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单克隆抗体及其抗感染作用的研究进展 认领
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作者 崔乐乐 卜桐 +6 位作者 刘兆基 张涵旭 史雨 井雯雯 李爱梅 考文萍 翟爱霞 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2020年第2期87-92,共6页
骨髓瘤细胞和单个B细胞可融合形成杂交瘤细胞,这种细胞分离并克隆后可产生针对单一表位,且结构和功能相同的抗体,即单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)。单克隆抗体发展历程经历了四个阶段。其制备技术也在不断革新与发展。目前单克... 骨髓瘤细胞和单个B细胞可融合形成杂交瘤细胞,这种细胞分离并克隆后可产生针对单一表位,且结构和功能相同的抗体,即单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)。单克隆抗体发展历程经历了四个阶段。其制备技术也在不断革新与发展。目前单克隆抗体技术发展日益成熟,在疾病治疗与诊断中发挥着关键的作用。单克隆抗体与天然抗体不同,具有效价高、特异性强、交叉反应少、可大量制备,靶向性高等特点。mAb可用于诊断及治疗感染性疾病、自身免疫病以及癌症等。对mAb的发展历程及mAb在抗感染性疾病中的应用进行简要阐述。 展开更多
关键词 抗体 单克隆抗体 全人源单克隆抗体 抗感染 感染性疾病
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文章速递基于碳纳米管信号放大的卡那霉素高灵敏分析方法的建立 认领
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作者 韦达理 曾昆 +2 位作者 康启鑫 黄哲 张旭芸 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期28-35,共8页
卡那霉素是一种氨基糖苷类抗生素,具有广谱抗菌性,在动物医疗中应用广泛,从而导致了其在动物源性食品中广泛残留,因此检测食品中卡那霉素的残留很有必要。作者以多壁碳纳米管(Multiwalled Carbon Nanotubes,MWCNTs)作为载体,通过EDC/NH... 卡那霉素是一种氨基糖苷类抗生素,具有广谱抗菌性,在动物医疗中应用广泛,从而导致了其在动物源性食品中广泛残留,因此检测食品中卡那霉素的残留很有必要。作者以多壁碳纳米管(Multiwalled Carbon Nanotubes,MWCNTs)作为载体,通过EDC/NHS方法偶联抗体与信号分子辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP),合成多酶复合颗粒MWCNTs-Abs-HRP;建立基于MWCNTs-Abs-HRP多酶复合颗粒的检测方法,相比于已建立的传统竞争ELISA,灵敏度提高约5倍;并成功将此方法应用于牛奶样本中卡那霉素的检测。 展开更多
关键词 卡那霉素 单克隆抗体 碳纳米管 信号放大
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1-芘丁酸单克隆抗体的制备及免疫学性能鉴定 认领
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作者 胡骁飞 孔蒙蒙 +3 位作者 邢广旭 邢云瑞 孙亚宁 张改平 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1114-1118,共5页
目的:拟制备灵敏、特异的1-芘丁酸(PBA)单克隆抗体并对其免疫学性能进行鉴定。方法:碳二亚胺法(EDC)制备人工抗原PBA-BSA和PBA-OVA。PBA-BSA免疫BALB/c小鼠,选择血清效价高、灵敏度良好的小鼠进行细胞融合并筛选出分泌抗PBA单克隆抗体... 目的:拟制备灵敏、特异的1-芘丁酸(PBA)单克隆抗体并对其免疫学性能进行鉴定。方法:碳二亚胺法(EDC)制备人工抗原PBA-BSA和PBA-OVA。PBA-BSA免疫BALB/c小鼠,选择血清效价高、灵敏度良好的小鼠进行细胞融合并筛选出分泌抗PBA单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法批量制备抗体并对其免疫学性能进行鉴定。结果:筛选出能稳定分泌PBA单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株10C2A6,单克隆抗体效价为1∶2.56×10^5,IC50为0.86 ng/ml,亚型为IgG2b型,亲和常数为1.96×10^9 L/mol,与芘、1-芘甲醛和1-芘甲醇的交叉反应率分别为1.74%、1.42%和0.63%,与其他物质交叉反应率均小于0.05%。结论:本实验成功制备出了灵敏、特异的PBA单克隆抗体,并为其免疫学检测方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 1-芘丁酸 人工抗原 细胞融合 杂交瘤细胞 单克隆抗体
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人巨细胞病毒gH蛋白表达及其单克隆抗体的制备 认领
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作者 刘乐 廖旻晶 +3 位作者 徐叶 刘如石 钟志宏 王庆林 《激光生物学报》 CAS 2020年第3期260-267,共8页
人巨细胞病毒(HCMV)是全球范围内普遍感染的一种疱疹病毒,也是引起胎儿先天性畸形和器官移植受者死亡最常见的病原体。有研究表明,gH蛋白是HCMV主要的中和性抗原,特异性抗gH抗体具有中和HCMV及阻断病毒在细胞间传播的潜力。本研究以含... 人巨细胞病毒(HCMV)是全球范围内普遍感染的一种疱疹病毒,也是引起胎儿先天性畸形和器官移植受者死亡最常见的病原体。有研究表明,gH蛋白是HCMV主要的中和性抗原,特异性抗gH抗体具有中和HCMV及阻断病毒在细胞间传播的潜力。本研究以含人巨细胞病毒临床株Toledo全基因组的细菌人工染色体(BAC)为模板,扩增去除信号肽和跨膜区的gH基因片段,并将其插入表达载体构建pET32a’-gH重组表达质粒,将序列鉴定正确的重组质粒转化进入表达菌株TransB,诱导重组蛋白表达。用纯化的重组gH蛋白免疫8周龄BALB/c雄鼠,经杂交瘤技术获得5株稳定分泌抗gH单克隆抗体的细胞株,分别命名为8A9、8B4、8C4、8D9、8D12。所获5株单克隆抗体对gH蛋白均具有良好的反应性,其中8A9、8B4、8D9和8D12具有一定的病毒捕获能力,且8D9和8D12的捕获能力较强。本研究获得了具有自主知识产权的抗gH单克隆抗体,抗体具有良好的病毒捕获能力。在此基础上,我们将进一步鉴定其是否为中和抗体,为今后开发治疗HCMV感染的中和抗体奠定基础。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 gH糖蛋白 单克隆抗体 病毒捕获
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HEV保护性基因工程抗体的制备及功能研究 认领
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作者 李冰 杨婷婷 +3 位作者 唐奇 冯振卿 杨永林 陈宇 《南京医科大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期342-347,共6页
目的:制备抗戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)的人鼠嵌合基因工程抗体并研究其中和保护作用及特性。方法:将已获得的抗HEV鼠源单克隆抗体基因序列进行优化,设计人鼠嵌合的工程化抗体基因序列,将其克隆入真核表达载体;表达载体共转染... 目的:制备抗戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)的人鼠嵌合基因工程抗体并研究其中和保护作用及特性。方法:将已获得的抗HEV鼠源单克隆抗体基因序列进行优化,设计人鼠嵌合的工程化抗体基因序列,将其克隆入真核表达载体;表达载体共转染293F细胞进行表达优化,高效制备基因工程化抗体;通过酶联免疫反应(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、免疫荧光及HEV细胞感染模型,研究工程化抗体的结合能力及中和活性。结果:成功构建基因工程化人鼠嵌合HEV保护性抗体表达载体,在293F表达系统中实现高效表达。抗体表达产率达30 mg/L,亲和力为1.202×10^-8mol/L。免疫荧光检测结果显示抗体能够灵敏、特异地与已感染HEV的Kernow细胞结合,实时荧光定量PCR检测结果显示抗体可保护易感的C3A细胞不被HEV感染。结论:基因工程化抗体抗体具有高效的HEV结合能力及中和作用,能有效阻断HEV感染,并实现低成本高效表达。 展开更多
关键词 HEV 人鼠嵌合基因工程抗体 单克隆抗体
猪流行性腹泻病毒N蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备 认领
6
作者 李任峰 田香勤 +5 位作者 韩笑 王晓斐 姜金庆 夏小静 王异民 王自良 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第4期52-57,共6页
本研究旨在采用原核表达系统表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)的核衣壳蛋白(N),并进一步制备其单克隆抗体。将构建重组原核表达质粒pET28a-N转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达重组蛋白,并采用Ni-NTA亲和层析和分子筛进行纯化... 本研究旨在采用原核表达系统表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)的核衣壳蛋白(N),并进一步制备其单克隆抗体。将构建重组原核表达质粒pET28a-N转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达重组蛋白,并采用Ni-NTA亲和层析和分子筛进行纯化。将纯化后的重组N蛋白免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾脏B淋巴细胞与SP2/0瘤细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞株,并对其分泌抗体的特性进行了分析。结果显示:重组质粒pET28a-N在E.coli BL21中高效表达,筛选获得了2株稳定分泌抗N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1A3和4F6,其分泌的抗体均为IgG1亚型,腹水效价分别为5.12×10^5、1.28×10^5。本研究为进一步研究N蛋白的功能以及建立PEDV免疫学诊断方法奠定了基础。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 N蛋白 原核表达 单克隆抗体
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双抗体夹心ELISA法分析人血APOL1含量与EV71感染程度的相关性 认领
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作者 魏与添 杨秀文 +3 位作者 马丹娟 袁帅 龙敏 朱利 《热带医学杂志》 CAS 2020年第5期603-608,共6页
目的建立检测载脂蛋白L1(APOL1)的ELISA方法,探讨肠道病毒71型(EV71)感染患儿血液中APOL1的含量与EV71感染程度的关系。方法合成APOL1多肽,采用经典方法制备APOL1单克隆抗体,建立检测APOL1蛋白的双抗体夹心ELISA方法,并检测EV71感染的... 目的建立检测载脂蛋白L1(APOL1)的ELISA方法,探讨肠道病毒71型(EV71)感染患儿血液中APOL1的含量与EV71感染程度的关系。方法合成APOL1多肽,采用经典方法制备APOL1单克隆抗体,建立检测APOL1蛋白的双抗体夹心ELISA方法,并检测EV71感染的临床血样68份。结果筛选出5B5和7A9两个特异性的单克隆抗体,据此建立ELISA双抗体夹心检测方法。在78.125~5000 ng/mL范围内,APOL1蛋白浓度有较好的检测线性,批内和批间变异系数不超过10%。在EV71⁃IgM阳性组和弱阳性组感染患儿血清中,APOL1含量分别为(1008.00±18.34)ng/mL和(885.80±15.76)ng/mL,两组血清中的APOL1含量差异有统计学意义(P<0.05)。结论建立了稳定可靠用于检测血清中APOL1蛋白的双抗体夹心ELISA方法。EV71⁃IgM抗体阳性组患儿血清中APOL1含量明显高于弱阳性组,提示APOL1含量和EV71感染程度具有一定相关性。 展开更多
关键词 APOL1 单克隆抗体 EV71 ELISA法
鼻疽诺卡菌Nfa34810蛋白的抗原表位筛选与鉴定 认领
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作者 宋韩 李振军 +5 位作者 吉兴照 孙丽娜 徐帅 韩李超 郑宁伟 楼永良 《疾病监测》 CAS 2020年第6期540-546,共7页
目的制备鼻疽诺卡菌IFM10152的Nfa34810蛋白的单克隆抗体并进行B细胞抗原表位的筛选与鉴定。方法首先将Nfa34810蛋白截成相互重叠20个氨基酸的P1和P2,使用重组Nfa34810蛋白兔多抗血清与鼻疽诺卡菌IFM10152的鼠多抗血清,通过Western Blo... 目的制备鼻疽诺卡菌IFM10152的Nfa34810蛋白的单克隆抗体并进行B细胞抗原表位的筛选与鉴定。方法首先将Nfa34810蛋白截成相互重叠20个氨基酸的P1和P2,使用重组Nfa34810蛋白兔多抗血清与鼻疽诺卡菌IFM10152的鼠多抗血清,通过Western Blot方法检测P1和P2,初步定位抗原表位,对初步确定表位所在片段的P2进行纯化,并使用纯化的P2和Nfa34810蛋白分别免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体。采用Western Blot方法鉴定获得的单克隆抗体,应用肽扫描法进一步用单克隆抗体对逐步截短表达的短肽进行筛选,从而确定Nfa34810蛋白的B细胞抗原表位。结果成功制备了5株针对Nfa34810完整蛋白和4株针对P2的单克隆抗体,抗体能与P2和重组Nfa34810蛋白发生特异性抗原抗体反应。通过肽扫描法成功筛选到1个抗原表位和2个抗原表位区域。结论本研究成功制备了Nfa34810蛋白的单克隆抗体,并对抗原表位进行定位,为开展鼻疽诺卡菌病原学检测、流行病学研究等奠定基础。 展开更多
关键词 鼻疽诺卡菌 Nfa34810蛋白 B细胞抗原表位 单克隆抗体 重组表达
抗狂犬病病毒单克隆抗体临床试验设计和评价考虑要点 认领
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作者 林琳 赵建中 +2 位作者 刘丽华 魏春敏 曾新 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期125-128,共4页
狂犬病是我国重要的公共卫生威胁,抗狂犬病病毒单克隆抗体因批间效价差异小、安全性提高、可大量制备等优势,有替代原有抗狂犬病病毒被动免疫制剂的潜力。本文对抗狂犬病病毒单克隆抗体新药临床试验设计和评价重点关注问题进行了讨论分析。
关键词 狂犬病 单克隆抗体 临床试验 抗狂犬病病毒单克隆抗体
HIV-1 CRF07_BC亚型gp140探针的构建及特异性B细胞分选与单克隆中和抗体制备 认领
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作者 亢佳星 李丹 +3 位作者 任莉 郝彦玲 王铮 王静媛 《中国艾滋病性病》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期470-475,共6页
目的构建用于膜蛋白特异性B细胞分选的BC亚型gp140分子探针(CN54 gp140-Avi),从我国1型艾滋病病毒(HIV-1)感染者外周血单个核细胞(PBMCs)中分选特异性记忆B细胞进而获得单克隆抗体,并鉴定其生物特性。方法利用聚合酶链反应(PCR)方法构... 目的构建用于膜蛋白特异性B细胞分选的BC亚型gp140分子探针(CN54 gp140-Avi),从我国1型艾滋病病毒(HIV-1)感染者外周血单个核细胞(PBMCs)中分选特异性记忆B细胞进而获得单克隆抗体,并鉴定其生物特性。方法利用聚合酶链反应(PCR)方法构建特异性分子探针(CN54 gp140-Avi),并进行生物素化,利用该探针分选特异性记忆B细胞克隆,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别扩增出IgG的轻重链可变区基因,并克隆入表达载体,共转染293F细胞后获得抗体,检测抗体的中和活性。结果成功构建出CN54 gp140-Avi生物素化分子探针,利用该分子探针从HIV-1 BC亚型感染者PBMCs中分离得到单克隆抗体CBJB363-B4,B4抗体重链来源于IGHV1-3*01F家系,轻链为Lambda链,属于IGLV1-40*01F家系,体细胞突变率均较低。B4抗体可以很好地结合CN54 gp140蛋白。该抗体可以有效中和MW965、X2278、398-F1毒株。结论成功制备出具有生物学活性的CN54 gp140-Avi探针,并获得具有中和活性的单克隆抗体。利用该分子探针,未来有望获得较多更强中和能力的抗体,为开发艾滋病抗体药物和基础疫苗学研究等领域提供新的工具和思路。 展开更多
关键词 分子探针 1型艾滋病病毒 单克隆抗体 中和活性
基于单克隆抗体的双酚A间接竞争酶联免疫分析法的建立 认领
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作者 张玉超 刘旭东 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2020年第17期172-177,共6页
为建立一种简便、快速、准确的双酚A检测方法,采用活性酯法将双酚酸与牛血清蛋白、卵清蛋白偶联制备人工抗原免疫BALB/c小鼠。选择抗血清效价和灵敏度高的BALB/c小鼠,采用聚乙二醇法制备杂交瘤细胞,获得一株可分泌双酚A单克隆抗体的杂... 为建立一种简便、快速、准确的双酚A检测方法,采用活性酯法将双酚酸与牛血清蛋白、卵清蛋白偶联制备人工抗原免疫BALB/c小鼠。选择抗血清效价和灵敏度高的BALB/c小鼠,采用聚乙二醇法制备杂交瘤细胞,获得一株可分泌双酚A单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过方阵滴定和反应条件优化,建立一种基于单克隆抗体的双酚A间接竞争酶联免疫分析法。该检测方法在0.5 ng/mL~50 ng/mL内有良好的线性关系,最低检测限IC10为0.5 ng/mL,半数抑制率IC50为16.65 ng/mL,水样中加标回收率为89.72%~105.25%。该单克隆抗体效价高、特异性强,该检测方法灵敏度高。 展开更多
关键词 双酚A 人工抗原 单克隆抗体 间接竞争酶联免疫分析法
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基于配体结合分析-液相色谱串联质谱技术的生物技术药物定量分析方法研究进展 认领
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作者 桂罗兰 董立厚 +3 位作者 宋海峰 向慎思 李黎 葛志强 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期1150-1159,共10页
随着生物技术的发展,蛋白多肽类药物日益增多,对此类药物的定量检测及药代动力学研究变得越来越重要。传统生物技术药物分析方法主要是以配体结合分析(ligand-binding assay,LBA)为主,而液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem ... 随着生物技术的发展,蛋白多肽类药物日益增多,对此类药物的定量检测及药代动力学研究变得越来越重要。传统生物技术药物分析方法主要是以配体结合分析(ligand-binding assay,LBA)为主,而液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)技术由于兼具色谱的高分离能力和质谱的高选择性等优点,也已成为生物大分子药物定量分析的有力手段。综合上述2种方法的各自优势,LCMS/MS技术联用LBA技术进行样品前处理,不仅能降低背景的复杂性,还能避免交叉反应,可以大大提高方法的选择性和灵敏度。另外,使用肽水平的免疫捕获可进一步提高分析灵敏度。联合使用配体结合分析-液相色谱串联质谱(hybird LBA with LC-MS/MS,LBA-LC-MS/MS)技术的关键影响因素包括(:1)捕获试剂的亲和力;(2)酶切位点和效率;(3)指纹肽的选择;(4)内标的选择;(5)蛋白质和肽段的纯化;(6)色谱分离;(7)质谱条件的优化。本文综述了近年来研究蛋白多肽类药物药代动力学的各种分析方法,其中LC-MS/MS和毛细管电泳(capillary electrophoresis,CE)-MS联用技术可望成为药代动力学研究中较有前途的分析方法。 展开更多
关键词 生物大分子药物 液质联用技术 免疫亲和捕获 定量分析 单克隆抗体 样品前处理 配体结合分析-液相色谱串联质谱技术联用
鸭骨骼肌肌钙蛋白I单克隆抗体的制备及其特性 认领
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作者 刘静静 张静 +3 位作者 孙劲冲 吴萌 杜顺丰 李春生 《肉类研究》 北大核心 2020年第2期60-64,共5页
提取鸭骨骼肌肌钙蛋白I(skeletal muscle troponin I,sTnI)用于制备单克隆抗体,并对抗体性能进行评价。将鸭骨骼肌提取后经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE)测... 提取鸭骨骼肌肌钙蛋白I(skeletal muscle troponin I,sTnI)用于制备单克隆抗体,并对抗体性能进行评价。将鸭骨骼肌提取后经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE)测定,取凝胶条带免疫小鼠,融合后经筛选获得分泌抗鸭sTnI的杂交瘤细胞株,用酶联免疫吸附测定法检测抗体效价、亚型及特异性等特性。结果表明:鸭骨骼肌提取物经SDS-PAGE后出现2条颜色较深的条带,取分子质量24 kDa条带用于免疫;筛选后获得2株单克隆抗体,其中3E7特异性较好,效价在1∶1.0×10^5以上,为IgG1亚型,亲和常数(Ka)为5.9×10^5 L/mol;免疫印迹结果显示,抗体3E7能与鸭骨骼肌提取物反应,与牛、羊、鸡、鱼骨骼肌提取物无明显反应。 展开更多
关键词 鸭骨骼肌肌钙蛋白I 单克隆抗体 肉类来源 免疫学鉴别 特异性
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H5N1禽流感病毒PB1-F2特异性单克隆抗体的制备与鉴定 认领
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作者 徐国双 刘恩华 +2 位作者 张茂林 段铭 关振宏 《动物医学进展》 北大核心 2020年第7期1-6,共6页
以重组的H5N1亚型禽流感病毒(AIV)PB1-F2的C端蛋白(cPB1-F2)为免疫原制备单克隆抗体,并鉴定其特异性。构建cPB1-F2的pGEX-6p-1原核表达载体,进行蛋白表达与纯化;采用杂交瘤技术制备筛选抗重组cPB1-F2蛋白的杂交瘤细胞株,利用间接免疫荧... 以重组的H5N1亚型禽流感病毒(AIV)PB1-F2的C端蛋白(cPB1-F2)为免疫原制备单克隆抗体,并鉴定其特异性。构建cPB1-F2的pGEX-6p-1原核表达载体,进行蛋白表达与纯化;采用杂交瘤技术制备筛选抗重组cPB1-F2蛋白的杂交瘤细胞株,利用间接免疫荧光和酶联免疫吸附试验筛选鉴定阳性细胞株,并对单克隆抗体特异性进行鉴定。结果显示,纯化的重组cPB1-F2蛋白具有良好的免疫原性,筛选获得了3株稳定分泌抗cPB1-F2单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为6F4、2C5和4D3,经鉴定抗体均为IgG1亚类,且3株单克隆抗体均能特异性识别重组PB1-F2蛋白。结果表明成功制备了cPB1-F2特异性单克隆抗体,为研制针对流感病毒的抗体药物奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H5N1 PB1-F2 单克隆抗体
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胶体金试纸条同时检测鲤鱼中7种苯并咪唑类药物的残留 认领
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作者 张彩芹 张勋 +5 位作者 李洁 李娜 肖香 欧阳琴 王云 周兴华 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2020年第6期291-296,共6页
为检测鲤鱼中苯并咪唑类药物残留,降低其对人体造成的危害,本文基于单克隆抗体之上建立胶体金试纸条检测方法。首先以2-甲氧基羰基氨基-3H-苯并咪唑-5-羧酸为半抗原,用活化酯法偶联蛋白质制备免疫原,免疫小鼠,进行细胞融合制备单克隆抗... 为检测鲤鱼中苯并咪唑类药物残留,降低其对人体造成的危害,本文基于单克隆抗体之上建立胶体金试纸条检测方法。首先以2-甲氧基羰基氨基-3H-苯并咪唑-5-羧酸为半抗原,用活化酯法偶联蛋白质制备免疫原,免疫小鼠,进行细胞融合制备单克隆抗体,而后用合成的胶体金标记单克隆抗体制备胶体金试纸条。通过间接竞争ELSIA法(ic-ELISA)测得阿苯达唑、甲苯咪唑、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜、芬苯达唑、氟苯咪唑、奥芬达唑的半抑制浓度(IC50)分别为0.44、0.16、3.47、5.62、0.62、0.10、5.77 ng/mL。胶体金试纸条在鲤鱼中的阿苯达唑、甲苯咪唑、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜、芬苯达唑、氟苯咪唑、奥芬达唑的检测限分别为4、2、50、100、10、1、100 ng/g,检测时间为15 min。因此,该方法灵敏度高、成本低、速度快且无需仪器辅助,适宜现场大量鲤鱼样本的快速检测。 展开更多
关键词 苯并咪唑 单克隆抗体 胶体金试纸条 鲤鱼
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嗜肺军团菌快速检测胶体金试纸的研制 认领
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作者 张秋 李杰 +3 位作者 王猛 王毅 杨波 胡征 《检验医学》 CAS 2020年第7期726-733,共8页
目的研制特异性检测嗜肺军团菌(Lp)的胶体金免疫层析试纸条。方法通过基因工程制备Lp-肽聚糖关联脂蛋白(PAL)重组蛋白并进行纯化,筛选分泌抗Lp-PAL重组蛋白单克隆抗体(简称单抗)的杂交瘤细胞株,采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫... 目的研制特异性检测嗜肺军团菌(Lp)的胶体金免疫层析试纸条。方法通过基因工程制备Lp-肽聚糖关联脂蛋白(PAL)重组蛋白并进行纯化,筛选分泌抗Lp-PAL重组蛋白单克隆抗体(简称单抗)的杂交瘤细胞株,采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫印迹法鉴定筛选到的Lp-1和Lp-2单抗的特异性,采用生物膜层干涉(BLI)技术鉴定抗原抗体反应的特异性。依据双抗体夹心原理制备胶体金免疫层析试纸条,并初步评价其检测性能(特异性、灵敏度及稳定性)。结果筛选到2株高效分泌抗Lp-PAL蛋白抗体的杂交瘤细胞株Lp-1和Lp-2,纯化得到2种单抗Lp-1和Lp-2。间接ELISA检测结果表明,Lp-1及Lp-2单抗只与Lp发生阳性反应,与其他10种呼吸道常见病原菌(肺炎链球菌、卡他莫拉菌、流感嗜血杆菌、肺炎支原体、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、奇异变形杆菌)无交叉反应。免疫印迹法结果显示,Lp-1和Lp-2单抗与Lp-PAL天然蛋白和重组蛋白有强反应,与肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌无目的反应条带。BLI技术的验证结果显示,抗原抗体的相互作用力均较强,解离速率慢,Lp-1和Lp-2单抗识别的是同一抗原的不同抗原表位,且只与Lp有强反应,与其他10种细菌均无特异性结合反应。制备的胶体金免疫层析试纸条最低检出限为1×107 CFU/mL,与Lp常见4种血清型(Lp14、Lp12、Lp9和Lp6)均有特异性反应,与肺炎链球菌、卡他莫拉菌等10种常见呼吸道病原菌均无交叉反应,可在25℃环境下稳定6个月。结论 PAL蛋白具有高度的表面暴露性和较强的抗原性,可作为Lp的检测标志物,以此为基础制备的胶体金免疫层析试纸条具有快速、简便、灵敏的特点,适用于Lp感染的快速检测。 展开更多
关键词 嗜肺军团菌 单克隆抗体 肽聚糖关联脂蛋白 生物膜层干涉技术 胶体金免疫层析法
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A型流感病毒PB1蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 认领
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作者 钟亦晔 石柳媛 +4 位作者 王星博 杨辉 颜焰 廖敏 周继勇 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期845-851,共7页
以A型流感病毒A/Chicken/Zhejiang/YH/2/2013(H7N9)的PB1基因为模板,扩增其1519~2274bp间的片段,并构建原核表达载体pET-28a(+)-H7N9-sPB1。通过大肠杆菌原核表达获得重组蛋白His-sPB1后,以其作为抗原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合筛选获... 以A型流感病毒A/Chicken/Zhejiang/YH/2/2013(H7N9)的PB1基因为模板,扩增其1519~2274bp间的片段,并构建原核表达载体pET-28a(+)-H7N9-sPB1。通过大肠杆菌原核表达获得重组蛋白His-sPB1后,以其作为抗原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合筛选获得3株能够稳定分泌单克隆抗体的细胞株5G5、2H3和5E8。Western-blot和IFA检测表明,3株单克隆抗体对于不同亚型的流感病毒均具有良好的反应性。免疫共沉淀结果表明,3株单克隆抗体能用于免疫共沉淀试验。A型流感病毒PB1蛋白单克隆抗体的制备为进一步研究PB1蛋白的结构与功能以及流感病毒的监测与诊断提供了必要的工具。 展开更多
关键词 流感病毒 H7N9 PB1 单克隆抗体
蓖麻肌动蛋白基因的克隆、抗体制备和表达分析 认领
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作者 王芳 汤璧蔚 +5 位作者 董乐 刘宝 黄慧 黄苹苹 张立群 栾芙蓉 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2020年第3期12-23,共12页
为探讨蓖麻肌动蛋白(Actin)基因(RcActin)是否可作为蓖麻基因表达研究中的内参基因。以蓖麻生长根为试验材料,根据GenBank中公布的RcActin全长cDNA序列(登录号:XM002522148.3)设计合成特异性引物,经PCR扩增获得RcActin的编码序列(CDS),... 为探讨蓖麻肌动蛋白(Actin)基因(RcActin)是否可作为蓖麻基因表达研究中的内参基因。以蓖麻生长根为试验材料,根据GenBank中公布的RcActin全长cDNA序列(登录号:XM002522148.3)设计合成特异性引物,经PCR扩增获得RcActin的编码序列(CDS),并将其插入原核表达载体pET32a(+)中。重组表达载体pET32a(+)-RcActin转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合6个组氨酸标签的目的蛋白,表达蛋白经钴离子螯合磁珠纯化后,采用Western Blot验证,结果表明,pET32a(+)-RcActin可诱导表达分子量约为61.46 ku的融合蛋白His-RcActin。用纯化的His-RcActin免疫BALB/c小鼠,经细胞融合及筛选获得9株能分泌抗蓖麻RcActin蛋白质单克隆抗体(Monoclonal antibody, McAb)的杂交瘤细胞株。利用阳性杂交瘤细胞株刺激小鼠,取腹水,采用间接ELISA方法测定,结果表明,5株阳性单克隆细胞株腹水效价达到1∶1 000 000及以上。用蛋白A/G亲和层析法纯化His-RcActin McAb;采用间接ELISA方法对纯化McAb的特异性进行测定,3株阳性细胞株能分泌针对RcActin的特异性McAb;通过抗体亚类鉴定试剂盒鉴定纯化McAb的亚型,结果表明,3株阳性细胞株分泌的McAb亚类均为IgG1。采用间接ELISA方法对3株阳性细胞株分泌McAb的稳定性进行鉴定,获得1株在体外传19代或液氮冻存4个月后、能稳定分泌McAb的阳性细胞株。采用Western Blot和间接ELISA方法对从该细胞株中纯化的McAb的特异性、效价进行验证,结果表明,获得的McAb具有针对RcActin的特异性且效价为1∶512 000。以制备的McAb为一抗,利用Western Blot方法分析RcActin在正常水肥管理且时空一致条件下的蓖麻8个组织中的表达量,结果表明,蓖麻不同组织中RcActin的含量存在显著性差异(P<0.05)。RT-qPCR分析结果表明,蓖麻不同组织中RcActin mRNA也存在显著性差异(P<0.05)。通过Western Blot方法分析RcActin在不同浓度NaCl胁迫下盆栽蓖麻根系中的表达量;通� 展开更多
关键词 蓖麻 肌动蛋白 基因克隆 单克隆抗体 组织表达
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牛骨骼肌肌钙蛋白T单克隆抗体的制备及其特性鉴定 认领
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作者 刘静静 李玉静 +5 位作者 王振华 张静 吴萌 杜顺丰 张岩 李春生 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2020年第8期187-191,共5页
制备牛骨骼肌肌钙蛋白T的单克隆抗体,评价单抗的特性。肌肉提取物经聚丙烯酰氨凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)后切胶,用于免疫Balb/c小鼠。经聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)法融合... 制备牛骨骼肌肌钙蛋白T的单克隆抗体,评价单抗的特性。肌肉提取物经聚丙烯酰氨凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)后切胶,用于免疫Balb/c小鼠。经聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)法融合,制备稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株。用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法对单抗的效价、亚型、特异性等进行分析。经筛选后,获得2株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,其中3A8特异性好、效价高,为IgG1亚型,亲和常数为8.1×10~8L/mol。免疫印迹结果显示该单抗能与牛羊的骨骼肌提取物反应,不与鸡鸭的骨骼肌提取物反应。 展开更多
关键词 牛骨骼肌肌钙蛋白T 单克隆抗体 肉源成分 免疫鉴别 特异性
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肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)单克隆抗体制备及检测方法的建立 认领
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作者 管楷丽 朱华结 程华 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2020年第6期1027-1039,共13页
该文通过制备出特异性高的单克隆抗体,初步建立了双抗夹心ELISA定量测定CK-MB的方法,为CK-MB试剂和原料的国产化奠定重要的基础。以购入的CK-MB抗原为免疫原,对随机选取的5只6~8周龄Balb/c健康雌性小鼠进行免疫。采用有限稀释法、间接EL... 该文通过制备出特异性高的单克隆抗体,初步建立了双抗夹心ELISA定量测定CK-MB的方法,为CK-MB试剂和原料的国产化奠定重要的基础。以购入的CK-MB抗原为免疫原,对随机选取的5只6~8周龄Balb/c健康雌性小鼠进行免疫。采用有限稀释法、间接ELISA、捕获ELISA方法,最终筛选出了3株能够稳定分泌抗体的细胞株,分别命名为2F6、2H3和2H9,其分泌的单克隆抗体亚型均为IgG3,腹水效价分别为1:102000、1:51200和1:102000。采用亲和层析法对3株杂交瘤细胞产生的小鼠腹水进行纯化,分光光度计测定纯化后的单克隆抗体2H3、2F6、2H9的浓度分别为5 mg/mL、6 mg/mL、6 mg/mL,SDS-PAGE结果表明,成功纯化了小鼠腹水,能够清晰地观察到轻链和重链两条带。Western blot结果表明,单克隆抗体2F6、2H3和2H9均能特异性识别CK-MB蛋白。间接ELISA及捕获ELISA方法检测显示,单克隆抗体2H3只与CK-MB及CK-BB发生捕获ELISA方法反应;单克隆抗体2H9只与CK-MB及CK-BB发生捕获ELISA方法反应;单克隆抗体2F6只与CK-MB及CK-MM发生捕获ELISA方法反应。稳定性实验表明,3株杂交瘤细胞都能稳定分泌抗CK-MB单克隆抗体。高质量单克隆抗体的获得,为建立CK-MB检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 肌酸激酶同工酶MB(CK-MB) 单克隆抗体 ELISA 特性鉴定
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