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基于核酸适配体的PCR法检测溶藻弧菌及其灭活菌 预览
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作者 汤学敏 林文燕 +5 位作者 鄢庆枇 刘慧敏 彭英林 赵铨 林旭俊 郑江 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期391-396,共6页
溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)分布广,数量多,发病率高,是水产养殖中常见的条件致病菌,而对溶藻弧菌进行快速准确的识别鉴定是其病害防治的前提和基础。核酸适配体,因为具有较高的亲和特异性,在微生物的识别鉴定方面展现出了巨大的优... 溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)分布广,数量多,发病率高,是水产养殖中常见的条件致病菌,而对溶藻弧菌进行快速准确的识别鉴定是其病害防治的前提和基础。核酸适配体,因为具有较高的亲和特异性,在微生物的识别鉴定方面展现出了巨大的优势。本文利用核酸适配体和适配体筛选产物,通过结合、洗涤、加热分离、PCR扩增以及电泳检测等步骤,对溶藻弧菌进行了检测鉴定。结果表明,适配体和筛选产物都能对溶藻弧菌及其灭活菌进行较好的识别鉴定,适配体筛选产物对溶藻弧菌的检测下限为10~3cfu/mL,而对其灭活菌的检测下限为10~2cfu/mL,适配体对溶藻弧菌及其灭活菌的检测下限都可达到10 cfu/mL。该方法对溶藻弧菌有较好的亲和特异性,并能较好地区分溶藻弧菌与哈维氏弧菌等水产常见病原菌,在水产病害的检测中显示了较好的应用前景。 展开更多
关键词 核酸适配体 溶藻弧菌 PCR 灭活 检测
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武汉地区314例消化系统疾病患者CYP2C19基因多态性分析 预览
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作者 盛碧 陈永刚 +2 位作者 王慧娟 纪刚剑 邹吉利 《中国现代医学杂志》 CAS 2019年第2期92-96,共5页
目的分析武汉地区消化系统疾病患者CYP2C19基因的多态性。方法选取2016年1月—2017年12月于湖北省武汉市第三医院行CYP2C19基因多态性检测的无血缘关系汉族消化系统疾病患者314例。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测质子泵抑制剂代谢相... 目的分析武汉地区消化系统疾病患者CYP2C19基因的多态性。方法选取2016年1月—2017年12月于湖北省武汉市第三医院行CYP2C19基因多态性检测的无血缘关系汉族消化系统疾病患者314例。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测质子泵抑制剂代谢相关酶CYP2C19基因型,根据基因型判断代谢表型,并分析性别、年龄及消化系统疾病临床分型与CYP2C19基因多态性的相关性。结果该研究共检测到8种基因型:CYP2C19*1*17、*1*1、*1*2、*1*3、*2*17、*3*17、*2*2及*2*3;4种代谢表型:超快代谢型为0.96%,快代谢型型为36.94%,中间代谢型型为45.54%,慢代谢型型为16.56%。不同年龄、性别及消化系统疾病临床分型患者CYP2C19基因型比较,差异无统计学意义(P>0.05);不同性别、消化系统疾病临床分型患者代谢表型比较,差异无统计学意义(P>0.05);不同年龄患者代谢表型比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论武汉地区消化系统疾病患者CYP2C19基因具有多态性,其等位基因频率和代谢表型分布情况与亚洲人群接近,与欧洲等其他国家人群存在明显差异。 展开更多
关键词 消化系统疾病 CYP2C19/基因 多态性 单核苷酸 聚合酶链反应 基因型
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解脲支原体生物亚群及抗子宫内膜抗体与女性不孕的相关性研究 预览
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作者 曾文军 王柳均 +3 位作者 梅艳娟 邓珍良 皮红泉 陈群 《中国医学创新》 CAS 2019年第1期131-134,共4页
目的:探讨解脲支原体(UU)不同生物亚群、抗子宫内膜抗体(AEMAb)与女性不孕患者的关系。方法:选取本院2017年2月-2018年2月100例不孕女性为不孕组,同期选取100例健康孕妇为对照组,两组均行UU培养,通过聚合酶链反应并以多条带抗原基因为... 目的:探讨解脲支原体(UU)不同生物亚群、抗子宫内膜抗体(AEMAb)与女性不孕患者的关系。方法:选取本院2017年2月-2018年2月100例不孕女性为不孕组,同期选取100例健康孕妇为对照组,两组均行UU培养,通过聚合酶链反应并以多条带抗原基因为靶位设计引物将检测到的UU进行分群,应用ELISA方法检测AEMAb,同时进行相关分析。结果:不孕组UU及其UU2生物亚群与AEMAb阳性率均明显高于对照组(P<0.01),不孕组以UU2生物亚群为主,对照组以UU1生物亚群为主,而两组UU1生物亚群比较差异无统计学意义(P>0.05)。不孕组AEMAb阳性者UU及UU2生物亚群感染率明显高于AEMAb阴性者(P<0.01),两者UU1生物亚群比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:女性不孕的发生与UU及AEMAb有关,UU1生物亚群可能是定植菌群,而UU2生物亚群则更易导致机体产生AEMAb引起不育。 展开更多
关键词 解脲支原体 生物亚群 抗子宫内膜抗体 聚合酶链反应 不孕
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PCR-RFLP法检测DDAH2基因rs805304多态性的实验条件研究 预览
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作者 石柔 董荣静 +1 位作者 刘华 李会芳 《中国医药导报》 CAS 2019年第2期4-7,共4页
目的探讨聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测二甲基精氨酸二甲胺水解酶2(DDAH2)rs805304多态性的最适实验条件。方法运用PCR-RFLP技术分别对2016年1月~2017年3月昆明医科大学第一附属医院收治的182例2型糖尿病患者和... 目的探讨聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测二甲基精氨酸二甲胺水解酶2(DDAH2)rs805304多态性的最适实验条件。方法运用PCR-RFLP技术分别对2016年1月~2017年3月昆明医科大学第一附属医院收治的182例2型糖尿病患者和147名健康体检者DDAH2基因rs805304的多态性进行检测,对影响PCR-RFLP方法的主要因素进行研究。结果最适实验条件:退火温度为58℃,变性温度为95℃,2×Power Taq PCR Master Mix浓度为12.5μL,引物浓度为0.8μmo/L,酶切体系为15μL体系中加8.0μL产物,用5 U的限制性内切酶BstUI消化。结论最适实验条件的摸索为后续研究奠定了基础。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 二甲基精氨酸二甲胺水解酶2 实验条件
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PCR技术检测致病真菌感染的研究 预览
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作者 王宇 郑秋冬 +2 位作者 邓琴 刘宁远 潘婷 《攀枝花学院学报:综合版》 2019年第2期6-8,共3页
目的建立适合临床实践的常见致病真菌的PCR检测方法。方法根据真菌的保守基因设计不同的特异性引物,对152例临床标本进行PCR检测,与传统检验方法的结果进行比较。结果真菌培养阳性46例;真菌PCR检测阳性57例,分别为白色念珠菌感染30份、... 目的建立适合临床实践的常见致病真菌的PCR检测方法。方法根据真菌的保守基因设计不同的特异性引物,对152例临床标本进行PCR检测,与传统检验方法的结果进行比较。结果真菌培养阳性46例;真菌PCR检测阳性57例,分别为白色念珠菌感染30份、烟曲霉感染9份、黄曲菌感染8份,其他真菌感染10份。两种方法比较,检出率差异无统计学意义。结论PCR法可快速、特异、灵敏地检测致病真菌,适合临床实验室的快速诊断。 展开更多
关键词 真菌 聚合酶链反应 白色念珠菌
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多重PCR法检测产志贺毒素性大肠杆菌的4个血清型
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作者 王警 张碧成 +3 位作者 郭芸芸 吴庆侠 何孔旺 张雪寒 《食品安全质量检测学报》 CAS 2019年第2期440-446,共7页
目的建立多重PCR法检测产志贺毒素性大肠杆菌(shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)主要血清型O26、O145、O45和O121的分析方法。方法根据GenBank登录序列,设计扩增O抗原翻转酶(wzx)基因的引物,建立PCR方法,并以STECO26、O145... 目的建立多重PCR法检测产志贺毒素性大肠杆菌(shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)主要血清型O26、O145、O45和O121的分析方法。方法根据GenBank登录序列,设计扩增O抗原翻转酶(wzx)基因的引物,建立PCR方法,并以STECO26、O145、O45和O121基因组为模板,检验多重PCR的灵敏度和特异性。使用建立的PCR,检测牛胴体表面拭子,阳性扩增条带送测序,以验证PCR扩增的可靠性。同时将阳性扩增样品,涂布显色平板,分离靶标血清型细菌。结果本研究成功建立STEC O26、O145、O45和O121的多重PCR方法,PCR循环参数中退火温度为60℃,扩增片段分别为249、353、890和587 bp。多重PCR直接检测O26、O145、O45和O121时,最低检测限介于10~3~10~4 CFU/mL,而增菌后再检测,最低检测限均为1CFU/m L。多重PCR用于其他血清型STEC,和非大肠杆菌扩增时,均未扩增出目的条带,只有O26、O145、O45和O121能够扩增出相应条带。当使用多重PCR直接检测胴体擦拭子时,阳性率为5.45%(3/55),主要为O26、O145血清型;增菌后检测阳性率为7.27%(4/55),主要为O26、O145和O121血清型。阳性PCR扩增样品,成功分离到O26两株、O145和O121各一株。分离菌株具有典型大肠杆菌的生化特性,携带STEC代表性毒力因子志贺毒素和紧密素,且具有多重耐药性。结论以STECO26、O145、O45和O121的wzx基因为检测靶标,成功建立多重PCR方法,灵敏度和特异性良好,与细菌分离联合使用,可减少工作量,精准分离目的病原菌。 展开更多
关键词 产志贺毒素性大肠杆菌 多聚酶链反应 胴体 耐药
建立检测血液中EC、KP、SA和MRSA的多重PCR方法 预览
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作者 吴许文 温旺荣 +2 位作者 李沛樟 倪金良 简仕铭 《国际检验医学杂志》 CAS 2019年第1期19-24,28共7页
目的建立快速检测血液中常见致病菌包括大肠埃希菌(EC)、肺炎克雷伯菌(KP)、金黄色葡萄球菌(SA)及耐甲氧西林SA(MRSA)的多重聚合酶链反应(PCR)方法,有利于败血症的及时治疗。方法建立多重PCR方法对ECphoA基因、KPmdh基因、SAfemA基因和M... 目的建立快速检测血液中常见致病菌包括大肠埃希菌(EC)、肺炎克雷伯菌(KP)、金黄色葡萄球菌(SA)及耐甲氧西林SA(MRSA)的多重聚合酶链反应(PCR)方法,有利于败血症的及时治疗。方法建立多重PCR方法对ECphoA基因、KPmdh基因、SAfemA基因和MRSAmecA基因进行检测,并将16SrDNA作为致病菌感染对照。结果采用建立的多重PCR方法进行检测的特异性为100%,EC检测限为2.75×10^2CFU/mL,KP为2.43×10^3CFU/mL,SA为3.13×10^2CFU/mL,MRSA为3.03×10^2CFU/mL;用多重PCR方法和传统血培养方法对300个血标本进行检测,传统血培养方法检测出187个血标本内阳性,多重PCR方法有4个血标本为假阴性,未能被检出。结论建立的多重PCR方法可简便、及时地检测血流感染中的EC、KP、SA和MRSA。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 脓毒症 大肠杆菌 克雷伯菌 肺炎 葡萄球菌 金黄色 甲氧西林抗药性
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HBV-DNA实时荧光定量检测程序的测量不确定度评估及分析 预览
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作者 刘伟平 杨新春 殷明刚 《国际检验医学杂志》 CAS 2019年第1期59-61,共3页
目的根据国际标准化组织(ISO)15189实验室认可要求,评估乙型肝炎病毒(HBV)DNA定量检测程序的测量不确定度。方法采用室内质控获得的中间精密度计算HBV-DNA测量重复性引入的测量不确定度,采用卫生部室间质量评价结果计算HBV-DNA偏倚引入... 目的根据国际标准化组织(ISO)15189实验室认可要求,评估乙型肝炎病毒(HBV)DNA定量检测程序的测量不确定度。方法采用室内质控获得的中间精密度计算HBV-DNA测量重复性引入的测量不确定度,采用卫生部室间质量评价结果计算HBV-DNA偏倚引入的测量不确定度,将二者合成计算出合成标准不确定度和扩展不确定度。结果HBV-DNA在室内质控水平为4.03(对数的倒数)时实验室内测量重复性引入的相对测量不确定度为3.45%,HBV-DNA偏倚引入的相对测量不确定度为5.27%。相对合成标准不确定度为6.30%;相对扩展不确定度为12.60%;而HBV-DNA在该水平的相对测量不确定度可表示为(4.03±12.60)%。结论HBV-DNA实时荧光定量检测程序的测量不确定度可作为检验结果质量持续改进的依据,并用于解释临床结果。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 DNA 病毒 聚合酶链反应 荧光
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白血病患儿微小残留病的检测与应用进展 预览
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作者 孙雨 刘建平 王向文 《内蒙古医学杂志》 2019年第1期43-45,共3页
近年来,随着一些新的化疗药物的出现,儿童白血病的治疗效果逐渐显著,患者的完全缓解率可达50%~80%。尽管如此,由白血病中的微小残留病(MRD)引起的复发仍然面临巨大的考验,并且体内残留的白血病细胞是白血病复发的根本原因。回顾性和前... 近年来,随着一些新的化疗药物的出现,儿童白血病的治疗效果逐渐显著,患者的完全缓解率可达50%~80%。尽管如此,由白血病中的微小残留病(MRD)引起的复发仍然面临巨大的考验,并且体内残留的白血病细胞是白血病复发的根本原因。回顾性和前瞻性分析均已证实ALL和AML患者的MRD水平与治疗效果相关并能预测复发风险。目前MRD的检测技术已非常完善,可覆盖98%以上的ALL和大部分AML。如今,检测MRD的两种主要技术是流式细胞术(FCM)和聚合酶链式反应(PCR)。这两种技术在预测疾病复发和评估预后方面具有重要作用,并为儿童白血病的临床干预治疗提供了基础。 展开更多
关键词 急性白血病 微小残留病 流式细胞术
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荧光PCR探针熔解曲线技术检测结核分枝杆菌对五种抗结核药物耐药性的研究
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作者 曹志华 赵悦竹 胡双双 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2019年第2期156-161,共6页
目的运用荧光PCR探针熔解曲线技术检测结核分枝杆菌(MTB)对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氟喹诺酮类共5种抗结核药物的耐药性,并评价其临床应用价值。方法收集2018年1—8月分离自抚顺市第四人民医院门诊患者的153株MTB临床分离株... 目的运用荧光PCR探针熔解曲线技术检测结核分枝杆菌(MTB)对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氟喹诺酮类共5种抗结核药物的耐药性,并评价其临床应用价值。方法收集2018年1—8月分离自抚顺市第四人民医院门诊患者的153株MTB临床分离株,采用荧光PCR探针熔解曲线法检测MTB对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素和氟喹诺酮类药物的耐药性。以比例法药物敏感性试验(简称“药敏试验”)为金标准,评价荧光PCR探针熔解曲线法的敏感度、特异度和一致率。结果以比例法药敏试验为金标准,荧光PCR探针熔解曲线法检测MTB对利福平耐药性的敏感度为95.56%(43/45),特异度为94.44%(102/108),一致率为94.77%(145/153),Kappa值为0.88;对异烟肼耐药性的敏感度为90.57%(48/53),特异度为96.00%(96/100),一致率为94.12%(144/153),Kappa值为0.87;对乙胺丁醇耐药性的敏感度为85.71%(18/21),特异度为92.42%(122/132),一致率为91.50%(140/153),Kappa值为0.69;对链霉素耐药性的敏感度为89.66%(26/29),特异度为92.74%(115/124),一致率为92.16%(141/153),Kappa值为0.76;对氟喹诺酮类药物耐药性的敏感度为93.75%(15/16),特异度为96.35%(132/137),一致率为96.08%(147/153),Kappa值为0.81。结论荧光PCR探针熔解曲线法检测MTB对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素和氟喹诺酮类药物的耐药性具有良好的效能,可为医生制定用药方案提供重要依据。 展开更多
关键词 结核 抗多种药物性 聚合酶链反应 分子探针技术 微生物敏感性试验 评价研究
微RNA在心血管疾病中的研究进展 预览
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作者 徐娜 庄宇鑫 +2 位作者 全东令 张国华 周磊 《医学综述》 2019年第5期883-887,共5页
随着社会经济的发展,人口老龄化进程的加快,居民生活方式的改变等因素导致心血管疾病的患病率持续升高。微RNA(miRNA)在心血管疾病的发展进程中起着至关重要的作用。许多心肌miRNA的表达在心血管疾病的进展中发生了改变,这些改变加深了... 随着社会经济的发展,人口老龄化进程的加快,居民生活方式的改变等因素导致心血管疾病的患病率持续升高。微RNA(miRNA)在心血管疾病的发展进程中起着至关重要的作用。许多心肌miRNA的表达在心血管疾病的进展中发生了改变,这些改变加深了人们对心血管疾病的发生机制、诊断标志物和治疗靶点的认识。心血管功能障碍中发生的miRNA的诱导或抑制以细胞特有的方式触发下游的心脏事件。此外,内源性miRNA的干扰可以通过外源性过表达或中和策略进行修饰,以缓和心肌受损功能。 展开更多
关键词 心血管疾病 微RNA 聚合酶链反应
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病毒性脑炎的诊治研究进展 预览
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作者 冯绵烨 娄燕 《中华诊断学电子杂志》 2019年第1期66-70,共5页
病毒性脑炎是病毒影响中枢神经系统的结果,可涉及从儿童至老年的任何年龄组,而疾病的严重程度取决于病毒的种类和宿主的免疫系统。引起病毒性脑炎的病原体种类繁多,临床表现不尽相同,实验室检查、影像学和脑脊液分析对脑炎诊断起着至关... 病毒性脑炎是病毒影响中枢神经系统的结果,可涉及从儿童至老年的任何年龄组,而疾病的严重程度取决于病毒的种类和宿主的免疫系统。引起病毒性脑炎的病原体种类繁多,临床表现不尽相同,实验室检查、影像学和脑脊液分析对脑炎诊断起着至关重要的作用。过去酶联免疫吸附测定是诊断病毒性脑炎最常用的方法,但由于检测试剂种类少,价格昂贵,故大部分病毒性脑炎不能得到病原学诊断。随着聚合酶链反应等分子生物学技术不断改进并用于脑脊液病原体检测,其已成为诊断病毒性脑炎的利器。笔者主要从病毒性脑炎病原学、发病机制、诊断技术及治疗进展做一综述。 展开更多
关键词 脑炎 病毒性 病原 发病机制 诊断 聚合酶链反应
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乙型肝炎病毒YMDD突变室间质量评价调查品制备及应用 预览
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作者 蒋玲丽 肖艳群 +3 位作者 王雪亮 鲍芸 杨依绡 王华梁 《检验医学》 CAS 2019年第2期176-179,共4页
目的制备乙型肝炎病毒(HBV)YMDD突变室间质量评价(EQA)调查品,评估上海地区临床实验室检测HBVYMDD突变的能力。方法筛选HBVDNA >5×10^4 IU/ML的临床样本,经稀释制成含HBVYMDD不同突变类型的样本盘。采用实时荧光聚合酶链反应(P... 目的制备乙型肝炎病毒(HBV)YMDD突变室间质量评价(EQA)调查品,评估上海地区临床实验室检测HBVYMDD突变的能力。方法筛选HBVDNA >5×10^4 IU/ML的临床样本,经稀释制成含HBVYMDD不同突变类型的样本盘。采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)、高温连接酶反应(LDR)和测序法筛选EQA候选样本,并采用PCR评估样本均匀性和稳定性。2017年2次EQA各制备5份样本,要求参评实验室在规定时间内检测样本并上报检测结果。对回报结果进行分析。结果2017年2次EQA分别收到12份和10份有效回报结果,66.67%的实验室检测结果完全正确。HBVYIDD、YVDD、YIDD+YVDD和YMDD不同突变样本的检测符合率分别为90.63%、86.36%、77.27%和88.24%。结论制备的调查品均匀、稳定,可用于EQA;部分临床实验室HBVYMDD突变检测能力尚需提高,应加强质量控制以保证检测结果的准确性。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 高温连接酶反应 测序法 聚合酶链反应
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中国南方汉族造血干细胞捐献者HLA-A、-B、-C、-DRB1及-DQB1高分辨等位基因多态性分析
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作者 全湛柔 邓志辉 +4 位作者 周丹 钟艳平 陈浩 洪文旭 邹红岩 《国际输血及血液学杂志》 CAS 2018年第6期497-505,共9页
目的探讨中国南方汉族造血干细胞捐献者人类白细胞抗原(HLA)-A、-B、-C、-DRB1及-DQB1位点高分辨等位基因的多态性分布。方法选择2016年1月至2017年12月于中国造血干细胞捐献者资料库(CMDP)深圳分库登记的4 262例中国南方汉族造血干细... 目的探讨中国南方汉族造血干细胞捐献者人类白细胞抗原(HLA)-A、-B、-C、-DRB1及-DQB1位点高分辨等位基因的多态性分布。方法选择2016年1月至2017年12月于中国造血干细胞捐献者资料库(CMDP)深圳分库登记的4 262例中国南方汉族造血干细胞捐献者为研究对象。采用PCR-序列特异性寡核苷酸探针(SSO)和二代测序(NGS)技术对本研究4 262例造血干细胞捐献者的HLA-A、-B、-C、-DRB1及-DQB1位点进行高分辨等位基因分型检测。采用直接计数法分别计算上述5个HLA位点的常见、确认及罕见等位基因频率。采用χ2检验判断研究对象的HLA-A、-B、-C、-DRB1及-DQB1各位点等位基因的分布是否符合Hardy-Weinberg平衡定律。结果①本研究4 262例中国南方汉族造血干细胞捐献者的HLA-A、-B、-C、-DRB1及-DQB1位点等位基因观察值与期望值分别比较,差异均无统计学意义(χ^2=295.068、572.482、355.205、362.584、312.150,P>0.05)。本研究4 262例造血干细胞捐献者的HLA-A、-B、-C、-DRB1及-DQBl位点基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律。②本研究4 262例中国南方汉族造血干细胞捐献者中,检出的HLA-A、-B、-C、-DRB1及-DQB1位点的等位基因分别为49、97、37、48和22种,其中等位基因频率>0.05的常见等位基因包括:HLA-A*11∶01、24∶02、02∶07、02∶01、33∶03和02∶03,累计等位基因频率为0.767 1;HLA-B*40∶01、46∶01、58∶01、13∶01和51∶01,累计等位基因频率为0.471 6;HLA-C*01∶02、07∶02、03∶04、08∶01、03∶02、06∶02和03∶03,累计等位基因频率为0.782 5;HLA-DRB1*09∶01、15∶01、12∶02、07∶01、08∶03、03∶01、11∶01和04∶05,累计等位基因频率为0.656 4;以及HLA-DQB1*03∶01、03∶03、06∶01、05∶02、03∶02、02∶01、05∶03、06∶02和02∶02,累计等位基因频率为0.877 6。③本研究4 262例中国南方汉族造血干细胞捐献者中,HLA-A、-B、-C、-DRB1及-DQB1位点的确认及罕见� 展开更多
关键词 HLA抗原 等位基因 基因频率 聚合酶链反应 高分辨基因分型 常见等位基因 确认等位基因 罕见等位基因 聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针 二代测序
In vitro anticancer activity of polysaccharide extracted from red alga Jania rubens against breast and colon cancer cell lines
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作者 Saly Gheda Mostafa El-Sheekh Alaa Abou-Zeid 《亚太热带医药杂志:英文版》 SCIE CAS 2018年第10期583-589,共7页
Objective: To evaluate the potential role of the polysaccharides of the marine algae as an anticancer agent in vitro against colon cancer cell line(CoCa2) and breast cancer(MCF7) cell lines and to measure lactate ... Objective: To evaluate the potential role of the polysaccharides of the marine algae as an anticancer agent in vitro against colon cancer cell line(CoCa2) and breast cancer(MCF7) cell lines and to measure lactate dehydrogenase enzyme(LDH) activity as biomarker of membrane integrity of the cells. Methods: The cells of breast cancer(MCF7) and colon cancer(CoCa2)were used to evaluate the potential anticancer role of the polysaccharides of marine algae. Antiproliferative activity against MCF7 and CoCa2 cell lines were evaluated in vitro by the 3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2 H-tetrazolium bromide(MTT) assay. Results: The in vitro assay of the antioxidant activity of eight marine seaweed species showed that the red seaweed Jania rubens(J. rubens) had the highest DPPH(2,2 diphenyl-1-picrylhydrazyl) free radical scavenging activity. The extracted polysaccharides with concentrations 0.1–40.0 mg/mL from J. rubens were tested for its anticancer potentiality and cytotoxic effects against the cell lines of human breast(MCF7) and colon cancer(CoCa2) cell lines by MTT assay. The inhibitory concentration at 50 (IC50) value the of J. rubens polysaccharide extract was 0.312 5 mg/mL for MCF7 and 20 mg/mL for CoCa2. LDH activity and annexin V concentration were higher in the treated MCF7 and CaCo2 cells than in the untreated ones. Quantitative polymerase chain reaction technique indicated that the polysaccharide treatments caused up-regulation of Bax, caspase 8 and P53 genes expression in CoCa2 cells, and up-regulation of caspase 3 and down-regulation of Bcl2 genes expression in MCF7 cells. Conclusions: The polysaccharides of the red marine alga J. rubens could be a potential candidate for the natural compounds as antioxidant and anticancer therapy. 展开更多
关键词 Marine ALGAE Antioxidant activity Cytotoxicity Apoptosis LACTATE DEHYDROGENASE POLYMERASE chain reaction
修饰的pfu酶与T7ssb蛋白在聚合酶链式反应中的应用
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作者 刘明珠 秦中强 +3 位作者 杨天华 陈勇 李永海 李正红 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2018年第5期2220-2227,共8页
表达、纯化pfu-sso7d及T7ssb蛋白,并优化PCR反应体系。分别将pfu、pfu-sso7d及T7ssb基因构建于p ET28载体上,转化至原核细胞中,诱导表达出pfu、pfu-sso7d及T7ssb蛋白,并通过His-Nickle亲和层析纯化柱纯化蛋白。从A549细胞中提取人的基因... 表达、纯化pfu-sso7d及T7ssb蛋白,并优化PCR反应体系。分别将pfu、pfu-sso7d及T7ssb基因构建于p ET28载体上,转化至原核细胞中,诱导表达出pfu、pfu-sso7d及T7ssb蛋白,并通过His-Nickle亲和层析纯化柱纯化蛋白。从A549细胞中提取人的基因组DNA,以该基因组DNA为模板,利用pfu酶扩增c-met基因;同时从A549中提取总RNA,经过逆转录反应后,以逆转录产物c DNA为模板,分别利用pfu酶和pfu-sso7d酶扩增PD-L1基因,对比两种酶的DNA扩增效率;从MC38细胞中提取鼠的基因组DNA,以此基因组DNA为模板,分别用pfu-sso7d和pfu-sso7d联合T7ssb蛋白扩增Trp53基因,对比两种PCR反应体系的扩增效率。我们成功的将pfu、pfu-sso7d及T7ssb基因构建于p ET28载体上,并成功的诱导表达并纯化了这三种蛋白;用pfu酶成功的扩增出c-met基因;对比pfu酶,pfu-sso7d表现出较高的DNA扩增效率;在扩增Trp53基因的PCR反应体系中,同单独使用pfu-sso7d酶相比,pfu-sso7d联合T7ssb蛋白在PCR反应体系中可以提高PCR产物的量,约1.7倍。本次研究表明,利用纯化的pfu-sso7d蛋白和T7ssb蛋白,我们构建了优化的PCR反应体系。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 PFU DNA聚合酶 T7单链结合蛋白 重组蛋白诱导表达 蛋白纯化
食品中花生过敏原及其检测方法的研究进展 预览
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作者 黄玉霞 梁金玲 +1 位作者 Lisa Wang 何金兴 《食品工业科技》 CSCD 北大核心 2018年第22期314-318,327共6页
花生是常见的过敏原之一,能够引起严重的过敏反应。由于缺乏明确的治疗花生过敏的方法,只能让花生过敏患者尽量避免食入含有花生的食物。但在实际的生产过程中,食品加工往往需要经过复杂的生产工艺,会造成食品之间的交叉污染,部分食品... 花生是常见的过敏原之一,能够引起严重的过敏反应。由于缺乏明确的治疗花生过敏的方法,只能让花生过敏患者尽量避免食入含有花生的食物。但在实际的生产过程中,食品加工往往需要经过复杂的生产工艺,会造成食品之间的交叉污染,部分食品难以准确判断是否含有花生过敏原。因此对于食品中花生过敏原的检测方法的开发就显得尤为重要。本文主要对花生中过敏原的种类及其检测方法的研究进展进行了综述,主要对以下几种方法做了介绍,包括酶联免疫吸附法(ELISA)、免疫印迹法、聚合酶链式反应(PCR)等,以及新兴的生物传感器和质谱法,并对检测方法的未来发展趋势进行了展望。 展开更多
关键词 花生过敏原 检测 酶联免疫吸附法 聚合酶链式反应 生物传感器法 质谱法
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利用PCR快速检测粪便标本中的鸭沙门菌
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作者 韩营营 段瑶 +1 位作者 李杰 闫梅英 《疾病监测》 CAS 2018年第3期246-250,共5页
目的建立应用PCR技术鉴定鸭沙门菌血清型的方法,并评价其特异度、灵敏度和检测下限。方法从Gen Bank下载截至2015年8月的所有沙门菌基因组序列进行比对,得到鸭沙门菌血清型特异的基因序列,设计引物,建立普通PCR检测体系并验证引物的特... 目的建立应用PCR技术鉴定鸭沙门菌血清型的方法,并评价其特异度、灵敏度和检测下限。方法从Gen Bank下载截至2015年8月的所有沙门菌基因组序列进行比对,得到鸭沙门菌血清型特异的基因序列,设计引物,建立普通PCR检测体系并验证引物的特异度和灵敏度。同时利用模拟粪便样本确定其检测下限。结果利用鸭沙门菌特异基因AW58_15605建立的PCR检测方法,对全部鸭沙门菌纯菌及其临床样本的扩增结果均为阳性,而对鸭沙门菌血清型以外的沙门菌和肠道菌的扩增结果均为阴性,检测的特异度和灵敏度均为100%。以粪便模拟样本提取DNA为模板进行检测,增菌后该方法检测下限的灵敏度明显提高,样本经过夜选择性增菌后,检测下限可达59.1 cfu/g,较增菌前提高105倍。结论建立了一种特异度、灵敏度高的筛查鸭沙门菌血清型方法,为快速、准确鉴定鸭沙门菌和及时处置其造成的公共卫生问题有重要作用。 展开更多
关键词 鸭沙门菌 血清型 聚合酶链式反应
人脐带间充质干细胞对小鼠肝缺血-再灌注损伤后肝内CD4~+T细胞的影响 预览
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作者 周朝荣 吕海金 +3 位作者 孙瑶 安玉玲 范明明 易慧敏 《器官移植》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期103-109,共7页
目的探讨人脐带间充质干细胞(HUC-MSCs)对小鼠肝缺血-再灌注损伤(HIRI)后肝内CD4+T细胞的影响。方法将225只小鼠随机分为sham组、control组和MSC组,每组75只。其中MSC组和control组均为HIRI模型小鼠,MSC组通过下腔静脉注射HUC-MSCs... 目的探讨人脐带间充质干细胞(HUC-MSCs)对小鼠肝缺血-再灌注损伤(HIRI)后肝内CD4+T细胞的影响。方法将225只小鼠随机分为sham组、control组和MSC组,每组75只。其中MSC组和control组均为HIRI模型小鼠,MSC组通过下腔静脉注射HUC-MSCs,control组通过下腔静脉注射生理盐水,sham组仅进行开腹、关腹等操作,不行血管夹闭。分别于术后6、12、24 h,每组随机取15只小鼠,用于眼球取血法采血及取肝组织样本,每组剩下的30只小鼠用于肝内单核细胞的提取。比较各组小鼠不同时间点肝内单核细胞数量,CD4+T细胞比例、数量和阳性率;比较各组小鼠不同时间点血清和肝组织中白细胞介素(IL)-17含量,及肝组织内共刺激分子B7-1和B7-2信使核糖核酸(m RNA)表达水平。结果术后12、24 h,control组的肝内单核细胞数量明显高于sham组,而MSC组的肝内单核细胞数量明显低于control组(P〈0.01-0.05)。术后6、12、24 h,control组的CD4+T细胞比例、数量及阳性率均明显高于sham组(均为P〈0.01),MSC组的CD4+T细胞比例明显低于control组(P〈0.01-0.05);术后12、24 h,MSC组的CD4+T细胞数量和阳性率均明显低于control组(P〈0.01-0.05)。术后6、12、24 h,control组血清和肝组织中的IL-17含量均高于sham组(均为P〈0.01),而MSC组血清和肝组织中的IL-17含量均低于control组(均为P〈0.01)。术后6 h,control组B7-2的m RNA表达水平高于sham组(P〈0.05);术后12、24 h,control组B7-1和B7-2的m RNA表达水平均高于sham组(均为P〈0.01),而MSC组B7-1和B7-2的m RNA表达水平均低于control组(均为P〈0.01)。结论 HUC-MSCs抑制HIRI后肝内CD4+T细胞的数量和IL-17的分泌,同时减少肝内单核细胞数量及B7-1和B7-2 m RNA表达,减轻HIRI。 展开更多
关键词 间充质干细胞 人脐带 缺血-再灌注损伤 肝脏 CD4+T细胞 白细胞介素(IL)-17 单核细胞 共刺激分子 流式细胞术 聚合酶链反应
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解脲支原体生物亚群与男性尿道炎的相关研究 预览
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作者 曾文军 王柳均 +5 位作者 邓珍良 袁绍辉 张小敏 陈剑钊 皮红泉 陈群 《中国实用医药》 2018年第9期195-197,共3页
目的研究解脲支原体(UU)不同生物亚群与男性尿道炎的关系。方法 120例男性尿道拭子标本,获取120株UU临床株,分析检查其尿液,并以多条带抗原基因为靶位设计分群引物进行UU鉴定生物群。结果本研究未发现两生物亚群混合感染标本。UU1生... 目的研究解脲支原体(UU)不同生物亚群与男性尿道炎的关系。方法 120例男性尿道拭子标本,获取120株UU临床株,分析检查其尿液,并以多条带抗原基因为靶位设计分群引物进行UU鉴定生物群。结果本研究未发现两生物亚群混合感染标本。UU1生物亚群占UU检测79.17%(95/120),UU2生物亚群占UU检测率20.83%(25/120)。12例有临床症状(其中2例UU1,10例UU2),108例无临床症状(其中93例UU1,15例UU2),UU2在男性尿道炎患者中检出率显著高于UU1,差异有统计学意义(χ^2=31.58,P〈0.01),即UU2具有更高的致病性,UU1是优势定植菌。结论 UU1生物亚群可能是优势定植菌群,UU2生物亚群更容易引起尿道炎症。 展开更多
关键词 解脲支原体 生物亚群 尿道炎 聚合酶链反应
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