺激RAW264.7巨噬细胞建立炎症细胞模型,选择醋酸地塞米松(Dexamethasone,Dex)作为阳性对照药,分别设置空白(KB)组、模型(MX)组、阳性(YX)组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,药物组分别使用相应浓度的药物预处理细胞0.5h后,各组(除KB组)再用LPS刺激23.5h.倒置显微镜下观察细胞形态,一步法测定细胞培养上清液中一氧化氮(NO)的含量,Westernblot法检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)通路、核转录因子E2相关因子2(Nrf2)通路及核因子(NF-κB)通路中相关蛋白的表达水平,DCFH-DA荧光探针检测活性氧(ROS)含量.结果:冰片浓度<600μg/mL和LPS浓度<1.5μg/mL时细胞活力未受明显影响,并进一步优化出1.5μg/mL、15μg/mL、150μg/mL分别作为冰片抑制细胞炎症的低、中、高剂量,1.2μg/mLLPS作为刺激RAW264.7细胞的最佳浓度.倒置显微镜下观察可见,KB组大部分细胞呈圆形,轮廓较为清楚;MX组细胞伪足和肿胀分化较为严重,且胞质内可见白色透明小泡;YX组细胞伪足回缩,趋于正常;冰片三个剂量组均能不同程度地抑制细胞分化.冰片可剂量依赖性地降低炎症因子NO的水平.Western blot结果显示,冰片可激活Nrf2通路,促进Nrf2蛋白表达,同时抑制MAPKs及NF-κB通路活化,降低ERK、JNK、p38和p65的磷酸化水平.冰片可剂量依赖性地抑制ROS的过度表达.结论:冰片可剂量依赖性地抑制MAPKs和NF-κB通路的活化,以及激活Nrf2蛋白,降低相关炎症因子NO的表达水平,进而发挥细胞抗炎活性. 展开更多
关键词 冰片 RAW264.7巨噬细胞 脂多糖 抗炎 炎症因子 MAPKs通路 NF-ΚB通路 Nrf2通路
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c-fos在破骨细胞分化中的作用及机制
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作者 朱伟 孙琴 +2 位作者 张博燃 马净植 李文强 《临床口腔医学杂志》 2019年第1期3-7,共5页
目的:探究c-fos在RAW264.7细胞向破骨细胞分化过程的作用及可能的表观遗传学作用机制。方法:用30 ng/m L巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和50 ng/m L核因子κB受体活化素配体(RANKL)诱导RAW264.7细胞向破骨细胞分化,达指定天数后,TRAP染色... 目的:探究c-fos在RAW264.7细胞向破骨细胞分化过程的作用及可能的表观遗传学作用机制。方法:用30 ng/m L巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和50 ng/m L核因子κB受体活化素配体(RANKL)诱导RAW264.7细胞向破骨细胞分化,达指定天数后,TRAP染色观察破骨细胞形成,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测c-fos和破骨细胞分化相关基因mRNA表达水平。过表达和抑制c-fos后,诱导RAW264.7细胞分化,TRAP染色观察破骨细胞形成,qRT-PCR检测c-fos和破骨细胞分化相关基因的mRNA表达水平。利用DIANA、miRDB、PicTar、Target Scan 4个生物信息学软件预测可能调控c-fos表达的microRNA。结果:c-fos在破骨细胞分化过程中逐渐上调。过表达c-fos促进破骨细胞分化,抑制c-fos抑制破骨细胞分化。生物信息学分析提示miR-101a-3p和miR-101b-3p可能是c-fos基因的上游microRNA。结论:c-fos促进RAW264.7细胞向破骨细胞分化,miR-101a-3p和miR-101b-3p可能对c-fos基因表达有调控作用。 展开更多
关键词 C-FOS RAW264.7 细胞分化 根尖周炎 MICRORNA
5种鸢尾属药用植物甲醇提取物体外抗炎活性研究
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作者 杨阳 张绪阳 +4 位作者 常利华 严敏 赵劲竹 张曼瑞 赵长琦 《中南药学》 CAS 2019年第2期199-203,共5页
目的研究5种鸢尾属药用植物(膜苞鸢尾、细叶鸢尾、蓝花喜盐鸢尾、粗根鸢尾、中亚鸢尾)根及根状茎甲醇提取物的体外抗炎活性。方法制备5种鸢尾属植物根及根状茎的甲醇提取物,并测定其总黄酮含量。采用脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞RAW 264.7... 目的研究5种鸢尾属药用植物(膜苞鸢尾、细叶鸢尾、蓝花喜盐鸢尾、粗根鸢尾、中亚鸢尾)根及根状茎甲醇提取物的体外抗炎活性。方法制备5种鸢尾属植物根及根状茎的甲醇提取物,并测定其总黄酮含量。采用脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞RAW 264.7建立细胞炎症模型,观察5种鸢尾属植物提取物对NO、TNF-α、IL-6水平的影响。使用MTT测定细胞活力,Griess法测定NO的含量,ELISA法测定TNF-α及IL-6的含量。结果与模型组相比,5种提取物中,膜苞鸢尾及中亚鸢尾在12.5~100μg·mL^-1,粗根鸢尾及蓝花喜盐鸢尾在25~100μg·mL^-1,细叶鸢尾在50~100μg·mL^-1时,均能有效抑制巨噬细胞释放NO(P<0.05)。膜苞鸢尾、粗根鸢尾、中亚鸢尾、蓝花喜盐鸢尾在25~100μg·mL^-1,细叶鸢尾在50~100μg·mL^-1时,均能有效抑制巨噬细胞释放TNF-α(P<0.05)。5种鸢尾在25~100μg·mL-1时,均能有效抑制巨噬细胞释放IL-6(P<0.01)。组间对比表明,膜苞鸢尾在100μg·mL^-1时对NO和TNF-α的抑制作用最强,细叶鸢尾在25μg·mL-1时对NO的抑制作用最弱,在100μg·mL^-1时对IL-6的抑制作用最弱(P<0.05)。结论 5种鸢尾属药用植物根及根状茎的甲醇提取物具有潜在的抗炎活性,本研究结果可为该属药用植物抗炎活性的研究提供参考。 展开更多
关键词 鸢尾属 药用植物 体外抗炎 RAW264.7细胞
脑心通对小鼠巨噬细胞Raw264.7的活力及凋亡的影响
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作者 邓子亮 蓝明明 +6 位作者 郭洪胜 谭锦麟 李婉怡 周雅贤 梁艳君 王森 王焱 《海南医学》 CAS 2019年第8期956-959,共4页
目的研究脑心通(Naoxintong,NXT)对Raw264.7小鼠单核巨噬细胞系细胞活力和凋亡的影响及NXT的作用特点。方法实验设置空白组(培养基100μL)、对照组[细胞悬液100μL+1/10二甲基亚砜(DMSO)原液1μL]和三种浓度的NXT组。用CCK-8法检测空白... 目的研究脑心通(Naoxintong,NXT)对Raw264.7小鼠单核巨噬细胞系细胞活力和凋亡的影响及NXT的作用特点。方法实验设置空白组(培养基100μL)、对照组[细胞悬液100μL+1/10二甲基亚砜(DMSO)原液1μL]和三种浓度的NXT组。用CCK-8法检测空白组、对照组、1∶1000NXT组、1∶10000NXT组和1∶100000NXT组经NXT作用12h后Raw264.7细胞的活力。选取1∶1000NXT组,CCK-8法检测作用1h、3h和6h后Raw264.7细胞的活力。用Hoechst33258细胞凋亡试剂盒检测对照组和1:1000的NXT组的细胞凋亡程度。结果与对照组比较,1∶1000NXT组和1∶10000NXT组分别提高Raw264.7细胞活力至(108.2±5.35)%和(105.69±3.02)%,差异均有统计学意义(P<0.05);作用6h内,NXT对Raw264.7细胞活力的提高效果均非常显著,差异有统计学意义(P<0.05);1∶1000的NXTDMSO浸取原液组细胞凋亡数量显著减少。结论NXT可提高Raw264.7细胞活力,降低细胞凋亡,其最佳作用浓度1/1000,最佳作用时间1~6h。 展开更多
关键词 脑心通 RAW264.7细胞 细胞凋亡 细胞活力 CCK-8
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蔓荆子黄素对小鼠单核巨噬细胞增殖和凋亡的影响 预览
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作者 杨远超 何芳 +5 位作者 刘学伟 温彬宇 闫妍 唐旭 高俊峰 王新祥 《中国现代医学杂志》 2018年第21期1-9,共9页
目的通过蔓荆子黄素对小鼠腹腔巨噬细胞活性及RAW264.7细胞增殖和凋亡作用的研究,探讨蔓荆子黄素对单核巨噬细胞的影响。方法分别用含有不同浓度蔓荆子黄素作用于小鼠腹腔巨噬细胞与小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,于24、48及72h后采用CCK-8... 目的通过蔓荆子黄素对小鼠腹腔巨噬细胞活性及RAW264.7细胞增殖和凋亡作用的研究,探讨蔓荆子黄素对单核巨噬细胞的影响。方法分别用含有不同浓度蔓荆子黄素作用于小鼠腹腔巨噬细胞与小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,于24、48及72h后采用CCK-8检测细胞活性。使用AO/EB染色观察RAW264.7细胞凋亡变化;应用流式细胞仪检测RAW264.7细胞凋亡率。通过荧光探针DCFH-DA检测RAW264.7细胞活性氧水平,使用JC-1染色标记线粒体膜电位的变化。结果CCK-8法检测结果显示,蔓荆子黄素对小鼠腹腔巨噬细胞的细胞活性及RAW264.7细胞的增殖都有抑制作用,呈剂量与时间依赖关系,尤其对具有增殖能力的RAW264.7细胞活性抑制作用更强。AO/EB染色结果显示,RAW264.7细胞经浓度为5及10μmol/L的蔓荆子黄素处理后,细胞表现为凋亡形态;流式细胞仪检测结果显示,蔓荆子黄素诱导RAW264.7细胞Sub-G1期代表凋亡细胞的百分比增加(P<0.05)。蔓荆子黄素作用于RAW264.7细胞后,细胞内活性氧水平提高;JC-1染色结果显示,蔓荆子黄素能使RAW264.7细胞的线粒体膜电位下降。结论蔓荆子黄素能够抑制小鼠腹腔巨噬细胞与小鼠单核巨噬细胞RAW264.7活性,尤其对具有增殖能力的RAW264.7细胞活性抑制作用更强,可以促进其凋亡,其作用机制与增加细胞内活性氧水平和降低线粒体膜电位有关。 展开更多
关键词 蔓荆子黄素 小鼠腹腔巨噬细胞 RAW264.7细胞 细胞凋亡 细胞增殖
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下调miR-92a通过调控PIAS3抑制ox-LDL诱导RAW264.7细胞炎症介质分泌和脂质蓄积
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作者 胡威威 陈丽曼 刘智芬 《中国动脉硬化杂志》 2018年第11期1119-1126,共8页
目的 探讨下调miR-92a对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导RAW264.7细胞炎症介质分泌和脂质蓄积的影响及其机制。方法 以不同浓度(0、25、50、100 mg/L)的ox-LDL处理RAW264.7细胞24 h或以100 mg/L ox-LDL分别处理RAW264.7细胞0、12、24 h... 目的 探讨下调miR-92a对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导RAW264.7细胞炎症介质分泌和脂质蓄积的影响及其机制。方法 以不同浓度(0、25、50、100 mg/L)的ox-LDL处理RAW264.7细胞24 h或以100 mg/L ox-LDL分别处理RAW264.7细胞0、12、24 h后,采用定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测ox-LDL对miR-92a表达的影响。建立miR-92a低表达的RAW264.7细胞株,并给予100 mg/L ox-LDL处理后,用qRT-PCR、油红O染色、一氧化氮(NO)荧光探针(DAF-FMDA)和Western blot检测下调miR-92a表达对ox-LDL诱导的RAW264.7细胞中炎症因子诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素6(IL-6)和IL-1β表达、脂质蓄积以及信号转导子和转录激活子3(STAT3)信号通路相关蛋白p-STAT3、STAT3蛋白表达的影响。建立活化STAT3蛋白抑制分子(PIAS3)和miR-92a低表达的RAW264.7细胞株,并给予100 mg/L ox-LDL处理后,观察沉默PIAS3表达对ox-LDL作用下miR-92a低表达的RAW264.7细胞中炎症因子、脂质蓄积以及STAT3信号通路的影响。TargetScan软件预测和双荧光素酶报告实验验证miR-92a和PIAS3的靶向关系。结果 随着ox-LDL作用时间和浓度的增加,RAW264.7细胞中miR-92a表达升高;双荧光素酶报告实验验证PIAS3是miR-92a的靶基因。采用ox-LDL处理后RAW264.7细胞中miR-92a、iNOS、IL-6、IL-1β、p-STAT3表达升高,NO释放增多和细胞内脂滴升高,而PIAS3的表达下降。这种调控作用可被anti-miR-92a所抑制;而沉默PIAS3后,anti-miR-92a的这一抑制作用得以恢复。结论 下调miR-92a可通过调控PIAS3抑制ox-LDL诱导RAW264.7细胞炎症介质分泌和脂质蓄积。 展开更多
关键词 RAW264.7细胞 氧化型低密度脂蛋白 miR-92a 炎症介质 脂质蓄积
二十二碳六烯酸免疫调节活性 预览
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作者 韩丽荣 魏硕名 +1 位作者 王旭锋 王春玲 《食品科学》 CSCD 北大核心 2018年第3期206-212,共7页
以小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞为研究对象,采用噻唑蓝法、细胞染色法、相关酶活力的测定以及蛋白免疫印迹等方法,研究二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)的免疫调节活性。噻唑蓝实验结果表明,当DHA质量浓度为800 ng/m L,作用48 h... 以小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞为研究对象,采用噻唑蓝法、细胞染色法、相关酶活力的测定以及蛋白免疫印迹等方法,研究二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)的免疫调节活性。噻唑蓝实验结果表明,当DHA质量浓度为800 ng/m L,作用48 h时,RAW264.7细胞增殖率达到最大值,为73.03%。中性红实验结果表明DHA可以显著增强RAW264.7细胞的吞噬活性。扫描电子显微镜结果显示DHA具有促进RAW264.7细胞活化的作用;吖啶橙染色结果表明在DHA作用下,细胞核酸代谢旺盛,RAW264.7细胞被激活;糖原染色结果表明DHA能通过促进RAW264.7细胞内糖原代谢加快细胞的分化。通过对RAW264.7细胞中相关酶活力的测定,结果表明DHA能够显著提高酸性磷酸酶、溶菌酶和超氧化物歧化酶的活力。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)蛋白通路结果表明:DHA能够引起细胞外信号调节激酶1/2、p38和应激活化蛋白激酶出现一定程度的磷酸化,说明DHA诱导巨噬细胞激活部分依赖了MAPKs信号转导通路。以上研究结果证明:DHA具有一定的免疫调节活性,可为DHA的应用提供理论依据。 展开更多
关键词 二十二碳六烯酸 RAW264.7细胞 免疫调节 细胞增殖
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不同剂量异鼠李素对炎症损伤小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖能力的影响及其机制探讨 预览
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作者 王科 庞辉 +5 位作者 梁春梅 罗创才 黄海珠 周玉权 吴青燕 韦娇 《山东医药》 2018年第39期48-51,共4页
目的观察异鼠李素(ISO)对炎症损伤小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖能力的影响,并探讨其机制。方法 取对数生长期RAW264.7细胞,将细胞分为5组,低、中、高剂量组分别加入已经配好含10 ng/mL脂多糖(LPS)及低、中、高剂量ISO(50、100、200μg/mL)... 目的观察异鼠李素(ISO)对炎症损伤小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖能力的影响,并探讨其机制。方法 取对数生长期RAW264.7细胞,将细胞分为5组,低、中、高剂量组分别加入已经配好含10 ng/mL脂多糖(LPS)及低、中、高剂量ISO(50、100、200μg/mL)的溶液,模型组加入含10μg/mL LPS的1640培养基(含10%FBS),对照组加入含10%溶剂对照的1640完全培养基。测算各组细胞增殖指数,检测各组一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子(TNF-α)。结果 与对照组比较,模型组细胞12、24、36、48 h细胞增殖指数增加(P均<0.05);与模型组比较,低剂量组24、36 h及中剂量组和高剂量组12、24、36、48 h细胞增殖指数减少(P均<0.05);与低剂量组比较,中剂量组24 h及高剂量组24、48 h细胞增殖指数减少(P均<0.05)。与对照组比较,模型组NO、TNF-α水平升高(P均<0.05);与模型组比较,低剂量组NO水平及中剂量组和高剂量组NO、TNF-α水平降低(P均<0.05);与低剂量组比较,中剂量组和高剂量组NO、TNF-α水平降低(P均<0.05)。结论 ISO可抑制RAW 264.7细胞增殖能力,且呈剂量依赖性,高剂量作用最大;机制可能与抑制NO、TNF-α有关。 展开更多
关键词 异鼠李素 炎症损伤 巨噬细胞RAW264.7 细胞增殖能力 一氧化氮 肿瘤坏死因子
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原儿茶酸对金黄色葡萄球菌性肺炎模型小鼠的保护作用及相关机制研究 预览
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作者 饶春晖 陆淼炯 杨燕 《浙江中西医结合杂志》 2018年第11期911-915,987共6页
目的 研究原儿茶酸(PA)对金黄色葡萄球菌(SA)性肺炎模型小鼠的保护作用,并探讨其相关机制。方法 动物实验:36只C57BL/6雌鼠随机分为对照组、SA模型组和原儿茶酸预处理组,每组12只,构建SA肺炎模型小鼠。细胞实验:RAW264.7细胞分组... 目的 研究原儿茶酸(PA)对金黄色葡萄球菌(SA)性肺炎模型小鼠的保护作用,并探讨其相关机制。方法 动物实验:36只C57BL/6雌鼠随机分为对照组、SA模型组和原儿茶酸预处理组,每组12只,构建SA肺炎模型小鼠。细胞实验:RAW264.7细胞分组方法同前,构建体外巨噬细胞RAW264.7感染模型。二者均于模型构建前1h行PA预处理。采用HE检测各组小鼠肺组织病理变化,Western Blot检测RAW264.7细胞P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)和磷酸化(p)-P38MAPK、胞外信号调节激酶(ERK MAPK)和p-ERK MAPK、c-Jun氨基末端激酶(JNK MAPK)和p-JNK MAPK、核转录因子-κB P65(P65)和p-P65蛋白表达情况,采用实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)和酶联免疫吸附法(ELISA)测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)表达水平。结果 动物实验:与模型组比较,PA预处理可减轻SA肺炎,减轻肺组织病理改变,显著降低肺组织和肺泡灌洗液TNF-α和IL-6表达水平(P均〈0.05)。细胞实验:与模型组比较,PA预处理可显著降低细胞上清液和细胞TNF-α和IL-6表达水平(P均〈0.05),并且抑制P65蛋白的活化,但对其它MAPK相关蛋白表达无影响。结论 原儿茶酸对SA肺炎模型小鼠具有保护作用,作用机制可能与抑制P65炎症信号通路的活化、降低TNF-α、IL-6表达有关。 展开更多
关键词 小鼠 RAW264.7细胞 原儿茶酸 金黄色葡萄球菌 肺炎 P65蛋白
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金莲花汤不同提取物对细胞增殖的影响及体外抗病毒活性研究 预览
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作者 梁羽茜 刘晓丽 +2 位作者 张琳婧 王如峰 胡秀华 《医学研究杂志》 2018年第4期100-106,共7页
目的 探讨不同提取方法的金莲花汤提取物(金莲花汤不同提取物)对小鼠巨噬细胞Raw264.7增殖以及对小鼠H1N1流感病毒活性的影响方法 通过MTT法观察药物处理后对小鼠巨噬细胞Raw264.7生长增殖情况的影响;利用小鼠H1N1流感病毒感染MDCK细... 目的 探讨不同提取方法的金莲花汤提取物(金莲花汤不同提取物)对小鼠巨噬细胞Raw264.7增殖以及对小鼠H1N1流感病毒活性的影响方法 通过MTT法观察药物处理后对小鼠巨噬细胞Raw264.7生长增殖情况的影响;利用小鼠H1N1流感病毒感染MDCK细胞,进行病毒扩增并测定病毒效价;利用小鼠H1N1流感病毒感染小鼠巨噬细胞Raw264.7,采用MTT法结合CPE方法确定金莲花汤不同提取物的抗病毒效果。结果 MTT结果发现,金莲花汤不同提取物(20%、40%、60%、80%、95%、二次80%、二次95%及粗提取物)均对小鼠巨噬细胞Raw264.7增殖具有明显的抑制作用,IC_(50)分别为0.063、0.064、0.145、0.065、0.064、0.064、0.105、0.2mg/ml;MTT结果结合CPE分析显示,60%金莲花汤提取物IC_(25)及IC_(50)的药物剂量有轻微的抗病毒效果;80%金莲花汤提取物IC_0及二次95%金莲花汤提取物IC_(25)的药物剂量抗病毒效果较好,差异有统计学意义。结论不同提取方法的金莲花汤提取物对小鼠巨噬细胞Raw264.7增殖有一定的抑制作用;在体外抗病毒实验中,一定提取纯度的金莲花汤提取物对小鼠H1N1流感病毒有抑制作用。 展开更多
关键词 小鼠巨噬细胞Raw264.7 MDCK细胞 金莲花汤提取物 细胞增殖 抗病毒活性
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白杨素通过MAPK信号抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症
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作者 李强 齐世美 +2 位作者 姜琦 戚之琳 章尧 《皖南医学院学报》 CAS 2018年第5期409-412,共4页
目的:探讨白杨素抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症的分子机制。方法:用不同浓度的白杨素处理RAW264.7细胞24h后,CCK-8法检测细胞活力;WeSter/1blot检测白杨素对LPS诱导的RAw264.7细胞中MAPK信号蛋白p—ERK,p-JNK和p-P38水平;ELIS... 目的:探讨白杨素抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症的分子机制。方法:用不同浓度的白杨素处理RAW264.7细胞24h后,CCK-8法检测细胞活力;WeSter/1blot检测白杨素对LPS诱导的RAw264.7细胞中MAPK信号蛋白p—ERK,p-JNK和p-P38水平;ELISA法检测TNF-α、IL-6和NO浓度;活性氧探针检测细胞内ROS释放情况。结果:白杨素浓度低于60mg/L对RAW264.7细胞增殖无影响;westerllblot检测表明白杨素抑制了MAPK信号分子p—ERK,p-JNK和p—P38的水平:ELISA结果显示,白杨素抑制TNF-α、IL-6和NO的释放;此外,白杨素也降低了细胞内ROS的产生。结论:白杨素抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应是通过MAPK信号实现的。 展开更多
关键词 白杨素 脂多糖 活性氧簇 RAW 264.7细胞 MAPK信号通路
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11种中药提取物对脂多糖诱导的RAW264.7细胞生成一氧化氮的影响 被引量:1
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作者 许洪波 杨康 +5 位作者 刘澳昕 李易 雷智安 吴明斌 宋忠兴 唐志书 《中南药学》 CAS 2018年第1期72-75,共4页
目的研究11味中药提取物对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞RAW264.7产生一氧化氮(NO)的抑制作用。方法使用MTT法测试样品对RAW264.7的细胞毒作用,Griess法测定样品对LPS刺激RAW264.7细胞产生NO的含量,N-单甲基-L-精氨酸单乙酸酯(L-NMMA)... 目的研究11味中药提取物对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞RAW264.7产生一氧化氮(NO)的抑制作用。方法使用MTT法测试样品对RAW264.7的细胞毒作用,Griess法测定样品对LPS刺激RAW264.7细胞产生NO的含量,N-单甲基-L-精氨酸单乙酸酯(L-NMMA)为阳性对照。结果 11味中药甲醇提取物均具有一定的抑制RAW264.7细胞生成NO的作用,其中秦艽、五加皮、独活、雷公藤、仙鹤草提取物的抑制作用最强(IC50在4.3±0.6~14.8±2.6μg·m L-1),且选择指数较高(SI〉27)。结论本研究系统评价了11味常用中药提取物对LPS诱导RAW 264.7细胞产生NO的影响,研究结果进一步证实这些中药的抗炎活性。 展开更多
关键词 抗炎 一氧化氮 RAW264.7细胞 中药提取物
TNF-α及TNF-α抗体对破骨细胞V-ATP酶的影响 预览
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作者 王潇 陈健 +2 位作者 张鑫 何剑全 黄慧 《中国骨质疏松杂志》 CSCD 北大核心 2018年第9期1132-1135,共4页
目的 研究不同浓度的TNF-α及TNF-α抗体对破骨细胞上V-ATP酶表达量的影响。方法 体外诱导小鼠RAW264.7细胞分化为破骨细胞,通过抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测破骨细胞生成情况。然后将破骨细胞分为对照组、TNF-α干预组及TNF-α抗体干... 目的 研究不同浓度的TNF-α及TNF-α抗体对破骨细胞上V-ATP酶表达量的影响。方法 体外诱导小鼠RAW264.7细胞分化为破骨细胞,通过抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测破骨细胞生成情况。然后将破骨细胞分为对照组、TNF-α干预组及TNF-α抗体干预组,TNF-α干预组、TNF-α抗体干预组分别用低、中、高三种浓度的TNF-α、TNF-α抗体干预48 h。用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)、Western blot检测破骨细胞V-ATP酶的mRNA和蛋白表达水平。结果 TRAP染色检测提示有多核破骨细胞生成。TNF-α处理组V-ATP酶mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.001);TNF-α抗体处理组V-ATP酶mRNA表达水平显著低于对照组(P<0.001)。同时,TNF-α处理组V-ATP酶蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.05);TNF-α抗体处理组V-ATP酶蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.05)。结论 TNF-α可提高破骨细胞V-ATP酶的表达;TNF-α抗体可抑制破骨细胞V-ATP酶的表达。上述提示TNF-α可能通过提高破骨细胞V-ATP酶的表达从而增加破骨细胞的骨吸收作用。 展开更多
关键词 RAW264.7细胞 破骨细胞 肿瘤坏死因子Α 肿瘤坏死因子α抗体 V-ATP酶
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α-MEM培养基和高糖DMEM培养基对RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响 预览
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作者 曾汝君 马亚仙 +4 位作者 张郡 罗云瑶 谯小勇 刘玲 许良智 《中国骨质疏松杂志》 CSCD 北大核心 2018年第6期745-749,790共6页
目的 比较α-MEM和高糖DMEM两种培养基对小鼠破骨细胞前体细胞系RAW264.7细胞分化的影响.方法 (1)根据培养基和是否添加核因子κB受体激活蛋白配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)将细胞分为4组:α-MEM... 目的 比较α-MEM和高糖DMEM两种培养基对小鼠破骨细胞前体细胞系RAW264.7细胞分化的影响.方法 (1)根据培养基和是否添加核因子κB受体激活蛋白配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)将细胞分为4组:α-MEM培养基组、添加RANKL的α-MEM培养基组、高糖DMEM培养基组、添加RANKL的高糖DMEM培养基组;(2)于培养第3天收集细胞,分别通过qPCR、免疫印迹实验观察分化相关标记物抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase , TRAP)、活化的T细胞核因子(nuclear factor of activated T-cells 1,NFATc1)、核因子κB 受体活化因子(receptor activator for nuclear factor-κB,RANK)和组织蛋白酶(Cathepsin)K的mRNA及蛋白表达水平,并做TRAP染色观察各组成熟破骨细胞的形成情况,探讨添加RANKL后α-MEM培养基和高糖DMEM培养基对RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响.结果 (1)与添加RANKL的高糖DMEM培养基相比,添加RANKL的α-MEM培养基使RAW264.7细胞的分化相关标记物TRAP、NFATc1、RANK及cathepsin K的mRNA表达水平增加,TRAP、NFATc1及cathepsin K的蛋白表达水平增加;(2)在α-MEM培养基或高糖DMEM培养基中添加RANKL均可使RAW264.7细胞分化为成熟破骨细胞,但添加RANKL的α-MEM培养基处理的细胞组中形成的成熟破骨细胞更多.结论 添加RANKL的α-MEM培养基有利于RAW264.7细胞向破骨细胞分化. 展开更多
关键词 RAW264.7细胞 高糖DMEM培养基 α-MEM培养基 破骨细胞 核因子kB受体激活蛋白配体
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柴葛疏表颗粒对脂多糖诱导RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响
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作者 吕晓君 周素文 《医药导报》 CAS 北大核心 2018年第9期1043-1047,共5页
目的 观察柴葛疏表颗粒对脂多糖诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞分泌炎症细胞因子的影响。方法 建立脂多糖诱导的RAW264.7细胞体外炎症模型,采用噻唑蓝(MTT)法检测柴葛疏表颗粒的细胞毒性作用,Griess法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)分泌量,酶... 目的 观察柴葛疏表颗粒对脂多糖诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞分泌炎症细胞因子的影响。方法 建立脂多糖诱导的RAW264.7细胞体外炎症模型,采用噻唑蓝(MTT)法检测柴葛疏表颗粒的细胞毒性作用,Griess法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)分泌量,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β含量。结果 柴葛疏表颗粒在12.5~50.0μg·mL-1的浓度范围内对RAW264.7细胞活力无显著影响(P>0.05);脂多糖可以明显诱导RAW264.7细胞分泌NO、TNF-α和IL-1β(P<0.01),25.0,50.0μg·mL-1柴葛疏表颗粒可显著抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞释放NO(P<0.01),12.5,25.0,50.0μg·mL-1的柴葛疏表颗粒可浓度依赖性地抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-1β。结论 柴葛疏表颗粒可抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症反应,其抗炎作用与减少炎症因子NO、TNF-α和IL-1β有关。 展开更多
关键词 柴葛疏表颗粒 脂多糖 RAW264.7细胞 炎症因子
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石柑子不同提取部位对RAW264.7细胞炎症的影响
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作者 李养学 江洁怡 +3 位作者 陈雪 刘梦云 姚楠 黄丹娥 《湖南中医杂志》 2018年第12期129-131,160共4页
目的:观察石柑子不同提取部位对脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞炎症的影响。方法:用不同质量浓度的石柑子石油醚振摇提取部分、三氯甲烷振摇提取部分、乙酸乙酯振摇提取部分、正丁醇振摇提取部分以及水提取部分和阳性... 目的:观察石柑子不同提取部位对脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞炎症的影响。方法:用不同质量浓度的石柑子石油醚振摇提取部分、三氯甲烷振摇提取部分、乙酸乙酯振摇提取部分、正丁醇振摇提取部分以及水提取部分和阳性药地塞米松处理LPS刺激的RAW264.7细胞。分别运用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性,RT-qPCR法检测iNOS细胞和COX-2细胞的mRNA表达,Westernblot法检测iNOS细胞和COX-2细胞的蛋白表达。结果:石柑子石油醚提取部位、三氯甲烷提取部位、乙酸乙酯提取部位、正丁醇提取部位和水提取部位作用RAW264.7细胞的无毒剂量分别为25、5、10、50、25μg/ml;LPS的用药质量浓度为0.5μg/ml;地塞米松的用药质量浓度为0.4μg/ml;石油醚提取部位25μg/ml和地塞米松能下调iNOSmRNA表达且抑制iNOS的蛋白表达;三氯甲烷提取部位5μg/ml和地塞米松能抑制COX-2的蛋白表达,并且下调COX-2mRNA的表达。结论:石油醚振摇提取部分和三氯甲烷振摇提取部分对通过LPS诱导的RAW264.7细胞炎症具有抑制作用,其作用机制可能与抑制iNOS和COX-2细胞基因核蛋白的表达有关。 展开更多
关键词 石柑子 RAW264.7细胞 iNOS COX-2 RT-QPCR Western BLOT
阿里红多糖对RAW264.7巨噬细胞中NF-κB信号途径及肿瘤坏死因子-α表达的影响
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作者 木尼萨·迪力夏提 米仁沙·牙库甫 +2 位作者 伊明·尕哈甫 丛媛媛 帕丽达·阿不力孜 《食品安全质量检测学报》 CAS 2018年第24期6465-6470,共6页
目的研究阿里红粗多糖(Fomes Officinals polysaccharide,FOPS)及阿里红多糖组分(FOPS-α)对巨噬细胞RAW264.7的Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)、核转录因子-κb p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)表达以及肿瘤坏死因子-... 目的研究阿里红粗多糖(Fomes Officinals polysaccharide,FOPS)及阿里红多糖组分(FOPS-α)对巨噬细胞RAW264.7的Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)、核转录因子-κb p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)表达以及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)释放的影响,初步探讨阿里红多糖组分的免疫调节机制。方法采用RT-PCR法检测不同浓度(50、100、200μg/mL)的FOPS及FOPS-α对IL-1β、TNF-α、p65、TLR4 mRNA表达量的影响;用Western Blot法检测FOPS及FOPS-α对磷酸化核因子-κB(p-NF-κBp65)和磷酸化核因子抑制蛋白(p-Iκba)表达水平的影响;用NF-κB抑制剂BAY11-7082预处理细胞后,ELISA法检测上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6分泌量的影响。结果与空白对照组相比,不同浓度的阿里红多糖可以显著提高TLR4、p65、TNF-α、IL-1β mRNA表达量和p-NF-κBp65和p-Ixba的磷酸化水平(P<0.05);通过阻断NF-κB途径可以显著抑制FOPS及FOPS-α对TNF-α、IL-1β、IL-6促进分泌的作用(P<0.05)。结论FOPS及FOPS-α发挥免疫调节作用的机制与其激活NF-κB信号途径进而调节TNF-α等因子的基因表达和控制细胞因子释放有关。 展开更多
关键词 阿里红多糖 阿里红多糖组分-α 巨噬细胞RAW264.7 核转录因子-ΚB 肿瘤坏死因子-Α
CXCL12对RANKL诱导的RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响 预览
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作者 赖宪良 苏嘉 陈鸥 《温州医科大学学报》 CAS 2018年第3期216-219,224共5页
目的:研究基质衍生因子-1(CXCL12)体外对核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导小鼠单核细胞RAW264.7向破骨细胞分化的影响。方法:体外培养RAW264.7细胞,使用RANKL诱导细胞分化为破骨细胞,同时使用浓度为0、25、50、100ng/mL的C... 目的:研究基质衍生因子-1(CXCL12)体外对核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导小鼠单核细胞RAW264.7向破骨细胞分化的影响。方法:体外培养RAW264.7细胞,使用RANKL诱导细胞分化为破骨细胞,同时使用浓度为0、25、50、100ng/mL的CXCL12刺激细胞,CCK-8检测CXCL12对细胞增殖活性的影响,实验分为对照组、CXCL12组和AMD3100组,对照组只使用RANKL诱导培养,CXCL12组同时使用50ng/mL的CXCL12培养,AMD3100组同时使用浓度为650nmol/L的AMD3100刺激细胞。抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法观察TRAP染色阳性破骨细胞的形态,RT-PCR检测MMP-9、c-src、Cathepsin K mRNA的表达情况,Westernblot检测MMP-9、p-src、Cathepsin K蛋白的表达情况。结果:CXCL12不影响RAW264.7细胞的增殖活性;RANKL诱导的细胞TRAP染色阳性的数量在CXCL12组明显增高(P<0.05),而AMD3100组明显降低(P<0.05);CXCL12能够促进RANKL诱导的细胞中MMP-9、c-src、Cathepsin K mRNA的表达(P<0.05)及MMP-9、p-src、Cathepsin K蛋白的表达(P<0.05);AMD3100则能抑制这种增高(P<0.05)。结论:CXCL12能促进RANKL诱导的RAW264.7细胞向破骨细胞分化,并能提高细胞的骨吸收能力,可能是骨质疏松的治疗靶点。 展开更多
关键词 基质衍生因子-1 RAW264.7细胞 破骨细胞 骨质疏松
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