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抗性淀粉含量不同的小麦品种(系)淀粉分支酶SBEⅡa和SBEⅡb基因多态性分析 预览 被引量:1
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作者 王昊龙 韩俊杰 +1 位作者 李卫华 刘伟 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期981-987,共7页
【目的】克隆抗性淀粉含量不同的小麦品种(系)中淀粉合成酶关键基因SBEⅡa和SBEⅡb进行多态性分析,从分子水平阐述不同小麦品种(系)间抗性淀粉含量差异的原因。【方法】根据Gene Bank中公布的小麦SBEⅡa(AF286319.1)和SBEⅡb(AY7... 【目的】克隆抗性淀粉含量不同的小麦品种(系)中淀粉合成酶关键基因SBEⅡa和SBEⅡb进行多态性分析,从分子水平阐述不同小麦品种(系)间抗性淀粉含量差异的原因。【方法】根据Gene Bank中公布的小麦SBEⅡa(AF286319.1)和SBEⅡb(AY740401.1)基因序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术克隆SBEⅡa和SBEⅡb基因序列,利用Clustal.W进行测序结果的比对分析,NCBI Conserved domain和inte Pro在线网站对SBEⅡa和SBEⅡb氨基酸序列进行结构域预测,寻找影响抗性淀粉含量的主效基因位点。【结果】克隆了SBEⅡa(2 471 bp)、SBEⅡb(2 510 bp)基因ORF(open reading frame,ORF)全长。序列分析表明:SBEⅡa、SBEⅡb基因与公布的序列同源性分别为98.64%和99.07%。【结论】SBEⅡa基因ORF的三个结构域中未发现影响籽粒抗性淀粉含量的候选差异位点。在SBEⅡb基因编码区羧基C-末端的3个候选差异位点和α-淀粉催化酶结构域的1个候选差异位点可能是造成小麦品种(系)间抗性淀粉含量差异的原因。SBEⅡa、SBEⅡb氨基N-末端前面序列中共计10个单碱基变异作为潜在差异位点,也可能参与SBE基因的表达。 展开更多
关键词 小麦 抗性淀粉 SBEa SBEb 多态性分析
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不同抗性淀粉含量的小麦品种(系)SBEⅡa基因启动子序列分析 预览 被引量:2
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作者 王昊龙 韩俊杰 +1 位作者 李卫华 刘伟 《石河子大学学报:自然科学版》 CAS 2015年第1期60-66,共7页
为了从分子水平上揭示不同小麦品种(系)间抗性淀粉含量差异的原因,本试验利用q RT-PCR技术研究了抗性淀粉含量高和抗性淀粉含量低的小麦品种(系)淀粉合成关键基因SBEⅡa表达差异。根据Genebank中公布的小麦SBEⅡa基因启动子(AY3570... 为了从分子水平上揭示不同小麦品种(系)间抗性淀粉含量差异的原因,本试验利用q RT-PCR技术研究了抗性淀粉含量高和抗性淀粉含量低的小麦品种(系)淀粉合成关键基因SBEⅡa表达差异。根据Genebank中公布的小麦SBEⅡa基因启动子(AY357072.1)基因序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术克隆SBEⅡa基因启动子,利用Clustal.W对测序结果比对分析,利用数据库PLACE和Plant CARE对启动子序列中各特征元件进行预测,以发掘影响SBEⅡa基因表达量的重要作用元件的等位变异位点。结果显示:抗性淀粉含量高的小麦品种(系)中SBEⅡa基因的表达量低于抗性淀粉含量低的品种(系)。克隆了10个抗性淀粉含量不同的小麦品种(系)SBEⅡa基因编码区上游2896 bp序列,10个小麦品种(系)SBEⅡa基因启动子序列相似性达到了99.92%,抗性淀粉含量高和抗性淀粉含量低的小麦品种(系)SBEⅡa基因启动子序列间无规律性差异。推测,SBEⅡa基因启动子可能不是造成SBEⅡa基因表达差异的主要原因。 展开更多
关键词 小麦 抗性淀粉 SBEa 启动子
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小麦SBEⅡa、SSⅡa基因片段的克隆及VIGS重组载体的构建 预览 被引量:2
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作者 李淼淼 南富波 +1 位作者 刘伟 李卫华 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1961-1966,共6页
【目的】克隆小麦SBEⅡa、SSⅡa基因部分序列并构建二者的VIGS重组载体,为在小麦上利用VIGS技术研究SBEⅡa、SSⅡg基因与小麦淀粉合成的关系奠定基础。【方法】根据GenBank中公布的小麦SBEⅡa(AF286319.1)、SSⅡa(AF155217.2)基... 【目的】克隆小麦SBEⅡa、SSⅡa基因部分序列并构建二者的VIGS重组载体,为在小麦上利用VIGS技术研究SBEⅡa、SSⅡg基因与小麦淀粉合成的关系奠定基础。【方法】根据GenBank中公布的小麦SBEⅡa(AF286319.1)、SSⅡa(AF155217.2)基因序列分别设计特异引物,利用RT—PeR技术克隆SBEⅡa、SSⅡa基因的特异片段。然后以BSMV:γ-PDS为原载体,通过酶切连接用SBEⅡa、SSⅡa基因片段分别将原载体中的PDS基因进行替换,从而构建BSMV:γ-SBEⅡa和BSMV:γ-SSⅡa重组载体。【结果】克隆的SBEⅡa和SSⅡa基因片段长分别是178bp和171bp。序列分析表明:SBEⅡa基因片段与小麦SBEⅡa(AP286319.1)序列同源性为100%I、S5Ⅱa基因片段与SSⅡa(AF155217.2)序列同源性也为100%;酶切鉴定结果表明成功构建BSMV:γ-SBEⅡa和BSMV:γ-SSⅡa重组载体。【结论】构建的BSMV:γ-SBEIIa和BSMV:γ-SSⅡa重组载体将为下一步利用VIGS技术在小麦上研究SBEⅡa、SSIIa基因与小麦淀粉合成的关系奠定基础。 展开更多
关键词 小麦 SBEa SSa VIGS载体
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改良Trizol法从灌浆期小麦胚乳中提取高质量总RNA的研究 预览 被引量:2
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作者 李淼淼 南富波 +1 位作者 刘伟 李卫华 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期共5页
[目的]在传统的Trizol法基础上进行改良,探索一种适合于灌浆期小麦胚乳高质量总RNA提取的方法.[方法]用改良的Trizol法从花后10、15、20 d的小麦胚乳中提取总RNA,经核酸分析仪及电泳检测其质量,进行RT-PCR扩增小麦SBEⅡa基因片段并测序... [目的]在传统的Trizol法基础上进行改良,探索一种适合于灌浆期小麦胚乳高质量总RNA提取的方法.[方法]用改良的Trizol法从花后10、15、20 d的小麦胚乳中提取总RNA,经核酸分析仪及电泳检测其质量,进行RT-PCR扩增小麦SBEⅡa基因片段并测序比对.[结果]OD260/OD280:1.95~1.98,OD260/OD230:2.0~2.25,产率:544.00~645.46 μg/g,表明提取的总RNA浓度和纯度均达到要求.测序及Blast比对表明成功克隆小麦SBEⅡa基因片段.[结论]改良后的Trizol法可以高效的从灌浆期小麦胚乳中提取高质量的总RNA. 展开更多
关键词 小麦 总RNA提取 TRIZOL法 SBEa
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玉米淀粉分支酶基因SBEⅡb高效沉默表达载体的构建及转化表达 预览 被引量:1
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作者 李楠 赵吉元 +6 位作者 尹悦佳 柳青 郭嘉 王云鹏 刘相国 郝东云 贺红霞 《生物技术进展》 2015年第2期120-126,F0003共8页
淀粉分支酶( starch branching enzyme, SBE)是淀粉合成的限速酶。为了进一步研究SBEⅡb沉默对玉米生长及直链淀粉合成的影响,克隆了玉米( Zea mays)淀粉分支酶SBEⅡb基因片段,构建了SBEⅡb的发卡结构表达载体pTFU-SBEⅡb hair... 淀粉分支酶( starch branching enzyme, SBE)是淀粉合成的限速酶。为了进一步研究SBEⅡb沉默对玉米生长及直链淀粉合成的影响,克隆了玉米( Zea mays)淀粉分支酶SBEⅡb基因片段,构建了SBEⅡb的发卡结构表达载体pTFU-SBEⅡb hairpin,用农杆菌介导法将其导入玉米HiⅡ幼胚中,经除草剂筛选获得了194株转化再生植株,其中4株结实,获得转基因种子35粒。 T1代植株经PCR及试纸条检测获得3株阳性材料,半定量RT-PCR结果得出SBEⅡb的表达量降低,推断出基因表达水平降低对直链淀粉的合成具有正效应。 展开更多
关键词 玉米 淀粉分支酶SBEb ihpRNA载体 直链淀粉
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小麦SBEⅡb基因的克隆及其与PDS基因串联VIGS载体的构建 预览 被引量:1
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作者 南富波 李淼淼 +3 位作者 王昊龙 韩俊杰 刘伟 李卫华 《石河子大学学报:自然科学版》 CAS 2014年第1期1-5,共5页
为探讨以PDS基因为指示基因利用VIGS技术研究小麦SBEⅡb基因的功能,本研究拟构建小麦SBEⅡb和PDS的双基因串联VIGS重组载体。根据GeneBank中公布的小麦SBEⅡb(AY740401.1)和PDS(FJ517553.1)基因序列分别设计搭桥引物,利用RT-PCR技... 为探讨以PDS基因为指示基因利用VIGS技术研究小麦SBEⅡb基因的功能,本研究拟构建小麦SBEⅡb和PDS的双基因串联VIGS重组载体。根据GeneBank中公布的小麦SBEⅡb(AY740401.1)和PDS(FJ517553.1)基因序列分别设计搭桥引物,利用RT-PCR技术克隆SBEⅡb和PDS基因的特异片段,利用SOE-PCR技术获得双基因融合片段SBEⅡb:PDS。然后以BSMV:γ-PDS为原载体,通过酶切连接,用SBEⅡb:PDS基因片段将原载体中的PDS基因片段进行替换,从而构建BSMV:γ-SBEⅡb:PDS重组载体。结果显示克隆的SBEⅡb和PDS基因片段长分别是181和190 bp,SBEⅡb:PDS片段长是370 bp。序列分析表明:SBEⅡb基因片段与小麦SBEⅡb(AY740401.1)序列同源性为97%;小麦PDS基因片段与PDS(AF155217.2)序列同源性也为97%;酶切鉴定结果表明成功构建BSMV:γ-SBEⅡb:PDS重组载体。本研究构建的BSMV:γ-SBEⅡb:PDS重组载体将在PDS基因的指示下为下一步利用VIGS技术在小麦上研究SBEⅡb基因与小麦淀粉合成的关系奠定了基础。 展开更多
关键词 小麦 SBEb PDS VIGS
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小麦淀粉分支酶基因SBE-Ⅱb植物表达载体的构建及表达鉴定 预览 被引量:1
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作者 王自布 齐军仓 +2 位作者 李卫华 曹连莆 石培春 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期620-625,共6页
从花后15 d的小麦(Triticum aestivum L.)胚乳中提取RNA,根据GeneBank上已经公布的小麦淀粉分支酶基因(SBE-Ⅱb)序列(AY740401.1)设计引物,经RT-PCR扩增得到一条2 511 bp的条带,测序结果与公布的序列一致。将克隆得到的基因构建... 从花后15 d的小麦(Triticum aestivum L.)胚乳中提取RNA,根据GeneBank上已经公布的小麦淀粉分支酶基因(SBE-Ⅱb)序列(AY740401.1)设计引物,经RT-PCR扩增得到一条2 511 bp的条带,测序结果与公布的序列一致。将克隆得到的基因构建到了植物表达载体pPZP35S上,通过农杆菌叶盘转化法转化烟草叶片,经卡那霉素筛选、PCR扩增鉴定证明,SBE-Ⅱb基因已成功转入烟草细胞中,获得4个转基因株系。转基因烟草叶片与野生型比较,颜色变暗,植株较小。RT-PCR半定量和实时荧光定量RT-PCR分析表明,转基因烟草株系的叶片中有SBE-Ⅱb基因的表达,与对照植株相比,转SBE-Ⅱb基因的植株中的转录本达到了显著性的变化,但是其淀粉分支酶活性没有达到显著性变化。 展开更多
关键词 小麦 转基因 实时荧光定量(qRT-PCR) 淀粉分支酶基因(SBE-b)
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玉米ae基因的研究进展 预览 被引量:1
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作者 任红丽 张军杰 黄玉碧 《玉米科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期 56-59,共4页
ae基因是一种胚乳突变基因。玉米ae突变体的表现型为玻璃状、无光泽胚乳。ae基因编码淀粉分枝酶Ⅱb(SBEⅡb)是SBEⅡb的结构基因,ae基因定位在玉米第5条染色体长臂上,在玉米中是单拷贝基因。在ae突变体胚乳中,SBEⅡb的活性缺失,子... ae基因是一种胚乳突变基因。玉米ae突变体的表现型为玻璃状、无光泽胚乳。ae基因编码淀粉分枝酶Ⅱb(SBEⅡb)是SBEⅡb的结构基因,ae基因定位在玉米第5条染色体长臂上,在玉米中是单拷贝基因。在ae突变体胚乳中,SBEⅡb的活性缺失,子粒的表观直链淀粉含量增加,同时支链淀粉的α-1,6糖苷键分支点的数量降低。本文对ae基因的结构、功能、特性等作了一个较全面的综述,对其做更深入的研究,以改良淀粉品质。 展开更多
关键词 直链淀粉 胚乳突变基因 ae(amylose extender)基因 淀粉分枝酶b(SBEb)
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农杆菌介导水稻sbeIIb基因转化体系的建立 预览 被引量:1
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作者 陈宗伦 张明洲 +4 位作者 方结红 刘军 俞晓平 孙传兴 Christer Jansson 《安徽农学通报》 2006年第13期77-78,97共3页
本文对水稻愈伤组织再生体系及其转化影响因子进行了研究。以水稻品种秀水11的幼胚和成熟胚为外植体,以M S+肌醇0.1g/L+2,4-D 2mg/L+6-BA 0.2mg/L+脯胺酸2.8g/L+水解酪蛋白0.3g/L作诱导培养基,愈伤组织诱导率最高为73.45%,愈伤组织在M ... 本文对水稻愈伤组织再生体系及其转化影响因子进行了研究。以水稻品种秀水11的幼胚和成熟胚为外植体,以M S+肌醇0.1g/L+2,4-D 2mg/L+6-BA 0.2mg/L+脯胺酸2.8g/L+水解酪蛋白0.3g/L作诱导培养基,愈伤组织诱导率最高为73.45%,愈伤组织在M S+6-BA2 mg/L+NAA 0.5mg/L的分化培养基上,分化频率达53.33%;在此基础上对农杆菌介导水稻愈伤组织转化的因子进行了优化,获得较高转化频率的条件为:预培养时间3d,在OD600值为0.6农杆菌菌液中感染10m in,共培养3d。 展开更多
关键词 sbeb基因 转化体系 农杆菌 水稻
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Evaluation and characterization of an endosperm-specific sbeⅡα promoter in wheat 被引量:2
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作者 MIAOHongmei FlemingJoyE. +1 位作者 LuDebing HANJinfeng 《中国科学通报:英文版》 SCIE CAS 2004年第6期579-585,共7页
Starch,the main component of the wheat grain,is the product of a complex biochemical pathway. The sbeⅡα gene plays a key role in controlling the synthesis of starch, in particular, the biosynthesis of amylopectin,in... Starch,the main component of the wheat grain,is the product of a complex biochemical pathway. The sbeⅡα gene plays a key role in controlling the synthesis of starch, in particular, the biosynthesis of amylopectin,in maturing wheat grain.To investigate its regulatory mechanisms and endosperm-specific expression pattern, the sbeⅡα promoter (3094 bp in length) was cloned using APCR and sequenced.The effect of a series of deletions was studied using a GUS transient assay system. Results showed that the 3094 bp sequence (sbe.g construct) exhibited full stable promoting activity and that the activities of 5′ or 3′ deletions reduced levels of GUS expression. Some constructs with internal deletions showed only weak activity, however,sbe.e, with a deletion from -1579—--1210 bp resulted in higher levels of expression than the full-length promoter sequence, sbe.g. This indicates that motifs such as the -300 bp element, G-box and/or P-box act as positive elements and are necessary in determining the promoter's endosperm-specific pattern and that negative repressor elements or motifs may also be present within the -1579—-1210 bp sequence. The age of wheate ndosperm tissue used in the GUS-transient assay system is shown to be of significant importance. 展开更多
关键词 六倍体株小麦 胚乳 sbeα 生长促进 淀粉岐化酶 生物化学方法
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