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青枯病植物疫苗工程菌FJAT-91ΔepsD培养条件优化
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作者 陈小强 迟文超 刘波 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期2546-2551,共6页
为优化青枯病植物疫苗工程菌FJAT-91ΔepsD的发酵条件,考察培养温度、培养基pH值、装液量对菌株生物量的影响,通过Box-Benhnken试验设计和响应面分析法,建立以生物量为响应值的多元二次回归模型,确定菌株发酵的最优条件。结果表明,最优... 为优化青枯病植物疫苗工程菌FJAT-91ΔepsD的发酵条件,考察培养温度、培养基pH值、装液量对菌株生物量的影响,通过Box-Benhnken试验设计和响应面分析法,建立以生物量为响应值的多元二次回归模型,确定菌株发酵的最优条件。结果表明,最优发酵条件为温度29℃、pH值为7.0、装液量57 m L。根据优化的条件,获得菌株FJAT-91ΔepsD的生物量为19.8×10^8cfu/mL,较优化前提高了47.8%。本研究获得的菌株FJAT-91ΔepsD发酵条件可提高其生物量从而降低生产成本,有助于植物疫苗制剂的应用推广。 展开更多
关键词 青枯病 植物疫苗 发酵条件 响应面
利用MTT建立一种快速检测青枯菌活菌的方法 预览
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作者 周大祥 熊书 谢桂香 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期103-106,共4页
利用四氮唑蓝(MTT),优化了检测波长、菌浓度、MTT用量、MTT反应时间、三联液的用量和溶解时间等,建立一种有效快速检测青枯菌活菌的方法。结果发现,MTT反应的最佳检测波长为512nm,青枯菌浓度A600为0.3,MTT用量为30μL,MTT还原反应控制在... 利用四氮唑蓝(MTT),优化了检测波长、菌浓度、MTT用量、MTT反应时间、三联液的用量和溶解时间等,建立一种有效快速检测青枯菌活菌的方法。结果发现,MTT反应的最佳检测波长为512nm,青枯菌浓度A600为0.3,MTT用量为30μL,MTT还原反应控制在20min以内,三联液溶解甲臜晶体的用量为3mL,溶解8h,甲臜溶液在10~120μL以内与A512的数值线性关系良好,平板计数印证了这一结果。实验结果表明,MTT法可以用于快速检测青枯菌等植物病原菌活菌,对农产品进出口检验检疫具有一定的应用价值。 展开更多
关键词 青枯菌 MTT 甲臜 三联液 活菌检测
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不同抗性短枝木麻黄种源苗木接种青枯病菌后酚类物质含量的变化 预览
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作者 魏永成 张勇 +2 位作者 仲崇禄 孟景祥 陈珍 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期309-314,共6页
为了解短枝木麻黄(Casuarina equisetifolia)抗青枯病的机理,对接种青枯病菌(Ralstonia solanacearum)后短枝木麻黄的单宁和黄酮含量变化进行了分析。结果表明,不同抗性短枝木麻黄种源小枝的总酚和单宁含量呈现不同的变化趋势,高抗、中... 为了解短枝木麻黄(Casuarina equisetifolia)抗青枯病的机理,对接种青枯病菌(Ralstonia solanacearum)后短枝木麻黄的单宁和黄酮含量变化进行了分析。结果表明,不同抗性短枝木麻黄种源小枝的总酚和单宁含量呈现不同的变化趋势,高抗、中抗种源均呈现先升高后降低的变化趋势,峰值均约为126mgg^-1,但中抗种源的峰值出现时间较晚,而易感种源则呈逐渐升高趋势。抗、感种源木麻黄接种青枯菌后,小枝中缩合单宁含量均呈现逐渐升高的趋势,但高抗种源的缩合单宁含量均显著高于易感种源,增加70.33%。抗性种源黄酮含量呈S型上升趋势,易感种源则持续缓慢升高。这表明接种青枯病菌后,抗、感短枝木麻黄种源表现出不同的防御特征,次生物质含量增幅越大,抑菌抗氧化能力越强,短枝木麻黄表现出的抗性越强。 展开更多
关键词 短枝木麻黄 青枯病菌 接种 单宁 黄酮
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茄科劳尔氏菌单克隆抗体的制备及其特性鉴定 预览
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作者 马兰 曾海娟 +9 位作者 谢曼曼 胡谦 丁承超 王淑娟 翟绪昭 孙静娟 李杰 王艳 董庆利 刘箐 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2019年第1期95-100,共6页
茄科劳尔氏菌( Ralstonia solanacearum ,RS)是番茄、茄子、辣椒、马铃薯等茄科蔬菜青枯病害的致病菌。为实现对RS的快速高效检测,以茄科劳尔氏菌株1.76免疫BALB/c小鼠,经细胞融合后利用间接酶联免疫吸附分析(Enzyme-linked Immunosorbe... 茄科劳尔氏菌( Ralstonia solanacearum ,RS)是番茄、茄子、辣椒、马铃薯等茄科蔬菜青枯病害的致病菌。为实现对RS的快速高效检测,以茄科劳尔氏菌株1.76免疫BALB/c小鼠,经细胞融合后利用间接酶联免疫吸附分析(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)筛选出3株能稳定分泌抗茄科劳尔氏菌株1.76的单克隆杂交瘤细胞株1C1、1B3和9D7。然后利用小鼠体内诱生腹水,1C1、1B3和9D7效价分别为11 024 000、 1 64 000、1 256 000。采用饱和硫酸铵沉淀及Protein-G亲和层析法纯化腹水,经SDS-PAGE鉴定显示纯化后的单克隆抗体(Monoclonal Antibodies,mAb)纯度较高。纯化后单克隆抗体(2 mg/mL)效价分别为1 17 529、1 35 819、1 50 000,抗体亚型均为IgG1。对3株抗体进行特异性检测结果显示,1C1和9D7均不能与RS-5结合,1B3不能结合1.74和RS-5。此外,检测结果还表明3株单克隆抗体与桑肠杆菌JX-6、苏云金芽胞杆菌SYJ及实验室现有11株燕麦嗜酸菌卡特莱兰亚种、燕麦嗜酸菌西瓜亚种、玉米细菌性条斑菌、嗜酸菌魔芋亚种,梨火疫病菌QB0809、 XL-4,玉米细菌性枯萎病菌QB0241、QB0242,水稻细菌性谷枯病菌QB0017、QB0753、QB0755均无交叉情况。此次茄科劳尔氏菌抗体的制备,为后期青枯病菌的快速检测提供参考。 展开更多
关键词 茄科劳尔氏菌 ELISA 单克隆抗体
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麻楝果实化学成分及其抗烟草青枯病菌活性的研究 预览
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作者 刘慧 刘寿柏 +5 位作者 王昊 陈惠琴 王佩 梅文莉 杨克军 戴好富 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1023-1029,974共8页
为研究麻楝(Chukrasia tabularis)的化学成分,采用色谱法从麻楝果实乙醇提取物中分离得到15个化合物,利用波谱学方法鉴定其结构分别为:没食子酸甲酯(1)、没食子酸乙酯(2)、没食子酸(3)、ozoroalide(4)、stigmast-4-en-6β-ol-3-one(5)... 为研究麻楝(Chukrasia tabularis)的化学成分,采用色谱法从麻楝果实乙醇提取物中分离得到15个化合物,利用波谱学方法鉴定其结构分别为:没食子酸甲酯(1)、没食子酸乙酯(2)、没食子酸(3)、ozoroalide(4)、stigmast-4-en-6β-ol-3-one(5)、黄柏呈(6)、chukranin A(7)、chisopanin M(8)、21α,24α-methylmelianodiol(9)、toonaciliatin K(10)、21α,25-dimethylmelianodiol(11)、odoratone(12)、bourjotinolone A(13)、hispidone(14)和phragmalin di-isobutyrate(15)。化合物4~14为首次从麻楝属植物中分离得到。采用滤纸片琼脂扩散法对单体化合物进行抗烟草青枯病菌(Ralstonia solanacearum)的活性研究,结果表明化合物1、2和3具有中等拮抗活性。 展开更多
关键词 麻楝 果实 化学成分 烟草青枯病菌
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青枯菌铜抗性基因copA的功能 预览
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作者 王晓宁 梁欢 +5 位作者 王帅 方文生 许景升 冯洁 徐进 曹坳程 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期837-848,共12页
【目的】植物细菌性青枯病(bacterial wilt of plants)是由茄科雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的一种世界性重大土传病害。作为防治青枯病等细菌性病害的重要杀菌剂,铜制剂的广泛使用造成多种植物病原细菌群体中出现了铜抗性菌... 【目的】植物细菌性青枯病(bacterial wilt of plants)是由茄科雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的一种世界性重大土传病害。作为防治青枯病等细菌性病害的重要杀菌剂,铜制剂的广泛使用造成多种植物病原细菌群体中出现了铜抗性菌株。青枯菌Po82菌株大质粒上携带了丁香假单胞菌中的铜抗性编码基因copA的同源物,论文旨在探明青枯菌Po82菌株copA在铜抗性、致病性等方面的生物学功能。【方法】以青枯菌Po82菌株为研究对象,利用MEGA6.0软件包,基于邻接法构建copA的系统发育树,探究铜抗性基因copA在青枯菌和其他植物病原细菌中的系统进化关系。通过反向遗传学的研究手段,采用基因同源重组双交换和电击转化法,构建copA基因缺失菌株及相应互补菌株。通过最小抑制浓度(minimal inhibition concentration,MIC)测定、RT-qPCR、Biolog代谢芯片以及致病力等基础生物学测定研究手段,解析copA与青枯菌铜胁迫应答、代谢活性、致病性和运动性等表型生物学特征之间的关系。【结果】同源性比对分析结果显示,copA广泛存在于青枯菌群体中,青枯菌copA在亲缘关系上与耐金属贪铜菌最为紧密,与稻黄单胞菌、丁香假单胞菌和大肠杆菌的亲缘关系较远。RT-qPCR结果显示copA的表达受到铜离子的诱导,copA的表达量随着CuSO4浓度的增加而增加。CuSO4浓度为1.0mmol·L-1时,基因表达量最高。铜MIC测定结果显示copA基因缺失菌株对铜离子的敏感性增加,copA基因缺失菌株的MIC值为0.8 mmol·L-1,较野生型菌株的1.2 mmol·L-1下降了33.3%,互补菌株恢复了铜抗性能力,表明copA在青枯菌的铜胁迫应答过程中发挥着重要作用。与野生型菌株相比,copA基因缺失菌株在普通NA培养基及含0.6mmol·L-1 CuSO4的NA培养基中的对数生长期的生长速率降低,表明copA与青枯菌的生长速率相关。copA基因缺失菌株于发病前期病情指数较野生� 展开更多
关键词 青枯菌 铜抗性 COPA 致病性
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青枯劳尔氏菌多基因家族Ⅲ型效应蛋白在植物病害发展及防御系统中的作用
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作者 陈立 魏谦卓 大西浩平 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期2061-2068,共8页
青枯劳尔氏菌是导致多种重要经济作物毁灭性枯萎(bacterial wilt)的一种土传病害,严重危害热带和亚热带地区食品安全。该细菌通过Ⅲ型分泌系统(T3SS)向寄主细胞注射大量效应蛋白(T3Es)。效应蛋白是把双刃剑,既可诱导植物感病,又能激活... 青枯劳尔氏菌是导致多种重要经济作物毁灭性枯萎(bacterial wilt)的一种土传病害,严重危害热带和亚热带地区食品安全。该细菌通过Ⅲ型分泌系统(T3SS)向寄主细胞注射大量效应蛋白(T3Es)。效应蛋白是把双刃剑,既可诱导植物感病,又能激活植物防御系统。具有特殊重复结构的效应蛋白被归类成多基因家族,各家族成员协同致病,但其分子机制尚不清楚。本文围绕近年来有关多基因家族效应蛋白结构、功能和致病性等方面最新进展进行综述,为青枯菌致病机理和病害防治提供新思路。 展开更多
关键词 青枯菌 Ⅲ型效应蛋白 多基因家族 植物免疫和致病性
茄青枯拉尔氏菌Rs-T02在3,4,5-三羟基苯甲酸甲酯作用下的转录组分析
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作者 汪锴豪 邹承武 +2 位作者 袁高庆 林纬 黎起秦 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期192-202,共11页
本文利用Illumina Hi Seq测序技术,对在3,4,5-三羟基苯甲酸甲酯(methyl gallate,MG)作用下和对照条件下的茄青枯拉尔氏菌(Ralstonia solanacearum) Rs-T02菌株的转录组进行测序分析,并用GO和KEGG Pathway富集化分析的方法分析差异表达基... 本文利用Illumina Hi Seq测序技术,对在3,4,5-三羟基苯甲酸甲酯(methyl gallate,MG)作用下和对照条件下的茄青枯拉尔氏菌(Ralstonia solanacearum) Rs-T02菌株的转录组进行测序分析,并用GO和KEGG Pathway富集化分析的方法分析差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)的功能和代谢通路,以初步了解MG对R. solanacearum作用的分子机制。结果表明,MG处理组和对照组的差异表达的基因有2 172个,其中1 037个基因上调,1 135个基因下调。随意挑选10个DEGs进行qRT-PCR验证,其基因表达趋势与转录组测序结果一致。通过对差异表达基因的功能和代谢通路分析发现,与细胞结构相关的肽聚糖水解酶、3-磷酸甘油酰基转移酶和UDP-N-乙酰胞壁酰丙氨酸-D-谷氨酸连接酶等蛋白的编码基因上调表达,蛋白YeaQ、外膜蛋白W和外膜蛋白Bam E等蛋白的编码基因下调表达;与能量代谢相关的ATP合成酶结构蛋白、辅酶Q亚基和细胞色素等蛋白的编码基因上调表达,甘油醛-3-磷酸脱氢酶、甘油醛脱氢酶和异柠檬酸裂解酶等蛋白的编码基因下调表达;与致病性相关的gspD、gspE和gspF等基因上调表达,hrpY、hrpB和gspG等基因下调表达;与细菌抗药性相关的氨基酸的氨酰-tRNA连接酶、核糖体RNA小亚单位甲基转移酶G基因和多重药物外排泵亚基AcrA等蛋白的编码基因上调表达;与细菌运动性相关的flg B、flg C和flg D等基因上调表达。推测MG对Rs-T02菌株的抑菌机制可能与MG影响病菌的细胞结构和能量代谢相关基因的差异表达有关;同时,MG影响病菌T3SS和T2SS相关基因的差异表达,从而影响细菌的致病力。此外,3-磷酸甘油酰基转移酶基因、核糖体RNA小亚单位甲基转移酶G和多重药物外排泵亚基AcrA基因等上调表达,可能与病菌抵抗MG的机制有关。 展开更多
关键词 茄青枯拉尔氏菌 3 4 5-三羟基苯甲酸甲酯 转录组表达谱
繁殖体数量对外来Ralstonia solanacearum在红壤中入侵潜力的影响
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作者 马超 庄睿花 +6 位作者 王时聪 许邶 柴如山 屠人凤 朱林 李道林 郜红建 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 2019年第4期665-670,共6页
外来种的繁殖体压力因可调控其他入侵影响因素(如外来种特性)而备受入侵生态学家的关注。前人研究指出剂量-响应曲线能够定量分析繁殖体数量对入侵潜力的影响,但关于该曲线形状的认识尚未统一。利用土壤微宇宙,比较了初始接种量为10^3(P... 外来种的繁殖体压力因可调控其他入侵影响因素(如外来种特性)而备受入侵生态学家的关注。前人研究指出剂量-响应曲线能够定量分析繁殖体数量对入侵潜力的影响,但关于该曲线形状的认识尚未统一。利用土壤微宇宙,比较了初始接种量为10^3(PP3)、10^5(PP5)、10^7(PP7)和10^9 CFU·g^-1(PP9)的青枯病菌Ralstonia solanacearum进入土壤3和42 d后的存活量,并对初始接种量和存活量之间关系进行拟合,试图探清地下部微生物入侵的剂量-响应曲线状况。研究发现,不同接种量处理外来R.solanacearum接入土壤3 d后的存活量差异显著(P<0.05),从大到小依次为PP9、PP7、PP5和PP3,初始接种量和存活量之间拟合的剂量-响应曲线为指数型;而外来Ralstonia solanacearum接入土壤42 d后,除了初始接种量为109 CFU·g^-1处理的存活量稍高外,其余处理间差异不显著,此时的剂量-响应曲线呈直线型(斜率约为0)。结果表明,外来病原菌入侵土壤时的剂量-响应关系会随其进入土壤时间的延长而改变,前期为指数型,后期转为直线型,这说明外来R.solanacearum在红壤中的入侵潜力在入侵前期随繁殖体数量增加而呈指数增长,在入侵后期不受繁殖体数量的影响。 展开更多
关键词 微生物入侵 繁殖体数量 剂量-响应曲线 青枯菌 红壤
31种瑶药提取物抑菌活性的筛选 预览
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作者 杨若颖 李婵 +3 位作者 叶明亮 张丹阳 冯俊涛 闫合 《热带生物学报》 2019年第3期226-230,共5页
以烟草青枯菌(Ralstonia solanacearum)为供试菌株,采用二倍稀释法筛选了31种瑶药提取物的抑菌活性,并测定了初筛高活性瑶药提取物对烟草青枯菌、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的最低抑菌浓度(... 以烟草青枯菌(Ralstonia solanacearum)为供试菌株,采用二倍稀释法筛选了31种瑶药提取物的抑菌活性,并测定了初筛高活性瑶药提取物对烟草青枯菌、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的最低抑菌浓度(MIC)。结果表明:在500 mg·L^-1的质量浓度下,有18种瑶药提取物表现出显著的抑菌活性;在100 mg·L^-1的质量浓度下,穿破石、独脚风、贯众等3种瑶药提取物对烟草青枯菌具显著的抑菌活性。穿破石、独脚风、贯众等3种提取物对烟草青枯菌的MIC分别为25,25,25 mg·L^-1,对蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)的MIC分别为12.5,50,50 mg·L^-1,对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的MIC分别为50,25,50 mg·L^-1。 展开更多
关键词 抑菌活性 瑶药 烟草青枯菌 蜡状芽孢杆菌 金黄色葡萄球菌
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三种单子叶植物叶组织中GWSF诱导转录特性
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作者 董永清 陈广欣 +2 位作者 伍思韵 邝嘉怡 黄真池 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第13期4257-4262,共6页
理想病原诱导型启动子的应用在植物抗病基因工程中非常重要。本研究以高粱、玉米和小麦为材料,检测人工病原诱导型启动子GWSF在单子叶植物叶组织中的诱导转录特性,寻找理想病原诱导型启动子。用GWSF替代pBI121中调控gus基因的CaMV35S启... 理想病原诱导型启动子的应用在植物抗病基因工程中非常重要。本研究以高粱、玉米和小麦为材料,检测人工病原诱导型启动子GWSF在单子叶植物叶组织中的诱导转录特性,寻找理想病原诱导型启动子。用GWSF替代pBI121中调控gus基因的CaMV35S启动子构建重组质粒,导入农杆菌(Agrobacterium tumefaciens) GV3101;通过农杆菌渗入法转化高粱、玉米和小麦12 h后,用水杨酸,青枯菌,疫霉菌孢子诱导处理12 h,本底表达用无菌水处理12 h;最后用GUS染色法和实时荧光定量PCR (real-time quantitative PCR, qPCR)检测GWSF的转录特性。GUS染色结果显示:GWSF在三种植物中都具有本底低、受水杨酸,青枯菌,疫霉菌孢子诱导的特性。设CaMV35S的转录活性为1,qPCR结果为:GWSF在高粱中本底水平为0.67,受水杨酸,青枯菌,疫霉菌孢子诱导时,转录活性明显升高,分别为:2.53、0.87、7.33;玉米中本底水平为0.11,受水杨酸,青枯菌,疫霉菌孢子诱导时,转录活性分别为:1.92、0.19、2.06;小麦中本底水平为0.13,受水杨酸,青枯菌,疫霉菌孢子诱导时,转录活性分别为:0.69、0.45、1.16。结果表明,GWSF在三种单子叶植物叶组织中具有本底低、诱导因子广、诱导活性高的特性,是较理想的人工病原诱导型启动子,可应用于单子叶植物转基因抗病育种。 展开更多
关键词 单子叶植物 GWSF 水杨酸 青枯菌 疫霉菌
拮抗青枯劳尔氏菌的荧光假单胞菌SN15-2分离鉴定及其生防能力分析
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作者 娄海博 王晓冰 +1 位作者 陈俊 王伟 《中国植保导刊》 北大核心 2019年第3期12-18,共7页
为了筛选出对番茄青枯病具有较好防效的生防菌,采用皿内测定法从上海地区的番茄青枯病自然衰退土壤中,分离到一株对番茄青枯病有很强抑制作用的菌株SN15-2,并进行了分子鉴定和对荧光假单胞菌SN15-2产抗生素能力和定殖能力测定。结果表明... 为了筛选出对番茄青枯病具有较好防效的生防菌,采用皿内测定法从上海地区的番茄青枯病自然衰退土壤中,分离到一株对番茄青枯病有很强抑制作用的菌株SN15-2,并进行了分子鉴定和对荧光假单胞菌SN15-2产抗生素能力和定殖能力测定。结果表明,菌株SN15-2为荧光假单胞菌(Pseudomonasfluorescens)。其菌株能产生2,4-二乙酰基间苯三酚(2,4-DAPG)、硝吡咯菌素(PRN)、藤黄绿脓菌素(PLT)。同时,可以产生HCN、噬铁素,能够形成生物膜。SN15-2在施入番茄根际后的前20d定殖数量减少,20d后基本稳定,60d时,在干土中的定殖数量可达3.67×105cfu/g。盆栽防效分析表明,荧光假单胞菌SN15-2对番茄青枯病防效达到46.58%。 展开更多
关键词 青枯劳尔氏菌 荧光假单胞菌 拮抗作用 定殖能力 生防效果
我国长江流域和南方地区花生青枯菌遗传多样性分析
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作者 康彦平 雷永 +3 位作者 万丽云 淮东欣 晏立英 廖伯寿 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期291-297,共7页
为明确不同青枯菌的遗传多样性和其在花生植株上的致病力差异,采用国际上新的青枯菌演化型分类模式,对从我国长江流域和南方地区9个花生种植区分离的95株花生青枯菌Ralstonia solanacearum菌株进行遗传多样性分析,基于内源葡聚糖酶基因... 为明确不同青枯菌的遗传多样性和其在花生植株上的致病力差异,采用国际上新的青枯菌演化型分类模式,对从我国长江流域和南方地区9个花生种植区分离的95株花生青枯菌Ralstonia solanacearum菌株进行遗传多样性分析,基于内源葡聚糖酶基因egl对青枯菌进行系统发育研究,并对供试青枯菌的致病力进行测定。结果表明,所有95株菌株均属于青枯菌演化型I型,即亚洲分支类型。在序列变种分类上,所检测的9个花生种植区中有8个种植区的花生青枯菌菌株属于序列变种14,仅有1个种植区(广西壮族自治区贺州市)的花生青枯菌菌株属于序列变种48,表明我国长江流域和南方地区花生青枯菌群体遗传多样性水平较低。青枯菌致病力测定结果表明,来自赣州市的菌株GZ-1、贺州市的菌株HZ-2和宜昌市的菌株YC接种到花生植株14d后,花生的病情指数分别为43.8、75.0和87.5,而来自其它6个花生种植区的菌株接种花生后,其病情指数均为100.0,表明菌株GZ-1和HZ-2的致病力较弱,而其它7个花生种植区代表性菌株的致病力均较强。 展开更多
关键词 花生 青枯菌 演化型 序列变种 致病力
马齿苋内生菌橘青霉和波兰青霉中抗青枯菌的活性物质 预览
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作者 张倩 黎平 +1 位作者 何子康 颜健 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期731-738,共8页
为了挖掘农作物病害生物防治新资源,以药用植物马齿苋(Portulaca oleracea)为材料,通过培养基种植法分离和纯化其根、茎、叶中的内生菌,以青枯菌(Ralstonia solanacearum)的抑菌试验评价其活性,采用菌落形态观察和ITS序列分析鉴定菌种... 为了挖掘农作物病害生物防治新资源,以药用植物马齿苋(Portulaca oleracea)为材料,通过培养基种植法分离和纯化其根、茎、叶中的内生菌,以青枯菌(Ralstonia solanacearum)的抑菌试验评价其活性,采用菌落形态观察和ITS序列分析鉴定菌种。结果表明,从马齿苋筛选出2种具有抑制青枯菌的内生菌橘青霉(Penicillium citrinum)和波兰青霉(P.polonicum),采用液相与四极杆飞行时间串联质谱(UPLC-QTOF-MS)鉴定2种内生菌的主要活性物质为橘霉素,其对青枯菌的抑制效果比链霉素更好。因此,这为植物青枯病的生物防治提供科学依据。 展开更多
关键词 马齿苋 橘青霉 波兰青霉 橘霉素 青枯菌
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不同渗透压及pH环境对烟草青枯病菌致病力的影响
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作者 汪汉成 郭华 +3 位作者 蔡琳 余婧 蔡刘体 丁伟 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期754-761,共8页
为探究不同渗透压和pH环境对烟草青枯病菌Ralstonia solanacearum致病力的影响,用Biolog PM 9~10代谢板中96种渗透压和96种pH环境培养烟草青枯病菌,并采用穿刺法接种于烟草离体叶片,测定不同环境下烟草青枯病菌对烟草的致病情况。结果表... 为探究不同渗透压和pH环境对烟草青枯病菌Ralstonia solanacearum致病力的影响,用Biolog PM 9~10代谢板中96种渗透压和96种pH环境培养烟草青枯病菌,并采用穿刺法接种于烟草离体叶片,测定不同环境下烟草青枯病菌对烟草的致病情况。结果表明,烟草青枯病菌可致病的渗透压范围包括1%~2%氯化钠、2%~3%硫酸钠、5%~20%乙二醇、1%甲酸钠、2%尿素、1%乳酸钠、20~100 mmol/L磷酸钠、10~100 mmol/L硫酸铵、10~100 mmol/L硝酸钠及10~20 mmol/L亚硝酸钠。可致病pH范围为5.0~8.0;当pH 4.5时,烟草青枯病菌在分别与L-正缬氨酸和5-羟色氨酸共培养时均可致病,与其余33种氨基酸共培养时则均不能致病;当pH 9.5时,烟草青枯病菌在与所有35种供试氨基酸共培养时均不能致病;烟草青枯病菌在葡萄糖苷、辛酸盐、半乳糖苷等10种化合物培养下均可致病。表明渗透压和pH环境会严重影响烟草青枯病菌的生长和致病力。 展开更多
关键词 烟草青枯病菌 渗透压 致病力 PH
芝麻青枯病严重度对芝麻生长与产量的影响
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作者 李信申 肖运萍 +3 位作者 黄瑞荣 魏林根 汪瑞清 华菊玲 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期762-769,共8页
为预测芝麻青枯病造成的产量损失,以茎秆病斑长度为指标确定成熟期芝麻青枯病严重度的分级标准,测定4个芝麻品种在不同青枯病严重度下的农艺性状指标、产量构成因子以及产量,建立单株蒴果数、单蒴粒数、千粒重、单株产量与青枯病严重度... 为预测芝麻青枯病造成的产量损失,以茎秆病斑长度为指标确定成熟期芝麻青枯病严重度的分级标准,测定4个芝麻品种在不同青枯病严重度下的农艺性状指标、产量构成因子以及产量,建立单株蒴果数、单蒴粒数、千粒重、单株产量与青枯病严重度的回归方程,在此基础上对芝麻青枯病严重度与单株产量损失率进行回归分析。结果表明:随着青枯病严重度上升,芝麻株高显著降低,空梢长度显著增长,始蒴高度显著增高;而芝麻单株蒴果数、单蒴粒数、千粒重均显著下降,其中芝麻单株蒴果数降低最显著,各级芝麻病株的单株蒴果数之间显著差异,且4个芝麻品种9级病株的单株蒴果数比0级病株降低71.24%~79.08%;各级病株的单株产量之间显著差异,4个芝麻品种的1、3、5、7和9级病株平均产量损失率分别为12.56%、29.53%、54.01%、72.57%和81.98%;青枯病严重度与单株蒴果数、单蒴粒数、千粒重3个产量构成因子呈极显著线性负相关;青枯病严重度x与产量损失率y的线性回归方程为y=2.5534+9.4132x(R~2=0.9867),说明青枯病严重度越高,损失率越大。 展开更多
关键词 青枯雷尔氏菌 严重度 芝麻 农艺性状 产量构成因子 单株产量
广藿香青枯病菌Tn5转座子插入突变体的构建
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作者 王亚琴 张宇瑶 +4 位作者 贺红 李颛 邓志成 金华 黎广卫 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期77-81,共5页
该研究以从感染了青枯病的广藿香植株中分离的青枯菌菌株PRS-84为供试菌株,利用电击转化法,对青枯菌进行Tn5转座子插入突变,在含卡那霉素的培养基上筛选抗性克隆。对抗性克隆进行卡那霉素抗性基因的PCR鉴定,并利用反向PCR技术获得转化子... 该研究以从感染了青枯病的广藿香植株中分离的青枯菌菌株PRS-84为供试菌株,利用电击转化法,对青枯菌进行Tn5转座子插入突变,在含卡那霉素的培养基上筛选抗性克隆。对抗性克隆进行卡那霉素抗性基因的PCR鉴定,并利用反向PCR技术获得转化子Tn5转座子插入位点的侧翼序列并进行序列测定与分析。结果表明,青枯菌感受态细胞经电击转化后,获得了抗性克隆。经PCR扩增,抗性克隆在预计的约700 bp处出现特异性条带。反向PCR扩增获得了转化子Tn5转座子插入位点的侧翼序列,经序列测定及同源性分析,初步推测3个突变体的Tn5转座子插入位点基因分别为typ A基因、rec O基因和gid A基因。该研究建立了广藿香青枯病菌Tn5转座子插入突变体系,获得了青枯菌Tn5转座子插入突变体,为构建广藿香青枯菌突变体库及发现青枯菌致病基因奠定了基础。 展开更多
关键词 广藿香 青枯菌 Tn5转座子 电击转化 突变体
尾叶桉叶组织中8个人工启动子转录特性 预览
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作者 黄真池 李柳如 +2 位作者 钟子倩 沈金玲 李恒 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期21-23,85共4页
理想病原诱导型启动子可准确调控抗病基因的时空表达,在植物抗病基因工程中起着关键作用。将4个病原诱导元件F-box、S-box、Gst1-box、W-box和Mini35S片段组合得到8个人工病原诱导启动子(synthetic pathogen-inducible promoters,SPIP)... 理想病原诱导型启动子可准确调控抗病基因的时空表达,在植物抗病基因工程中起着关键作用。将4个病原诱导元件F-box、S-box、Gst1-box、W-box和Mini35S片段组合得到8个人工病原诱导启动子(synthetic pathogen-inducible promoters,SPIP),按元件排列顺序命名为,FSGW、FSWG、GWFS、GWSF、SFGW、SFWG、WGFS、WGSF。再用其分别替换pBI121中控制gus表达的35S启动子得到重组质粒后导入农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)GV3101。用农杆菌渗入法转化尾叶桉(Eucalyptus urophylla)叶盘,12 h后用GUS染色法检测启动子本底活性。其余叶盘用水杨酸,青枯菌,疫霉菌孢子诱导处理12 h后,提取总RNA、反转录得cDNA,通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测人工启动子的诱导转录特性。GWFS和SFWG对应的叶盘GUS染色较为明显,本底活性相对较高,其余6个启动子本底活性较低,对应的叶盘不着色或着色浅。设CaMV35S的转录活性为1,qPCR结果显示:受水杨酸诱导时,GWSF和SFWG活性升高明显,分别为0.931和1.362;受青枯菌诱导时,WGFS活性升高到0.945;受疫霉菌孢子诱导时,GWFS、SFGW和WGFS活性升高明显,分别为2.030、1.979和2.351。结果表明:病原诱导元件的排列组合显著影响人工启动子的转录特性;8个启动子中WGFS具有本底低、诱导活性相对较高的优点,将其进一步优化后可应用于植物转基因抗病育种。 展开更多
关键词 尾叶桉 人工病原诱导启动子 水杨酸 青枯菌 疫霉菌
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茄科作物青枯菌NADH脱氢酶F亚基在细胞运动和致病性中的功能研究(英文)
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作者 童建华 Gibson Kamau Gicharu +3 位作者 户勋 范晓静 卓涛 邹华松 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1968-1968,1960-1967共2页
【目的】劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum)在茄科作物上引起严重的细菌性青枯病,本研究旨在发掘青枯劳尔氏菌与致病相关的基因。【方法】利用Tn5转座子构建随机插入突变体,分析生物膜形成、细胞运动和致病性;对有表型变化的突变体,运用... 【目的】劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum)在茄科作物上引起严重的细菌性青枯病,本研究旨在发掘青枯劳尔氏菌与致病相关的基因。【方法】利用Tn5转座子构建随机插入突变体,分析生物膜形成、细胞运动和致病性;对有表型变化的突变体,运用TAIL-PCR方法鉴定Tn5插入位点,确定所突变的基因。【结果】以模式菌株GMI000为出发菌,总共获得了400个突变体,其中2个突变体不能形成生物膜,在软琼脂平板上的运动能力下降;接种感病番茄植物,这2个突变体都不能引起萎焉症状。TAIL-PCR结果显示,2个突变体的Tn5插入位点都在NADH脱氢酶F亚基(nuoF)中,距离翻译起始位点分别为103-bp和225-bp。ripAY基因启动子推动的nuoF基因互补载体,完全恢复了2个突变体的表型。【结论】NADH脱氢酶复合物是微生物呼吸电子传递链中的第一步催化酶。我们的结果表明,NADH脱氢酶复合物对R. solanacearum生物膜形成、细胞运动和致病性也有重要作用。 展开更多
关键词 青枯菌 NADH脱氢酶 致病性 nuoF 运动
健康与感染青枯病烟株根际土壤与茎秆细菌群落结构与多样性
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作者 向立刚 周浩 +3 位作者 汪汉成 李震 陈乾丽 余知和 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1984-1999,共16页
【目的】了解健康烟株与感染青枯病烟株在根际土壤、茎杆发病部位、茎杆病健交界部位以及未发病茎杆的细菌群落结构与多样性。【方法】分别对土壤与茎杆样品中细菌的16S rRNA基因V3-V4区进行扩增,采用Illumina MiSeq测序技术对扩增片段... 【目的】了解健康烟株与感染青枯病烟株在根际土壤、茎杆发病部位、茎杆病健交界部位以及未发病茎杆的细菌群落结构与多样性。【方法】分别对土壤与茎杆样品中细菌的16S rRNA基因V3-V4区进行扩增,采用Illumina MiSeq测序技术对扩增片段进行高通量测序,然后对健康烟株与感染青枯病烟株不同部位细菌群落结构与多样性进行分析。【结果】感染青枯病烟株发病茎杆及根际土壤的细菌群落多样性高于健康烟株茎杆及其根际土壤样品,病健交界茎杆样品细菌群落多样性低于健康烟株。变形菌门(Proteobacteria)在所有样品中均为优势菌门;所有烟株根际土壤的优势菌门为拟杆菌门(Bacteroidetes)、酸杆菌门(Acidobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)和绿弯菌门(Chloroflexi);健康烟株茎杆部位的优势菌门为蓝细菌门(Cyanobacteria);感染青枯病烟株发病茎杆和病健交界茎杆部位的优势菌门为蓝细菌门(Cyanobacteria)和厚壁菌门(Firmicutes)。所有根际土壤样品的优势菌属为劳尔氏菌属(Ralstonia)、假单胞菌属(Pseudomonas)、鞘脂单胞菌属(Sphingomonas)、黄杆菌属(Flavobacterium)和代尔夫特菌属(Delftia),而感染青枯病烟株根际土壤的劳尔氏菌属(Ralstonia)和假单胞菌属(Pseudomonas)相对丰度显著高于健康烟株根际土壤,鞘脂单胞菌属相对丰度显著低于健康烟株根际土壤。烟株茎杆的优势菌属为劳尔氏菌属和假单胞菌属等。感染青枯病烟株病健交界茎杆中劳尔氏菌属、肠杆菌属(Enterobacter)和泛菌属(Pantoea)相对丰度显著低于健康烟株样品。【结论】健康与感染青枯病烟株茎杆样品细菌群落的丰富度和多样性明显低于相应的根际土壤样品。较健康烟株而言,感染青枯病烟株根际土壤和茎杆样品细菌群落丰富度和多样性均表现出不同程度地增加,且根际土壤细菌群落结构变化较茎杆样品明显,而病健交界茎杆样� 展开更多
关键词 Illumina高通量测序 细菌多样性 群落结构 烟草青枯病 茄科劳尔氏菌
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