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肺炎克雷伯菌榆中分离株 OmpK17基因的克隆、生物信息学分析及免疫原性研究 预览
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作者 程家海 殷娟斌 +3 位作者 白珊泽 田泽暘 庞红红 包世俊 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第5期1456-1465,共10页
试验旨在研究肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumoniae)外膜蛋白OmpK17基因序列特征及其免疫原性。参照GenBank中肺炎克雷伯菌外膜蛋白OmpK17基因序列(登录号:U52843.1)设计1对特异性引物,应用PCR技术扩增获得了肺炎克雷伯菌榆中分离株(YZ株)... 试验旨在研究肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumoniae)外膜蛋白OmpK17基因序列特征及其免疫原性。参照GenBank中肺炎克雷伯菌外膜蛋白OmpK17基因序列(登录号:U52843.1)设计1对特异性引物,应用PCR技术扩增获得了肺炎克雷伯菌榆中分离株(YZ株)OmpK17基因CDS序列,应用相关软件及程序对OmpK17基因核苷酸序列及其推导的氨基酸序列进行生物信息学分析,构建其原核表达载体pET-OmpK17,并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了表达。表达产物纯化后免疫新西兰兔制备多抗血清,应用ELISA和Westernblotting分析了重组蛋白的免疫原性。结果显示,肺炎克雷伯菌YZ株外膜蛋白OmpK17基因高度保守,其CDS序列全长513bp,编码170个氨基酸,与GenBank中其他肺炎克雷伯菌OmpK17基因序列同源性均高于99.6%;OmpK17蛋白分子质量约为18.5ku,具有较强的亲水性,含有1个信号肽、1个跨膜区和6个抗原决定簇区域,是一种具有桶状三维结构的跨膜蛋白。SDS-PAGE结果显示,OmpK17基因在大肠杆菌中获得表达且表达产物主要以包涵体形式存在。ELISA及Westernblotting结果表明,肺炎克雷伯菌OmpK17蛋白具有良好的免疫原性。本研究克隆和表达了肺炎克雷伯菌OmpK17基因及其编码蛋白,并证实该蛋白具有良好的免疫原性,为OmpK17基因的生物学特性研究和肺炎克雷伯菌检测方法的建立奠定了基础,为肺炎克雷伯菌基因工程疫苗的研发提供了理论依据。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯菌 OmpK17基因 克隆 生物信息学 原核表达 免疫原性
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牛HSL基因的克隆和生物信息学分析 预览
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作者 刘燕 李赞 田万年 《畜牧与饲料科学》 2019年第6期9-12,共4页
旨在克隆牛HSL基因的CDS序列,并对该基因进行生物信息学、组织表达谱分析。根据GenBank登录的牛HSL基因序列(NM_001080220)设计1对引物,对牛组织样品中的HSL基因CDS序列进行RT-PCR扩增及序列测定;利用半定量RT-PCR方法检测HSL基因在牛... 旨在克隆牛HSL基因的CDS序列,并对该基因进行生物信息学、组织表达谱分析。根据GenBank登录的牛HSL基因序列(NM_001080220)设计1对引物,对牛组织样品中的HSL基因CDS序列进行RT-PCR扩增及序列测定;利用半定量RT-PCR方法检测HSL基因在牛各组织中的表达情况;利用生物信息学软件对其所编码的牛HSL蛋白进行分析。结果显示,获得的牛HSL基因CDS全长为2271bp,编码756个氨基酸,与GenBank登录的牛HSL基因同源性最高,为99.9%。HSL蛋白含有一个HSL-Nsuperfamily保守结构域,无信号肽结构,具有疏水性。半定量RT-PCR显示,HSL基因在检测的心脏、脾脏、肺脏、肾脏、肝脏、大网膜、皮下脂肪、肌肉8种组织中均有表达,其中在大网膜和皮下脂肪中表达量较高,在肾脏、脾脏、肝脏、肺脏、肌肉和心脏中度表达。该试验可为研究牛HSL蛋白的结构和功能提供参考。 展开更多
关键词 克隆 分析 HSL基因 生物信息学 表达谱
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杂交鹅掌楸LhARF2基因启动子的克隆及瞬时表达分析 预览
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作者 刘立盘 钟永达 +2 位作者 杨爱红 李彦强 余发新 《江西科学》 2019年第4期513-518,共6页
生长素响应因子(Auxin response factor,ARF)参与调控植物生长发育的多个途径。本研究利用Tail-PCR技术从杂交鹅掌楸中克隆LhARF2基因5'端上游2637bp序列,即pLhARF2启动子,并利用生物信息学软件PlantCARE分析其包含的调控元件,发现... 生长素响应因子(Auxin response factor,ARF)参与调控植物生长发育的多个途径。本研究利用Tail-PCR技术从杂交鹅掌楸中克隆LhARF2基因5'端上游2637bp序列,即pLhARF2启动子,并利用生物信息学软件PlantCARE分析其包含的调控元件,发现其含有启动子必需元件TATA-box和CAAT-box,以及压力响应、激素响应、光信号转导和代谢循环过程元件。构建pLhARF2-pCAMBIA1300:GUS植物表达载体并瞬时浸染本氏烟草叶片,利用GUS组织化学染色法鉴定烟草叶片中瞬时表达活性,发现在烟草叶片中有蓝色斑块,但颜色较浅。实验结果推测杂交鹅掌楸pLhARF2启动子可以调控GUS基因活性,为下一步研究启动子遗传转化的组织表达活性奠定了基础。 展开更多
关键词 杂交鹅掌楸 pLhARF2启动子 克隆 瞬时表达
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An Analysis of the Alienation in Brave New World 预览
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作者 张月红 《校园英语》 2019年第27期249-250,共2页
Based on the alienation phenomenon described in Brave New World,like the embryonic cloning technology,we can see a fictitious society under totalitarianism and the rudiment of a world b ased on mechanism from the pers... Based on the alienation phenomenon described in Brave New World,like the embryonic cloning technology,we can see a fictitious society under totalitarianism and the rudiment of a world b ased on mechanism from the perspective of Marx’s alienation theory.To analyze the social alienation phenomenon in Brave New World can help us understand the importance of the balance between the productive force of science and technology and humanity,of the fact that scientific and technological progress are likely to lead to dehumanization. 展开更多
关键词 ALIENATION EMBRYONIC CLONING DEHUMANIZATION MECHANISM
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桂花β-胡萝卜素羟化酶基因的克隆与序列分析 预览
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作者 程楠 项黛徽 +2 位作者 沈雅园 付建新 张超 《河南农业科学》 北大核心 2019年第1期99-104,共6页
为揭示桂花不同品种β-胡萝卜素羟化酶(β-carotene hydroxylase,HYB)基因的序列差异,利用已构建的桂花花瓣转录组数据库中Unigene序列信息,结合RT-PCR技术对桂花品种玉玲珑、金球桂、堰虹桂和日香桂中2个β-胡萝卜素羟化酶基因(HYB1和H... 为揭示桂花不同品种β-胡萝卜素羟化酶(β-carotene hydroxylase,HYB)基因的序列差异,利用已构建的桂花花瓣转录组数据库中Unigene序列信息,结合RT-PCR技术对桂花品种玉玲珑、金球桂、堰虹桂和日香桂中2个β-胡萝卜素羟化酶基因(HYB1和HYB2)的最大阅读框进行扩增,并测序验证。生物信息学分析结果表明,4个桂花品种HYB 1基因均含有长为909bp的开放阅读框,编码302个氨基酸残基;HYB 2基因均含有长为915bp的开放阅读框,编码304个氨基酸残基。4个桂花品种HYB1和HYB2推导的氨基酸序列均具备保守的组氨酸结构域。HYB1基因核苷酸序列存在27个变异位点,其氨基酸序列存在8个变异位点;HYB2基因核苷酸序列存在12个变异位点,其氨基酸序列存在3个变异位点。进化树分析结果发现,4个桂花品种的HYB1和HYB2蛋白与茄科植物番茄和辣椒HYB蛋白亲缘性最高。 展开更多
关键词 桂花 花色 Β-胡萝卜素羟化酶 克隆 序列分析
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一种三角帆蚌肌浆网Ca^2+-ATP酶基因cDNA的全长克隆与表达分析 预览
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作者 张爱菊 刘士力 +2 位作者 刘金殿 张根芳 周志明 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第4期545-555,共11页
采用RACE技术,从三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)鳃组织中成功克隆得到一种肌浆网Ca^2+-ATP酶(sarco/endoplasmic reticulum calcium ATPase,SERCA)基因的全长cDNA序列,共3326bp,包含201-bp5’-UTR区域、3060-bp编码框(ORF)和65-bp3’-UTR... 采用RACE技术,从三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)鳃组织中成功克隆得到一种肌浆网Ca^2+-ATP酶(sarco/endoplasmic reticulum calcium ATPase,SERCA)基因的全长cDNA序列,共3326bp,包含201-bp5’-UTR区域、3060-bp编码框(ORF)和65-bp3’-UTR。ORF共编码1019个氨基酸,预测无信号肽。该基因氨基酸序列呈现出典型的Ca^2+-ATP酶特征,由Cation_ATPase_N、E1-E2ATPase、Hydrolase、Cation_ATPase_C四种类型结构域组成,其内含SERCAs的常见结构组成包括磷酸化区域、异硫氰酸荧光素位点、FSBA结合位点、受磷蛋白结合区以及毒胡萝卜素位点。分析显示,该基因序列高度保守且与海洋软体动物具有最高同源性。荧光定量PCR检测,该基因在三角帆蚌外套膜、斧足、鳃、肝胰腺、性腺等5个组织中均有表达,且在鳃、外套膜、肝胰腺组织中表达较高。不同Ca^2+浓度处理试验的结果表明,随水体中Ca^2+浓度逐渐升高,该基因在外套膜中的表达水平呈先下降后上升趋势,并在Ca^2+浓度为60mg·L^-1时达到最低值,80mg·L^-1时达到最高值。同时在60mg·L^-1Ca^2+浓度条件下,外套膜中SERCA基因的表达量随时间推移先上升,并于48h时达到最高,而后逐渐下降。上述结果为进一步深入研究SERCA基因的功能及其调控机理奠定了基础。 展开更多
关键词 三角帆蚌 SERCA 克隆 基因表达 钙刺激
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重组牛LAP-CATHL2融合抗菌肽的克隆及原核表达 预览
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作者 王静 高利 《黑龙江八一农垦大学学报》 2019年第4期40-49,共10页
从牛舌鳞状上皮细胞和股骨骨髓细胞中分别克隆出牛β-防御素LAP和牛CATHL2抗菌肽,然后利用重叠延伸PCR克隆得到重组牛LAP-CATHL2抗菌肽,将其克隆进pGEX-4T-1载体,构建了重组牛LAP-CATHL2抗菌肽的原核表达载体,并转进感受态大肠杆菌BL21... 从牛舌鳞状上皮细胞和股骨骨髓细胞中分别克隆出牛β-防御素LAP和牛CATHL2抗菌肽,然后利用重叠延伸PCR克隆得到重组牛LAP-CATHL2抗菌肽,将其克隆进pGEX-4T-1载体,构建了重组牛LAP-CATHL2抗菌肽的原核表达载体,并转进感受态大肠杆菌BL21进行诱导表达,并加以纯化,得到了重组牛LAP-CATHL2抗菌肽产量是2.83 mg·mL-1培养液。 展开更多
关键词 重组牛LAP-CATHL2融合抗菌肽 克隆 原核表达
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犬弓首蛔虫enol-1基因的克隆及序列分析
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作者 卜卜才加 张念章 +2 位作者 张芙恺 朱兴全 赵权 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期97-101,共5页
对犬弓首蛔虫烯醇化酶(enolase)基因(enol-1)进行克隆及序列分析,预测其作为抗犬弓首蛔虫疫苗候选抗原的潜力。从犬弓首蛔虫的cDNA中扩增出enol-1基因,连接至pMD18-T载体,并筛选阳性克隆后,测序鉴定。将测序结果正确的核苷酸序列翻译成... 对犬弓首蛔虫烯醇化酶(enolase)基因(enol-1)进行克隆及序列分析,预测其作为抗犬弓首蛔虫疫苗候选抗原的潜力。从犬弓首蛔虫的cDNA中扩增出enol-1基因,连接至pMD18-T载体,并筛选阳性克隆后,测序鉴定。将测序结果正确的核苷酸序列翻译成氨基酸序列,运用生物信息学软件分析enol-1蛋白的结构,预测抗原表位及功能位点,并运用Maximum likelihood(ML)法构建了系统发育树。结果表明:enol-1基因长1 311 bp,可编码437个氨基酸。Enol-1蛋白中包含18个α-螺旋区,7个β-折叠区,10个亲水区域和16个柔性区域,并预测含有9个线性B细胞抗原表位,enol-1蛋白可能具有潜在的免疫原性。并对犬弓首蛔虫enol-1基因进行了克隆及序列分析,为评价enol-1蛋白作为犬弓首蛔虫亚单位疫苗及表位疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 犬弓首蛔虫 enol-1基因 克隆 生物信息学分析
8个茶树WRKY转录因子基因的克隆与表达分析 被引量:1
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作者 王鹏杰 陈笛 +5 位作者 林浥 郑知临 郑玉成 杨江帆 岳川 叶乃兴 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期685-693,共9页
目的克隆茶树WRKY转录因子(Cs WRKYs)家族中的8个成员,并对其进行生物信息学和非生物胁迫下的表达分析。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术从'铁观音'茶树品种中克隆8个WRKY基因,运用生物信息学的方法对8个WRKY基因编码的... 目的克隆茶树WRKY转录因子(Cs WRKYs)家族中的8个成员,并对其进行生物信息学和非生物胁迫下的表达分析。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术从'铁观音'茶树品种中克隆8个WRKY基因,运用生物信息学的方法对8个WRKY基因编码的蛋白进行理化性质分析,同时通过与拟南芥同源基因的比较进行进化树的构建、多序列比对及保守基序分析。采用qRT-PCR方法检测8个WRKY基因在低温、干旱和脱落酸(abscisicacid,ABA)胁迫处理下的表达量。结果 8个WRKY转录因子基因开放阅读框(ORF)长度分别为1 407、2 208、1 302、849、978、879、1 443和810 bp,分别编码468、735、433、282、325、292、480和269个氨基酸,GenBank登录号分别为MG298951、MG298952、MG298955、MG298956、MG298957、MG298959、MG298960和MG298963。系统进化树及序列比对分析显示,8个CsWRKYs可以分成了2个大组;除CsWRKY39缺少锌指结构外,其他CsWRKYs均含有WRKYGQK保守七肽结构域及锌指结构组成的WRKY结构域。非生物胁迫下的表达模式显示,CsWRKYs基因在低温、干旱和ABA胁迫处理下均有表达且表达受到不同程度的诱导;CsWRKY2、CsWRKY21、CsWRKY23、CsWRKY44和CsWRKY65基因在低温处理后表达量上调超过2,显著响应低温胁迫;CsWRKY21、CsWRKY23、CsWRKY39和CsWRKY65在干旱胁迫处理12 h及ABA处理6 h时均上调表达。结论克隆获得来自不同组的8个茶树WRKY基因,推测与茶树抗逆密切相关。 展开更多
关键词 茶树 WRKY转录因子 克隆 生物信息学 非生物胁迫
羚牛苦味受体3(Tas2R3)基因的克隆及生物信息学分析
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作者 周明 余姣姣 +2 位作者 李彪 欧阳菠 杨建东 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1957-1968,共12页
Tas2R3是苦味受体基因家族中一个重要的成员,为了进一步了解和研究羚牛(Budorcas taxicolor)苦味受体基因的结构和功能,本研究对羚牛苦味受体3 (Tas2R3)基因进行了克隆和生物信息学分析(GenBank登录号:MG650195)。结果显示,羚牛Tas2R3... Tas2R3是苦味受体基因家族中一个重要的成员,为了进一步了解和研究羚牛(Budorcas taxicolor)苦味受体基因的结构和功能,本研究对羚牛苦味受体3 (Tas2R3)基因进行了克隆和生物信息学分析(GenBank登录号:MG650195)。结果显示,羚牛Tas2R3基因编码区(coding sequence, CDS)序列全长951 bp,共编码316个氨基酸,以亮氨酸含量最高,谷氨酰胺含量最低。其蛋白质等电点为9.68,分子量为51.96 kD。高级结构功能预测显示,二级结构以α-螺旋为主,蛋白质为碱性、稳定的亲水性蛋白,由4个胞外区、7个跨膜区和4个胞内区组成。预测到2种类型共8个糖基化功能位点和4种类型共15个磷酸化功能位点。通过比较Tas2R3基因种间相似性发现,在偶蹄目中具有很高的同源性,羚牛与绵羊(Ovis aries)的相似性最高(0.98),与褐家鼠(Rattus norvegicus)最低(0.52)。用羚牛、绵羊等12个物种的Tas2R3基因CDS序列构建的NJ树与ME树结构一致,表明Tas2R3基因适合用于构建不同物种间的系统进化树。 展开更多
关键词 羚牛 苦味受体 Tas2R3基因 克隆 生物信息学分析
鸡传染性法氏囊病病毒DK株VP2基因序列分析及其对SPF雏鸡的致病力 预览
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作者 雷赟赟 林绍青 +5 位作者 刘秉珲 于高博 武琦 周五朵 黄宝钦 吴异健 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期414-417,共4页
为探究鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)DK分离株的致病性和遗传变异情况,本研究测定了该分离株的鸡胚半数致死量(ELD50)、对SFP雏鸡的致病力以及扩增病毒的VP2基因并分析其序列。结果显示,DK分离株对鸡胚的ELD50为104.5/0.2mL,以2×10^3... 为探究鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)DK分离株的致病性和遗传变异情况,本研究测定了该分离株的鸡胚半数致死量(ELD50)、对SFP雏鸡的致病力以及扩增病毒的VP2基因并分析其序列。结果显示,DK分离株对鸡胚的ELD50为104.5/0.2mL,以2×10^3ELD50剂量感染SFP雏鸡出现典型IBD的临床症状、剖检和组织学病变;实验鸡发病率为100%,致死率为44.4%;DK株VP2基因序列与参考株的同源性为93.1%~97.0%、氨基酸序列同源性为93.6%~97.5%,其基因序列和氨基酸序列均与Cu-1wt参考株(经典株)同源性最高;DK株VP2氨基酸序列的七肽区SASWSGS及249Q、253Q、279D、284A、290M、313V、330S氨基酸位点均与强毒株的氨基酸位点一致;但其222P、256V、299N3个氨基酸不符合IBDV超强毒株的特征;而其第222、249位氨基酸为P和Q,与抗原变异株(vIBDV)的T和K也不相同。结果表明:IBDVDK株为中等偏强毒力病毒。本研究为IBD的防控提供参考依据。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 VP2基因 克隆 序列分析
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26个桑树品种的ITS序列位点的克隆与分析 预览
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作者 王晖 高妍夏 +4 位作者 高玉军 李娜 谢岩 张东豪 杨帆 《北方蚕业》 2019年第2期1-4,共4页
选择26个代表性的桑树品种,提取DNA作为模板,进行PCR反应,以已经公布的ITS引物作为本研究的扩增引物,同时从NCBI中搜索所有关于桑树的ITS扩增序列,下载与本研究的扩增序列进行比对。结果表明:26个代表性桑树品种中,只有毛桑出现了两个... 选择26个代表性的桑树品种,提取DNA作为模板,进行PCR反应,以已经公布的ITS引物作为本研究的扩增引物,同时从NCBI中搜索所有关于桑树的ITS扩增序列,下载与本研究的扩增序列进行比对。结果表明:26个代表性桑树品种中,只有毛桑出现了两个个变异位点,其它25个品种或种质序列完全一致,从Genbank中共下载到15条桑树的ITS序列,其中有3条序列含有3个变异位点。本研究证明,单独的ITS只能进行少数几个桑树品种的鉴别,不能完全准确地进行桑树品种分类。 展开更多
关键词 桑树 基因间隔序列 克隆
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核桃FLOWERING LOCUS T(JrFT)基因的克隆及表达分析 预览
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作者 王企 陈利娜 +4 位作者 夏小丛 敬丹 李好先 骆翔 曹尚银 《江西农业学报》 CAS 2019年第4期13-20,共8页
为了了解核桃FLOWERING LOCUS T(JrFT)基因在核桃雌雄异熟开花机制中的作用,以核桃雌先型品种‘极早丰’与雄先型品种‘新早丰’在3个时期(2月6日、3月21日及4月7日)的雌、雄花芽为试验材料,结合荧光定量PCR(qRT-PCR)、RT-PCR扩增、生... 为了了解核桃FLOWERING LOCUS T(JrFT)基因在核桃雌雄异熟开花机制中的作用,以核桃雌先型品种‘极早丰’与雄先型品种‘新早丰’在3个时期(2月6日、3月21日及4月7日)的雌、雄花芽为试验材料,结合荧光定量PCR(qRT-PCR)、RT-PCR扩增、生物信息技术,分析了核桃JrFT基因的结构与表达,预测了JrFT基因的功能。结果表明:核桃JrFT基因在‘极早丰’与‘新早丰’3个时期的雌、雄花芽中均有表达;在不同时期同一花芽JrFT基因的表达量有所差异;在同一时期,JrFT基因在雌花中的表达量明显高于雄花,在‘新早丰’雄花中的表达量高于在‘极早丰’雄花中的表达量。克隆获得了JrFT基因的CDS序列,其长度为525 bp,编码174个氨基酸,含有高度保守的PEBP蛋白结构域。在NCBI数据库进行Blast比对显示:核桃JrFT基因与其他木本植物FT同源基因的相似性较高,可达到80%以上;JrFT蛋白与其他植物FT蛋白的相似性也很高。系统进化分析也同样说明JrFT基因属于PEBP家族基因。因此推测JrFT基因可能在核桃开花进程中具有一定的促进作用。 展开更多
关键词 核桃 FLOWERING LOCUS T(FT)基因 克隆 功能分析 表达载体构建
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辣椒CaWRKY8基因克隆及胁迫下的表达分析 预览
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作者 刁玄章 王述彬 +3 位作者 刁卫平 潘宝贵 戈伟 高青海 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期210-217,共8页
为了揭示辣椒WRKY基因功能,以辣椒PI201234为实验材料,克隆得到WRKY基因全长1 647bp的cDNA序列,命名为CaWRKY8。生物信息学分析表明,该基因含有一个1 647bp完整开放阅读框(ORF),编码548个氨基酸残基。氨基酸序列分析显示,CaWRKY8编码的... 为了揭示辣椒WRKY基因功能,以辣椒PI201234为实验材料,克隆得到WRKY基因全长1 647bp的cDNA序列,命名为CaWRKY8。生物信息学分析表明,该基因含有一个1 647bp完整开放阅读框(ORF),编码548个氨基酸残基。氨基酸序列分析显示,CaWRKY8编码的蛋白含有2个WRKY结构域,属于Group I。氨基酸序列比对结果表明,CaWRKY8与辣椒WRKY25、马铃薯WRKY、番茄基因组中预测的WRKY26、烟草基因组中预测的WRKY33和猕猴桃WRKY的氨基酸序列之间均具有高度的保守性。实时荧光定量分析表明,CaWRKY8受盐、高温、干旱和辣椒疫霉菌诱导表达;其中CaWRKY8的表达量在盐和干旱处理下3h达到峰值,分别是对照的2.38倍和121.10倍,在高温和疫霉菌处理下12h达到峰值,分别是对照的6.12和6.81倍。以上研究结果表明,CaWRKY8基因在辣椒响应胁迫进程中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 辣椒 CaWRKY8 克隆 胁迫 生物信息学
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黏虫CYP9A113基因的克隆及外源物质对基因表达的诱导效应 预览
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作者 张雅男 刘月庆 +2 位作者 JUNAID S M 王智琪 樊东 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期97-103,共7页
黏虫是我国作物上最重要的害虫之一。细胞色素P450能够参与昆虫外源物质代谢。本研究采用RACE技术克隆了一条编码黏虫P450基因的cDNA序列,并通过Real-time PCR技术,检测了4种外源物质对该基因表达的诱导效应。该基因被国际P450命名委员... 黏虫是我国作物上最重要的害虫之一。细胞色素P450能够参与昆虫外源物质代谢。本研究采用RACE技术克隆了一条编码黏虫P450基因的cDNA序列,并通过Real-time PCR技术,检测了4种外源物质对该基因表达的诱导效应。该基因被国际P450命名委员会命名为CYP9A113,GenBank登录号为KY436739。利用2.5%高效氯氟氰菊酯乳油的LD 50处理黏虫3 h,LD 10、LD 30和LD 50处理12 h和24 h,可诱导表达CYP9A113基因;20%氯虫苯甲酰胺悬浮剂的LD 10处理黏虫12、24和48 h,LD 30和LD 50处理24 h,CYP9A113基因表达呈诱导效应;0.1和0.5 mg/mL香豆素处理6、12、24和48 h,CYP9A113基因表达均呈诱导效应;0.1和0.5 mg/mL吲哚-3-甲醇处理3、6、12、24和48 h,CYP9A113基因表达均呈诱导效应。 展开更多
关键词 黏虫 CYP9A113基因 克隆 外源物质 诱导效应
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禽呼肠孤病毒σA蛋白在HEK293T细胞中的表达
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作者 任红玉 谢芝勋 +9 位作者 谢丽基 王盛 黄娇玲 范晴 罗思思 张艳芳 曾婷婷 张明秀 谢志勤 邓显文 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第14期59-62,共4页
为了正确表达禽呼肠孤病毒(ARV)σA蛋白,试验拟构建σA基因的真核表达质粒,并将其在人胚肾细胞(HEK293T)中准确表达,参照GenBank中ARVS2基因序列(登录号为KF741763.1)设计特异性引物,以pMD18-T-σA重组载体为模板,应用PCR的方法扩增σA... 为了正确表达禽呼肠孤病毒(ARV)σA蛋白,试验拟构建σA基因的真核表达质粒,并将其在人胚肾细胞(HEK293T)中准确表达,参照GenBank中ARVS2基因序列(登录号为KF741763.1)设计特异性引物,以pMD18-T-σA重组载体为模板,应用PCR的方法扩增σA基因的特异性序列,并将其克隆到pMD18-T载体中,构建重组pMD18-T-σA表达质粒,再用限制性内切酶KpnⅠ和NotⅠ同时双酶切pMD18-T-σA和真核表达质粒pEF1α-HA,将胶回收的σA基因和pEF1α-HA进行连接,构建真核表达质粒pEF1α-HA-σA。真核表达质粒经菌落PCR、双酶切和测序验证正确后,将其转染HEK293T细胞,于24h后收取蛋白质,通过WesteRn-blot验证目的蛋白。结果表明:本试验成功克隆了ARVσA基因,构建了其真核表达质粒pEF1α-HA-σA,并在HEK293T细胞中表达。说明该蛋白可以在HEK293T细胞中准确表达。 展开更多
关键词 禽呼肠孤病毒 σA基因 克隆 σA蛋白 真核表达质粒
金黄色葡萄球菌ymdB基因的克隆表达及生物信息学分析
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作者 夏佳音 陈新江 +2 位作者 李文通 吴佳艳 羊晓敏 《生物技术》 CAS 2019年第3期215-219,共5页
[目的]克隆、表达金黄色葡萄球菌ymd B基因,并对其编码产物进行生物信息学分析。[方法]以金黄色葡萄球菌ATCC 25923菌株的基因组DNA为模板,用聚合酶链式反应扩增ymd B基因,将扩增基因酶切后与表达载体pET-32a(+)连接,构建重组质粒并转... [目的]克隆、表达金黄色葡萄球菌ymd B基因,并对其编码产物进行生物信息学分析。[方法]以金黄色葡萄球菌ATCC 25923菌株的基因组DNA为模板,用聚合酶链式反应扩增ymd B基因,将扩增基因酶切后与表达载体pET-32a(+)连接,构建重组质粒并转化大肠杆菌TG1,增菌培养后提取质粒,经PCR、基因测序鉴定后,再转化大肠杆菌BL21(DE3),对转化菌株进行诱导后,进行10%SDS-PAGE分析。使用Protparam、PSORT、CDD、Signal P 4. 1、TMpred、Net Phos 3. 1 Server、PSIPRED、SWISS-MODEL等软件,分析YmdB蛋白的氨基酸数目、相对分子质量、理论等电点、带电荷氨基酸总数、半衰期、稳定性、疏水性、亚细胞定位、保守结构域、信号肽、跨膜区、磷酸化位点、二级结构、三维结构等。[结果]构建了表达载体pET-32a(+)-ymd B,在37℃经异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后获得表达。YmdB蛋白由266个氨基酸组成,相对分子质量为30134. 53Da,等电点为6. 23,正电荷氨基酸总数为33个,负电荷氨基酸总数为35个,在大肠杆菌内的半衰期为10 h以上,是稳定的亲水蛋白质,定位于细胞质中,与YmdB蛋白家族具有相似的保守结构域,没有信号肽,有一个跨膜区和14个磷酸化位点,二级结构中ɑ螺旋、β折叠和无规则卷曲分别占42. 11%、9. 40%、48. 49%,三维空间结构与二级结构预测结果大致相同。[结论]成功克隆、表达了金黄色葡萄球菌ymdB基因,并对YmdB蛋白进行了生物信息学分析,为深入研究该蛋白的分子作用机理打下一定基础。 展开更多
关键词 ymdB基因 ymdB蛋白 克隆 原核表达 生物信息学 金黄色葡萄球菌
Up-regulation of a homeodomain-leucine zipper gene HD-1 contributes to trichome initiation and development in cotton 预览
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作者 NIU Er-li CAI Cai-ping +3 位作者 BAO Jiang-hao WU Shuang ZHAO Liang GUO Wang-zhen 《农业科学学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2019年第2期361-371,共11页
Plant trichomes originate from epidermal cells.In this work,we demonstrated that a homeodomain-leucine zipper(HD-Zip)gene,GhA06G1283(Gh HD-1A),was related to the leaf trichome trait in allotetraploid cotton and could ... Plant trichomes originate from epidermal cells.In this work,we demonstrated that a homeodomain-leucine zipper(HD-Zip)gene,GhA06G1283(Gh HD-1A),was related to the leaf trichome trait in allotetraploid cotton and could be a candidate gene for the T1 locus.The ortholog of GhHD-1A in the hairless accession Gossypium barbadense cv.Hai7124 was interrupted by a long terminal repeat(LTR)retrotransposon,while GhHD-1A worked well in the hairy accession Gossypium hirsutum acc.T586.Sequence and phylogenetic analysis showed that GhHD-1A belonged to the HD-Zip IV gene family,which mainly regulated epidermis hair development in plants.Silencing of GhHD-1A and its homoeologs GhHD-1D in allotetraploid T586and Hai7124 could significantly reduce the density of leaf hairs and affect the expression levels of other genes related to leaf trichome formation.Further analysis found that GhHD-1A mainly regulated trichome initiation on the upper epidermal hairs of leaves in cotton,while the up-regulated expression of GhHD-1A in different organs/tissues also altered epidermal trichome development.This study not only helps to unravel the important roles of GhHD-1A in regulating trichome initiation in cotton,but also provides a reference for exploring the different forms of trichome development in plants. 展开更多
关键词 leaf TRICHOME map-based cloning a homeodomain-leucine ZIPPER GENE HD-1 virus-induced GENE SILENCING (VIGS) functional differentiation
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牦牛Bcl-2、Bax基因克隆及其在生殖轴上的表达分析 预览
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作者 夏忆 王琴 +3 位作者 何向东 陈莹 吉格莫体 字向东 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第7期1881-1889,共9页
试验旨在分析Bcl-2与Bax基因的序列特性,并分析其在母牦牛生殖轴上的表达特点,为探讨其在牦牛繁殖活动中的调控作用奠定基础。试验采集健康母牦牛与母黄牛下丘脑、垂体、卵巢、输卵管及子宫组织样品,通过RT-PCR扩增并克隆Bcl-2与Bax基因... 试验旨在分析Bcl-2与Bax基因的序列特性,并分析其在母牦牛生殖轴上的表达特点,为探讨其在牦牛繁殖活动中的调控作用奠定基础。试验采集健康母牦牛与母黄牛下丘脑、垂体、卵巢、输卵管及子宫组织样品,通过RT-PCR扩增并克隆Bcl-2与Bax基因,并采用生物信息学软件进行序列分析;利用实时荧光定量PCR法检测Bcl-2与Bax基因在牦牛与黄牛不同组织中的表达差异。结果表明,牦牛Bcl-2编码区全长690 bp,编码229个氨基酸;与黄牛Bcl-2基因核苷酸序列同源性最高,为99.86%,其次是山羊、绵羊,同源性分别为98.41%、97.97%;系统进化树表明,牦牛与黄牛亲缘关系最近。牦牛Bax基因编码区全长579 bp,编码192个氨基酸,与黄牛、藏山羊和金堂黑山羊同源性较高,分别为99.83%、99.48%和99.48%,其次是绵羊、马、人,同源性分别为99.14%、95.34%、94.30%;系统进化树表明,牦牛与黄牛亲缘关系最近。Bcl-2和Bax蛋白不存在信号肽,均为酸性不稳定的疏水蛋白。Bcl-2与Bax基因在黄牛及牦牛下丘脑、垂体、卵巢、输卵管和子宫组织中均有表达,其中牦牛卵巢、子宫中Bcl-2基因表达量分别显著和极显著高于黄牛(P<0.05;P<0.01);牦牛子宫、输卵管中Bax基因表达量显著高于黄牛(P<0.05),牦牛卵巢中Bcl-2/Bax比值极显著高于黄牛(P<0.01),子宫和垂体中显著高于黄牛(P<0.05)。表明Bcl-2与Bax在动物进化中非常保守且在繁殖活动中起重要作用,牦牛卵巢、子宫、输卵管和垂体中的高表达量可能与牦牛处于极端恶劣环境的细胞抗凋亡作用有关。 展开更多
关键词 牦牛 黄牛 BCL-2基因 BAX基因 克隆 组织表达
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水貂DCT基因启动子的克隆及转录调控元件分析
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作者 王亚琪 胡露露 +4 位作者 王瑞宁 刘铮铸 巩元芳 李祥龙 彭永东 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第9期146-150,183共6页
为了找到水貂多巴色素异构酶(DCT)基因启动子活性区域及转录因子结合位点,试验采用PCR扩增与克隆,构建双荧光素酶报告基因重组质粒,分别转染到293T细胞和A375细胞,测定其活性,并利用在线软件对序列进行生物信息学分析,预测水貂DCT基因... 为了找到水貂多巴色素异构酶(DCT)基因启动子活性区域及转录因子结合位点,试验采用PCR扩增与克隆,构建双荧光素酶报告基因重组质粒,分别转染到293T细胞和A375细胞,测定其活性,并利用在线软件对序列进行生物信息学分析,预测水貂DCT基因核心启动子区域的转录因子结合位点。结果表明:得到的6个不同长度的启动子片段均具有明显的启动子活性,且-1 292~+113 bp区域活性最高,提示其为水貂DCT基因核心启动子区域;成功筛选出337 bp水貂DCT基因活性较高的启动子片段,发现转录因子特异性蛋白1(Sp1)可能是调控启动子活性的重要转录因子。 展开更多
关键词 水貂 启动子 DCT基因 克隆 活性
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