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结核性胸膜炎患者MAIT细胞Granzyme B免疫应答特征及其与疾病转归的相关性 预览
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作者 曹志红 蒋静 +6 位作者 俞珊 杨秉芬 刘艳华 安红娟 王若 翟斐 程小星 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第6期874-877,882共5页
目的研究结核性胸膜炎患者胸腔积液中MAIT细胞颗粒酶B(Granzyme B)免疫应答特征及其与疾病转归的相关性。方法提取25份结核性胸腔积液PFMCs,用结核分枝杆菌H37Rv裂解液刺激后收集细胞,进行流式抗体染色。另外有10例患者重复收集胸水,其... 目的研究结核性胸膜炎患者胸腔积液中MAIT细胞颗粒酶B(Granzyme B)免疫应答特征及其与疾病转归的相关性。方法提取25份结核性胸腔积液PFMCs,用结核分枝杆菌H37Rv裂解液刺激后收集细胞,进行流式抗体染色。另外有10例患者重复收集胸水,其中7例治疗效果好,胸水吸收,另3例无明显治疗效果,比较其治疗前后Granzyme B^+MAIT细胞比例。结果结核分枝杆菌抗原刺激后,结核性胸膜炎患者胸腔积液中Granzyme B^+MAIT比例为(25.34±5.37)%。男女性和不同年龄患者的Granzyme B^+MAIT细胞比例均差异无统计学意义。7例治疗效果好的患者治疗后Granzyme B^+MAIT细胞比例明显上升,治疗前后比例分别为(30.41±2.78)%和(40.61±2.61)%,差异有统计学意义(t=9.867,P <0.000 1)。3例治疗效果不好的患者Granzyme B~+MAIT细胞比例明显低于治疗效果好的患者,且治疗后比例上升不明显。结论 MAIT细胞生成颗粒酶B通过细胞毒性杀伤作用而在局部抗结核免疫中发挥重要作用。 展开更多
关键词 结核 MAIT细胞 细胞颗粒酶B 胸腔积液
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NB-UVB对特应性皮炎患者外周血CLA+CD8+T细胞的影响
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作者 王玉洁 李婷婷 +3 位作者 张宝祥 吴振涛 冯佃芹 孙广美 《中国皮肤性病学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第8期883-886,共4页
目的 观察窄谱中波紫外线(NB-UVB)治疗特应性皮炎(AD)患者的临床疗效,并分析其对外周血皮肤归巢的CD8+T细胞数量及表达杀伤功能相关蛋白水平的影响,探讨 NB-UVB 治疗 AD的作用机制。方法 选取19例AD患者,予 NB-UVB 照射治疗8周,采... 目的 观察窄谱中波紫外线(NB-UVB)治疗特应性皮炎(AD)患者的临床疗效,并分析其对外周血皮肤归巢的CD8+T细胞数量及表达杀伤功能相关蛋白水平的影响,探讨 NB-UVB 治疗 AD的作用机制。方法 选取19例AD患者,予 NB-UVB 照射治疗8周,采用特应性皮炎积分指数(SCORAD)判断病情严重程度; 并用流式细胞术检测外周血表达皮肤淋巴细胞相关抗原(cutaneous lymphocyte-associated antigen,CLA)的CD8+T细胞(CLA+CD8+T细胞)的比例,分析其杀伤功能相关蛋白穿孔素、颗粒酶B的表达。另选15例健康体检者作为正常对照。结果 ①SCORAD评分在AD治疗前组明显高于治疗后组,差异有统计学意义(P〈0.01); ②CLA+CD8+T细胞的比例在AD治疗前组明显高于对照组,差异有统计学意义(P〈0.01),且AD治疗前组CLA+CD8+T细胞的比例与SCORAD评分正相关(Pearson相关,P〈0.01); 穿孔素和颗粒酶B的表达在AD治疗前组均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P均〈0.01); ③NB-UVB 治疗后,AD患者血清CLA+CD8+T细胞的比例较治疗前明显降低,差异有统计学意义(P〈0.05),且表达穿孔素和颗粒酶B水平也均较治疗前明显下降,差异均有统计学意义(P均〈0.05)。结论 NB-UVB 照射可明显下调AD患者外周血CLA+CD8+T细胞的比例及杀伤功能相关蛋白的表达,这可能是NB-UVB治疗AD的机制之一。NB-UVB治疗AD安全有效。 展开更多
关键词 谱中波紫外线 皮肤淋巴细胞相关抗原 CD8+T细胞 穿孔素 颗粒酶B
健脾利湿汤治疗轻中度溃疡性结肠炎的疗效及其对调节T细胞功能影响的机制研究 预览 被引量:2
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作者 郝莉莉 刘小溪 《天津中医药》 CAS 2018年第5期344-348,共5页
[目的]观察健脾利湿汤治疗轻中度溃疡性结肠炎(UC)的临床疗效,并从调节T细胞(Treg)功能角度探讨其作用机制。[方法]将59例UC患者随机分为2组,对照组口服美沙拉嗪肠溶片,健脾利湿组口服健脾利湿汤,持续治疗3个月。观察患者治疗前后... [目的]观察健脾利湿汤治疗轻中度溃疡性结肠炎(UC)的临床疗效,并从调节T细胞(Treg)功能角度探讨其作用机制。[方法]将59例UC患者随机分为2组,对照组口服美沙拉嗪肠溶片,健脾利湿组口服健脾利湿汤,持续治疗3个月。观察患者治疗前后主要症状评分、疗效指数、生活质量的改善情况;并采集正常人及患者外周血,ELISA法测定白介素-1β(IL-1β)和转化生长因子-β1(TGF-β1)含量。反转录实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法测定外周血Foxp3、穿孔素和颗粒酶B mRNA的水平。[结果]经治疗,患者腹痛、腹泻、脓血便症状明显改善,且健脾利湿组改善效果明显优于对照组(P〈0.05)。治疗3个月后,两组患者在胃肠症状、全身症状、情感能力和社会能力等方面的生活质量均较治疗前明显提高(P〈0.05);且健脾利湿组的生活质量明显优于对照组(P〈0.05)。与正常人相比,治疗前两组患者外周血中IL-1β水平较高,而TGF-β水平较低;Foxp3 mRNA表达水平较低,而穿孔素和颗粒酶B mRNA表达水平较高,差异均具有统计学意义(P〈0.01);经过治疗,两组患者上述细胞因子及基因表达均向相反方向变化,与本组治疗前相比差异有统计学意义(P〈0.05,P〈0.01),且健脾利湿组的改善效果更为明显(P〈0.05)。[结论]健脾利湿汤通过调节Treg细胞的数量和功能,增强其免疫抑制功能,抑制穿孔素/颗粒酶B对靶细胞的杀伤作用,以此减轻肠道组织的炎症反应。 展开更多
关键词 溃疡性结肠炎 调节T细胞 穿孔素 颗粒酶B
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颗粒酶B基因纳米粒与盐酸多柔比星共载温敏凝胶的制备及初步理化性质评价
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作者 尹晓兰 王天琪 +1 位作者 韩雷强 张娜 《药物生物技术》 CAS 2018年第2期100-107,共8页
设计以温敏凝胶作为颗粒酶B质粒(pGZMB)和盐酸多柔比星(DOX-HCl)的共载载体以期实现基因和化疗药物联合治疗。选择支链型聚乙烯亚胺(bPEI)作为pGZMB的载体,自组装形成bPEI/pGZMB纳米粒,通过琼脂糖凝胶电泳和粒径电位结果研究形... 设计以温敏凝胶作为颗粒酶B质粒(pGZMB)和盐酸多柔比星(DOX-HCl)的共载载体以期实现基因和化疗药物联合治疗。选择支链型聚乙烯亚胺(bPEI)作为pGZMB的载体,自组装形成bPEI/pGZMB纳米粒,通过琼脂糖凝胶电泳和粒径电位结果研究形成bPEI/pGZMB纳米粒的最优质量比并对最优处方的外观形态、粒径分布、Zeta电位、转染能力进行考察。以胶凝温度为指标考察温敏凝胶基质普朗尼克F127与普朗尼克F68的用量及共载入bPEI/pGZMB纳米粒和DOX-HCl后对胶凝温度的影响,结合胶凝时间和通针性结果优化共载bPEI/pGZMB纳米粒和DOX-HCl的F127/F68温敏凝胶(DOX-HCl&bPEI/pGZMB-G)处方,并对其流变学、体外释放特性、凝胶材料的细胞毒性等进行评价。结果表明最优质量比90:32制备的bPEI/pGZMB纳米粒形态圆整,大小较为均一,平均粒径为(60.194-0.68)nm,平均电位为(8.864-1.08)mV,且具有较高的转染效率。最优处方制备的DOX·HCl&bPEI/pGZMB—G在室温下为溶液状态,当温度在37℃时可转变为凝胶状态,流变学性质考察结果也说明DOX-HCl&bPEI/pGZMB-G具有良好的温度敏感特性并表现为假塑性流体特征;体外释放结果显示与溶液组相比温敏凝胶组具有一定的缓释特性;体外抗增殖实验证明了温敏凝胶材料细胞毒性较低,安全性良好。以上结果表明以F127/F68为基质的温敏凝胶可作为DOX-HCl和pGZMB肿瘤治疗局部给药良好的共递送载体。 展开更多
关键词 温敏凝胶 普朗尼克 多柔比星 颗粒酶B 联合治疗 共递送
EV71手足口病患儿CD8^+T、NK细胞穿孔素和颗粒酶B的变化 预览
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作者 姜涛 欧阳文献 +1 位作者 谭艳芳 李双杰 《中国感染控制杂志》 北大核心 2018年第12期1079-1082,共4页
目的探讨肠道病毒7l型(EV71)手足口病患儿CD8^+T、NK细胞穿孔素(PRF)和颗粒酶B(GrzB)的变化。方法选取某儿童医院2017年5—7月普通型、重型手足口病患儿(普通型组、重型组),健康儿童志愿者(正常对照组)各30例,采用流式细胞术测定外周血C... 目的探讨肠道病毒7l型(EV71)手足口病患儿CD8^+T、NK细胞穿孔素(PRF)和颗粒酶B(GrzB)的变化。方法选取某儿童医院2017年5—7月普通型、重型手足口病患儿(普通型组、重型组),健康儿童志愿者(正常对照组)各30例,采用流式细胞术测定外周血CD8^+T、NK细胞PRF和GrzB的表达水平,比较各组差异。结果与正常对照组相比,普通型组和重型组EV71手足口病患儿急性期两种细胞中PRF和GrzB的表达水平均升高,差异有统计学意义(均P<0.05)。普通型组和重型组EV71手足口病恢复期患儿CD8^+T细胞PRF、GrzB的表达水平较急性期明显下降,但仍高于正常对照组(均P<0.05)。NK细胞PRF、GrzB的表达水平:普通型组和重型组急性期比较,差异均无统计学意义(均P >0.05);普通型组EV71手足口病恢复期患儿较急性期虽稍升高,但差异仍无统计学意义(均P >0.05);重型组EV71手足口病恢复期患儿较急性期明显升高(均P<0.05)。结论CD8^+T、NK细胞PRF和CrzB在EV71手足口病发病中起着一定作用。 展开更多
关键词 EV71 手足口病 穿孔素 颗粒酶B
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黏膜相关恒定T细胞在感染性疾病中的研究进展 预览
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作者 毛玉林 黄俊峰 诸杜明 《复旦学报:医学版》 CSCD 北大核心 2018年第4期567-572,共6页
黏膜相关恒定T细胞(mucosal-associated invariant T cell,MAIT细胞)是一类进化保守的固有样T淋巴细胞,它可以通过主要组织相容性复合物相关蛋白1(major histocompatibility complex classⅠ-like molecule,MR1)识别微生物来源的维... 黏膜相关恒定T细胞(mucosal-associated invariant T cell,MAIT细胞)是一类进化保守的固有样T淋巴细胞,它可以通过主要组织相容性复合物相关蛋白1(major histocompatibility complex classⅠ-like molecule,MR1)识别微生物来源的维生素B代谢物,迅速产生大量促炎细胞因子和颗粒酶,发挥其独特的抗感染作用。本文对MAIT细胞的性质、在感染性疾病中的作用及其作用机制作一综述。 展开更多
关键词 脓毒症 黏膜相关固定T细胞 主要组织相容性复合物相关蛋白1 淋巴细胞 干扰素Γ 颗粒酶B
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亚砷酸钠对人淋巴细胞白细胞介素和穿孔素及颗粒酶B的影响
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作者 蒋涓 张爱华 +5 位作者 林晶 叶影 岑延利 王文娟 李军 杨光红 《环境与健康杂志》 北大核心 2018年第2期124-127,F0003共5页
目的探讨亚砷酸钠体外染毒对人淋巴细胞白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-10、穿孔素(perforin,PFP)和颗粒酶B(granzyme B,Gr B)水平的影响。方法采集健康成年人外周血,密度梯度离心分离出淋巴细胞,分别暴露于含终浓度为0.0... 目的探讨亚砷酸钠体外染毒对人淋巴细胞白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-10、穿孔素(perforin,PFP)和颗粒酶B(granzyme B,Gr B)水平的影响。方法采集健康成年人外周血,密度梯度离心分离出淋巴细胞,分别暴露于含终浓度为0.00(对照)、5.00、10.00、20.00、30.00μmol/L亚砷酸钠的培养基染毒12、24、48 h。采用HE染色法鉴定染毒模型;MTT比色法检测细胞存活率;ELISA法检测IL-6、IL-10、PFP和Gr B的水平。结果与不同时间的对照组相比,5.00μmol/L亚砷酸钠染毒组淋巴细胞的存活率均升高,而10.00-30.00μmol/L亚砷酸钠染毒组淋巴细胞的存活率均降低,差异有统计学意义(P〈0.05)。与相同浓度亚砷酸钠染毒12 h比较,20.00、30.00μmol/L亚砷酸钠染毒24 h及10.00-30.00μmol/L亚砷酸钠染毒48 h淋巴细胞的存活率均降低,差异有统计学意义(P〈0.05)。与对照组相比,10.00-30.00μmol/L亚砷酸钠染毒12 h组和各浓度亚砷酸钠染毒24 h组及20.00、30.00μmol/L亚砷酸钠染毒48 h组淋巴细胞分泌的IL-6水平均较高,差异有统计学意义(P〈0.05)。与对照组相比,30.00μmol/L亚砷酸钠染毒12 h组和20.00、30.00μmol/L亚砷酸钠染毒24 h组及10.00-30.00μmol/L亚砷酸钠染毒48 h组淋巴细胞分泌的IL-10水平均较高,差异有统计学意义(P〈0.05)。与对照组相比,10.00-30.00μmol/L亚砷酸钠染毒12、24 h组及各浓度亚砷酸钠染毒48 h组淋巴细胞分泌的PFP水平均较高,差异有统计学意义(P〈0.05)。与相同浓度亚砷酸钠染毒12 h比较,各浓度亚砷酸钠染毒组淋巴细胞分泌的PFP水平均升高,除10.00μmol/L亚砷酸钠染毒24 h外,差异均有统计学意义(P〈0.05)。与对照组相比,30.00μmol/L亚砷酸钠染毒12 h组和20.00、30.00μmol/L亚砷酸钠染毒24、48 h组淋巴细胞分泌的Gr B水平均较高,差异有统计学意义(P〈0.05)。不同浓度亚砷酸钠染毒12、24、48 h后淋巴细胞分泌的IL 展开更多
关键词 亚砷酸钠 人淋巴细胞 白细胞介素-6 白细胞介素-10 穿孔素 颗粒酶B 免疫功能
川崎病并发巨噬细胞活化综合征9例病例报告并文献复习 预览
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作者 何涛 钟家蓉 张静 《中国循证儿科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第6期421-426,共6页
目的探讨川崎病(KD)并发巨噬细胞活化综合征(MAS)临床特点及相关基因和蛋白表达的生物学意义。方法回顾性分析2008年8月至2017年6月重庆医科大学附属儿童医院(我院)收治的KD并发MAS连续病例,系统检索中英文数据库KD并发MAS文献,以出院... 目的探讨川崎病(KD)并发巨噬细胞活化综合征(MAS)临床特点及相关基因和蛋白表达的生物学意义。方法回顾性分析2008年8月至2017年6月重庆医科大学附属儿童医院(我院)收治的KD并发MAS连续病例,系统检索中英文数据库KD并发MAS文献,以出院结局指标分为预后不良组(死亡或放弃治疗)和好转组,提取临床资料及实验室检查结果,探讨KD并发MAS的临床特点。结果我院9例中,均有肝、脾肿大和IVIG无反应,皮疹,趾、指端硬肿或脱屑,冠脉病变各8例,唇红皲裂7例,淋巴结肿大6例,球结膜充血和不完全KD各4例。CRP均升高,纤维蛋白原(Fib)<1.5g·L^-1和铁蛋白>1500ng·mL^-1各8例;ALT升高7例,AST升高和骨髓噬血现象阳性率各6例,甘油三酯(TG)>3.0mmol·L^-14例。2例行HLH相关基因及蛋白表达检测,未发现HLH相关基因(24种)突变,均有NK细胞的穿孔素蛋白表达水平降低,1例同时存在NK细胞颗粒酶B表达以及CTL细胞穿孔素表达降低。复习文献,共报告27例(包括本文9例)KD并发MAS,好转18例,预后不良9例,预后不良组仅不完全KD发生率明显高于好转组(55.6%vs5.9%,P=0.004)。结论KD患儿出现首剂IVIG治疗无反应且伴肝脾肿大、AST和/或ALT、铁蛋白明显升高时,需警惕KD并发MAS可能。未提示KD并发MAS具有遗传倾向,NK细胞中穿孔素表达水平的降低可能与KD患儿并发MAS相关。不完全KD可能是影响KD并发MAS患儿预后的危险因素之一。 展开更多
关键词 川崎病 巨噬细胞活化综合征 临床特点 基因 穿孔素蛋白 颗粒酶B
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大鼠肝移植后颗粒酶B mRNA的表达与急性排斥反应的关系 预览
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作者 肖曙峰 唐波 +5 位作者 张捷 付必莽 田大广 阿永俊 朱洪 李铁汉 《云南医药》 CAS 2017年第1期5-9,共5页
目的 探讨大鼠肝移植后肝组织、外周血和胆汁中颗粒酶B m RNA的表达变化与急性排斥反应的关系,评价术后检测颗粒酶B m RNA的表达对早期诊断急性排斥反应发生的价值。方法 首先建立大鼠原位肝移植胆道T管引流模型。实验动物分为4组,A组... 目的 探讨大鼠肝移植后肝组织、外周血和胆汁中颗粒酶B m RNA的表达变化与急性排斥反应的关系,评价术后检测颗粒酶B m RNA的表达对早期诊断急性排斥反应发生的价值。方法 首先建立大鼠原位肝移植胆道T管引流模型。实验动物分为4组,A组:正常对照组,n=20;B组:同种同基因组,n=30;C组:异基因移植+Cs A组(SD→Wistar大鼠),术后给予免疫抑制剂Cs A 5mg·kg-1·d-1,n=30;D组:急性排斥反应组(SD→Wistar大鼠),n=30。应用RT-PCR方法分别检测各组术后第1、3、5、7和10d外周血和胆汁中颗粒酶B mRNA的表达水平,同时行肝脏病理组织学观察。结果大鼠肝移植后D组肝组织和外周血自术后3d起可以检测到颗粒酶B mRNA的表达,颗粒酶B mRNA的表达在术后第3、5、7、10d与其他组相比有显著统计学差异。各组在胆汁中均未检测到颗粒酶B mRNA的表达。D组急性排斥表现与病理学检查相吻合。结论 肝移植术后检测颗粒酶B mRNA的表达,可以为早期发现急性排斥反应的发生提供诊断依据,而从外周血中检测其表达可以提供一种急性排斥反应早期诊断和检测的方法。 展开更多
关键词 肝移植 颗粒酶B 移植物排斥 RT-PCR 大鼠
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IL-21增强CIK细胞对食管癌EC9706细胞的杀伤作用及其可能的机制 被引量:3
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作者 肖鹏 冯睿婷 +1 位作者 梅家转 赵继智 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CSCD 北大核心 2017年第11期1266-1270,共5页
目的:探讨细胞因子IL-21对CIK细胞体外杀伤食管癌EC9706细胞活性的影响,并初步分析其可能的分子机制。方法:体外无菌分离人外周血单个核细胞,分别进行常规培养和加IL-21培养CIK细胞。流式细胞术检测2种培养CIK细胞的免疫表型,LDH释放... 目的:探讨细胞因子IL-21对CIK细胞体外杀伤食管癌EC9706细胞活性的影响,并初步分析其可能的分子机制。方法:体外无菌分离人外周血单个核细胞,分别进行常规培养和加IL-21培养CIK细胞。流式细胞术检测2种培养CIK细胞的免疫表型,LDH释放法检测2种培养CIK细胞杀伤食管癌EC9706的活性,ELISA法检测2种CIK细胞培养上清液IFN-γ浓度。结果:常规培养和加IL-21培养的2种CIK细胞增殖数量无明显差异。加IL-21培养的CIK细胞CD3+CD56+细胞比例、CD3+细胞内颗粒酶B和穿孔素表达率均显著高于常规培养CIK细胞[(26.95±3.53)%vs(16.18±1.04)%,(33.29±2.30)%vs(23.58±2.28)%和(59.70±1.91)%vs(45.96±2.67)%,均P〈0.05)。效靶比20∶1和30∶1时,加IL-21培养的CIK细胞杀伤EC9706细胞的活性均显著高于常规培养的CIK细胞[20∶1时:(43.66±1.99)%vs(34.59±1.75)%;30∶1时:(57.52±2.15)%vs(42.23±1.87)%,均P〈0.05]。加IL-21培养CIK细胞的上清液FN-γ的浓度明显高于常规培养CIK细胞的上清液[(142.7±13.4)vs(42.6±3.3)ng/L,P〈0.05]。结论:IL-21增加CD3+CD56+细胞比例和颗粒酶B及穿孔素的表达,提高CIK细胞分泌IFN-γ,从而增强CIK细胞对EC9706细胞的杀伤活性。 展开更多
关键词 食管癌 细胞因子诱导的杀伤细胞 白介素-21 穿孔素 颗粒酶B EC9706细胞
CD8+T细胞对白癜风患者黑素细胞的杀伤机制 预览
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作者 马锦媛 杨钰琪 +5 位作者 李舒丽 郭伟楠 宋璞 安亚文 高天文 李春英 《中国麻风皮肤病杂志》 2017年第6期341-343,共3页
目的: 明确CD8+T细胞对白癜风患者黑素细胞的杀伤机制.方法: 分选白癜风患者及正常人外周血CD8+T细胞,分别与原代黑素细胞及永生化正常黑素细胞系PIG1及永生化白癜风黑素细胞系PIG3V建立共孵育杀伤模型,采用流式细胞术检测靶细胞被... 目的: 明确CD8+T细胞对白癜风患者黑素细胞的杀伤机制.方法: 分选白癜风患者及正常人外周血CD8+T细胞,分别与原代黑素细胞及永生化正常黑素细胞系PIG1及永生化白癜风黑素细胞系PIG3V建立共孵育杀伤模型,采用流式细胞术检测靶细胞被杀伤情况,酶联免疫吸附法(ELISA)检测杀伤环境中IFN-γ、TNF-α、颗粒酶B及穿孔素的分泌水平.结果: 白癜风患者外周血CD8+T细胞杀伤原代黑素细胞及PIG3V能力,分泌IFN-γ、颗粒酶B及穿孔素水平均高于健康对照,而杀伤PIG1能力和TNF-α水平并无显著差异;白癜风患者CD8+T细胞IFN-γ分泌水平与细胞杀伤率呈明显正相关.结论: 白癜风患者CD8+T细胞杀伤黑素细胞是白癜风发病的重要机制,且该杀伤作用可能依赖IFN-γ、颗粒酶B及穿孔素分泌水平的上调. 展开更多
关键词 白癜风 CD8+T细胞 干扰素Γ 颗粒酶B 穿孔素
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肠道白色念珠菌感染对脾虚小鼠小肠黏膜中T细胞亚群和穿孔素-颗粒酶B的影响
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作者 韩晓伟 马贤德 +4 位作者 谭健 吴艳梅 雷萍 侯殿东 关洪全 《中华中医药学刊》 北大核心 2017年第8期2046-2049,I0014-I0017共8页
目的:通过观察肠道白色念珠菌感染对脾虚小鼠小肠黏膜固有层中T细胞亚群和穿孔素、颗粒酶的影响,探讨机体在脾虚状态下感染白色念珠菌的部分免疫机制。方法:本实验采用饮食失节加劳倦过度的复合因素制备小鼠脾虚模型,经肠道感染白色... 目的:通过观察肠道白色念珠菌感染对脾虚小鼠小肠黏膜固有层中T细胞亚群和穿孔素、颗粒酶的影响,探讨机体在脾虚状态下感染白色念珠菌的部分免疫机制。方法:本实验采用饮食失节加劳倦过度的复合因素制备小鼠脾虚模型,经肠道感染白色念珠菌后第14天,应用流式细胞术检测小鼠小肠黏膜固有层中CD3+、CD4+和CD8+T的细胞百分比,采用免疫荧光法检测各组小鼠小肠黏膜中穿孔素、颗粒酶阳性表达细胞数。结果:与正常对照组比较,其他3组小鼠小肠黏膜固有层中CD4+T细胞比例均有不同程度下降,CD8+T细胞比例均有不同程度上升,有统计学意义(P〈0.01);正常感染白念组和脾虚感染白念组小鼠小肠黏膜固有层中穿孔素阳性表达细胞均明显增多(P〈0.05或P〈0.01),而颗粒酶阳性表达细胞仅脾虚感染白念组明显增多(P〈0.01)。其中,脾虚感染白念组最显著,与其他3组均具有统计学意义(P〈0.05或P〈0.01)。结论:小肠黏膜固有层中穿孔素和颗粒酶的高表达可能是造成小肠局部损伤的免疫机制之一,脾虚小鼠肠道局部免疫功能下降,感染发生后可加重肠道局部损伤程度。 展开更多
关键词 脾虚证 白色念珠菌 T细胞亚群 穿孔素 颗粒酶B
反复种植失败患者CD8+T细胞数量及功能的研究 预览
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作者 徐士儒 李玉叶 +4 位作者 连若纯 余姝毅 许健 陈聪 曾勇 《实用医学杂志》 北大核心 2017年第23期3885-3890,共6页
目的探讨反复种植失败(RIF)患者中周围血及子宫内膜CD8+T细胞的数量及功能变化。方法在黄体中期,对37例来本中心就诊的RIF患者周围血及子宫内膜进行取样。流式及免疫组化分析CD8+T细胞的数量,流式检测周围血CD8+T细胞表达穿孔素... 目的探讨反复种植失败(RIF)患者中周围血及子宫内膜CD8+T细胞的数量及功能变化。方法在黄体中期,对37例来本中心就诊的RIF患者周围血及子宫内膜进行取样。流式及免疫组化分析CD8+T细胞的数量,流式检测周围血CD8+T细胞表达穿孔素及颗粒酶B的情况,免疫荧光检测子宫内膜CD8+T细胞穿孔素及颗粒酶B的表达情况。结果与正常对照组相比较,RIF患者周围血CD8+T细胞数量(37.22%vs.37.15%,P〉0.05)无明显差异。而子宫内膜CD8+T细胞的数量(1.99%狐3.77%,P〈0.001)显著高于正常对照组。周围血和子宫内膜CD8+T细胞表达的穿孔素和颗粒酶B在正常对照组和RIF组之间均无统计学变化。结论与正常对照组相比较,RIF患者子宫内膜CD8+T细胞的数量显著增多,但周围血和子宫内膜CD8+T细胞的杀伤功能无显著差异,说明CD8+T细胞的杀伤功能可能不是导致RIF发生的关键因素,但具体的分子机制还需进一步研究。 展开更多
关键词 反复种植失败 CD8+T细胞 穿孔素 颗粒酶
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蝎毒多肽提取物调控肝脏移植瘤中自然杀伤细胞浸润的机制研究 预览 被引量:2
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作者 韩琛 王朝霞 +4 位作者 贾青 王兆朋 张月英 张钰 王恒孝 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期390-395,400共7页
目的:观察蝎毒多肽提取物(PESV)对H22细胞小鼠肝脏原位移植瘤模型中肿瘤浸润自然杀伤细胞(Natural killer cell,NK cell)的浸润分布及活性的影响。方法:C57BL/6小鼠肝脏接种H22肝癌细胞株悬液构建原位移植瘤模型,设立正常对照组... 目的:观察蝎毒多肽提取物(PESV)对H22细胞小鼠肝脏原位移植瘤模型中肿瘤浸润自然杀伤细胞(Natural killer cell,NK cell)的浸润分布及活性的影响。方法:C57BL/6小鼠肝脏接种H22肝癌细胞株悬液构建原位移植瘤模型,设立正常对照组、荷瘤对照组、PESV小剂量组和PESV大剂量组,分别给予生理盐水及PESV灌胃干预14 d,观察比较各组小鼠给药后的肿瘤体积、肿瘤质量及生存期变化,通过HE染色比较各组肿瘤组织形态学变化,流式细胞术和免疫组化检测肝脏及癌组织中浸润NK1.1~+细胞的比例及分布特点,real-time PCR法检测癌组织中穿孔素、颗粒酶B的表达。结果:PESV大、小剂量组肝脏移植瘤的生长受到抑制,肿瘤体积和瘤质量均低于荷瘤对照组,肿瘤抑制率分别为30.77%和15.38%,生存期观察显示PESV大剂量组能显著延长荷瘤小鼠生存时间,生命延长率为34.06%,P〈0.05;荷瘤对照组肿瘤细胞排列紧密,异型性显著,呈浸润性生长,PESV大、小剂量组出现明显坏死区,细胞异型性减轻;PESV大剂量组小鼠肝脏NK细胞占肝脏总淋巴细胞的比例是(5.91±0.49)%,显著高于荷瘤对照组(3.69±0.50)%(P〈0.05),且大量浸润分布在肿瘤组织及癌旁组织中;PESV大剂量组瘤组织中穿孔素和颗粒酶的mRNA表达量分别是荷瘤对照组的3.62倍和5.82倍(P〈0.05)。结论:PESV可通过提高H22细胞肝脏原位移植瘤中浸润NK细胞的比例,促进NK细胞向肿瘤组织迁移,诱导穿孔素和颗粒酶B的产生,有助于NK细胞杀伤活性的恢复,从而增强对肿瘤细胞的清除,抑制肿瘤的浸润生长。 展开更多
关键词 蝎毒 肝肿瘤 自然杀伤细胞 穿孔素 颗粒酶B
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灵芝酸G诱导Vβ3^+CD8^+T细胞抗肿瘤活性的研究 预览
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作者 余福恒 胡芳 +4 位作者 汪宏良 李仲娟 李超 柯萧韵 陈敏 《湖北理工学院学报》 2016年第4期54-57,共4页
为探讨SEA(Staphylococcus Enterotoxin A,SEA)存在下的灵芝酸G(Licochalcone-G,LG)对小鼠CD8+细胞活化及杀伤肿瘤细胞的作用,采用流式细胞技术分别检测CD8+细胞表面分子表达及活化后细胞内的颗粒酶B(Granzyme B,Gr B)和穿孔素... 为探讨SEA(Staphylococcus Enterotoxin A,SEA)存在下的灵芝酸G(Licochalcone-G,LG)对小鼠CD8+细胞活化及杀伤肿瘤细胞的作用,采用流式细胞技术分别检测CD8+细胞表面分子表达及活化后细胞内的颗粒酶B(Granzyme B,Gr B)和穿孔素(Perforin,Pf)的水平、Caspase-3酶的活性分析肿瘤细胞凋亡。结果为:SEA组和SEA+LG组经过3 d刺激能激活小鼠CD8+细胞Vβ3和Vβ11分别为7.4±0.45,11.5±0.72。体外实验显示,SEA组和SEA+LG组的Vβ3+CD8+T细胞内Gr B%的水平分别为70.2±8.04,91.6±8.16;Pf%的水平分别为67.3±6.86,86.4±7.17,与对照组相比有显著性差异(t=5.24,t=6.43;t=4.31,t=5.47,P〈0.01);SEA组和SEA+LG组的HL-60肿瘤细胞内Caspase-3酶的活性分别为37.6±4.81,68.8±6.82,与对照组相比有显著性差异(t=3.18,t=5.27,P〈0.01);SEA组和SEA+LG组的A20肿瘤细胞内Caspase-3酶的活性分别为23.7±3.58,54.1±5.71,与对照组相比有显著性差异(t=4.23,t=4.88,P〈0.01)。SEA依赖的LG能促使小鼠CD8+T细胞Vβ3和Vβ11分子活化,活化的Vβ3+CD8+T细胞内分泌大量的Gr B和Pf,并通过Caspase-3的信号途径诱导肿瘤细胞凋亡。 展开更多
关键词 颗粒酶B 灵芝酸G 肿瘤细胞
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Monomethyl fumarate augments NK cell lysis of tumor cells through degranulation and the upregulation of NKp46 and CDIO7a
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作者 Heidi Vego Kristin L Sand +4 位作者 Rune A Hoglund Lars-Egil Fallang Glenn Gundersen Trygve Holmoy Azzam A Maghazachi 《中国免疫学杂志:英文版》 SCIE CAS CSCD 2016年第1期57-64,共8页
Dimethyl fumarate (DMF ) 是使用到对待的新药多重硬化(MS ) 病人。这里,我们在生来的杀手(NK ) 的各种各样的活动检验了 DMF 和 DMF 代谢物 monomethyl fumarate (MMF ) 的效果房间。我们证明 MMF 扩充 K562 和 RAJI 肿瘤房间的主要 ... Dimethyl fumarate (DMF ) 是使用到对待的新药多重硬化(MS ) 病人。这里,我们在生来的杀手(NK ) 的各种各样的活动检验了 DMF 和 DMF 代谢物 monomethyl fumarate (MMF ) 的效果房间。我们证明 MMF 扩充 K562 和 RAJI 肿瘤房间的主要 CD56 <sup>&#x0002B;</sup>, 然而并非 CD56 <sup>&#x02212;</sup>, NK 房间细胞溶解。MMF 为 24 h 在孵化以后在 CD56 <sup>&#x0002B;</sup>, 然而并非 CD56 <sup>&#x02212;</sup>, NK 房间的表面上导致了 NKp46 表示。这效果密切通过这代谢物从这些房间在 CD56 <sup>&#x0002B;</sup> NK 房间和 Granzyme B 版本的正式就职的表面上与 CD107a 表示的 upregulation 被相关。anti-NKp46 抗体通过 CD56 <sup>&#x0002B;</sup> NK 房间禁止了 CD107a 的导致 MMF 的 upregulation 和肿瘤房间的细胞溶解。因此,这些结果是第一证明 MMF 扩充肿瘤目标房间的 CD56 <sup>&#x0002B;</sup> NK 房间细胞溶解,效果通过 NKp46 调停了。这新奇效果在癌症为治疗学或预防的协议建议 MMF 的使用。 展开更多
关键词 富马酸单甲酯 细胞裂解 肿瘤细胞 颗粒酶B 富马酸二甲酯 NK细胞 细胞表面 MMF
雷公藤与附子心脏急性毒性的血浆生物标志物的初步探讨
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作者 王淑荣 陈小淼 +5 位作者 凌霜 郭慧宁 倪荣镇 党延启 马婧 许锦文 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期759-761,共3页
目的寻找雷公藤和附子心脏毒性的新的生物标志物。方法给大鼠雷公藤和附子,检测血浆中的心肌肌钙蛋白-I和颗粒酶B及其他一些生化指标。结果血浆中心肌肌钙蛋白I只能反映心肌有严重损伤的雄性大鼠的心脏毒性,但难反映出心脏毒性程度较低... 目的寻找雷公藤和附子心脏毒性的新的生物标志物。方法给大鼠雷公藤和附子,检测血浆中的心肌肌钙蛋白-I和颗粒酶B及其他一些生化指标。结果血浆中心肌肌钙蛋白I只能反映心肌有严重损伤的雄性大鼠的心脏毒性,但难反映出心脏毒性程度较低的雌性大鼠的毒性状况。结论寻找有毒中药心脏毒性的新的生物标志物将有益于早期的临床监测和评价。 展开更多
关键词 有毒中药 心脏毒性 生物标志物 心肌肌钙蛋白-I 颗粒酶B
NK92细胞经非溶酶体途径快速生成并释放35kD颗粒酶B至靶细胞
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作者 汪蕾 江绍伟 +3 位作者 肖凌 陈琳 李安政 郑芳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期205-211,共7页
目的探讨NK92细胞能否经非分泌型溶酶体途径分泌颗粒酶B(GZB)以及其可能的分泌机制。方法 NK92细胞作为细胞模型,经佛波酯(PMA)和离子霉素(ION)活化后4 h内,采用免疫荧光染色和胶体金标记免疫电镜技术检测NK92细胞胞质中蛋白合成... 目的探讨NK92细胞能否经非分泌型溶酶体途径分泌颗粒酶B(GZB)以及其可能的分泌机制。方法 NK92细胞作为细胞模型,经佛波酯(PMA)和离子霉素(ION)活化后4 h内,采用免疫荧光染色和胶体金标记免疫电镜技术检测NK92细胞胞质中蛋白合成功能被抑制前后相对分子质量(Mr)35 000和32 000 GZB的含量及其分布情况;采用Western blot法检测分离纯化分泌型溶酶体(SL)及不含溶酶体胞质中的GZB种类;通过EDTA抑制溶酶体的胞吐来阻断Mr32 000 GZB的释放,观察活化后NK92细胞上清中的Mr35 000 GZB含量;将活化的NK92细胞与K562细胞共培养,观察Mr35 000 GZB能否进入K562细胞;观察活化后NK92细胞的死亡率,并检测其分泌Mr35 000 GZB的酶活性。结果 NK92细胞PMA/ION刺激4 h后,在SL外的胞质中生成大量GZB,Mr为35 000区别于SL内GZB的Mr32 000。经免疫电镜和免疫荧光染色进一步显示,这些GZB位于溶酶体外的小囊泡内。同时,Mr35 000 GZB能被分泌至细胞外。进一步检测发现受到刺激的NK92细胞在SL外的胞质中同时出现GZB/丝氨酸蛋白酶抑制剂9(serpinb9)复合物以及Mr35 000 GZB,但死亡率未上升,与之相应的是SL内的GZB具有酶活性,SL外的Mr35 000 GZB为酶原形式,表明Mr35 000 GZB并非由SL漏出。结论人NK细胞内存在SL外无酶活性的Mr35 000 GZB,以非溶酶体途径快速生成方式分泌至细胞外,提供了部分细胞外的GZB。 展开更多
关键词 颗粒酶B NK92细胞 分泌型溶酶体 细胞凋亡
颗粒酶B在慢性鼓膜穿孔炎症损伤修复中的应用 预览
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作者 张天宇 SHEN Steve 杨琳 《中国眼耳鼻喉科杂志》 2016年第1期7-9,15共4页
鼓膜穿孔延缓愈合可导致声波传递增益减少。文献报道颗粒酶B通过细胞内、外途径介导炎症反应,影响或延缓皮肤等伤口愈合;颗粒酶B基因敲除的小鼠则不发生迟缓愈合。鼓膜结构与皮肤有相似性,但在正常鼓膜与损伤延迟愈合鼓膜中颗粒酶B的表... 鼓膜穿孔延缓愈合可导致声波传递增益减少。文献报道颗粒酶B通过细胞内、外途径介导炎症反应,影响或延缓皮肤等伤口愈合;颗粒酶B基因敲除的小鼠则不发生迟缓愈合。鼓膜结构与皮肤有相似性,但在正常鼓膜与损伤延迟愈合鼓膜中颗粒酶B的表达差异鲜有报道。本文总结了慢性鼓膜穿孔产生和延迟愈合的机制及颗粒酶B可能对其影响的途径,为研究颗粒酶B抑制剂在促进慢性鼓膜穿孔炎症损伤修复中的作用,为临床探索新的治疗手段提供依据。 展开更多
关键词 颗粒酶B 鼓膜穿孔 炎症反应 损伤修复
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IL-36γ促进人CD8+T淋巴细胞细胞因子的分泌 预览 被引量:3
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作者 吕全省 马静姝 +5 位作者 古彦铮 王雪峰 王明元 张学光 朱一蓓 卢斌峰 《江苏大学学报:医学版》 CAS 2016年第3期193-198,共6页
目的:探讨白细胞介素36γ(IL-36γ)是否能够增强体外培养的人CD8+T淋巴细胞分泌γ干扰素。方法:经密度梯度离心法从健康人外周血分离获得外周血单个核细胞(PBMC),经磁珠阳性选择富集纯化CD8+T淋巴细胞,分别用CD3单克隆抗体(m A... 目的:探讨白细胞介素36γ(IL-36γ)是否能够增强体外培养的人CD8+T淋巴细胞分泌γ干扰素。方法:经密度梯度离心法从健康人外周血分离获得外周血单个核细胞(PBMC),经磁珠阳性选择富集纯化CD8+T淋巴细胞,分别用CD3单克隆抗体(m Ab)+CD28 m Ab,CD3 mAb+CD28 mAb+IL-12,CD3 mAb+CD28 mAb+IL-36γ以及CD3m Ab+CD28 m Ab+IL-12+IL-36γ4种因子组合刺激培养24 h和72 h。收集细胞,采用免疫荧光标记和流式细胞术分析分选富集的CD8+T淋巴细胞纯度以及γ干扰素的表达;采用实时PCR检测各组细胞IL-36受体(IL-36R)、γ干扰素和颗粒酶B mRNA的表达。结果:人CD8+T淋巴细胞表达IL-36R;各组因子刺激的人CD8+T淋巴细胞形态没有明显差异;人CD8+T淋巴细胞经IL-36γ刺激后,γ干扰素、颗粒酶B mRNA表达上调;同时,IL-36γ和IL-12具有协同刺激CD8+T淋巴细胞的作用。结论:IL-36γ能促进体外培养的人CD8+T淋巴细胞分泌细胞因子,并且与IL-12具有协同作用。 展开更多
关键词 白细胞介素36γ CD8+T淋巴细胞 Γ干扰素 颗粒酶B
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