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SLUG基因可调控性干扰载体的构建及其在鼻咽癌细胞中的表达 预览
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作者 刘芳 柳玉红 +2 位作者 李晓鸣 邹桂华 周来勇 《南昌大学学报:医学版》 CAS 2019年第3期33-37,共5页
目的 探讨鼻咽癌细胞中基因表达,构建可调控性相关基因干扰载体,并验证其干扰作用。方法 将高转移人鼻咽癌细胞株5-8F、5-8F-H3细胞进行培养,实时荧光定量RT-PCR检测5-8F及5-8F-H3细胞中SLUG、CBX3、MAD2L1、PLAU、HMGA1基因的表达水平... 目的 探讨鼻咽癌细胞中基因表达,构建可调控性相关基因干扰载体,并验证其干扰作用。方法 将高转移人鼻咽癌细胞株5-8F、5-8F-H3细胞进行培养,实时荧光定量RT-PCR检测5-8F及5-8F-H3细胞中SLUG、CBX3、MAD2L1、PLAU、HMGA1基因的表达水平。应用酶切、连接技术构建pSUPERIOR-SLUG干扰载体,采用脂质体转染方法转染5-8F-H3细胞,经嘌呤霉素筛选获得阳性克隆,实时荧光定量RT-PCR检测干扰效果。结果 5-8F及 5-8F-H3细胞中SLUG基因表达水平均明显高于CBX3、MAD2L1、PLAU、HMGA1基因(均P<0.05),相对倍数分别为(11.23±1.78)倍、(1.23±0.17)倍、(1.57±0.27)倍、(6.36±0.38)倍、(3.66±1.14)倍,以SLUG基因倍数最高。所构建的pSUPERIOR-SLUG重组质粒,经酶切鉴定及序列分析证实为所需的目标序列,并成功转染鼻咽癌5-8F-H3细胞。阳性克隆S2-18基因表达水平高于阳性克隆S1-7、S1-9、S2-22基因(P<0.05),干扰率分别为67.42%、72.45%、84.20%、75.61%。结论 SLUG基因在鼻咽癌5-8F-H3中高表达。成功构建了重组质粒——pSUPERIOR-SLUG,并成功转染鼻咽癌5-8F-H3细胞,为后续进一步研究SLUG在鼻咽癌的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 高转移人鼻咽癌细胞株5-8F、5-8F-H3细胞 SLUG基因 可调控性干扰载体
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siRNA干扰slug基因表达对IEC-6细胞放射线敏感性影响 预览
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作者 高清华 张克君 +3 位作者 赵彬彬 陈栋 姜忠 张林 《青岛大学医学院学报》 CAS 2017年第1期35-38,42共5页
目的探讨siRNA干扰slug基因表达对体外肠隐窝上皮细胞IEC-6接受X线照射的敏感性影响及其机制。方法以体外培养大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6为研究对象,将转染siRNA-slug(实验组)、转染siRNA(阴性对照组)和未转染siRNA(空白对照组)... 目的探讨siRNA干扰slug基因表达对体外肠隐窝上皮细胞IEC-6接受X线照射的敏感性影响及其机制。方法以体外培养大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6为研究对象,将转染siRNA-slug(实验组)、转染siRNA(阴性对照组)和未转染siRNA(空白对照组)的细胞进行X射线照射处理,24h后,用Western blot法检测各组细胞的Slug和细胞P53正向凋亡上调因子(PUMA)蛋白的表达,CCK8法检测细胞在不同剂量X射线照射下的生长抑制情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果实验组Slug蛋白表达与阴性对照组和空白对照组比较明显降低,PUMA蛋白表达明显高于阴性对照组和空白对照组,差异有显著性(F=1 760、421,P〈0.01)。与阴性对照组和空白对照组比较,实验组细胞的凋亡率增加,差异有统计学意义(F=33.02,P〈0.01)。在0~6Gy剂量范围内,随着X线照射剂量的增加,各组细胞的增殖活性均降低(F=6.595~31.470,P〈0.05);在6Gy剂量X线照射下,实验组细胞生长抑制率、早期+晚期凋亡率较阴性对照组和空白对照组明显增高,差异有统计学意义(F=47.700、33.020,P〈0.01)。结论 siRNA干扰slug基因的表达能够使促凋亡的PUMA蛋白表达增加,从而增强IEC-6细胞对X射线的敏感性。 展开更多
关键词 SLUG基因 RNA干扰 P53正向凋亡上调因子 辐射耐受性
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过表达和敲除SLUG基因卵巢癌SKOV3细胞稳定株的建立 预览 被引量:1
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作者 雷静 赵然 +2 位作者 高茹 辛灵彪 刘欣 《山东医药》 北大核心 2017年第42期1-4,共4页
目的利用慢病毒载体和改良的CRISPR/Cas9基因编辑系统分别构建过表达和敲除SLUG基因的卵巢癌SKOV3细胞稳定株。方法 (1)以质粒p CMV-Myc-SLUG为模板扩增出HA-SLUG基因,将其连接到慢病毒表达质粒p LVX-IRES-Hyg中。将此重组表达载体p L... 目的利用慢病毒载体和改良的CRISPR/Cas9基因编辑系统分别构建过表达和敲除SLUG基因的卵巢癌SKOV3细胞稳定株。方法 (1)以质粒p CMV-Myc-SLUG为模板扩增出HA-SLUG基因,将其连接到慢病毒表达质粒p LVX-IRES-Hyg中。将此重组表达载体p LVX-HA-SLUG通过病毒感染法感染SKOV3细胞(实验组),以相同条件制备p LVX-IRES-Hyg空载体的慢病毒作为阴性对照,Western blotting法检测两组SLUG蛋白表达。(2)将一对能特异结合SLUG基因的sgRNA分别连接到载体PX462中,获得的一对重组质粒通过脂质体法共转染SKOV3细胞,筛选稳定株,挑取单克隆细胞(实验组),用Western blotting法检测SLUG蛋白表达,另设空白对照组,不加任何处理。结果 (1)对挑取的单克隆菌液进行PCR扩增,阳性者提取质粒进行PCR和双酶切,两者验证正确后进行DNA测序鉴定,结果证实重组质粒构建成功。阴性对照组与实验组SLUG蛋白相对表达量分别为0.92±0.02和3.14±0.04,实验组SLUG蛋白表达高于阴性对照组(P〈0.01)。(2)挑取4个单克隆细胞进行测定,SLUG蛋白的相对表达量分别为0.07±0.01、0.06±0.01、0.21±0.02、0.20±0.01,空白对照组为0.56±0.03。实验组SLUG蛋白相对表达量低于空白对照组(P均〈0.01)。结论过表达和稳定敲除SLUG基因的SKOV3细胞株构建成功,为进一步探讨SLUG在卵巢癌中的作用提供了细胞模型。 展开更多
关键词 SLUG基因 慢病毒载体 SKOV3细胞 卵巢癌 细胞模型
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沉默Slug抑制胰腺癌细胞迁移和侵袭能力 预览 被引量:2
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作者 孟宪魁 张雷 《西安交通大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期69-72,共4页
目的探讨核转录调控因子Slug对胰腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响,为研发胰腺癌有效的靶向治疗方案提供新思路。方法应用小干扰RNA技术,靶向沉默胰腺癌细胞MIAPaca-2中Slug的表达,观察肿瘤细胞迁移和侵袭能力的改变,并检测其下游转移... 目的探讨核转录调控因子Slug对胰腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响,为研发胰腺癌有效的靶向治疗方案提供新思路。方法应用小干扰RNA技术,靶向沉默胰腺癌细胞MIAPaca-2中Slug的表达,观察肿瘤细胞迁移和侵袭能力的改变,并检测其下游转移抑制蛋白E-cadherin的表达情况。结果所设计的sIRNA片段可以有效减少MIAPaca-2细胞中SlugmRNA及蛋白表达水平;沉默Slug因子后,MIAPaca-2细胞中E-cadherin蛋白表达明显升高,肿瘤细胞的迁移和侵袭能力明显降低。结论沉默Slug明显上调了E—cadherin的表达,并有效抑制胰腺癌细胞的侵袭能力,提示Slug在胰腺癌转移过程中起重要作用,可以作为预防胰腺癌转移的重要靶点。 展开更多
关键词 SLUG 胰腺癌 迁移 侵袭 E—cadherin 基因沉默
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骨肉瘤组织中Slug和E钙粘蛋白的表达意义 预览 被引量:5
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作者 伍锋 尹科 +6 位作者 龙秋平 丁登峰 牛兵 杨普 卢吉平 李哲海 廖前德 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第13期28-32,共5页
目的探讨骨肉瘤组织中Slug和E钙粘蛋白的表达及其意义。方法选取该院2008年1月-2012年6月骨肉瘤标本,用免疫组织化学SP法检测骨肉瘤中Slug和E钙粘蛋白的表达,对结合临床资料进行分析。结果 32例骨肉瘤标本纳入研究,在骨肉瘤组织中Slug和... 目的探讨骨肉瘤组织中Slug和E钙粘蛋白的表达及其意义。方法选取该院2008年1月-2012年6月骨肉瘤标本,用免疫组织化学SP法检测骨肉瘤中Slug和E钙粘蛋白的表达,对结合临床资料进行分析。结果 32例骨肉瘤标本纳入研究,在骨肉瘤组织中Slug和E钙粘蛋白阳性表达率分别为81.3%(26/32)和25.0%(8/32)。结合骨肉瘤临床病理特征的分析发现,Slug、E钙粘蛋白表达与Ennecking外科分期和骨肉瘤转移发生相关,同时还发现骨肉瘤标本中Slug表达与E钙粘蛋白表达为负相关(r=-0.745,P=0.000)。结论 Slug、E钙粘蛋白的表达联合检测可以作为判断骨肉瘤出现转移的指标。 展开更多
关键词 骨肉瘤 SLUG基因 E钙粘蛋白 转移
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rAAV2-EGFP-Slug-siRNA-U6对人胰腺癌血管生成的影响及其机制探讨 预览
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作者 崔海宁 陈俭云 +7 位作者 王正文 张克君 余壮明 王齐全 王明华 朱东明 宋彩霞 张泽米 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1161-1164,共4页
目的:构建并制备携带目的基因的rAAV2-EGFP-Slug-siRNA-U6(Slug-siRNA)腺相关病毒载体,探讨Slug干扰对人胰腺癌细胞株AsPC-1血管生成的影响及其机制。方法:利用以前试验的方法构建重组质粒pSNAV2.0-EGFP-Slug-siRNA-U6。鸡胚绒毛尿... 目的:构建并制备携带目的基因的rAAV2-EGFP-Slug-siRNA-U6(Slug-siRNA)腺相关病毒载体,探讨Slug干扰对人胰腺癌细胞株AsPC-1血管生成的影响及其机制。方法:利用以前试验的方法构建重组质粒pSNAV2.0-EGFP-Slug-siRNA-U6。鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)实验检测rAAV2-EGFP-Slug-siRNA-U6对细胞血管生成的影响。Western blot及RT-PCR方法鉴定转染前后AsPC-1细胞Slug与VEGF蛋白及mRNA表达。结果:携带编码靶向Slug的小发夹状干扰RNA序列的腺相关病毒载体rAAV2-EGFP-Slug-siRNA-U6成功构建。rAAV2-EGFP-Slug-siRNA-U6抑制细胞血管生成。Slug-siRNA有效抑制AsPC-1细胞Slug与VEGF蛋白及mRNA的表达。结论:rAAV2-EGFP-Slug-siRNA-U6抑制细胞血管生成,其机制可能与干扰Slug及VEGF的表达有关。 展开更多
关键词 SLUG 小干扰RNA 腺相关病毒 胰腺癌 血管生成
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RNA干扰下调Slug表达对肺癌细胞A549的细胞周期、增殖和侵袭的影响 被引量:1
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作者 何巍 李玉霞 +1 位作者 刘佳 李巍 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期685-689,共5页
目的:应用RNA干扰技术下调肺癌A549细胞中Slug基因的表达,探讨其对A549细胞增殖、细胞周期和细胞侵袭能力的影响。方法:构建靶向Slug基因的shRNA真核表达质粒pGPU6-GFP.Neo-Slug,与阴性对照质粒pNeg.shRNA分别用脂质体法转染A549... 目的:应用RNA干扰技术下调肺癌A549细胞中Slug基因的表达,探讨其对A549细胞增殖、细胞周期和细胞侵袭能力的影响。方法:构建靶向Slug基因的shRNA真核表达质粒pGPU6-GFP.Neo-Slug,与阴性对照质粒pNeg.shRNA分别用脂质体法转染A549细胞。Real-timePCR和Westernblotting验证转染后SlugmRNA和蛋白的表达。CCK.8法、流式细胞术和Transwell实验分别检测下调Slug表达对A549细胞增殖、细胞周期和侵袭能力的影响。结果:成功构建pGPU6.GFP-Neo.Slug载体并转染A549细胞,转染率达90%。与pNeg-shRNA组和空白对照组相比,pSlug-shRNA组A549细胞中SlugmRNA[(0.23±0.01)V8(0.97±0.08)、(1.0±0.09),P〈0.05]和蛋白[(0.20±O.09)VS(1.0±0.32)、(1.13.4-0.26),P〈0.05]表达量显著降低;细胞增殖抑制率明显上升[(35.3-4-5.4)%掷(1.5±0.2)%、(3.3±0.7)%,均P〈0.01];细胞增殖指数显著降低[(32.92±0.69)%椰(48.19.4-0.71)%、(42.88±0.75)%,均P〈0.05],并且处于G,期细胞数明显增多[(67.08-t-O.92)%"s(52.81-4-0.78)%、(56.12±0.73)%,均P〈0.05];细胞侵袭能力显著降低[穿透基底膜细胞数:(55-4-9)"s(169.4-12)、(173.4-15),均P〈0.01]。结论:pGPU6一GFP—Neo—Slug转染肺癌A549细胞能有效下调Slug基因的表达,从而抑制A549的增殖侵袭能力、阻滞细胞周期于G。期。 展开更多
关键词 RNA干扰 SLUG基因 肺癌 A549细胞 增殖 细胞周期 侵袭
Slug沉默抑制缺氧诱导的前列腺癌细胞LNCaP上皮间质转化 被引量:1
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作者 赵艳红 吴军兵 孔涛 《临床泌尿外科杂志》 2012年第8期636-638,共3页
目的:探讨转录因子Slug基因沉默对前列腺癌细胞LNCaP缺氧后上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程的影响及其相关的分子机理。方法:利用shRNA转染技术建立Slug沉默LNCaP细胞系,通过缺氧诱导EMT。采用western b... 目的:探讨转录因子Slug基因沉默对前列腺癌细胞LNCaP缺氧后上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程的影响及其相关的分子机理。方法:利用shRNA转染技术建立Slug沉默LNCaP细胞系,通过缺氧诱导EMT。采用western blot检测EMT发生的标志分子E-cadherin和N-cadherin蛋白的表达水平变化。Transwell侵袭实验评价细胞侵袭能力的改变。结果:成功建立Slug-shRNA稳定转染细胞系;缺氧诱导后,对照组E-cadherin表达水平明显降低,而N-cadherin表达水平明显升高,但是,在Slug沉默组,二者表达无明显变化;Slug沉默抑制了缺氧诱导的细胞侵袭能力的增加。结论:Slug基因沉默能够抑制缺氧诱导前列腺癌细胞EMT的发生;Slug与前列腺癌转移密切相关。 展开更多
关键词 前列腺癌 SLUG基因 上皮细胞间质转化
Slug基因在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变组织中的表达与意义 预览
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作者 张铭 张一鸣 +2 位作者 蒋丽霞 欧阳俊 周蓓蓓 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第36期3817-3819,共3页
目的研究转录因子Slug mRNA在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变(CIN)组织中的表达情况及意义。方法采用实时定量PCR方法检测56例宫颈癌组织、60例CIN组织中Slug mRNA的相对表达量,以35例正常宫颈组织及慢性宫颈炎组织作为对照,并分析其与宫颈... 目的研究转录因子Slug mRNA在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变(CIN)组织中的表达情况及意义。方法采用实时定量PCR方法检测56例宫颈癌组织、60例CIN组织中Slug mRNA的相对表达量,以35例正常宫颈组织及慢性宫颈炎组织作为对照,并分析其与宫颈癌各临床病理参数的相关性。结果对照组、CIN组、宫颈癌组Slug mRNA相对表达水平分别为(1.33±0.32)×10-2、(2.99±0.95)×10-2、(4.69±1.02)×10-2,宫颈癌组、CIN组Slug mRNA相对表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P〈0.01);宫颈癌组Slug mRNA相对表达水平高于CIN组,差异有统计学意义(P〈0.01)。宫颈癌组织中Slug的表达与国际妇产科学联盟(FIGO)分期、淋巴结转移相关,差异有统计学意义(P〈0.05),但与年龄、肿瘤大小、病理类型、分化程度无关,差异无统计学意义(P〉0.05)。结论 Slug基因在CIN、宫颈癌组织中表达上调,可能与宫颈癌的发生、发展及转移密切相关。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 SLUG基因 宫颈上皮内瘤变 实时定量PCR
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Slug在调控宫颈鳞状细胞癌上皮-间充质转变中的意义 预览 被引量:1
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作者 王晓萌 杜建层 +3 位作者 丁洋 高峰 王恩杰 王晓梅 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期975-978,共4页
目的 观察宫颈鳞状细胞癌组织中Slug的表达情况,探讨其在宫颈鳞状细胞癌上皮-间充质转变(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用机制.方法 收集临床慢性宫颈炎标本25例、CIN 3级标本33例、宫颈鳞状细胞癌标本98例,分别用免... 目的 观察宫颈鳞状细胞癌组织中Slug的表达情况,探讨其在宫颈鳞状细胞癌上皮-间充质转变(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用机制.方法 收集临床慢性宫颈炎标本25例、CIN 3级标本33例、宫颈鳞状细胞癌标本98例,分别用免疫组化、Western blot和实时荧光定量PCR检测Slug、E-cadherin、α-SMA蛋白及mRNA的表达情况.结果 Slug和α-SMA在宫颈鳞状细胞癌中高表达,并随恶性程度的升高而加强(P<0.01);E-cadherin在癌组织中的表达降低(P<0.01).结论 Slug可能通过调控EMT从而在宫颈鳞状细胞癌的侵袭转移过程中发挥作用. 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 鳞状细胞癌 上皮-间充质转变 SLUG基因
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rAAV-Slug-siRNA载体的构建及其抗胰腺癌的实验 预览
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作者 崔海宁 余壮明 +1 位作者 于飞 顾冠宏 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期265-269,共5页
目的构建并制备携带目的基因的rAAV-EGFP-Slug-siRNA(Slug-siRNA)病毒载体,探讨Slug干扰抗胰腺癌作用。方法首先构建pDC316-EGFP-Slug-si RNA质粒,以PCR鉴定正确的pDC316-EGFP-Slug-si RNA克隆为模板扩增EGFP-Slug-si RNA片段,EcoRⅠ... 目的构建并制备携带目的基因的rAAV-EGFP-Slug-siRNA(Slug-siRNA)病毒载体,探讨Slug干扰抗胰腺癌作用。方法首先构建pDC316-EGFP-Slug-si RNA质粒,以PCR鉴定正确的pDC316-EGFP-Slug-si RNA克隆为模板扩增EGFP-Slug-si RNA片段,EcoRⅠ和SalⅠ双酶切回收PCR产物;酶切pSNAV2.0-lacz-α载体质粒,并与上述产物进行连接;转化感受态大肠杆菌DH5α,得到重组质粒pSNAV2.0-EGFP-Slug-si RNA,酶切和测序对其进行鉴定。建立载体细胞株BHK/Slug-si RNA,大规模制备rAAV2-EGFP-Slug-si RAN并对其纯化、鉴定和滴度测定。将体外培养的胰腺癌细胞株AsPC-1转染Slug-si RNA和pSNAV2.0-EGFP空载体。Western blot及RT-PCR方法鉴定转染前后AsPC-1细胞内PUMA及Slug蛋白及mRNA表达,MTT比色法检测细胞存活率,TUNEL检查细胞凋亡。结果携带编码靶向Slug的小发夹状干扰RNA序列的腺相关病毒载体质粒pSNAV2.0-EGFP-Slug-si RNA,经PCR、酶切和测序鉴定,质粒构建正确。将构建成功的载体质粒与重组Ⅰ型单纯疱疹病毒HSV1-rc/ΔUL2共转染包装细胞BHK-2,成功复制和包装出重组腺相关病毒Slug-si R-NA,经检测目的片段插入成功,滴度为9.23×1010(puf)。Slug-si RNA有效抑制AsPC-1细胞内Slug表达,抑制体外细胞增殖,促进细胞凋亡,同时,伴随着Slug表达的下降,细胞内PUMA表达明显增加。结论成功制备出高滴度携带目的基因的Slug-si RNA病毒载体。干扰Slug表达抑制胰腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能通过解除Slug对PUMA基因的抑制有关。 展开更多
关键词 SLUG 小干扰 腺相关腺病毒 胰腺癌 凋亡
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靶向Slug基因的腺相关腺病毒载体的构建与鉴定 预览
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作者 严明总 张克君 +1 位作者 王齐全 欧树安 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2011年第11期1179-1183,共5页
目的:构建并制备携带目的基因的rAAV-EGFP-Slug-siRNA病毒载体.方法:首先构建pDC316-EGFP-Slug-siRNA质粒,以PCR鉴定正确的pDC316-EGFP-Slug-siRNA克隆为模板扩增EGFP-Slug-siRNA片段,EcoRⅠ和SalⅠ双酶切回收的PCR产物;酶切pSNAV2.0-... 目的:构建并制备携带目的基因的rAAV-EGFP-Slug-siRNA病毒载体.方法:首先构建pDC316-EGFP-Slug-siRNA质粒,以PCR鉴定正确的pDC316-EGFP-Slug-siRNA克隆为模板扩增EGFP-Slug-siRNA片段,EcoRⅠ和SalⅠ双酶切回收的PCR产物;酶切pSNAV2.0-lacz-α载体质粒,并与上述产物进行连接;转化感受态大肠杆菌DH5α,得到重组质粒pSNAV2.0-EGFP-Slug-siRNA,酶切和测序对其进行鉴定.建立载体细胞株BHK/Slug-siRNA,大规模制备rAAV2-EGFP-Slug-siRAN并对其纯化、鉴定和滴度测定.结果:携带编码靶向Slug的小发夹状干扰RNA序列的腺相关病毒载体质粒pSNAV2.0-EGFP-Slug-siRNA,经PCR、酶切和测序鉴定,质粒构建正确.将构建成功的载体质粒与重组Ⅰ型单纯疱疹病毒HSV1-rc/?UL2共转染包装细胞BHK-2,成功复制和包装出重组腺相关病毒rAAV2-EGFP-Slug-siRNA,经检测目的片段插入成功,滴度为9.23×10^10puf.结论:成功制备出高滴度的携带目的基因的rAAV-EGFP-Slug-siRNA病毒载体. 展开更多
关键词 SLUG基因 小干扰RNA 重组腺相关腺病毒
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宫颈癌组织中Slug基因及其蛋白质的表达与意义 预览 被引量:3
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作者 张铭 张一鸣 +5 位作者 董一善 王梅 赵崇辉 丁小青 钱晖 许文荣 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期 618-620,640,共4页
目的检测Slug基因在宫颈癌和慢性宫颈炎症组织中的表达,探讨其与宫颈癌发生、发展的相关性及在宫颈癌诊疗中的意义。方法收集31例宫颈癌组织和17例慢性宫颈炎症组织标本,用RT-PCR、实时定量PCR检测Slug mRNA的表达;用western blot分析S... 目的检测Slug基因在宫颈癌和慢性宫颈炎症组织中的表达,探讨其与宫颈癌发生、发展的相关性及在宫颈癌诊疗中的意义。方法收集31例宫颈癌组织和17例慢性宫颈炎症组织标本,用RT-PCR、实时定量PCR检测Slug mRNA的表达;用western blot分析Slug蛋白的表达水平,并分析Slug mRNA在宫颈癌中的表达水平与临床病理因素及高危型HPV病毒载量的相关性。结果宫颈癌组织中Slug mRNA表达阳性率及相对表达水平均显著高于慢性宫颈炎症组织(χ2=9.872;U=140,P均〈0.01);western blot也证实Slug蛋白表达水平高于慢性宫颈炎症组织(U=98,P〈0.01)。在宫颈癌组织中,Slug的阳性表达与国际妇产科学联盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO)肿瘤分期相关,Ⅱ期阳性率高于Ⅰ期(χ2=4.037,P〈0.05),与年龄、肿瘤大小、分化程度、淋巴细胞转移和病理类型无关;而Slug基因相对表达水平与高危型HPV病毒载量呈正相关(r=0.554,P〈0.01)。结论宫颈癌组织中Slug的表达上调,且与宫颈癌的FIGO分期相关,在宫颈癌的发生机制中,可能存在Slug和高危型HPV的协同作用。 展开更多
关键词 SLUG基因 宫颈癌 上皮-间质转化 人乳头瘤病毒
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靶向Slug基因诱导PUMA上调增强AsPC-1细胞对γ射线的敏感性研究 被引量:3
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作者 张克君 唐立岷 +4 位作者 焦学龙 张炳远 孙传东 卢云 曹红诗 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期410-413,共4页
目的 探讨siRNA干扰Slug基因表达对胰腺癌AsPC-1细胞γ射线敏感性的影响.方法 以0、10、50、100感染复数(MOI)的rAAV-EGFP-Slug-siRNA(Slug-siRNA)转染AsPC-1细胞72 h,免疫组织化学法和Western blotting检测转染前后细胞内Slug和PUM... 目的 探讨siRNA干扰Slug基因表达对胰腺癌AsPC-1细胞γ射线敏感性的影响.方法 以0、10、50、100感染复数(MOI)的rAAV-EGFP-Slug-siRNA(Slug-siRNA)转染AsPC-1细胞72 h,免疫组织化学法和Western blotting检测转染前后细胞内Slug和PUMA表达.采用4 Gy γ射线细胞进行照射,MTT比色法和Hoechst 33342和PI双染法检测对照组、转染组(MOI 50)、照射组、转染(MOI 50)+照射组细胞存活率和凋亡率,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,Giemsa染色观察细胞形态.结果 细胞受到MOI为10、50、100作用72 h后,Slug蛋白表达相对值分别为0.831±0.14、0.546±0.12和0.178±0.08,明显低于对照组1.17±0.152,差异有统计学意义(F=4.992,P<0.05);而细胞受到MOI为10、50、100作用72 h,PUMA蛋白表达相对值分别为0.325±0.07、0.593±0.11和0.978±0.12,明显高于对照组0.143±0.04,差异有统计学意义(F=4.324,P<0.05);转染(MOI 50)+照射组细胞增殖抑制率为(78.76±9.36)%,明显高于转染组和单独射线照射组[(43.68±6.71)%和(19.25±3.72)%],差异有统计学意义(F=5.056,P<0.05).另外,转染(MOI 50)+照射组细胞的凋亡现象较其他组更加明显.结论 siRNA干扰Slug基因表达能够解除Slug对PUMA的抑制,增强胰腺癌细胞对γ射线的敏感性. 展开更多
关键词 SLUG基因 干扰 PUMA基因 放射敏感性
靶向Slug基因腺相关病毒载体的构建及其抑制视网膜母细胞瘤细胞生长的体外研究 预览 被引量:3
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作者 王鲜 王旭 欧树安 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2010年第7期644-648,共5页
目的构建并制备携带目的基因的rAAV-EGFP-Slug-siRNA病毒载体。方法首先构建pDC316-EGFP-Slug-siRNA质粒,以PCR鉴定正确的pDC316-EGFP-Slug-siRNA克隆为模板扩增EGFP-Slug-siRNA片段,EcoRI和SalI双酶切后回收PCR产物。酶切pSNAV2.0-LacZ... 目的构建并制备携带目的基因的rAAV-EGFP-Slug-siRNA病毒载体。方法首先构建pDC316-EGFP-Slug-siRNA质粒,以PCR鉴定正确的pDC316-EGFP-Slug-siRNA克隆为模板扩增EGFP-Slug-siRNA片段,EcoRI和SalI双酶切后回收PCR产物。酶切pSNAV2.0-LacZ-α载体质粒,并与上述产物进行连接。转化感受态大肠杆菌DH5α,得到重组质粒pSNAV2.0-EGFP-Slug-siRNA,酶切和测序对其进行鉴定。建立载体细胞株BHK/Slug-siRNA,大规模制备rAAV2-EGFP-Slug-siRNA并对其纯化、鉴定和滴度测定。将体外培养的视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)细胞转染rAAV-EGFP-Slug-siRNA和pSNAV2.0-EGFP空载体。鸡胚绒毛尿囊膜实验检测血管生成,MTT比色法检测细胞存活率,建立鸡胚绒毛尿囊移植瘤。结果携带编码靶向Slug的小发夹状干扰RNA序列的腺相关病毒载体质粒pSNAV2.0-EGFP-Slug-siRNA,经PCR、酶切和测序鉴定,质粒构建正确。将构建成功的载体质粒与重组Ⅰ型单纯疱疹病毒HSV1-rc/UL2共转染包装细胞BHK-2,成功复制和包装出重组腺相关病毒rAAV2-EGFP-Slug-siRNA,经检测目的片段插入成功,滴度为90.21×109puf。Slug-siRNA有效抑制RB细胞内Slug表达后,肿瘤血管密度明显降低,血管生成被抑制,细胞存活率明显降低。实体瘤血管生成和生长受到抑制。结论成功制备出高滴度的携带目的基因的rAAV-EGFP-Slug-siRNA病毒载体。干扰Slug可抑制肿瘤血管生成,抑制RB细胞的生长增殖。 展开更多
关键词 SLUG基因 干扰 腺相关病毒 视网膜母细胞瘤 增殖 血管生成
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RNA沉默Slug基因对人乳腺癌细胞株MCF-7侵袭及血管生成的影响 被引量:3
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作者 沈仕兴 王齐全 《中国妇幼保健》 CAS 北大核心 2010年第17期2412-2415,共4页
目的:研究Slug-shRNA-1干扰Slug基因对MCF-7侵袭潜力及诱导血管内皮细胞形成管腔能力的影响。方法:通过体外侵袭模型,测定MCF-7通过Slug-shRNA-1作用于Slug基因后穿透Matrigel的潜力;应用MCF-7与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)双室联合培... 目的:研究Slug-shRNA-1干扰Slug基因对MCF-7侵袭潜力及诱导血管内皮细胞形成管腔能力的影响。方法:通过体外侵袭模型,测定MCF-7通过Slug-shRNA-1作用于Slug基因后穿透Matrigel的潜力;应用MCF-7与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)双室联合培养技术,观察MCF-7通过Slug-shRNA-1作用于Slug基因后诱导HUVEC形成管腔能力的影响。结果:siRNA-Slug作用于Slug基因后能明显降低MCF-7穿透Matrigel的能力(P〈0.05),抑制MCF-7诱导HUVEC形成管腔样结构的能力(P〈0.05)。结论:Slug-shRNA-1作用于Slug基因后能明显降低MCF-7的侵袭潜力,抑制MCF-7诱导管腔形成能力。 展开更多
关键词 人乳腺癌细胞 RNA干扰 SLUG基因 侵袭 血管形成
Slug—siRNA干扰Slug基因表达对胰腺癌的抑制作用 预览 被引量:4
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作者 欧树安 张克君 +1 位作者 严明总 王齐全 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2009年第17期1713-1719,共7页
目的:研究携带Slug-siRNA的rAAV对裸鼠体内胰腺癌的作用.方法:建立人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,2wk后随机将建模成功的裸鼠分为3组,每组6只.构建携带Slug-siRNA的rAAV载体,采用瘤体内多点注射的方法,阴性对照组裸鼠按1×10^... 目的:研究携带Slug-siRNA的rAAV对裸鼠体内胰腺癌的作用.方法:建立人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,2wk后随机将建模成功的裸鼠分为3组,每组6只.构建携带Slug-siRNA的rAAV载体,采用瘤体内多点注射的方法,阴性对照组裸鼠按1×10^9puf(50μL)标准注射rAAV-EGFP,空白对照组裸鼠注射等量生理盐水,实验组裸鼠按1×10^9puf(50μL)标准注射rAAV2-EGFP—slugsiRNA.只注射1次.观察裸鼠的一般情况,摄食,活动能力,每周用电子天平秤体质量,绘制裸鼠生长曲线.治疗6wk后二氧化碳吸入法处死裸鼠,切取肿瘤称质量:免疫组织化学SP法检测slug蛋白的表达,TUNEL检测皮下移植瘤细胞凋亡,透射电镜检测细胞超微结构.结果:3组裸鼠分别接受不同的处理后,在开始的2wk皮下移植瘤的生长无明显差别,2wk以后.实验组裸鼠皮下移植瘤的体积增长明显滞后于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义(P〈0.05).治疗6wk后,实验组裸鼠皮下移植瘤的质量明显轻于阴性对照组和空白对照组差异有统计学意义(3.26±0.48gvs7.56±1.25g,7.50±1.23g,均P〈0.05).实验组裸鼠皮下移植瘤的AI值明显高于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义(0.27±0.06vs0.024±0.01,0.025±0.01,均P〈0.05);买验组的抑瘤率明显高于阴性对照组,差异有统计学差异(71.4%vs0.04%,P〈0.01).透射电镜下,实验组肿瘤细胞可见细胞器结构模糊,核固缩,染色质边集等现象.免疫组织化学检测示实验组Slug表达明显减少.结论:Slug基因被有效沉默,Slug基因沉默后促进细胞凋亡,抑制胰腺癌实体瘤增殖和生长. 展开更多
关键词 Slug—siRNA 胰腺癌 基因治疗 免疫组织化学
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siRNA干扰Slug基因表达对胰腺癌BxPC-3细胞放射敏感性的影响 预览 被引量:5
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作者 王齐全 魏小斌 郑健超 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2009年第11期1079-1084,共6页
目的: 探讨siRNA干扰Slug基因表达对BxPC-3细胞γ射线敏感性的影响.方法:制备携带有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的siRNA-Slug质粒载体, 用脂质体转染法将siRNA-Slug(实验组)、pGCL-GFP(阴性对照)导入BxPC-3细胞(空白对照组), G... 目的: 探讨siRNA干扰Slug基因表达对BxPC-3细胞γ射线敏感性的影响.方法:制备携带有绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的siRNA-Slug质粒载体, 用脂质体转染法将siRNA-Slug(实验组)、pGCL-GFP(阴性对照)导入BxPC-3细胞(空白对照组), G418筛选阳性细胞, 获得稳定转染的阳性克隆. 将转染载体的BxPC-3阳性克隆细胞和未转染载体的BxPC-3细胞采用60Co γ射线对其进行照射3 Gy. RT-PCR和Western blot检测不同组细胞经γ射线后的Slug、PUMA表达, MTT检测细胞生长抑制, 流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡. 结果: 实验组细胞内Slug基因被有效沉默; 实验组细胞内PUMA蛋白和PUMA mRNA的相对值明显高于对照组(0.98±0.15 vs 0.32±0.08, 1.03±0.16 vs 0.38±0.08, 均P〈0.05). 实验组细胞生长抑制率和凋亡率分别高于对照组(37.46%±9.63% vs 2.13%±0.12%, 32.4%±9.5% vs 3.47%±0.18%, 均P〈0.05). 实验组细胞受到γ射线作用后, PUMA mRNA和PUMA蛋白表达明显增加, 分别为1.26±0.18和1.23±0.18, 生长抑制率和凋亡率增加, 分别为78.4%±18.5%和73.3%±17.4%, 与射线作用的对照组和阴性对照组比, 差异均有统计学意义(均P〈0.01). 结论:siRNA干扰Slug基因后, 解除Slug对PUMA基因的抑制, 增强BxPC-3对γ射线的敏感性. 展开更多
关键词 胰腺癌 P53正向凋亡上调因子 SLUG基因 RNA干扰 放射治疗
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rAAV2-slug-siRNA对原位胰腺癌移植瘤转移和血管生成影响的实验研究 预览 被引量:2
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作者 陈俭云 崔海宁 +1 位作者 王正文 张克君 《海南医学院学报》 CAS 2012年第1期 5-8,11,共5页
目的:研究slug基因的RNA干扰重组腺病毒载体(rAAV2-slug-siRNA)对原位胰腺癌移植瘤的转移和血管生成的影响。方法:建立胰腺癌细胞株AsPC-1裸鼠原位胰腺癌移植瘤模型,随机分成3组,每组8只,分为空白对照组(腹腔注射生理盐水)、阴性... 目的:研究slug基因的RNA干扰重组腺病毒载体(rAAV2-slug-siRNA)对原位胰腺癌移植瘤的转移和血管生成的影响。方法:建立胰腺癌细胞株AsPC-1裸鼠原位胰腺癌移植瘤模型,随机分成3组,每组8只,分为空白对照组(腹腔注射生理盐水)、阴性对照组(腹腔注射rAAV2-GFP)、实验组(腹腔注射rAAV2-slug-siRNA)。10周后利用CO2麻醉法处死裸鼠,观察原位胰腺癌移植瘤的重量,抑瘤率,肝、胃肠、腹腔转移,腹水等情况,及肿瘤细胞微血管密度(MVD)。RT-PCR检测移植瘤的slug mR-NA表达,Western blot检测slug蛋白的表达。结果:胰腺癌细胞株AsPC-1裸鼠原位胰腺癌移植瘤模型建立成功,成瘤率100%。实验组原位胰腺癌移植瘤瘤重明显低于阴性对照组(P〈0.05),抑瘤率为70.83%。阴性对照组诱发的裸鼠胰腺癌质地硬,肿块向四周浸润并形成癌性粘连,与阴性对照组相比,实验组腹膜、肝、毗邻脏器转移率和形成腹水率均明显下降(P〈0.05)。实验组MVD明显少于阴性对照组(P〈0.05),slug mRNA相对表达量(RT-PCR)和slug蛋白相对表达量(Western blot)明显低于阴性对照组(P〈0.05)。结论:rAAV2-slug-siRNA可能通过抑制肿瘤血管生成而抑制原位胰腺癌移植瘤转移。 展开更多
关键词 胰腺癌 slug基因的RNA干扰重组腺病毒载体 移植瘤转移 血管生成
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