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内质网应激对大鼠肝星状细胞HSC-T6活化的影响 预览
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作者 史晓燕 范妤 +3 位作者 段丽芳 闫曙光 李京涛 席奇 《山西医科大学学报》 CAS 2019年第8期1054-1059,共6页
目的探索内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)作用对肝星状细胞活化的影响及可能机制。方法利用衣霉素(tunicamycin,Tun)对正常培养的大鼠肝星状细胞HSC-T6进行处理,处理浓度分别为0(空白对照组),0.1,0.5,1.0,2.0,4.0μg/ml... 目的探索内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)作用对肝星状细胞活化的影响及可能机制。方法利用衣霉素(tunicamycin,Tun)对正常培养的大鼠肝星状细胞HSC-T6进行处理,处理浓度分别为0(空白对照组),0.1,0.5,1.0,2.0,4.0μg/ml。处理24 h,收集细胞,提取RNA和蛋白质,分别利用real-time PCR和Western blot检测内质网应激相关基因分子伴侣葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、CCAAT增强子结合同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding homologous protein,CHOP),肝纤维化相关基因α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、组织金属蛋白酶抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinases 1,TIMP1)、Ⅰ型胶原蛋白(collagen typeⅠalpha 1,Col1A1),及TGF-β/Smad通路相关基因TGF-β1、Smad4在RNA转录或蛋白表达水平的变化。结果real-time PCR检测结果表明,与空白对照组相比,Tun处理能够显著上调内质网应激相关基因Grp78、CHOP的转录水平(P<0.01);肝纤维化相关基因α-SMA、TIMP1的转录水平在Tun浓度为2.0μg/ml最高,但Col1A1的转录水平在Tun处理后有所下降(P<0.01或P<0.05);TGF-β/Smad通路相关基因TGF-β1在Tun浓度为2.0μg/ml和4.0μg/ml显著上升(P<0.01或P<0.05)。Western blot检测表明,Tun处理后,与空白对照相比内质网应激相关基因Grp78、CHOP的蛋白水平显著升高(P<0.01或P<0.05);α-SMA的蛋白水平在Tun浓度为1.0μg/ml和2.0μg/ml时明显上调(P<0.01或P<0.05);TGF-β1/Smad通路相关基因Smad4在Tun处理后亦明显上调(P<0.01或P<0.05)。结论内质网应激可促进肝星状细胞的活化,其机制可能与TGF-β1/Smad信号通路相关。 展开更多
关键词 内质网应激 肝星状细胞 HSC-T6 衣霉素
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自噬在内质网应激预处理减轻缺血再灌注心肌损伤中的作用
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作者 高鲁方 周涛 +4 位作者 杨列红 冯超 李遂宁 向道康 厉忠逵 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1076-1079,共4页
目的观察自噬在小剂量衣霉素(TM)诱导内质网应激(ERS)预处理减轻缺血再灌注心肌损伤中的作用。方法使用数字表法将50只成年雄性SD大鼠随机分为5组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、I/R+衣霉素处理组(TM组,模型建立前30min腹腔注... 目的观察自噬在小剂量衣霉素(TM)诱导内质网应激(ERS)预处理减轻缺血再灌注心肌损伤中的作用。方法使用数字表法将50只成年雄性SD大鼠随机分为5组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、I/R+衣霉素处理组(TM组,模型建立前30min腹腔注射TM)、I/R+TM处理+3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理1组(3-MA-1组,模型建立前30min腹腔注射TM、静脉注射自噬抑制剂3-MA);I/R+衣霉素处理+3-MA处理2组(3-MA-2组,模型建立前30min腹腔注射TM、再灌注时静脉注射3-MA);各组TM按0.6mg/kg体重、3-MA按1mg/kg体重给药。使用结扎左冠状动脉前降支并再灌注的方法建立I/R模型。在开胸后、再灌注2h时通过颈动脉取血,比色法检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)活性;再灌注2h后处死动物摘出心脏,原位缺口末端标记法(TUNEL)法观察心肌细胞凋亡情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测自噬蛋白Beclin-1和微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达。使用方差分析比较各组CK-MB、LDH、细胞凋亡及自噬蛋白的表达。结果CK-MB、LDH活性在再灌注2h时,TM组较I/R组低,差异有统计学意义(t=2.672、2.834,P<0.05);3-MA-1组与I/R组比较差异无统计学意义(t=1.232、1.275,P>0.05)。Sham、I/R、TM、3-MA-1和3-MA-2组细胞凋亡指数依次为(2.5±0.3)%、(27.9±3.1)%、(13.4±1.6)%、(26.4±2.9)%和(9.4±0.8)%。TM、3-MA-2组较I/R组低,差异有统计学意义(t=3.695、3.587,P<0.05);3-MA-1组与I/R组比较,差异无统计学意义(t=0.673,P>0.05)。再灌注2h时I/R、TM、3-MA-1和3-MA-2组Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ与Sham组比较均增高,差异有统计学意义(Beclin-1比较:t=4.047、3.773、3.738、2.542,P<0.05,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比较:t=3.447、3.363、3.169、2.527,P<0.05),TM、3-MA-1、3-MA-2组均低于I/R组,差异有统计学意义(Beclin-1比较:t=2.671、3.150、3.357,P<0.05;LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比较:t=2.479、3.263、3.351,P<0.05)。结论心肌缺血再灌注损伤过程中自噬起重要作用,� 展开更多
关键词 心肌缺血再灌注损伤 内质网应激 预处理 衣霉素 自噬
内质网应激通过影响线粒体功能致心肌结构重构的研究 预览
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作者 何锦丽 宫孟琦 +1 位作者 刘洋 刘彤 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2019年第4期416-420,共5页
目的探究内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)是否通过影响线粒体功能,从而导致心肌重构的机制。方法选择30只8周龄雄性SD大鼠给药前随机分为对照组、衣霉素组、4-苯基丁酸(4-PBA)组,每组10只。衣霉素组腹腔注射内质网应激激... 目的探究内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)是否通过影响线粒体功能,从而导致心肌重构的机制。方法选择30只8周龄雄性SD大鼠给药前随机分为对照组、衣霉素组、4-苯基丁酸(4-PBA)组,每组10只。衣霉素组腹腔注射内质网应激激动剂衣霉素;4-PBA组在注射衣霉素基础上给予灌胃内质网应激抑制剂4-PBA;对照组给予腹腔注射生理盐水。连续给药4周后,采用超声心动图检测左心室舒张早期血流峰值(E)/左心室舒张晚期血流峰值(A),检测大鼠心肌组织增强子结合蛋白环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(CHOP)、线粒体融合蛋白2(MFN2)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1),计算胶原容积分数。结果衣霉素组胶原容积分数、CHOP以及TGB-β1表达明显高于对照组和4-PBA组(P<0.05,P<0.01),E/A明显低于对照组和4-PBA组(0.67±0.11 vs 1.12±0.06和1.03±0.05),且MFN2明显低于对照组(0.19±0.09 vs 1.44±0.41),差异有统计学意义(P<0.05)。结论ERS影响其交联细胞器-线粒体的功能,可能是其致心肌结构重构的机制之一。 展开更多
关键词 内质网 线粒体 心室重构 衣霉素
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玉米黄素对衣霉素诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用 预览
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作者 魏俊 赵范范 +3 位作者 刘馨君 劳凤学 黄汉昌 商迎辉 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第7期163-168,共6页
研究玉米黄素对衣霉素诱导损伤的神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的保护作用。实验分为空白组、损伤组(模型组)、2、5、10 μmol/L玉米黄素保护组。用衣霉素(tunicamycin,TM)建立SH-SY5Y细胞损伤模型,噻唑蓝测定细胞存活率,试剂盒法测定培养... 研究玉米黄素对衣霉素诱导损伤的神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的保护作用。实验分为空白组、损伤组(模型组)、2、5、10 μmol/L玉米黄素保护组。用衣霉素(tunicamycin,TM)建立SH-SY5Y细胞损伤模型,噻唑蓝测定细胞存活率,试剂盒法测定培养液中的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平。结果显示:TM质量浓度在2 μg/mL以上时,可显著降低SH-SY5Y细胞活性(P<0.01);与TM损伤组相比,2~10 μmol/L玉米黄素预处理可显著提高细胞存活率(P<0.05),降低LDH的释放率,先用TM处理30 min后再加2、5、10 μmol/L的玉米黄素处理24 h的玉米黄素后处理组结果相同。因此,TM通过诱导内质网应激可引起细胞损伤,玉米黄素能够减轻该损伤作用,并且在一定程度上可逆转TM引起的损伤。 展开更多
关键词 玉米黄素 衣霉素 内质网应激 SH-SY5Y细胞
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CD147抑制剂衣霉素及激活剂血管紧张素Ⅱ对胆囊癌细胞的影响
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作者 赵浩永 刘超 +4 位作者 刘新江 张俊昶 胡矩强 王罗艺 庞志刚 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第5期851-854,共4页
目的 观察CD147抑制剂衣霉素及激活剂血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人胆囊癌GBC-SD细胞的增殖、侵袭、CD147和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,探讨其对GBC-SD细胞的作用机制.方法 用不同浓度的衣霉素(5、10、20 μl/ml)、AngⅡ(5、1... 目的 观察CD147抑制剂衣霉素及激活剂血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人胆囊癌GBC-SD细胞的增殖、侵袭、CD147和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,探讨其对GBC-SD细胞的作用机制.方法 用不同浓度的衣霉素(5、10、20 μl/ml)、AngⅡ(5、10、20 μl/ml)及联合用药(衣霉素10 μl/ml+ AngⅡ20 μl/ml)干预GBC-SD细胞,应用细胞计数试剂盒(CCK-8)法观察其对细胞增殖的影响,Western blot法检测CD147及MMP-9表达,Transwell小室法检测细胞侵袭能力.结果 (1)衣霉素组与对照组比较:各实验组细胞增殖率与对照组细胞增殖率比较[(88.17±8.36)%比(100.00±0.00)%,P =0.005;(85.35±6.42)%比(100.00 ±0.00)%,P =0.003;(70.15±6.89)%比(100.00±0.00)%,P=0.000],逐渐降低,呈时间及浓度依赖性;CD147的K值与对照组比较(0.75±0.04比0.88±0.07,P=0.046;0.71 ±0.04比0.88 ±0.07,P=0.009)、MMP-9的K值与对照组比较(0.84 ±0.04比1.10 ±0.08,P=0.004;0.67±0.10比1.10±0.08,P=0.000)均降低,呈浓度依赖趋势;实验组与对照组比较(43.00±10.98比67.65±8.65,P=0.034;32.46±7.71比67.65 ±8.65,P=0.005)侵袭能力降低,与剂量呈反比趋势.(2) AngⅡ组与对照组比较:各实验组细胞增殖率与对照组细胞增殖率比较[(104.32±5.05)%比(100.00±0.00)%,P=0.056;(108.25±6.57)%比(100.00±0.00)%,P=0.019;(115.50±8.65)%比(100.00±0.00)%,P=0.003]逐渐升高,呈时间及浓度依赖性;CD147的K值与对照组比较(1.02 ±0.08比0.88±0.07,P=0.039;1.08±0.05比0.88 ±0.07,P=0.005)、MMP-9的K值与对照组比较(1.28±0.06比1.10 ±0.08,P=0.034;1.57±0.07比1.10 ±0.08,P=0.001)均升高,呈浓度依赖趋势;实验组与对照组比较(98.00±12.56比67.65±8.65,P=0.013),侵袭能力增加.(3)联合用药:在细胞侵袭、CD147表达、MMP-9表达方面与对照组比较,差异无统计学意义.结论 衣霉素可以抑制胆囊癌细胞增殖及侵袭、 展开更多
关键词 胆囊癌 衣霉素 血管紧张素Ⅱ CD147 基质金属蛋白酶-9
N-糖基化对重组木聚糖酶XynA酶学特性的影响 预览
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作者 张笑雨 高思宇 +1 位作者 李秀婷 杨然 《食品工业科技》 CSCD 北大核心 2018年第11期137-143,160共8页
为实现木聚糖酶的高效表达,扩大实际生产应用,本实验将木聚糖酶基因xynA在毕赤酵母中进行重组表达,同时采用糖基化抑制剂衣霉素处理毕赤酵母细胞,以此来探讨N-糖基化对木聚糖酶XynA酶学性质的影响。结果表明,SDS—PAGE电泳图谱显... 为实现木聚糖酶的高效表达,扩大实际生产应用,本实验将木聚糖酶基因xynA在毕赤酵母中进行重组表达,同时采用糖基化抑制剂衣霉素处理毕赤酵母细胞,以此来探讨N-糖基化对木聚糖酶XynA酶学性质的影响。结果表明,SDS—PAGE电泳图谱显示木聚糖酶XynA发生了N-糖基化修饰,分子量约为45kDa,酶活为406.6U/mL,最适pH及反应温度分别为5.0和65℃;而添加不同浓度衣霉素处理后的木聚糖酶最适pH不变,最适反应温度下降5℃,随着衣霉素浓度的增加,去糖基化的木聚糖酶酶活力、分泌量及温度稳定性均有所下降,且当衣霉素添加浓度为15μg/mL时,剩余酶活为53.6%。去糖基化的木聚糖酶耐受胃蛋白酶的能力较糖基化的有所增强,Na+、K+、Li+、Ca2+、Al2+、EDTA相对于糖基化的木聚糖酶表现出了一定的激活作用。以上结果说明N-糖基化作为一种重要的翻译后修饰对木聚糖酶XynA的分泌及热稳定性有促进作用。 展开更多
关键词 N-糖基化 木聚糖酶 衣霉素 酶学性质
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谷氨酰胺对产生内质网应激反应的A549细胞JNK,pJNK,CHOP,GRP78表达水平的影响
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作者 李红子 金正勇 +1 位作者 金梅花 张有辰 《延边大学医学学报》 CAS 2018年第2期91-93,共3页
[目的]探讨谷氨酰胺对产生内质网应激反应的A549细胞的保护作用.[方法]取A549细胞进行培养,分为5个组,其中空白对照组培养液中只有A549细胞,衣霉素组培养液中加入A549细胞和衣霉素1mg/L,GLN4组培养液中加入A549细胞、衣霉素1mg/L和4mmo... [目的]探讨谷氨酰胺对产生内质网应激反应的A549细胞的保护作用.[方法]取A549细胞进行培养,分为5个组,其中空白对照组培养液中只有A549细胞,衣霉素组培养液中加入A549细胞和衣霉素1mg/L,GLN4组培养液中加入A549细胞、衣霉素1mg/L和4mmol/L谷氨酰胺,GLN8组培养液中加入A549细胞、衣霉素1mg/L和8mmol/L谷氨酰胺,GLN12组培养液中加入A549细胞、衣霉素1mg/L和12mmol/L谷氨酰胺.利用Western blot方法检测各组细胞培养12h后的JNK,pJNK,CHOP及GRP78表达水平.[结果]与空白对照组比较,衣霉素组pJNK,CHOP及GRP78表达水平均明显升高(P〈0.001),而JNK表达水平未见明显改变(P〉0.05),提示衣霉素诱导A549细胞产生了内质网应激.与衣霉素组比较,GLN4,GLN8及GLN12组pJNK,CHOP,GRP78表达水平均明显降低(P〈0.05).[结论]谷氨酰胺对产生内质网应激的A549细胞具有保护作用. 展开更多
关键词 内质网应激 A549细胞 谷氨酰胺 JNK pJNK CHOP/GADD153 GRP78/Bip 衣霉素
CHOP双重调控衣霉素诱导的DU-145细胞凋亡及自噬的研究 预览
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作者 雷艳 詹世淮 +5 位作者 陈俊秋 董会月 林榕 陈津 王水良 黄梁浒 《中华细胞与干细胞杂志(电子版)》 2018年第5期257-263,共7页
目的研究内质网应激分子CHOP调控细胞凋亡与自噬的作用和机制。方法利用衣霉素诱导DU-145细胞产生内质网应激,Western Blot法检测内质网应激相关分子Grp78、Grp94、p-eIF2α和CHOP及自噬蛋白LC3Ⅱ、Atg5和Beclin1的表达;用流式细胞术检... 目的研究内质网应激分子CHOP调控细胞凋亡与自噬的作用和机制。方法利用衣霉素诱导DU-145细胞产生内质网应激,Western Blot法检测内质网应激相关分子Grp78、Grp94、p-eIF2α和CHOP及自噬蛋白LC3Ⅱ、Atg5和Beclin1的表达;用流式细胞术检测细胞凋亡水平;沉默CHOP基因,用Western Blot法检测凋亡蛋白PARP、Caspase3的表达,流式细胞术检测细胞凋亡;并利用免疫荧光检测自噬标志性蛋白LC3B的表达。结果衣霉素诱导DU-145细胞内质网应激能诱导一定程度的细胞凋亡,衣霉素处理8、12、24h的细胞凋亡率分别为3.27﹪±1.02﹪,8.97﹪±0.71﹪和11.67﹪±1.41﹪,处理12h及24h的细胞凋亡率与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01)。同时也能通过抑制PI3K/AKt/mTOR信号通路激活DU-145细胞自噬。CHOP基因沉默抑制细胞凋亡,shCtrl组细胞凋亡率为32.17﹪±3.93﹪,shCHOP-1组细胞凋亡率为23.53﹪±3.41﹪,两组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。且CHOP基因沉默能促进细胞自噬分子LC3B的表达。结论衣霉素诱导DU-145细胞内质网应激状态下,CHOP在细胞凋亡与自噬之间发挥双重调控作用。 展开更多
关键词 内质网应激 细胞自噬 细胞凋亡 DU-145 衣霉素
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棉花Bax inhibitor-1影响内质网胁迫介导的细胞死亡的研究 预览
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作者 张景霞 霍雪寒 +2 位作者 王芙蓉 张传云 张军 《山东农业科学》 2018年第5期1-6,共6页
Bax inhibitor-1(BI-1)是调控内质网胁迫(endoplasmic reticulum stress,ER stress)介导的细胞死亡的关键因子,在植物耐逆中具有重要作用。目前,棉花BI-1(GhBI-1)的耐逆功能及其调控细胞死亡的相关报道较少。在本研究中,采用ER st... Bax inhibitor-1(BI-1)是调控内质网胁迫(endoplasmic reticulum stress,ER stress)介导的细胞死亡的关键因子,在植物耐逆中具有重要作用。目前,棉花BI-1(GhBI-1)的耐逆功能及其调控细胞死亡的相关报道较少。在本研究中,采用ER stress专一性诱导毒素——衣霉素(tunicamycin,TM)对棉花幼苗进行胁迫处理,实时定量PCR结果表明,GhBI-1的TM诱导表达具有组织特异性,根GhBI-1对TM的响应更加强烈。通过TM抗性试验及细胞死亡的分析发现,GhBI-1的表达提高了拟南芥的TM抗性,减缓了ER stress介导的细胞死亡。此外,未折叠蛋白反应信号通路中的bZip60转录因子基因的表达受GhBI-1的调控。 展开更多
关键词 BAX inhibitor-1 内质网胁迫 细胞死亡 棉花 拟南芥 衣霉素
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衣霉素对转化生长因子β_1刺激的肝星状细胞增殖、凋亡及caspase-9蛋白表达的影响 被引量:2
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作者 王铭 闫宇 +2 位作者 李雅楠 刘芳 肖永红 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期40-43,共4页
目的研究经转化生长因子β_1(TGF-β_1)刺激后,内质网应激(ERS)诱导剂衣霉素对肝星状细胞(HSC)增殖、凋亡及caspase-9蛋白的影响。方法将液氮冻存的HSC株复苏,进行体外培养,同步化后分为5组:空白组、模型组(TGF-β_1组)、实验... 目的研究经转化生长因子β_1(TGF-β_1)刺激后,内质网应激(ERS)诱导剂衣霉素对肝星状细胞(HSC)增殖、凋亡及caspase-9蛋白的影响。方法将液氮冻存的HSC株复苏,进行体外培养,同步化后分为5组:空白组、模型组(TGF-β_1组)、实验组(衣霉素组,0.5,1,2 mg·L~(-1))。空白组加入空白培养基处理48 h,其余4组用5μg·L~(-1)TGF-β_1刺激24 h后加入不同剂量衣霉素处理24 h,MTT法检测HSC的增殖情况,透射电子显微镜观察细胞超微结构的改变,吖啶橙-碘化丙啶(AO/PI)双染法检测细胞凋亡情况,Western blot检测caspase-9蛋白的表达。结果模型组HSC的增殖活性是实验组的(0.06±0.04),(0.14±0.06),(0.19±0.04)倍;AO/PI双染法和透射电子显微镜观察显示,随着衣霉素剂量的增加,HSC凋亡越显著。实验组caspase-9蛋白表达是模型组的(0.05±0.02),(0.08±0.02),(0.22±0.01)倍。结论衣霉素可抑制活化的HSC增殖,促进其凋亡,并上调caspase-9蛋白的表达。 展开更多
关键词 衣霉素 肝星状细胞 增殖 凋亡 CASPASE-9
内质网应激对膝骨关节炎大鼠关节软骨细胞的影响 预览 被引量:2
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作者 吴浩 孟志超 +8 位作者 曹永平 潘利平 周星彤 杨昕 刘恒 王瑞 崔云鹏 李翔 李卓扬 《中国组织工程研究》 北大核心 2017年第16期2502-2508,共7页
背景:研究认为,内质网应激与糖尿病、扩张性心肌病、神经退行性疾病等许多慢性疾病的发生相关,而它与骨关节炎的发生也密切相关。目的:分析内质网应激对大鼠关节软骨细胞生存状态的影响,以及内质网应激在体内对大鼠骨关节炎发生发展... 背景:研究认为,内质网应激与糖尿病、扩张性心肌病、神经退行性疾病等许多慢性疾病的发生相关,而它与骨关节炎的发生也密切相关。目的:分析内质网应激对大鼠关节软骨细胞生存状态的影响,以及内质网应激在体内对大鼠骨关节炎发生发展的影响。方法:在体外分离培养大鼠关节软骨细胞,应用10 mg/L衣霉素建立内质网应激模型。Western Blot检测内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78和C/EBP同源蛋白的表达,并分别应用CCK-8和Annexin V-FITC(流式法)检测软骨细胞增殖活性及细胞凋亡情况。体内实验选取SD大鼠15只,行前交叉韧带切断、内侧半月板切除术制作膝关节骨关节炎模型,于关节腔分别注射内质网应激激动剂衣霉素、抑制剂牛磺熊去氧胆酸和空白对照PBS,4周后应用苏木精-伊红染色评估各组关节退变情况。结果与结论:(1)应用衣霉素刺激大鼠关节软骨细胞后,葡萄糖调节蛋白78和C/EBP同源蛋白的表达均显著升高;同时,软骨细胞的细胞增殖活性在衣霉素刺激后逐渐下降,而细胞凋亡率则明显升高;(2)在大鼠骨关节炎模型中,大体标本及苏木精-伊红染色结果均显示,关节腔注射衣霉素组骨关节炎进展加速,而关节腔注射牛磺熊去氧胆酸组骨关节炎进展减慢;(3)结论:内质网应激的过度激活导致体外培养的大鼠关节软骨细胞增殖活性降低及细胞凋亡增加,这可能是导致骨关节炎发生发展的重要机制之一;应用内质网应激抑制剂牛磺熊去氧胆酸可以有效地减少内质网应激导致的骨关节炎的进展。 展开更多
关键词 内质网 软骨细胞 骨关节炎 衣霉素 脱氧胆酸 组织工程 组织构建 内质网应激 凋亡 衣霉素 牛磺熊去氧胆酸 体外实验 体内实验 北京市自然科学基金
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内质网激动剂调控PI3K/AKT/mTOR通路诱导人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡 预览 被引量:3
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作者 李学兆 《癌症进展》 2017年第6期638-641,684共5页
目的检测内质网应激能否通过PI3K/AKT/mTOR通路对人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡产生作用。方法采用MTT法检测不同浓度衣霉素对人小细胞肺癌NCI-H446的细胞毒性,AnnexinⅤ/PI检测药物作用下人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡情况,Western Blo... 目的检测内质网应激能否通过PI3K/AKT/mTOR通路对人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡产生作用。方法采用MTT法检测不同浓度衣霉素对人小细胞肺癌NCI-H446的细胞毒性,AnnexinⅤ/PI检测药物作用下人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡情况,Western Blot检测PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白的表达。结果衣霉素可抑制人小细胞肺癌NCI-H446细胞的活性,且呈时间和浓度依赖性。衣霉素能够激活内质网应激,抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路,使PI3K、AKT、mTOR蛋白磷酸化下调,诱导细胞凋亡。结论内质网激动剂能够调控PI3K/AKT/mTOR通路诱导人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡。 展开更多
关键词 内质网应激 PI3K/AKT/MTOR 小细胞肺癌 凋亡 衣霉素
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TOLL样受体信号转导通路在内质网应激致炎症反应中的作用 预览 被引量:1
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作者 杨思园 李辉 +4 位作者 李鑫 蒋荣猛 马成杰 魏红山 李兴旺 《中华实验和临床感染病杂志(电子版)》 CAS 2017年第3期222-227,共6页
目的探讨TOLL样受体信号转导通路在衣霉素(TM)致人肝癌细胞系HpeG2和人正常肝细胞系L02内质网应激及炎症反应过程中的作用。方法利用实时荧光定量PCR检测衣霉素作用后HepG2和L02细胞中细胞因子IRAK1、TAK1和NF-κB的基因表达水平,利用... 目的探讨TOLL样受体信号转导通路在衣霉素(TM)致人肝癌细胞系HpeG2和人正常肝细胞系L02内质网应激及炎症反应过程中的作用。方法利用实时荧光定量PCR检测衣霉素作用后HepG2和L02细胞中细胞因子IRAK1、TAK1和NF-κB的基因表达水平,利用Western blot检测相应细胞因子的表达水平。结果两种细胞系经TM刺激后,内质网应激标志物GRP78蛋白表达增高;炎症反应标志因子NF-κB在基因水平和蛋白水平表达均呈现增高趋势;TOLL样受体信号转导通路中关键细胞因子IRAK1、TAK1在基因水平和蛋白水平表达呈现增高趋势,差异均具有统计学意义(P均〈0.05)。结论 TM刺激HepG2和L02细胞系之后,可诱导出现内质网应激状态并引起细胞内的炎症反应;在内质网应激致炎症反应过程中伴TOLL样受体信号转导通路的激活,TOLL样受体信号转导通路对其发生、发展可能具有一定的调节作用。 展开更多
关键词 内质网应激 炎症反应 TOLL样受体信号转导通路 衣霉素
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应用OCT对衣霉素诱导视网膜损伤大鼠模型的检测评估 预览
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作者 张博仪 张亚琼 车慧欣 《国际眼科杂志》 CAS 2017年第7期1237-1241,共5页
目的:利用光学相干断层扫描仪(OCT)评价衣霉素损伤的大鼠视网膜形态及功能形态改变。方法:SD大鼠60只,随机分为3组(每组20只):对照组、低剂量组和高剂量组,各组分别应用微量注射器行大鼠眼球玻璃体腔内注射,剂量均为0.3μL,对照... 目的:利用光学相干断层扫描仪(OCT)评价衣霉素损伤的大鼠视网膜形态及功能形态改变。方法:SD大鼠60只,随机分为3组(每组20只):对照组、低剂量组和高剂量组,各组分别应用微量注射器行大鼠眼球玻璃体腔内注射,剂量均为0.3μL,对照组给予9g/L生理盐水、低剂量组给予浓度0.5mg/kg衣霉素、高剂量组给予浓度1.5mg/kg衣霉素进行玻璃体腔内注射。在造模后每天散瞳观察眼底,第1、7、14d通过OCT、眼底照相、眼底荧光、视网膜电图及HE染色观察不同浓度下视网膜各层形态学变化。结果:OCT结果提示衣霉素对视网膜形态及结构有损伤作用,呈现出时间-剂量依赖性;眼底照相结果提示在衣霉素注射2wk后,随着衣霉素浓度的变化,视网膜周边及黄斑区颜色逐渐苍白,视盘区水肿,高剂量组出现视网膜血管变细,视神经萎缩;荧光素造影结果提示:衣霉素注射玻璃体腔2wk后,视网膜血管功能损伤,逐渐出现周边至中央部血管造影剂渗漏;电生理表明,衣霉素诱导的视网膜电图紊乱,a波、b波逐渐地振幅降低,甚至变平,具有明显的统计学意义(P〈0.05);石蜡切片HE染色结果提示衣霉素对视网膜各层的损伤呈现剂量-时间依赖性,与OCT结果相一致。结论:衣霉素可以通过诱导视网膜损伤模拟视网膜疾病模型,OCT可以动态观察视网膜的损伤改变,作为一种非侵入性检查手段对于评价视网膜损伤具有一定积极意义。 展开更多
关键词 衣霉素 视网膜损伤 光学相干断层扫描仪
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内质网应激在大鼠缺血再灌注损伤心肌中的表达 预览
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作者 张腾芳 谢晓勇 +4 位作者 郑宝石 何巍 罗程 黎玉贵 冯旭 《微创医学》 2017年第3期306-308,311共4页
目的探讨内质网应激(ERS)在大鼠缺血再灌注损伤心肌中的表达以及小剂量衣霉素(TM)预处理对缺血再灌注损伤心肌的影响。方法 SD大鼠30只随机分为三组,假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)、衣霉素处理+IR组(TM+IR组),每组1... 目的探讨内质网应激(ERS)在大鼠缺血再灌注损伤心肌中的表达以及小剂量衣霉素(TM)预处理对缺血再灌注损伤心肌的影响。方法 SD大鼠30只随机分为三组,假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)、衣霉素处理+IR组(TM+IR组),每组10只。Sham组单纯开胸,不结扎冠状动脉;IR组开胸,结扎前降支30 min,再灌注2 h;TM+IR组TM腹腔注射0.6 mg/kg,30 min后结扎前降支30 min,再灌注2 h。于开胸后,心肌再灌注2 h抽血,检测肌钙蛋白I(c Tn I)含量,透射电镜观察再灌注2 h心肌的超微结构,检测再灌注2 h心肌的GRP78 mRNA及蛋白表达。结果 IR组和TM+IR组在再灌注2 h时,c Tn I水平均明显上升;IR组心肌超微结构损伤最严重,TM+IR组次之。再灌注2 h后,GRP78 mRNA及蛋白,IR组及TM+IR组明显升高。结论 MIRI可诱导ERS,小剂量TM预处理可减轻MIRI。 展开更多
关键词 心肌缺血再灌注损伤 内质网应激 衣霉素 葡萄糖调节蛋白78
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肝宁方对衣霉素诱导肝细胞内质网应激生存信号分子的影响 预览
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作者 文彬 李福英 +3 位作者 陈然 彭佩纯 李椿莹 邓鑫 《医学研究杂志》 2017年第11期62-65,共4页
目的 研究肝宁方对衣霉素诱导的人肝细胞内质网应激条件下的生存信号分子的影响。方法 将肝细胞分正常组、模型组、治疗组:正常组给予正常大鼠血清培养基培养48h,模型组在正常组基础上给予衣霉素诱导48h,治疗组在模型组基础上给予肝... 目的 研究肝宁方对衣霉素诱导的人肝细胞内质网应激条件下的生存信号分子的影响。方法 将肝细胞分正常组、模型组、治疗组:正常组给予正常大鼠血清培养基培养48h,模型组在正常组基础上给予衣霉素诱导48h,治疗组在模型组基础上给予肝宁方继续培养24h。Western blot法检测各组蛋白ATF6、IRE1α、PERK、GRP78的表达量,分析蛋白表达差异。结果 肝宁方治疗组与衣霉素诱导模型组比较,治疗组内质网应激信号分子的蛋白ATF6、IRE1α、PERK的表达明显减少(P〈0.05);模型组与对照组比较,模型组GRP78、内质网应激信号分子的蛋白ATF6、IRE1α、PERK的表达明显增多(P〈0.05)。结论 衣霉素诱导正常肝细胞后可激活ATF6、IRE1α、PERK及GRP78蛋白的表达,肝宁方对衣霉素诱导内质网应激生存信号分子蛋白ATF6、IRE1α、PERK的表达及内质网应激标记蛋白均有抑制作用,从而达到阻止未折叠蛋白的错误激活、抑制肝细胞凋亡,对肝细胞具有保护作用。 展开更多
关键词 肝宁方 内质网应激 衣霉素 生存信号分子
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SREBP-2沉默抑制衣霉素诱导的软骨细胞内质网应激 预览 被引量:1
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作者 谢静 史栋梁 郭会卿 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1291-1296,共6页
目的:探究固醇调节元件结合蛋白2(SREBP-2)对衣霉素诱导的软骨细胞内质网应激(ERS)的影响。方法:分离人正常软骨细胞和骨关节炎(OA)软骨细胞培养,衣霉素和SREBP-2 siRNA分别处理正常软骨细胞。24 h后,实时荧光定量PCR检测对微小... 目的:探究固醇调节元件结合蛋白2(SREBP-2)对衣霉素诱导的软骨细胞内质网应激(ERS)的影响。方法:分离人正常软骨细胞和骨关节炎(OA)软骨细胞培养,衣霉素和SREBP-2 siRNA分别处理正常软骨细胞。24 h后,实时荧光定量PCR检测对微小RNA-185(miR-185)表达的影响,流式细胞术检测对细胞凋亡的影响,Western blot法检测对SREBP-2、CHOP、p-e IF2α和ATF4等ERS相关蛋白,Bcl-2、Bax和caspase-3等凋亡相关蛋白水平的影响;caspase-3活性试剂盒检测对细胞caspase-3活性的影响。结果:与对照组相比,OA组和衣霉素组SREBP-2表达增加,miR-185表达降低(P〈0.05)。SREBP-2 siRNA转染可明显阻断衣霉素引起的miR-185降低(P〈0.05)。miR-185过表达能够下调SREBP-2蛋白水平(P〈0.05)。与对照组相比,OA组和衣霉素组CHOP、pe IF2α和ATF4的蛋白水平明显上调,Bcl-2表达下调,Bax和caspase-3表达增加(P〈0.05);SREBP-2沉默处理则显著逆转上述蛋白表达(P〈0.05)。细胞凋亡率与上述细胞凋亡相关蛋白的变化趋势一致(P〈0.05)。与衣霉素组相比,SREBP-2 siRNA转染明显下调caspase-3活性,miR-185抑制则明显逆转上述作用(P〈0.05)。结论:SREBP-2沉默可通过上调miR-185抑制衣霉素诱导的软骨细胞ERS和细胞凋亡。 展开更多
关键词 固醇调节元件结合蛋白2 衣霉素 内质网应激 软骨细胞 微小RNA-185
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自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤增强鼻咽癌细胞对放射和化学治疗的敏感性 预览 被引量:3
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作者 宋乐乐 马琳艳 +4 位作者 陈根德 黄莹莹 孙小锦 蒋琛琛 刘浩 《中南大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期9-18,共10页
目的:探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)增强鼻咽癌细胞对放射治疗(放疗)和化学治疗(化疗)敏感性的作用及其相关的分子机制。方法:采用MTT法检测3-MA对细胞的增殖抑制作用;集落克隆形成法检测3-MA对细胞集落... 目的:探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)增强鼻咽癌细胞对放射治疗(放疗)和化学治疗(化疗)敏感性的作用及其相关的分子机制。方法:采用MTT法检测3-MA对细胞的增殖抑制作用;集落克隆形成法检测3-MA对细胞集落克隆形成的影响;Annexin V/PI双染法、线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)、DAPI染色检测细胞凋亡;Western 印迹检测内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、自噬相关蛋白beclin1和微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)表达。结果:不同体积浓度或剂量的顺铂(cisplatin,DDP)、电离辐射(ionizing radiation,IR)、衣霉素(tunicamycin,TM)、3-MA对鼻咽癌细胞HONE-1均具有增殖抑制作用,且随着体积浓度或剂量的增加和作用时间的延长,对HONE-1细胞增殖抑制作用随之增加。经1.00 mmol/L 3-MA预处理细胞后,再次给予6.00 μmol/L DDP,4.00 Gy IR,1.00 μmol/L TM处理,细胞存活率明显降低,均低于单用组,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P〈0.05)。3-MA增强DDP,IR,TM抑制细胞集落克隆形成作用。用6.00 μmol/L DDP或4.00 Gy IR处理HONE-1细胞24 h后,细胞凋亡率分别为5.8%和6.7%,与阴性对照组比较差异无统计学意义(P〉0.05)。JC-1和DAPI染色显示3-MA增强DDP,IR或TM诱导的细胞凋亡作用;Western 印迹结果显示DDP,IR或TM处理组GRP78,beclin1表达呈时间依赖性上调,LC3 I向LC3 II转化,3-MA预处理组beclin1表达明显降低,LC3 I向LC3 II的转化。结论:自噬抑制剂3-MA可增强鼻咽癌细胞对放化疗的敏感性,其机制可能与3-MA抑制内质网应激诱导的自噬所产生的保护作用相关。 展开更多
关键词 鼻咽癌 顺铂 电离辐射 内质网应激 自噬 葡萄糖调节蛋白78 BECLIN1 微管相关蛋白1轻链3 衣霉素
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Roscovitine在衣霉素诱导足细胞损伤中的保护作用 预览
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作者 高翔 张悦 +4 位作者 张爱金 付芃 李佳琳 吴建 刘巍 《天津医药》 CAS 2016年第2期133-137,共5页
目的 应用衣霉素诱导内质网应激(ERS),观察Roscovtine对ERS导致足细胞损伤的保护作用。方法体外培养永生化小鼠足细胞,取37℃分化成熟细胞随机分组:(1)正常对照组、DMSO组及衣霉素Tunicamycin(1.0μmol/L,TM)组,各实验组分别刺激... 目的 应用衣霉素诱导内质网应激(ERS),观察Roscovtine对ERS导致足细胞损伤的保护作用。方法体外培养永生化小鼠足细胞,取37℃分化成熟细胞随机分组:(1)正常对照组、DMSO组及衣霉素Tunicamycin(1.0μmol/L,TM)组,各实验组分别刺激3、6、12 h。(2)正常对照组、Tunicamycin(1.0μmol/L,TM)组及Tunicamycin+Rosco-vitine(20、40μmol/L,TM+ROS)组,各实验组分别刺激12 h。应用流式细胞术及TUNEL法检测足细胞凋亡情况;应用Western blot检测细胞周期素依赖性蛋白激酶5(Cdk5)及ERS标志蛋白GRP78、Caspase-12、CHOP的表达变化。结果 (1)与正常对照组和DMSO组相比,Tunicamycin刺激3、6及12 h后,TM组足细胞凋亡率及Cdk5、GRP78、Caspase-12和CHOP蛋白的表达水平均呈明显的时间依赖性增高(P〈0.05);(2)加入Roscovitine干预后,与TM组相比,TM+ROS(20、40μmol/L)组足细胞凋亡率及GRP78、Caspase-12和CHOP蛋白的表达水平均显著降低(P〈0.05),其干预作用呈现明显的剂量依赖性。结论 Cdk5抑制剂Roscovitine能显著抑制衣霉素诱导的足细胞凋亡,从而发挥细胞保护作用。Roscovitine的足细胞保护作用可能有助于糖尿病肾病的治疗。 展开更多
关键词 足细胞 凋亡 衣霉素 细胞周期素依赖性蛋白激酶5 内质网应激 ROSCOVITINE
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INS-1-3细胞内质网应激伴随 MODY基因通路表达的变化
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作者 刘瑜婷 李世蕊 +1 位作者 王在 肖建中 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第34期2739-2743,共5页
目的:研究INS-1-3细胞(大鼠胰岛素高分泌细胞亚系)经毒胡萝卜素和衣霉素处理后造成内质网应激的基因表达谱变化。方法以正常培养的INS-1-3细胞为对照组,通过毒胡萝卜素( TG组,0.1μmol/L,16 h)和衣霉素( TM组,2.5μg/ml,1... 目的:研究INS-1-3细胞(大鼠胰岛素高分泌细胞亚系)经毒胡萝卜素和衣霉素处理后造成内质网应激的基因表达谱变化。方法以正常培养的INS-1-3细胞为对照组,通过毒胡萝卜素( TG组,0.1μmol/L,16 h)和衣霉素( TM组,2.5μg/ml,16 h)建立内质网应激模型,收集样本进行数字基因表达谱分析,筛选差异表达基因并进行差异基因表达模式聚类分析,基因本体论( GO)功能和pathway富集分析,并通过定量PCR对部分差异表达基因进行验证。结果 TG组和TM组分别与对照组比较,筛选出的差异基因数目分别为57个(其中上调基因45个,下调基因12个)和135个(其中上调基因99个,下调基因36个)。 GO功能显著性富集分析显示,细胞组分主要富集在内质网区域。pathway富集分析显示,共同显著富集的途径包括内质网应激、抗原的加工与提呈、蛋白运输和青少年发病的成人型糖尿病(MODY)通路。结论内质网应激的情况下,MODY信号通路相关转录因子表达发生变化可能与胰岛β细胞功能发生改变有关。 展开更多
关键词 毒胡萝卜素 衣霉素 胰岛细胞 基因表达谱 内质网应激
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