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RNA干涉及其应用前景 预览 被引量:18
1
作者 张利生 陈大元 《遗传》 CAS 北大核心 2003年第3期 341-344,共4页
RNA干涉是指由特定双链RNA(dsRNA)引起的转录后基因沉默现象.研究表明,Dicer断裂dsRNA产生的小干涉RNA可以抑制哺乳动物体细胞和胚胎中的基因的表达.RdRP在扩增RNAi中起着关键性的作用,RdRP活性复制较长的触发性dsRNA或以一种非引物的... RNA干涉是指由特定双链RNA(dsRNA)引起的转录后基因沉默现象.研究表明,Dicer断裂dsRNA产生的小干涉RNA可以抑制哺乳动物体细胞和胚胎中的基因的表达.RdRP在扩增RNAi中起着关键性的作用,RdRP活性复制较长的触发性dsRNA或以一种非引物的方式复制短的siRNA,即以siRNA为引物的RdRP反应使靶mRNA转变为dsRNA,同时复制触发性dsRNA.所有的产物又可作为Dicer的底物,起始RdRP级联反应.本文综述了RNAi可能的作用机制,并对RNAi在分析功能基因组、药物治疗等方面的应用前景进行了展望. 展开更多
关键词 RNA干涉 双链RNA DSRNA 转录 基因沉默 DICER酶 RdRP活性 功能基因组 作用机制 RNAi
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卤代烷烃脱卤酶基因在拟南芥中反式失活系统的建立 预览
2
作者 郝林 曹军 冯树 《应用生态学报》 CAS 2001年第2期 269-271,共3页
以细菌Xanthobacter autotrophicus卤代烷烃脱卤酶基因为遗传负选择标记,建立了该基因在拟南芥中反式失活的实验系统.在卤代烷烃脱卤酶转基因拟南芥中,有1株表现为转基因失活,离体核run-off转录实验表明为基因转录后沉默(这里特指... 以细菌Xanthobacter autotrophicus卤代烷烃脱卤酶基因为遗传负选择标记,建立了该基因在拟南芥中反式失活的实验系统.在卤代烷烃脱卤酶转基因拟南芥中,有1株表现为转基因失活,离体核run-off转录实验表明为基因转录后沉默(这里特指沉默位点).用这一转基因沉默植株与同源转基因高效表达植株(这里特指同源转基因位点)杂交,结果96%的F1代植株表现为同源转基因反式失活.将F1代植株自交,使部分沉默位点与反式失活的同源转基因位点分离,结果200株子代中有42株表现DhlA活性,158株无DhlA活性,即dhlA沉默植株与表达植株之比为3.76:1,表明沉默位点是以孟德尔显性因子方式使同源转基因位点反式失活的. 展开更多
关键词 卤代烷烃脱卤酶基因 拟南芥 反式失活 转录后沉默 转基因植物
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植物转基因中同源共抑制的机制及其解决措施 被引量:3
3
作者 孔莹莹 蒋丽 +3 位作者 韩凝 边红武 朱睦元 王君晖 《生命科学》 CSCD 2012年第5期 399-403,共5页
外源基因在不同的植物转基因株系间会呈现很大的表达差异,甚至出现同源共抑制现象,即转基因在其自身不表达的同时也造成与其同源的内源基因的沉默。转基因沉默和同源共抑制主要包括转录水平沉默(transcriptional gene silencing,TG... 外源基因在不同的植物转基因株系间会呈现很大的表达差异,甚至出现同源共抑制现象,即转基因在其自身不表达的同时也造成与其同源的内源基因的沉默。转基因沉默和同源共抑制主要包括转录水平沉默(transcriptional gene silencing,TGS)和转录后水平沉默(post—transcriptional gene silencing,PTGS)。高度转录的外源基因所产生的紊乱RNA触发了RNA干涉的机器,是造成转基因沉默和同源共抑制的主要原因。目前,介绍同源共抑制机理的综述很多,但是介绍其克服方法的综述却很少。为了减少转基因株系差异,得到稳定表达的转基因株系,研究者提出了一系列消除转基因沉默和同源共抑制的措施,包括筛选单拷贝株系、利用PTGS突变体材料、利用病毒的RNA干涉抑制因子、利用植物的紊乱RNA清除蛋白以及构建新型的转基因载体等。对上述方法进行综述,并比较其优劣。 展开更多
关键词 同源共抑制 转录水平基因沉默 转录后水平基因沉默 RNA干涉抑制
RNA干扰机制及应用研究进展 预览 被引量:6
4
作者 马丽 张春庆 《北方园艺》 CAS 北大核心 2012年第10期191-193,共3页
RNA干扰是外源和内源的双链RNA(double-strand RNA,dsRNA)特异性诱导生物体内同源靶基因mRNA的降解,从而导致转录后基因沉默的现象。目前对于RNA干扰机制已有深入研究,同时RNA干扰在抑制有害基因表达、功能基因组学及基因治疗等方面... RNA干扰是外源和内源的双链RNA(double-strand RNA,dsRNA)特异性诱导生物体内同源靶基因mRNA的降解,从而导致转录后基因沉默的现象。目前对于RNA干扰机制已有深入研究,同时RNA干扰在抑制有害基因表达、功能基因组学及基因治疗等方面的应用研究也取得了较大进展。现主要综述了RNA干扰的作用机制、作用特点和技术应用等方面的研究进展。 展开更多
关键词 RNA干扰 DSRNA 转录后基因沉默
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SLC/AGO1基因控制拟南芥细胞分裂与定向伸长 被引量:7
5
作者 王文婧 刘婷 +1 位作者 郭磊 刘春明 《植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期370-378,共9页
植物通过控制细胞分裂和伸长决定器官的形状。为了研究器官形状决定的分子机理,通过EMS诱变分离得到一个叶形细长的拟南芥突变体。细胞生物学观察发现,该基因突变不仅影响了生长点中的细胞分裂,也影响了叶片细胞的形状和数目,其表皮细... 植物通过控制细胞分裂和伸长决定器官的形状。为了研究器官形状决定的分子机理,通过EMS诱变分离得到一个叶形细长的拟南芥突变体。细胞生物学观察发现,该基因突变不仅影响了生长点中的细胞分裂,也影响了叶片细胞的形状和数目,其表皮细胞凸起数明显减少,呈单轴向伸长,因此将该突变体定名为slender leaves and cells(slc)。有趣的是,不同组织内细胞分裂和伸长受到不同程度的影响,说明SLC基因在协调细胞分裂和伸长过程中起关键作用。图位克隆结果表明,SLC与小RNA介导的基因沉默相关基因AGO1等位,其第574位组氨酸突变为酪氨酸。slc和ago1杂交F1代植物呈现突变体表型,证明AGO1和SLC确实为同一基因。以上结果表明,SLC/AGO1所介导的转录后基因沉默对控制植物器官和细胞形状决定均起重要作用。 展开更多
关键词 AGO1 细胞分裂 细胞伸长 叶片形状 转录后基因沉默
RNA干扰在植物中的应用 预览 被引量:2
6
作者 张旭 张树彪 金梅 《安徽农学通报》 2011年第7期 32,38,共2页
RNA干扰是一种进化上保守的机制,存在于植物、动物、真菌等生物中,目前已成为研究热点,在近几年得到了巨大的发展。对RNA干扰技术的发现过程、机制以及特点进行了综述,并对RNA干扰技术在植物上的应用进行了介绍,为相关研究提供信息。
关键词 RNA干扰 小干扰RAN 转录后基因沉默
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转录后基因沉默与植物抗病毒研究进展 预览
7
作者 朱春晖 张德咏 刘勇 《长江蔬菜》 2010年第8期 1-6,共6页
主要综述了转录后基因沉默(PTGS)的发现、定义、机制、与植物抗病毒的关系及利用转录后基因沉默防治植物病毒病研究进展。
关键词 转录后基因沉默 DSRNA 抗病毒
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RNA干扰技术及其应用研究 被引量:2
8
作者 陈若飞 《畜牧与饲料科学》 2009年第5期 49-51,共3页
RNA干涉作用,是生物界一种古老而且进化上高度保守的现象。是基因转录后沉默作用(PTGS)的重要机制之一。它能定向关闭生物体内某一基因,使其不发挥作用,同时不影响其他基因的功能,便于研究特定基因的功能。在后基因组时代的基因... RNA干涉作用,是生物界一种古老而且进化上高度保守的现象。是基因转录后沉默作用(PTGS)的重要机制之一。它能定向关闭生物体内某一基因,使其不发挥作用,同时不影响其他基因的功能,便于研究特定基因的功能。在后基因组时代的基因功能研究、基因治疗和药物开发中具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 RNA干涉技术 基因转录后沉默 基因功能组应用
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采用RNA干扰技术分析拟南芥Ca^2+泵基因ECAJ的功能 预览 被引量:2
9
作者 朱炜 黄丛林 +4 位作者 张秀海 王永勤 魏建民 于荣 吴忠义 《植物生理学通讯》 北大核心 2008年第3期 469-475,共7页
构建了含拟南芥Ca^2+泵基因ECA1特异片段反向重复结构的RNA干扰(RNAi)载体,以根癌农杆菌介导转化拟南芥,用卡那霉素筛选和PCR检测,获得了11个T3代纯合体转基因株系;半定量RT-PCR方法检测ECA1在转基因株系中转录的结果表明,其转... 构建了含拟南芥Ca^2+泵基因ECA1特异片段反向重复结构的RNA干扰(RNAi)载体,以根癌农杆菌介导转化拟南芥,用卡那霉素筛选和PCR检测,获得了11个T3代纯合体转基因株系;半定量RT-PCR方法检测ECA1在转基因株系中转录的结果表明,其转录产物比野生型(WT)明显低,且转基因株系之间差异明显,表达水平有一个梯度关系;在1/2MS培养基上转基因株系与野生型的差异不明显,相对于野生型而言,在相对低Ca^2+(0.2mmol·L^-1)或相对高Mn^2+(0.5mmol·L^-1)的培养基上的转基因株系生长受到不同程度的抑制,ECA1转录量越低,生长受到的抑制越大。据此认为:ECA1对植物的生长发育和抵御逆境胁迫有作用。 展开更多
关键词 Ca^2+泵 RNA干扰(RNAI) 转录后基因沉默
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拟南芥Ca~(2+)泵基因ACA_2的RNAi载体的构建及转基因植株的筛选 预览 被引量:1
10
作者 朱炜 魏建民 乌日罕 《内蒙古农业大学学报:自然科学版》 CAS 2008年第4期,共4页
构建了含拟南芥Ca2+泵基因ACA2特异片段反向重复结构的RNA i载体,通过根癌农杆菌介导转化拟南芥,用卡那霉素筛选和PCR检测,获得了12个T3代纯合体转基因株系;半定量RT-PCR方法检测ACA2在转基因株系中转录的结果表明,其转录产物比野生型(... 构建了含拟南芥Ca2+泵基因ACA2特异片段反向重复结构的RNA i载体,通过根癌农杆菌介导转化拟南芥,用卡那霉素筛选和PCR检测,获得了12个T3代纯合体转基因株系;半定量RT-PCR方法检测ACA2在转基因株系中转录的结果表明,其转录产物比野生型(WT)明显降低,且转基因株系之间差异明显,表达水平有1个梯度关系,因此,我们初步确定沉默Ca2+泵基因ACA2的RNA i载体是起作用的。 展开更多
关键词 Ca2+泵 RNAI 转录后基因沉默
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siRNA表达框架对TNF-α和IL-1的特异性抑制 预览
11
作者 孙杰 林怡 +2 位作者 姜妙娜 郭连英 张海鹏 《大连医科大学学报》 CAS 2008年第6期 527-529,共3页
[目的]利用siRNA表达框架研究RNA干扰技术对小鼠腹腔活化巨噬细胞分泌TNF-α和IL—1的抑制作用及其干扰序列的特异性。[方法]原代培养小鼠腹腔巨噬细胞,构建针对小鼠TNF—α和IL-1的siRNA表达框架,转染细胞,用ELISA方法检测TNF-α和I... [目的]利用siRNA表达框架研究RNA干扰技术对小鼠腹腔活化巨噬细胞分泌TNF-α和IL—1的抑制作用及其干扰序列的特异性。[方法]原代培养小鼠腹腔巨噬细胞,构建针对小鼠TNF—α和IL-1的siRNA表达框架,转染细胞,用ELISA方法检测TNF-α和IL-1分泌情况。[结果]TNF-α干扰组TNF-α分泌量(21.87±1.20)pg/mL较IL-1干扰组(28.02±1.03)pg/mL及对照组(27.64±1.92)pg/mL均明显降低,差异有显著性意义(P〈0.05)。IL-1干扰组IL-1分泌量(40.37±4.02)pg/mL较TNF—α干扰组(57.86±3.91)pg/mL及对照组(59.55±3.57)pg/mL均明显降低,差异有显著性意义(P〈0.05)。[结论]构建的针对TNF-α和IL-1的siRNA表达框架能够明显抑制巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1,且干扰作用具有序列特异性。 展开更多
关键词 RNA干扰 siRNA表达框架 肿瘤坏死因子Α 白细胞介素-1
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RNA干扰对小鼠腹腔活化巨噬细胞分泌TNF-α的影响 预览
12
作者 孙杰 高颖 +3 位作者 姜妙娜 郑宁宁 宋晓宇 张海鹏 《大连医科大学学报》 CAS 2008年第5期 414-416,共3页
[目的]探讨RNA干扰对小鼠腹腔活化巨噬细胞表达TNF-α的抑制作用。[方法]原代培养小鼠腹腔巨噬细胞,构建针对小鼠TNF-α的siRNA表达框架,转染细胞,用RT-PCR方法检测TNF-αmRNA的水平,用ELISA方法检测TNF-α分泌情况。[结果]从凝胶电泳图... [目的]探讨RNA干扰对小鼠腹腔活化巨噬细胞表达TNF-α的抑制作用。[方法]原代培养小鼠腹腔巨噬细胞,构建针对小鼠TNF-α的siRNA表达框架,转染细胞,用RT-PCR方法检测TNF-αmRNA的水平,用ELISA方法检测TNF-α分泌情况。[结果]从凝胶电泳图像TNF-α/β-actin灰度值比可以看出干扰组TNF-αmRNA的水平0.18±0.03较阳性对照组0.91±0.05及阴性对照组0.85±0.10明显降低(P〈0.05)。干扰组TNF-α分泌量(21.87±1.20)pg/mL较阳性对照组(28.02±1.03)pg/mL及阴性对照组(27.64±1.92)pg/mL均明显降低(P〈0.05)。[结论]RNA干扰可以有效地抑制原代培养小鼠腹腔巨噬细胞TNF-αmRNA水平及其蛋白分泌。 展开更多
关键词 RNA干扰 siRNA表达框架 转录后基因沉默 肿瘤坏死因子Α
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RNA干扰技术的研究进展
13
作者 宋亚锋 李世昌 《山西师大体育学院学报》 2007年第F06期 103-105,共3页
RNA组学研究日益蓬勃发展。RNA的相关研究被美国《科学》杂志评为2002年的十大进展。人们发现,双链RNA可以抑制含有特定序列的基因表达。应用这一特点,在生物体外强有力的使基因沉默,从而开创了一个新的和正在快速发展的生命科研领域... RNA组学研究日益蓬勃发展。RNA的相关研究被美国《科学》杂志评为2002年的十大进展。人们发现,双链RNA可以抑制含有特定序列的基因表达。应用这一特点,在生物体外强有力的使基因沉默,从而开创了一个新的和正在快速发展的生命科研领域。RNA干扰技术引起生物医学界几乎所有研究领域的广泛兴趣,它不仅揭示了细胞内基因沉默的机制,而且它还是基因功能分析的有力工具,RNA干扰(siRNA)技术对人类有着巨大的意义和广阔的应用前景。 展开更多
关键词 基因沉默 MRNA SIRNA 转录后基因沉默
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动植物miRNA的生物合成、作用机理及其功能 预览 被引量:2
14
作者 龙茹 李玉花 徐启江 《生命科学》 2007年第2期 127-131,共5页
microRNAs(miRNAs)是生物体内源长度约为20-23个核苷酸的非编码小RNA,通过与靶mRNA的互补配对而在转录后水平上对基因的表达进行负调控,导致mRNA的降解或翻译抑制。到目前为止,已报道有几千种miRNA存在于动物、植物、真菌等多细胞... microRNAs(miRNAs)是生物体内源长度约为20-23个核苷酸的非编码小RNA,通过与靶mRNA的互补配对而在转录后水平上对基因的表达进行负调控,导致mRNA的降解或翻译抑制。到目前为止,已报道有几千种miRNA存在于动物、植物、真菌等多细胞真核生物中,进化上高度保守。在植物和动物中,miRNA虽然都是通过与其靶基因的相互作用来调节基因表达,进而调控生物体的生长发育,但miRNA执行这种调控作用的机理却不尽相同。同时miRNA在动植物体内的形成过程也存在很多的不同之处。本文综述了动植物miRNA的生物合成、作用机理、生物功能等方面的研究进展。 展开更多
关键词 植物 动物 MIRNA 转录后基因沉默
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RNA干扰抑制小鼠脾淋巴细胞分泌IL-1α 被引量:1
15
作者 郑宁宁 于艳秋 +2 位作者 宋晓宇 丁旭东 张海鹏 《中国病理生理杂志》 CAS 北大核心 2007年第3期 435-437,共3页
目的:确定针对IL—1α的siRNA在细胞内与其具有同源互补序列的靶标位点结合后,特异性降解IL—1α的mRNA,从而抑制其表达的效果。方法:体外PCR扩增合成针对IL-1α靶位点的DNA表达盒,纯化后转染经LPS激活的小鼠脾淋巴细胞,在细胞内... 目的:确定针对IL—1α的siRNA在细胞内与其具有同源互补序列的靶标位点结合后,特异性降解IL—1α的mRNA,从而抑制其表达的效果。方法:体外PCR扩增合成针对IL-1α靶位点的DNA表达盒,纯化后转染经LPS激活的小鼠脾淋巴细胞,在细胞内源性RNA聚合酶Ⅲ作用下转录形成siRNA,诱发目标mRNA的降解。于转染后48h收集细胞培养上清。用ELISA法测定IL—1α浓度。结果:干扰组IL—1α分泌量明显低于对照组和无关干扰组(P〈0.05),抑制率约为15%。结论:RNA干扰技术可以在原代培养的小鼠脾淋巴细胞中发挥特异性干扰作用,产生抑制IL—1α分泌的效果,为IL—1α的基因治疗开拓了新途径。 展开更多
关键词 RNA干扰 转录后基因沉默 白细胞介素1 淋巴细胞
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RNA干扰机制的研究进展 被引量:1
16
作者 宋敬东 王健伟 +2 位作者 吴围屏 韩金祥 洪涛 《生物技术通讯》 CAS 2006年第3期 409-411,共3页
RNA干扰(RNAi)广泛存在于各种生物体中,是参与细胞防御与分化调控的重要机制之一.RNAi的作用由双链RNA启动,通过在转录、转录后和翻译等多个水平上对同源基因表达的特异阻断和抑制来实现,清晰地阐明其作用机制将为功能基因组学、发育... RNA干扰(RNAi)广泛存在于各种生物体中,是参与细胞防御与分化调控的重要机制之一.RNAi的作用由双链RNA启动,通过在转录、转录后和翻译等多个水平上对同源基因表达的特异阻断和抑制来实现,清晰地阐明其作用机制将为功能基因组学、发育生物学,以及抗肿瘤、抗病毒的新策略研究提供重要的理论依据.本文综述了近年来有关RNAi机制的研究进展. 展开更多
关键词 转录基因沉默 转录后基因沉默 翻译水平沉默 短干扰RNA 微小RNA
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RNA干扰及其技术的应用 预览
17
作者 钱颖 范春雷 《浙江中医学院学报》 2006年第1期 104-106,共3页
RNA干扰(RNAi)是细胞内由双链RNA请导降解与其配对的特定mRNA的过程。细胞内双链RNA在酶的作用下,形成20-25碱基大小的小干扰RNA(siRNAs),由siRNAs进一步掺入多组分极酸酶并使其激活,从而精确降解与siRNAs序列相同的mRNA,抑制... RNA干扰(RNAi)是细胞内由双链RNA请导降解与其配对的特定mRNA的过程。细胞内双链RNA在酶的作用下,形成20-25碱基大小的小干扰RNA(siRNAs),由siRNAs进一步掺入多组分极酸酶并使其激活,从而精确降解与siRNAs序列相同的mRNA,抑制该基因在细胞内的翻译表达。介绍了RNA干扰的分子机制、制备方法、以度RNA干扰技术在功能基因组学、微生物学、基因治疗和信号转导等研究领域里的应用。 展开更多
关键词 RNAI 转录后基因沉默 基因沉默复合体 基因功能 信号转导 基因治疗
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RNA干涉 预览
18
作者 龚熹 罗玉萍 李思光 《江西科学》 2006年第2期 111-114,共4页
RNA干涉是指双链RNA引发的同源mRNA的降解过程,由于其多发生于转录水平,因此又称为转录后基因沉默。RNA干涉现象是在线虫中首次发现的,通过几年的研究发现它广泛存在于生物体中(包括单细胞生物、后生动物和哺乳动物)。本文对RNA干... RNA干涉是指双链RNA引发的同源mRNA的降解过程,由于其多发生于转录水平,因此又称为转录后基因沉默。RNA干涉现象是在线虫中首次发现的,通过几年的研究发现它广泛存在于生物体中(包括单细胞生物、后生动物和哺乳动物)。本文对RNA干涉现象的发现、作用机制、相关基因等作了简单的论述。 展开更多
关键词 RNA干涉 转录后基因沉默 小分子干涉RNA 依赖于RNA的RNA聚合酶
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RNAi在植物功能基因组中的应用 预览 被引量:4
19
作者 刁文一 蒋建雄 +3 位作者 熊兴华 张炎 彭昕琴 张志刚 《现代生物医学进展》 CAS 2006年第2期 81-83,共3页
植物生物学后基因组时代的主要目标就是确定植物基因组中所有基因所具有的功能。解决这个问题的一个最直接的方法就是还原或者敲除某个在正常条件下其功能能表达出一定的可观察到的表型的特殊基因。对于这方面的研究,插入突变技术就是... 植物生物学后基因组时代的主要目标就是确定植物基因组中所有基因所具有的功能。解决这个问题的一个最直接的方法就是还原或者敲除某个在正常条件下其功能能表达出一定的可观察到的表型的特殊基因。对于这方面的研究,插入突变技术就是一个可用的工具,但是基因的随机性,致死敲除,无标记的突变体都大大地限制了这种技术的利用。RNm技术可以克服以上那些难题。它已经被广泛地应用在线虫的功能基因组上,并且所获得的有效资源还被广泛地用于植物功能基因组的分析。 展开更多
关键词 RNAI 转录后基因沉默 功能基因组
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RNA干扰对小鼠脾淋巴细胞分泌TNF-α的影响 预览 被引量:1
20
作者 郑宁宁 丁旭东 +4 位作者 宋晓宇 杜莉莉 孙杰 金玉楠 张海鹏 《中国医科大学学报》 CAS 北大核心 2006年第5期 449-450,466,共3页
目的:探讨小干扰RNA(siRNA)对小鼠脾淋巴细胞分泌的肿瘤坏死因子α(TNF-α)的抑制效果。方法:体外PCR扩增合成针对TNF-α靶位点的DNA表达盒,转染经脂多糖(LPS)激活的小鼠脾淋巴细胞,在细胞内源性RNA聚合酶III作用下转录形成si... 目的:探讨小干扰RNA(siRNA)对小鼠脾淋巴细胞分泌的肿瘤坏死因子α(TNF-α)的抑制效果。方法:体外PCR扩增合成针对TNF-α靶位点的DNA表达盒,转染经脂多糖(LPS)激活的小鼠脾淋巴细胞,在细胞内源性RNA聚合酶III作用下转录形成siRNA,诱发目标mRNA的降解。于转染后48h收集细胞培养上清。TNF-α浓度用ELISA方法测定。结果:与空白对照组和无关干扰组相比,干扰组TNF-α分泌量明显降低(P〈0.05),抑制率约为16%。结论:RNA干扰技术可以在原代培养的小鼠脾淋巴细胞中发挥特异性干扰作用,产生抑制TNF-α分泌的效果,为TNF-α的基因治疗开拓新途径。 展开更多
关键词 RNA干扰 小干扰RNA 转录后基因沉默 肿瘤坏死因子Α
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