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干扰素调节因子3基因敲除对伪狂犬病病毒增殖的影响 预览
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作者 张爽 樊爽爽 +7 位作者 常雯茹 丁光绪 郭瑞珍 段利芳 杜永坤 褚贝贝 杨国宇 王江 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第5期1253-1262,共10页
试验旨在研究敲除干扰素调节因子3 (interferon regulatory factor 3,IRF3)对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)复制的影响。使用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑技术建立了IRF3基因敲除PK15细胞系。通过构建重组质粒pIRF3-sgRNA,... 试验旨在研究敲除干扰素调节因子3 (interferon regulatory factor 3,IRF3)对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)复制的影响。使用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑技术建立了IRF3基因敲除PK15细胞系。通过构建重组质粒pIRF3-sgRNA,转染至HEK293T/17细胞,收获慢病毒并感染PK15细胞,经嘌呤霉素筛选获得多克隆细胞系,T7酶切鉴定后通过有限稀释法获得PK15-IRF3-/-单克隆稳定细胞系。为验证敲除IRF3基因稳定细胞系是否构建成功,采用实时荧光定量PCR、Western blotting方法检测PRV相关基因及蛋白的表达,应用荧光显微镜和流式细胞术观察病毒复制情况并进行病毒滴度检测。结果显示,PK15-IRF3-/-细胞系感染PRV-GFP后PK15-IRF3-/-细胞荧光强度明显强于PK15细胞。感染PRV野毒(PRV-QXX)后PK15-IRF3-/-病毒滴度明显强于PK15细胞,PRV的gE蛋白水平明显高于PK15细胞。在mRNA水平检测两种细胞中PRV TK基因的变化也得到相同的结果。进一步研究表明,在感染PRV-QXX后,PK15细胞中IFN-βmRNA会随着时间增加显著增高(P<0.05),但PK15-IRF3-/-细胞中IFN-βmRNA则无明显变化。上述结果表明,敲除IRF3基因后显著促进PRV的增殖,IRF3在病毒的复制中发挥着重要作用,为伪狂犬病的防控提供了新的方法和策略。 展开更多
关键词 干扰素调节因子3 (IRF3) 伪狂犬病病毒(PRV) CRISPR/Cas9
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轮状病毒UK株NSP1蛋白对人源宿主细胞干扰素调节因子3的影响
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作者 冉旭华 刘阳阳 +2 位作者 曹思 张峣 闻晓波 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第7期708-712,共5页
目的探讨轮状病毒UK株NSP1蛋白对人源宿主细胞干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3,IRF3)的影响。方法将UK毒株感染人结肠腺癌细胞Caco-2 6、12、24 h后,通过实时定量PCR和Western blot检测细胞内源性IRF3在转录水平和蛋... 目的探讨轮状病毒UK株NSP1蛋白对人源宿主细胞干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3,IRF3)的影响。方法将UK毒株感染人结肠腺癌细胞Caco-2 6、12、24 h后,通过实时定量PCR和Western blot检测细胞内源性IRF3在转录水平和蛋白水平的变化;构建质粒pCMV-3×FLAG-UK-NSP1和缺失IRF3结合结构域的质粒pCMV-3×FLAG-UK-NSP1△IRF3,分别单独转染及与p EGFP-N3-IRF3质粒共转染293T细胞4、8、12 h后,Western blot分析IRF3蛋白含量的变化。结果 IRF3 m RNA转录水平无明显变化,UK毒株感染组和NSP1质粒转染组IRF3蛋白含量均下降。结论 UK-NSP1能够介导人IRF3蛋白降解,且需要IRF3结合结构域参与。 展开更多
关键词 轮状病毒UK株 NSP1 干扰素调节因子3 免疫抑制
清热利湿活血方对HBV转基因小鼠的抗病毒作用及对TKB1-IRF3表达的影响
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作者 张传涛 廖婷婷 +5 位作者 黄群 张技 辜海英 杨鸿 黄晓群 王芳瑜 《广州中医药大学学报》 CAS 2018年第3期490-495,共6页
【目的】观察清热利湿活血方对乙型肝炎病毒(HBV)转基因小鼠的抗病毒作用及对肝组织TANK结合激酶1(TKB1)、干扰素调控因子3(IRF3)表达的影响,以阐明其作用机制。【方法】首先建立清热利湿活血方的HPLC指纹图谱。再将HBV转基因小... 【目的】观察清热利湿活血方对乙型肝炎病毒(HBV)转基因小鼠的抗病毒作用及对肝组织TANK结合激酶1(TKB1)、干扰素调控因子3(IRF3)表达的影响,以阐明其作用机制。【方法】首先建立清热利湿活血方的HPLC指纹图谱。再将HBV转基因小鼠随机分为4组,即模型组,苦参素组,清热利湿活血方高、低剂量组,每组8只。苦参素组小鼠给予灌胃剂量为0.15 g·kg^-1·d^-1的苦参素混悬液,清热利湿活血方高、低剂量组小鼠分别给予灌胃剂量为7、2 g·kg^-1·d^-1的清热利湿活血方混悬液,给药共5周。治疗结束后,采用酶链免疫吸附法(ELISA)检测血清及肝组织乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg),采用常规苏木素—伊红(HE)染色观察肝组织病理变化,采用定量聚合酶链反应(qPCR)法检测血清中HBV DNA及肝组织中HBV DNA、TKB1 mRNA、IRF3 mRNA表达,采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测肝组织TKB1、IRF3的蛋白表达。【结果】标定14个特征峰构成清热利湿活血方的指纹图谱,其中1号峰为没食子酸,8号峰为柯里拉京,9号峰为虎杖苷,10号峰为鞣花酸,13号峰为甘草酸,14号峰为齐墩果酸。高剂量清热利湿活血方可减轻肝细胞轻度脂肪变性、肝细胞轻度水肿及Kuffer细胞增生等病理改变,显著降低HBV转基因小鼠肝脏和血清中的HBsAg、HBV DNA水平(P〈0.05或P〈0.01),显著增强小鼠TKB1、IRF3的mRNA及蛋白表达水平(P〈0.05或P〈0.01)。【结论】清热利湿活血方有抗HBV作用,其抗病毒机制可能与增强TKB1、IRF7 mRNA及蛋白表达,进而影响干扰素分泌有关。 展开更多
关键词 清热利湿活血方 乙型肝炎病毒 TANK结合激酶1 干扰素调控因子3 转基因小鼠
TLR3和IRF3在华支睾吸虫感染C3H/HeN小鼠中表达的初步分析 预览 被引量:3
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作者 刘瀛 颜超 +3 位作者 华慧 李向阳 汤仁仙 郑葵阳 《徐州医学院学报》 CAS 2013年第9期602-605,共4页
目的 建立华支睾吸虫感染小鼠模型,初步分析TLR3、IRF3基因在小鼠肝脏中的表达情况.方法 随机选用健康雌性C3H/HeN小鼠感染华支睾吸虫建立感染模型,分别在感染第0、1、7、14、28、56、84天颈椎脱臼处死小鼠,取肝脏组织进行病理学观察,... 目的 建立华支睾吸虫感染小鼠模型,初步分析TLR3、IRF3基因在小鼠肝脏中的表达情况.方法 随机选用健康雌性C3H/HeN小鼠感染华支睾吸虫建立感染模型,分别在感染第0、1、7、14、28、56、84天颈椎脱臼处死小鼠,取肝脏组织进行病理学观察,收集粪便检查华支睾吸虫虫卵.同时,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝脏中Toll样受体(TLRs)中的TLR3和IRF3的mRNA的表达情况.结果 自感染后第20~30天检查出华支睾吸虫虫卵;肝脏病理学结果显示,与正常组小鼠相比,随着时间的增加,感染组小鼠肝脏汇管区由少量炎症细胞浸润、胆管上皮反应性增生发展到在该区域出现大量纤维组织增生伴有炎症细胞浸润,表明华支睾吸虫感染C3H/HeN小鼠模型成功建立.与正常组相比,感染组自感染后第1天起TLR3和IRF3的mRNA表达均升高(P〈0.01),均在第84天开始下降.结论 华支睾吸虫感染C3H/HeN小鼠后可激活TLR3-TRIF途径,提示TLR3-TRIF途径可能在华支睾吸虫致病过程中起了一定的作用. 展开更多
关键词 华支睾吸虫 C3H HeN小鼠 TLR3 IRF3
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人干扰素调节因子3基因启动子的初步鉴定
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作者 徐华国 任伟 +1 位作者 陆超 周国平 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期732-736,共5页
目的克隆并鉴定人干扰素调节因子3(IRF3)基因启动子,为进一步研究其转录调控机制奠定基础。方法用BLAST分析软件进行序列比较和同源分析不同种系IRF3启动子序列,以人类基因组DNA为模板,通过PCR定向克隆和酶切亚克隆策略,构建了覆... 目的克隆并鉴定人干扰素调节因子3(IRF3)基因启动子,为进一步研究其转录调控机制奠定基础。方法用BLAST分析软件进行序列比较和同源分析不同种系IRF3启动子序列,以人类基因组DNA为模板,通过PCR定向克隆和酶切亚克隆策略,构建了覆盖IRF3基因5’侧翼区转录起始位点上游1kb区域的一系列IRF3启动子虫荧光素酶报告基因重组体并瞬时转染宫颈癌HeLa细胞,用虫荧光素酶检测报告基因启动子的活性。结果在人、小鼠的IRF3推断的启动子区域进行同源比较发现,推断的E2F和GATA-1高度进化保守;启动子活性分析表明,IRF3启动子区域定位于主要转录起始位点区域前111~167bp的区域内。采用转录因子结合位点预测分析软件分析表明,该区域内存在E2F转录因子结合位点。结论-167~111bp区存在IRF3启动子的核心调控元件,转录因子E2F可能参与IRF3的转录调控。 展开更多
关键词 干扰素调节因子3(IRF3) 虫荧光素酶活性检测 启动子鉴定 转录调控
PAI-2与IRF-3相互作用的鉴定
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作者 张宇清 李平 +4 位作者 侯敏 王霞 樊静 谭理 朱运松 《生物化学与生物物理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第7期 661-665,共5页
2型纤溶酶原激活物抑制剂(plasminogen activator inhibitor type-2,PAI-2)除了参与纤溶活性的调节、肿瘤的浸润和迁移外,在抑制细胞凋亡方面也发挥着重要作用。现已明确,PAI-2分子中的CD螺旋间区是PAI-2与其他蛋白质相互作用的结构... 2型纤溶酶原激活物抑制剂(plasminogen activator inhibitor type-2,PAI-2)除了参与纤溶活性的调节、肿瘤的浸润和迁移外,在抑制细胞凋亡方面也发挥着重要作用。现已明确,PAI-2分子中的CD螺旋间区是PAI-2与其他蛋白质相互作用的结构域,该区的缺失将直接导致PAI-2丧失对TNF-α诱导细胞凋亡的拮抗功能,但其作用机制不详。以PAI-2的CD螺旋间区为诱饵,利用Gal4酵母双杂交系统筛选凋亡过程中的HeLa细胞cDNA文库,发现干扰素调节因子3(interferon regulatory factor-3,IRF-3)C端的98个氨基酸残基与PAI-2的CD螺旋间区之间存在相互作用。通过RT-PCR获得IRF-3的全长cDNA。免疫共沉淀实验进一步证实PAI-2通过其CD螺旋间区与IRF-3在细胞内也存在特异性的相互作用。IRF-3是一种转录调节因子,在抗病毒感染、免疫调节、病毒诱导的细胞凋亡中发挥重要作用。因此证实PAI-2与IRF-3之间存在相互作用,为进一步研究PAI-2参与抗病毒感染或抗细胞凋亡等方面打下了基础。 展开更多
关键词 PAI-2 抗细胞凋亡 肿瘤 抗病毒感染 纤溶酶原激活物抑制剂 蛋白质相互作用 细胞内 结构域 酵母双杂交系统 全长CDNA
Association of Single Nucleotide Polymorphisms in IRF6 and TGFA Genes With Nonsyndromic Cleft Lip With Or Without Cleft Palate in Chinese Patients 预览
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作者 Ya Shen Yugui Cui +4 位作者 Weidong Wan Xiaoping Zhou Lu Cheng Zuhong Lu Jiayin Liu 《南京医科大学学报:英文版》 2009年第1期40-45,共6页
客观 Nonsyndromic 劈开嘴唇与或没有劈开腭(NSCL/P ) 是有不清楚的病原学的一个普通出生缺点。基因、环境的因素可以贡献 NSCL/P。许多基因作为与这疾病联系的候选人基因被识别了。干扰素规章的因素 6 (IRF6 ) 基因和转变生长因素 -- ... 客观 Nonsyndromic 劈开嘴唇与或没有劈开腭(NSCL/P ) 是有不清楚的病原学的一个普通出生缺点。基因、环境的因素可以贡献 NSCL/P。许多基因作为与这疾病联系的候选人基因被识别了。干扰素规章的因素 6 (IRF6 ) 基因和转变生长因素 -- 一(TGFA ) 基因似乎在 NSCL/P 的倾向关键。这里,我们评估了一些单个核苷酸多型性(SNP ) 在与 NSCL/P.Methods 由父亲,母亲和影响后代组成的中国原子家庭的 TGFA 和 IRF6 基因的 loci NSCL/P 的五十个病人被整形外科医生证实。他们和他们的父母在学习被包括,都与知情同意。TGFA 和 IRF6 基因的 SNP loci 被微数组技术分析。一些 PCR 产品随机被选择并且定序检查微数组结果。在耐心的组和父母组之间的基因类型和等位基因频率的分发被比较。然后, Haplotype 相对风险(HRR ) 和传播不平衡测试(TDT ) 被执行。结果随机选择的 PCR 产品的序列都与微数组结果一致。所有 loci 在 Hardy-Weinberg 平衡。在在病人和他们的父母之间的遗传型和等位基因的分发没有重要差别。用 HRR 和 TDT 分析, IRF6 的 V274I 与 NSCL/P 被联系,当 IRF6 的另一个 SNP 地点不是时。连接不平衡的充分证据与 HRR 分析,然而并非与 TDT 分析在 TGFA 和疾病的 2 SNP loci 之间被发现。我们的学习在亚洲祖先的人口在 NSCL/P 的病原学证实 IRF6 的贡献的结论。有 NSCL/P 的 TGFA 的协会要求进一步的研究。 展开更多
关键词 唇裂 NSCL/P 生长因子 遗传性 干扰素调整
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PRRSV—GP5蛋白对干扰素调节因子-3磷酸化的影响 被引量:1
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作者 牛晓芸 王艳丽 +3 位作者 熊志轩 张显浩 李康宁 贺东生 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第1期17-20,205共5页
为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)-GP5蛋白对干扰素调节因子-3(IRF-3)磷酸化的影响,试验根据PRRSVCH-la毒株核苷酸序列,设计并合成用于扩增PRRSV—GP5基因的特异引物,将目的基因扩增产物与真核表达载体pcDNA3.1(+)连... 为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)-GP5蛋白对干扰素调节因子-3(IRF-3)磷酸化的影响,试验根据PRRSVCH-la毒株核苷酸序列,设计并合成用于扩增PRRSV—GP5基因的特异引物,将目的基因扩增产物与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,转染Marc-145细胞,间接免疫荧光试验鉴定目的蛋白的表达,应用SDS—PAGE和Western—blot分析GP5对IRF-3的影响。结果表明:经RT—PCR扩增,得到的GP5基因大小与预期一致;间接免疫荧光试验证明,GP5蛋白在Marc-145细胞中成功表达;SDS—PAGE和Western—blot分析显示,GP5基因可以抑制IRF一3的磷酸化。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) GP5基因 真核表达 干扰素调节因子-3(IRF-3)
TLR4介导汉滩病毒感染的血管内皮细胞转录因子NF—κB和IRF-3的细胞核移位
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作者 于海涛 王平忠 +5 位作者 白雪帆 张颖 张野 南雪平 姜泓 李彧 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期224-227,共4页
目的观察汉滩病毒(HTNV)感染的TLR4基因沉默的EVC304细胞(TLR4-EVC304)转录因子NF-κB和IRF-3的细胞核移位情况,为抗HTNV固有免疫及其信号转导研究提供新资料。方法用汉滩病毒76.118株分别感染TLR4-和TLR4+EVC304细胞,同时以LP... 目的观察汉滩病毒(HTNV)感染的TLR4基因沉默的EVC304细胞(TLR4-EVC304)转录因子NF-κB和IRF-3的细胞核移位情况,为抗HTNV固有免疫及其信号转导研究提供新资料。方法用汉滩病毒76.118株分别感染TLR4-和TLR4+EVC304细胞,同时以LPS作为阳性对照组,无任何刺激作为阴性对照组,6h后用间接免疫荧光方法检测NF—κB和IRF-3的细胞核移位现象。结果汉滩病毒76—118株刺激6h后,在TLR4+EVC304细胞中,NF—KB和IRF-3发生细胞核移位,而在TLR4-EVC304细胞中未出现细胞核移位现象。结论TLR4可能介导了HTNV感染的EVC304细胞中NF—κB和IRF-3的细胞核移位。 展开更多
关键词 Toll样受体4(TLR4) 汉滩病毒 核因子κB(NF-κB) 干扰素调节因子-3(IRF-3) 细胞核移位
抗病毒天然免疫通路中IRF-3调控新机制 被引量:1
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作者 刘殿波 钱远 +1 位作者 张七斤 陈忠斌 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1090-1095,共6页
干扰素调节因子-3(interferonregulatoryfactor-3,IRF-3)是IRF家族中重要转录因子之一,在调控干扰素(interferon,IFN)基因表达和抗病毒天然免疫反应中具有重要作用.最新发现的MITA(mediator of IRF-3 activation,又称STING/ERIS)... 干扰素调节因子-3(interferonregulatoryfactor-3,IRF-3)是IRF家族中重要转录因子之一,在调控干扰素(interferon,IFN)基因表达和抗病毒天然免疫反应中具有重要作用.最新发现的MITA(mediator of IRF-3 activation,又称STING/ERIS)蛋白是宿主抗病毒天然免疫反应中的一种重要调节分子.病毒侵染时,MITA与IRF-3相互作用,特异性激活IRF-3,并募集TANK结合激酶1(TANKbindingkinase 1,TBK1)与IFN通路中的线粒体抗病毒信号蛋白MAVS(mitochondrial anti-viralsignaling protein)形成复合物,且MITA可被TBK1磷酸化,诱导Ⅰ型IFN及IFN刺激基因(interferonstimulate genes,ISG)的表达,诱发抗病毒天然免疫反应.同时还发现,泛素连接酶RNF5(ringfingerprotein 5)可对MITA发生泛素化修饰从而抑制其对IRF-3活化,实现对宿主抗病毒天然免疫反应负调节作用.本室研究发现,严重性急性呼吸系统综合症冠状病毒(severe acute respiratory syndromecoronavirus,SARS-CoV)和人类新型冠状病毒(human coronavirus NL63,HCoV-NL63)的木瓜样蛋白酶(papain-like protease,PLP)利用其特有的去泛素化酶(deubiquitinase,DUB)活性,通过宿主细胞泛素-蛋白酶体信号系统对IRF-3的泛素化等翻译后修饰进行调节,从而成为该种病毒逃逸机体抗病毒防御系统主要手段之一. 展开更多
关键词 抗病毒天然免疫 干扰素 干扰素调节因子-3 MITA RNF5
流感病毒非结构蛋白对TBK-1的抑制作用
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作者 周国平 陈吉庆 +2 位作者 吴升华 陈晓禹 陈辉 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期 363-366,共4页
目的流感病毒非结构蛋白1(nonstructural protein 1, NS1)抑制干扰素调节因子(interferon regulatory factors, IRF) 3的机制未明,TANK结合激酶1(TANK-binding kinase 1, TBK-1)能使IRF-3活化,研究NS1是否对TBK-1有抑制作用. 方法亚克隆... 目的流感病毒非结构蛋白1(nonstructural protein 1, NS1)抑制干扰素调节因子(interferon regulatory factors, IRF) 3的机制未明,TANK结合激酶1(TANK-binding kinase 1, TBK-1)能使IRF-3活化,研究NS1是否对TBK-1有抑制作用. 方法亚克隆IRF-3、NS1和TBK-1至pcDNA3.1-flag构建flag-IRF-3、flag-NS1和flag-TBK-1质粒;用TBK-1对TBK-1+NS1以及IRF-3+TBK-1对IRF-3+TBK-1+NS1两组实验,分别共转染人胚胎肾上皮293细胞,用抗flag抗体作Western blot分析,鉴定IRF-3、NS1和TBK-1的表达,观测NS1对TBK-1活化IRF-3的抑制作用;荧光素酶功能分析方法观测NS1对TBK-1诱导的干扰素β(IFN-β)启动子-pGL-2B荧光素酶活性的影响. 结果 IRF-3、NS1和TBK-1均有高表达.TBK-1能使IRF-3活化,Western blot分析显示:TBK-1转染的细胞出现迁移较慢的IRF-3Ⅲ和Ⅳ型,NS1共转染可使IRF-3 Ⅲ和Ⅳ型几乎消失;荧光素酶功能分析显示,NS1能抑制TBK-1活化内源性IRF-3所诱导的IFN-β启动子活性,约为对照组的1/4,TBK-1+IRF-3共转染可使IFN-β启动子活性增高近1000倍,NS1可使TBK-1活化外源性IRF-3所诱导的IFN-β启动子的活性降至对照组的约1/2至1/3. 结论流感病毒NS1可抑制TBK-1所致的IRF-3活化,功能分析提供了NS1显著抑制TBK-1诱导的IFN-β启动子活性的证据,首次阐明了流感病毒NS1抑制IRF-3因而抑制干扰素β产生的机制之一是通过TBK-1信号通路所取得,为新的抗病毒治疗及新药开发战略提供了基础. 展开更多
关键词 流感病毒 非结构蛋白 TBK-1 抑制作用 干扰素调节因子3
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