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矮生二裂委陵菜对2型糖尿病大鼠糖脂代谢关键酶和激素表达的影响
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作者 唐勋 曾阳 李锦萍 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期1703-1706,共4页
目的:研究矮生二裂委陵菜总黄酮对2型糖尿病(T2DM)大鼠血糖影响,以及对胰岛素、抵抗素、瘦素、葡萄糖激酶和葡萄糖-6-磷酸酶基因表达的影响,以期探讨矮生二裂委陵菜抗T2DM的作用机制。方法:采用高脂高糖饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素注... 目的:研究矮生二裂委陵菜总黄酮对2型糖尿病(T2DM)大鼠血糖影响,以及对胰岛素、抵抗素、瘦素、葡萄糖激酶和葡萄糖-6-磷酸酶基因表达的影响,以期探讨矮生二裂委陵菜抗T2DM的作用机制。方法:采用高脂高糖饲料喂养联合小剂量链脲佐菌素注射构建T2DM大鼠模型,并随机分为模型组,二甲双胍组,格列吡嗪组,矮生二裂委陵菜总黄酮高、低剂量组(200、100mg/kg),给药7、14、21、28d后测定空腹血糖,并于给药28d后测定糖脂代谢关键酶和激素的基因表达量。结果:与模型组比较,给药14d后二甲双胍组、格列吡嗪组和矮生二裂委陵菜总黄酮高剂量组空腹血糖显著下降(P<0.05),给药21、28d后各给药组空腹血糖显著下降(P<0.01,P<0.05);给药28d后,各药物组胰岛素、葡萄糖激酶基因表达水平显著上调(P<0.05),抵抗素、瘦素、葡萄糖-6-磷酸酶基因表达水平显著下调(P<0.01,P<0.05)。结论:矮生二裂委陵菜总黄酮能够调节糖脂代谢关键酶和激素的表达,这可能是其抗T2DM的分子机制之一。 展开更多
关键词 矮生二裂委陵菜 2型糖尿病 QRT-PCR 胰岛素 抵抗素 葡萄糖激酶
不同猪种背部皮下脂肪中miR-1和miR-369的表达差异及其与胴体、肉质性状相关性分析
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作者 陶璇 顾以韧 +13 位作者 梁艳 杨雪梅 邓小松 钟志君 杨跃奎 曾凯 陈晓晖 王言 何志平 龚建军 雷云峰 应三成 王卫 吕学斌 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第5期1-5,共5页
为了研究miRNA表达量与猪胴体及肉质性状的相关性,采用荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测了引进猪种大约克夏猪和6个四川省地方猪种背部皮下脂肪中miR-1和miR-369的差异表达情况。结果:除miR-1与藏猪差异不显著外,2种miRNA在大约克夏猪背部... 为了研究miRNA表达量与猪胴体及肉质性状的相关性,采用荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测了引进猪种大约克夏猪和6个四川省地方猪种背部皮下脂肪中miR-1和miR-369的差异表达情况。结果:除miR-1与藏猪差异不显著外,2种miRNA在大约克夏猪背部皮下脂肪中的表达水平显著高于地方猪种(P<0.05);地方猪种中,miR-1和miR-369表达水平分别在藏猪和雅南猪中最高;相关性分析显示,miR-1和miR-369在背部皮下脂肪中表达水平均与瘦肉率、多不饱和脂肪酸含量呈极显著正相关(P<0.01),与单不饱和脂肪酸含量均呈显著负相关(P<0.05),miR-369表达水平还与平均背膘厚呈极显著负相关(P<0.01)。试验表明miR-1和miR-369可能对猪脂肪沉积和单不饱和脂肪酸生成起负调控作用,对多不饱和脂肪酸生成起正调控作用。 展开更多
关键词 MIR-1 miR-369 QRT-PCR 背部皮下脂肪
木霉诱导下山新杨PodaPIN9基因的组织表达调控 预览
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作者 李枢航 苗蕊 +4 位作者 常媛 李俊男 燕晓杰 刘照莹 张荣沭 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期267-275,共9页
PIN蛋白具有多个跨膜结构域,影响着高等植物生长素的外向运输和众多生长发育过程。木霉菌是能促进植物生长、提高其对多种病害防御作用的生防因子。研究木霉菌对木本植物山新杨生长素的极性分布的影响有重要意义。克隆了山新杨PodaPIN9... PIN蛋白具有多个跨膜结构域,影响着高等植物生长素的外向运输和众多生长发育过程。木霉菌是能促进植物生长、提高其对多种病害防御作用的生防因子。研究木霉菌对木本植物山新杨生长素的极性分布的影响有重要意义。克隆了山新杨PodaPIN9基因,对其核酸和蛋白序列进行分析;同时,构建的进化树显示PodaPIN9与6个物种的9条PIN基因具有高度一致性(> 80%)。qRT-PCR分析表明,PodaPIN9在山新杨茎尖、成熟叶和根中均有表达。在根中表达量极低;在茎尖和叶中的表达量极高,分别是根中的503和346倍。该基因受木霉影响在茎尖和叶中的表达量均显著下调;而根中的表达量显著上调,达到对照的32. 01倍。并发现根际接种木霉48h会使杨树茎尖、叶和根中生长素含量降低。说明木霉菌能影响杨树茎尖、叶和根中IAA水平及PodaPIN9的表达量。并且Pearson相关性分析表明在茎尖、叶和根中,PodaPIN9表达量与IAA水平具有不同的相关性。 展开更多
关键词 山新杨 棘孢木霉菌 PIN基因 QRT-PCR IAA
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嗜碱盐单胞菌X3中异化型硝酸盐还原酶编码基因簇的功能验证及蛋白结构预测 预览
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作者 王越 李秋芬 张艳 《中国海洋大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期33-40,共8页
细菌的氮代谢推动环境的氮循环,硝酸盐还原反应是氮代谢途径中重要步骤之一。本文运用酶活测定、qRT-PCR和生物信息学软件分析的方法,对嗜碱盐单胞菌(Halomonas alkaliphila)X3中编码细菌异化型硝酸盐还原酶(Dissimilatory nitrate redu... 细菌的氮代谢推动环境的氮循环,硝酸盐还原反应是氮代谢途径中重要步骤之一。本文运用酶活测定、qRT-PCR和生物信息学软件分析的方法,对嗜碱盐单胞菌(Halomonas alkaliphila)X3中编码细菌异化型硝酸盐还原酶(Dissimilatory nitrate reductase,Nar)不同亚基的基因簇narGYJV进行了功能验证、蛋白结构预测和系统发育分析。研究表明,X3菌株中存在narGYJV基因簇并具有表达活性,测得Nar的酶活为每克蛋白21.415 U;预测到的narGYJV编码蛋白功能区域中1~1246氨基酸属于NarG超家族,编码Nar的α亚基;1261~1752氨基酸属于DMSOR-beta-like超家族,编码Nar的β亚基;2061~2279氨基酸编码γ亚基,1802~2018氨基酸编码δ亚基;Nar的二级结构中无规卷曲占37.59%,α螺旋占34.43%,延伸链占18.33%;NarG、NarY和NarV的3D结构与PDB中大肠杆菌(Escherichia coli)的1Q16 3D结构最接近,覆盖率96%~100%。系统发育树显示,菌株X3中NarG与同属菌的遗传距离较近,在不同菌属间虽然功能相似,其同源性较低;NarY与大肠杆菌中的氨基酸序列的同源关系较近,说明异化型硝酸盐还原酶Nar中不同亚基的系统发育地位不同。研究结果表明,Halomonas alkaliphila X3菌株中存在编码Nar的基因簇narGYJV,编码蛋白具有独特的3D结构,不同亚基的系统发育地位不同。研究结果为进一步研究该菌的氮代谢通路选择和调控机制提供了依据。 展开更多
关键词 嗜碱盐单胞菌 异化型硝酸盐还原酶 基因簇narGYJV 3D结构 qRT-PCR 系统发育树
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长链非编码RNA-LINC00485在肺癌中的表达及对细胞增殖和迁移的影响 预览
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作者 王向辉 黄江平 +1 位作者 崔丰和 钱海云 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期42-46,共5页
目的观察长链非编码RNA-LINC00485(LINC00485)在肺癌细胞株及组织中的表达,探讨其对肺癌细胞增殖和迁移的影响及其作用机制。方法采用qRT-PCR检测LINC00485在4种肺癌细胞株(H1975、A549、HCC827、H1299)、正常肺泡上皮细胞HPAEPIC和12... 目的观察长链非编码RNA-LINC00485(LINC00485)在肺癌细胞株及组织中的表达,探讨其对肺癌细胞增殖和迁移的影响及其作用机制。方法采用qRT-PCR检测LINC00485在4种肺癌细胞株(H1975、A549、HCC827、H1299)、正常肺泡上皮细胞HPAEPIC和12例肺癌组织及癌旁组织中的差异性表达。通过生物信息学方法预测LINC00485可能结合的微小RNA(miRNA)及靶基因,将靶向沉默LINC00485的小干扰RNA(siRNA)通过脂质体转染至HCC827细胞。应用qRT-PCR检测LINC00485、miR-361-5p、p21活化蛋白激酶2(PAK2)mRNA的表达水平。采用Westernblot法检测PAK2蛋白的表达水平。应用MTS法检测细胞增殖能力、细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果与正常肺泡上皮相比,LINC00485在肺癌细胞株中均呈高表达(P<0.05),其中在HCC827细胞中表达水平最高。LINC00485在肺癌组织中的表达水平高于其癌旁组织(P<0.01)。下调HCC827细胞LINC00485的表达后,miR-361-5p的表达上调(P<0.01),PAK2mRNA和蛋白的表达下调(P<0.01),HCC827细胞增殖能力降低(P<0.05),细胞迁移能力下降(P<0.01)。结论LINC00485在肺癌细胞株和组织中表达升高,下调LINC00485可通过调控miR-361-5p和PAK2基因的表达,抑制肺癌HCC827细胞的增殖和迁移能力。 展开更多
关键词 肺肿瘤 长链非编码RNA-LINC00485 增殖 迁移 QRT-PCR
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酸碱度对StRALF基因表达量的影响及初步分析
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作者 朱飞宇 马周杰 +3 位作者 孙艳秋 何世道 姚远 高增贵 《玉米科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期29-37,共9页
快速碱化因子(RALF)是一种能够参与植物发育调控的植物肽激素,在真菌中也广泛存在并且影响真菌对寄主的侵染状况。通过外源添加酸碱来明确pH值对玉米大斑菌生长的影响,使用实时荧光定量PCR技术分析玉米大斑病菌中StRALF基因在外源添加... 快速碱化因子(RALF)是一种能够参与植物发育调控的植物肽激素,在真菌中也广泛存在并且影响真菌对寄主的侵染状况。通过外源添加酸碱来明确pH值对玉米大斑菌生长的影响,使用实时荧光定量PCR技术分析玉米大斑病菌中StRALF基因在外源添加酸、碱时表达量的变化。运用预测网站对克隆得到的StRALF基因编码区蛋白序列的基本性质进行分析。结果表明,玉米大斑瓋菌在碱性环境下生长状态较好。碱性条件下,StRALF基因比酸性条件下基因表达量高。在侵染寄主过程中,96 h及以后表达量达到最大。经预测分析,初步确定其为分泌蛋白或膜蛋白。在弱碱性条件下,StRALF基因表达量较高并参与侵染过程及侵染后的生长阶段。 展开更多
关键词 玉米 玉米大斑病菌 StRALF QRT-PCR
红梨实时荧光定量PCR内参基因的筛选
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作者 张雪 王荔 +1 位作者 瞿飞 杨胜俊 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期361-370,共10页
红梨(Pyrus pyrifolia)果皮花青苷的合成积累是影响红梨果实着色的关键因素,其生物合成由各步酶促反应基因调控,筛选出稳定可靠的内参基因对于研究红梨果实着色关键基因及其调控机制具有重要意义。本研究旨在筛选红梨的不同品种(早白蜜... 红梨(Pyrus pyrifolia)果皮花青苷的合成积累是影响红梨果实着色的关键因素,其生物合成由各步酶促反应基因调控,筛选出稳定可靠的内参基因对于研究红梨果实着色关键基因及其调控机制具有重要意义。本研究旨在筛选红梨的不同品种(早白蜜,中熟32,云红梨1号),在不同生长发育时期(幼果期,缓慢生长期,快速生长期,成熟期)和不同遮光处理(自然光照,部分遮光及完全遮光)条件下均稳定表达的内参基因,以用于qRT-PCR分析。选取红梨果皮为实验材料,以梨树(Pyrus communis)中常见的6个管家基因—β-肌动蛋白基因(β-actin, ACT)、18S核糖体RNA基因(18S ribosomal RNA, 18S rRNA)、甘油醛三磷酸脱氢酶基因(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH)、组蛋白基因(histone, His)、转录延伸因子基因(elongation factor 1α, EF-1α)及α微管蛋白基因(α-tubulin, TUB)作为候选内参基因,分别进行q RT-PCR扩增效率、内参基因稳定性参数及不同样品中相对表达量分析。以BIO-RAD CFX Manager v2.0软件对稳定性参数指标—循环阈值(cycle threshold, Ct)、平均表达系数(M)和变异系数(variation coefficient, CV)进行分析和综合对比,结果显示,不同候选内参基因的表达稳定性存在差异,其中EF-1α和His在红梨不同品种、不同生长发育时期及不同遮光处理条件下均稳定表达;对于不同样本中内参基因相对表达量的分析显示,EF-1α和His在不同样本中的表达量相对稳定。上述结果提示,EF-1α和His可作为红梨果皮组织qRTPCR分析的内参基因,为后续开展红梨果实着色相关基因的表达分析提供了校正和标准化基因选择。 展开更多
关键词 红梨 QRT-PCR 内参基因 筛选
原发性肝细胞癌中游离脂肪酸受体4的表达及其临床意义 预览
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作者 缪冉 吴立胜 +2 位作者 周杭城 邢云龙 姚寒晖 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期147-150,共4页
目的探讨游离脂肪酸受体4(FFAR4)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测102例HCC及其对应癌旁组织中FFAR4表达,并分析FFAR4的表达与HCC临床病理特征之间的相关性。利用qRT-PCR及West... 目的探讨游离脂肪酸受体4(FFAR4)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测102例HCC及其对应癌旁组织中FFAR4表达,并分析FFAR4的表达与HCC临床病理特征之间的相关性。利用qRT-PCR及Western blot法检测20对新鲜冷冻HCC组织及对应癌旁组织中FFAR4的表达,并复习相关文献。结果FFAR4在HCC及癌旁组织中的高表达率分别为64. 7%(66/102)、15. 7%(16/102),两组差异有统计学意义(P <0. 05),FFAR4高表达与HCC肿瘤血管侵犯(P <0. 05)、TNM分期(P <0. 01)及Edmondson分级(P <0. 05)有关。qRT-PCR及Western blot法检测结果均显示HCC组织中FFAR4的表达量显著高于癌旁组织,组间差异有统计学意义(P均<0. 05)。结论FFAR4表达与HCC是否存在血管侵犯、TNM分期以及Edmondson分级均有显著相关性。FFAR4高表达可能与HCC患者病情严重程度密切相关。 展开更多
关键词 肝肿瘤 肝细胞癌 FFAR4 免疫组织化学 QRT-PCR WESTERN BLOT
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胃癌组织中piR-9994的表达及其与PIWIL4表达的相关性 预览
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作者 夏言 林贤东 +4 位作者 胡丹 张和军 林洁琼 陈刚 郑雄伟 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期155-160,共6页
目的探讨piR-9994在胃癌中的表达及其与临床病理特征的关系,并分析其与PIWIL4表达的相关性。方法采用qRT-PCR法检测76例胃癌及癌旁组织中piR-9994的表达,采用免疫组化En Vision法检测PIWIL4的表达,并复习相关文献。结果 piR-9994在胃癌... 目的探讨piR-9994在胃癌中的表达及其与临床病理特征的关系,并分析其与PIWIL4表达的相关性。方法采用qRT-PCR法检测76例胃癌及癌旁组织中piR-9994的表达,采用免疫组化En Vision法检测PIWIL4的表达,并复习相关文献。结果 piR-9994在胃癌组织中的表达比癌旁组织上调2. 3倍(P=0. 002 2)。Ⅲ+Ⅳ期胃癌组piR-9994的表达比Ⅰ+Ⅱ期胃癌组上调3. 5倍(P=0. 002),神经侵犯组比未侵犯组上升2. 5倍(P=0. 036)。PIWIL4在胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织(χ2=18. 346,P <0. 001),其中Ⅲ+Ⅳ期胃癌组高于Ⅰ+Ⅱ期胃癌组(χ2=8. 60,P=0. 003)。胃癌组织中piR-9994的表达与PIWIL4表达呈正相关(r=0. 231,P <0. 05)。结论 piR-9994在胃癌组织中过表达并与肿瘤分期、神经侵犯密切相关,piR-9994可能通过调节PIWIL4表达促进胃癌的发生、发展,piR-9994有望成为判断胃癌恶性程度及预后的分子标志物。 展开更多
关键词 胃肿瘤 piR-9994 PIWIL4 免疫组织化学 QRT-PCR
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微小RNA-181a-5p、320a及其靶基因TGF-β1在食管鳞癌中的表达
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作者 李彦桦 李雨珊 +2 位作者 张仁静 周雪梅 何欣蓉 《肿瘤预防与治疗》 2019年第5期395-401,共7页
目的:检测人食管鳞癌组织中miR-181a-5p、miR-320a及TGF-β1的表达情况,研究其在食管鳞癌发生中的作用。方法:收集食管鳞癌及癌旁正常组织各3例,抽取总RNA,利用miRNA芯片技术检测miRNA的表达;采用qRT-PCR方法验证miRNA芯片结果的可靠性... 目的:检测人食管鳞癌组织中miR-181a-5p、miR-320a及TGF-β1的表达情况,研究其在食管鳞癌发生中的作用。方法:收集食管鳞癌及癌旁正常组织各3例,抽取总RNA,利用miRNA芯片技术检测miRNA的表达;采用qRT-PCR方法验证miRNA芯片结果的可靠性。采用软件和数据库对差异表达miRNA调控的靶基因进行初步分析。收集食管鳞癌及对照正常组织各22例,采用qRT-PCR方法检测miR-181a-5p、miR-320a和TGF-β1mRNA。结果:miRNA芯片结果显示,共有22种miRNA在食管鳞癌和正常组织中的表达差异有统计学意义(P<0.05),其中6种显著上调,16种显著下调;qRT-PCR证实miR-320a表达下降,miR-181a-5p表达上升,差异均有统计学意义(P<0.05),与芯片结果一致;TGF-β1mRNA在食管鳞癌中表达较对照正常组织稍升高,但差异无统计学意义。结论:miR-181a-5p和miR-320a可能参与食管鳞癌的发生发展过程。 展开更多
关键词 miR-181a-5p miR-320a 食管鳞癌 MIRNA芯片 QRT-PCR TGF-Β1
甘加藏羊发情周期下丘脑-垂体-卵巢轴中MTR1a基因的表达分析
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作者 杨大鹏 何玉琴 +5 位作者 葛闻博 张全伟 华道才让 王霞 周凯仁 陈卫刚 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期457-463,共7页
褪黑激素(melatonin, MT)是松果体分泌的一种吲哚类激素,与其受体结合可作用于雌性动物下丘脑-垂体-卵巢轴(hypothalamic-pituitary-ovarian, HPO),对动物的季节性繁殖起一定的调控作用。为阐明高原甘加藏羊(Ovis aries)发情周期HPO中... 褪黑激素(melatonin, MT)是松果体分泌的一种吲哚类激素,与其受体结合可作用于雌性动物下丘脑-垂体-卵巢轴(hypothalamic-pituitary-ovarian, HPO),对动物的季节性繁殖起一定的调控作用。为阐明高原甘加藏羊(Ovis aries)发情周期HPO中褪黑素1a受体基因(melatonin receptor 1a, MTR1a)的表达规律,本实验选取健康空怀且处于发情周期的甘加藏羊32只,应用qRT-PCR的方法,检测其发情周期下丘脑、垂体、卵巢组织中MTR1a基因表达差异。结果显示,甘加藏羊整个发情周期MTR1a在HPO轴组织中均有表达。在甘加藏羊发情前期、发情期、发情后期、间情期下丘脑组织中MTR1a基因的相对表达量发情前期最高,极显著高于发情期和发情后期(P<0.01);在垂体组织中MTR1a基因的相对表达量间情期最高,与发情期差异显著(P<0.05);在卵巢组织中MTR1a基因的相对表达量发情前期最高,其中发情前期MTR1a基因的相对表达量极显著高于其他三个时期(P<0.01);甘加藏羊发情周期HPO轴组织中均有MTR1a的表达,且表达量具有动态变化差异性,表明MT在甘加藏羊生殖活动中具有调节作用,这一研究结果在mRNA水平上为进一步揭示MT对甘加藏羊繁殖性能调控提供了科学依据。 展开更多
关键词 甘加藏羊 褪黑素受体 发情周期 下丘脑-垂体-卵巢轴(HPO) QRT-PCR
乳腺癌中hsa-miR-24-3p的表达及临床意义 预览
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作者 吴锦 丁克硕 +1 位作者 王浩 吴正升 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期514-517,521共5页
目的观察hsa-miR-24-3p在乳腺癌组织中的表达及与乳腺癌临床病理特征的关系,探索其发挥作用的具体机制。方法采用组织原位杂交实验检测乳腺癌组织和乳腺良性病变组织中hsa-miR-24-3p的原位表达,针对112例乳腺癌临床病理参数和相应hsa-mi... 目的观察hsa-miR-24-3p在乳腺癌组织中的表达及与乳腺癌临床病理特征的关系,探索其发挥作用的具体机制。方法采用组织原位杂交实验检测乳腺癌组织和乳腺良性病变组织中hsa-miR-24-3p的原位表达,针对112例乳腺癌临床病理参数和相应hsa-miR-24-3p的表达水平进行相关性分析;预测hsa-miR-24-3p下游靶基因,通过荧光素酶报告实验和实时荧光定量PCR实验进行验证。结果在乳腺癌组织和乳腺良性病变组织中hsa-miR-24-3p的阳性率分别为36.6%(41/112)和66.7%(14/21)。hsa-miR-24-3p表达与乳腺癌患者的腋窝淋巴结转移数以及肿瘤的TNM分期呈负相关(P <0.05),与患者年龄、肿瘤直径、组织学分级、ER、PR和HER-2的表达均无显著相关性(P >0.05)。hsa-miR-24-3p表达与乳腺癌患者的无复发生存期和总体生存期呈正相关(P =0.025,P =0.019)。hsa-miR-24-3p靶向抑制RNF2的表达。结论 hsa-miR-24-3p在乳腺癌中具有抑癌功能,其可作为乳腺癌的潜在靶向治疗药物。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 hsa-miR-24-3p 病理意义 QRT-PCR
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原发性肝细胞癌中NOP14的表达及其临床意义 预览
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作者 邢云龙 许戈良 +3 位作者 余继海 潘婷婷 黄玫 周杭城 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期402-406,共5页
目的探讨NOP14在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及临床意义。方法检测97例HCC石蜡包埋组织及其癌旁组织中NOP14的表达,分析NOP14表达与HCC临床病理特征的关系。利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qR... 目的探讨NOP14在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及临床意义。方法检测97例HCC石蜡包埋组织及其癌旁组织中NOP14的表达,分析NOP14表达与HCC临床病理特征的关系。利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)及Western blot法分别检测20对配对新鲜冻存HCC及癌旁组织中NOP14的表达。结果 NOP14在HCC组织中的高表达率为64.9%(63/97),癌旁组织中的高表达率为12.4%(12/97),差异有统计学意义( P <0.001),NOP14在HCC组织中的高表达与肿瘤血管侵犯( P =0.004)、TNM分期( P =0.013)及 Edmondson分级( P =0.009)差异有统计学意义。qRT-PCR及Western blot法检测均显示HCC组织中NOP14的表达量显著高于配对癌旁组织,差异有统计学意义( P <0.001, P <0.001)。Kaplan-Meier生存分析和Log-rank检验显示:NOP14高表达与低表达患者的中位生存期分别为17、35个月,差异有统计学意义( P <0.05)。结论 NOP14的表达与HCC是否存在血管侵犯、TNM分期以及Edmondson分级均有显著相关性,检测NOP14有助于HCC患者病情评估。 展开更多
关键词 肝肿瘤 NOP14 免疫组织化学 WESTERN BLOT QRT-PCR
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基因枪介导的转TaGAPDH8基因小麦的获得与鉴定 预览
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作者 雷代丽 雷瑛彤 +3 位作者 张琳 张阳璞 邓西平 杨淑慎 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期133-139,共7页
甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)是参与糖酵解和糖异生途径的关键酶之一,在维持细胞能量供应和植物抗逆性方面具有重要作用。本研究以耐旱型小麦品种长武134及干旱敏感型小麦品种郑引1号为材料,... 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)是参与糖酵解和糖异生途径的关键酶之一,在维持细胞能量供应和植物抗逆性方面具有重要作用。本研究以耐旱型小麦品种长武134及干旱敏感型小麦品种郑引1号为材料,利用基因枪法将TaGAPDH8基因分别转化这两种小麦的幼胚愈伤组织,经潮霉素筛选和PCR鉴定,最终得到4个下调表达的长武134株系(CW134-3、CW134-6、CW134-12、CW134-13)和8个上调表达的郑引1号株系(ZY1-1、ZY1-3、ZY1-4、ZY1-9、ZY1-10、ZY1-14、ZY1-15、ZY1-17)。对生长于大田的T2代转基因植株在乳熟期的生长状况进行了测定,获得了与对照相比有明显表型差异的植株。用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术测定了T3代小麦株系中TaGAPDH8的表达量,结果表明,4个长武134株系中TaGAPDH8基因的表达量分别为对照的0.53、0.75、0.21和0.78倍,而8个郑引1号株系中目的基因的表达量分别为对照的3.02、1.22、2.15、1.36、4.02、1.87、1.48和1.97倍。本研究获得了与对照存在明显表型差异的T2代及稳定遗传目的基因的T3代小麦株系,为后续的试验提供了研究材料和基础。 展开更多
关键词 小麦 TaGAPDH8 基因枪 QRT-PCR
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黄瓜苯丙氨酸解氨酶基因CsPAL的克隆及响应白粉菌侵染的表达分析
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作者 高红胜 张仁英 +3 位作者 许学文 齐晓花 徐强 陈学好 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1757-1762,共6页
为了分析苯丙氨酸解氨酶基因(CsPAL)在黄瓜侵染白粉菌中的转录应答响应,对CsPAL基因(GenBank No.JN 675927)及其启动子进行了克隆与序列分析,再利用qRT-PCR技术分析了该基因在黄瓜高抗白粉病品种‘Jin5-508’接种白粉菌后不同时间的相... 为了分析苯丙氨酸解氨酶基因(CsPAL)在黄瓜侵染白粉菌中的转录应答响应,对CsPAL基因(GenBank No.JN 675927)及其启动子进行了克隆与序列分析,再利用qRT-PCR技术分析了该基因在黄瓜高抗白粉病品种‘Jin5-508’接种白粉菌后不同时间的相对表达量。结果表明:CsPAL基因全长2 142 bp,编码713个氨基酸;推测CsPAL蛋白存在于细胞质中;系统发育进化树分析发现与拟南芥基因进化距离较近;启动子克隆及序列分析显示该基因能够响应真菌的侵染;组织特异性表达发现CsPAL在在叶片中的表达量最高;qRTPCR结果表明‘:Jin5-508’叶片在接菌16 h内,CsPAL基因的相对表达量于对照间无显著差异;接菌16 h后,CsPAL基因表达量迅速上升,显著高于对照,并在24 h达到最大值;接菌48 h后,CsPAL基因的表达量逐渐下降,但在96 h内仍显著高于相应对照的表达量。综上所述,黄瓜CsPAL基因为白粉菌侵染响应基因,可能与黄瓜对白粉病的抗性具有一定的相关性。 展开更多
关键词 黄瓜 白粉病 CsPAL 克隆 QRT-PCR
三角帆蚌碳酸酐酶Ⅳ基因的克隆及表达分析
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作者 郭鹏飞 吴丛迪 +2 位作者 王芹 汪桂玲 李家乐 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期1503-1511,共9页
三角帆蚌碳酸酐酶Ⅳ(carbonic anhydraseⅣ, HcCA4)基因属于α-CA家族,这是一类含Zn2+的金属酶。α-CA家族加速了CO2和HCO3-之间的相互转化,并对软体动物碳酸钙(CaCO3)的形成、酸碱平衡、钙化和生物矿化起重要作用。本研究通过RACE的方... 三角帆蚌碳酸酐酶Ⅳ(carbonic anhydraseⅣ, HcCA4)基因属于α-CA家族,这是一类含Zn2+的金属酶。α-CA家族加速了CO2和HCO3-之间的相互转化,并对软体动物碳酸钙(CaCO3)的形成、酸碱平衡、钙化和生物矿化起重要作用。本研究通过RACE的方法得到了HcCA4的全长cDNA,共3 043 bp,其中3’与5’端的UTR分别为137 bp、2 021 bp和885 bp的ORF (Open reading frame)区,共编码294个氨基酸,分子量为34.086 kD。对HcCA4的氨基酸序列进行同源性分析之后,发现一个完整的α-CA Superfamily结构域,证明HcCA4属于α-CA家族的基因。qRT-PCR结果表明:CA4基因在前端缘膜、中央膜、后端缘膜、斧足、肝、鳃、性腺和肾脏都有表达,在外套膜的前缘膜和中央膜,鳃中具有高表达。鳃是三角帆蚌呼吸器官,推测CA4参与呼吸作用;外套膜是三角帆蚌分泌矿化物质的关键组织,推测HcCA4参与珍珠层形成。 展开更多
关键词 三角帆蚌 QRT-PCR 碳酸酐酶Ⅳ α-CA家族
葡萄NHX基因家族的鉴定和表达分析 预览
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作者 卢世雄 许春苗 +4 位作者 何红红 梁国平 王萍 陈佰鸿 毛娟 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期266-276,共11页
【目的】探究葡萄NHX基因家族生物信息学特性及在非生物胁迫下的表达情况,以期筛选出与非生物胁迫相关的家族成员,从而为葡萄抗逆性研究提供理论依据。【方法】以拟南芥、水稻及胡扬NHX基因序列为基础,对葡萄NHX基因进行同源克隆、染色... 【目的】探究葡萄NHX基因家族生物信息学特性及在非生物胁迫下的表达情况,以期筛选出与非生物胁迫相关的家族成员,从而为葡萄抗逆性研究提供理论依据。【方法】以拟南芥、水稻及胡扬NHX基因序列为基础,对葡萄NHX基因进行同源克隆、染色体定位、氨基酸组成成分、理化性质、motif、蛋白质二级结构以及基因芯片表达等分析,同时利用qRT-PCR技术分析葡萄NHX基因家族表达情况。【结果】葡萄NHXs可分为2个亚族,主要分布在第1、5、7、14、15、19号染色体上,其外显子数为12~23个;VvNHX06的氨基酸数最少,有291个,VvNHX07的氨基酸数最多,有1141个。Motif分析发现,N端含有典型的锌指结构,蛋白质二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主。亚细胞定位预测发现,葡萄NHX基因主要分布在细胞膜、内质网、线粒体、液泡和细胞质中。基因芯片表达显示,使用NaCl、ABA和PEG处理后,葡萄叶片中VvNHX02和VvNHX06基因表达量均呈上升趋势。qRT-PCR分析结果表明,在200 mmol·L^-1NaCl、100 mmol·L^-1ABA处理后的葡萄叶片中,VvNHX06表达量显著增加,分别是对照的30倍和60倍。用10%PEG处理实验材料6 h后,VvNHX05的表达量明显增加,是对照的5倍。【结论】VvNHX05和VvNHX06基因与植物耐盐和抗旱性有密切关系,可为葡萄的逆境胁迫机制研究提供参考。 展开更多
关键词 葡萄 NHX基因家族 胁迫 QRT-PCR
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小鼠卵巢组织定量PCR分析中内参基因的筛选 预览
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作者 杨显英 熊显荣 +4 位作者 韩杰 黄向月 王艳 阿果约达 李键 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期446-453,共8页
旨在选择小鼠卵巢组织中合适的内参基因,为研究卵巢发育过程中基因表达提供可靠数据。以不同年龄(0日龄、3周龄、5周龄、8周龄)小鼠卵巢组织为试验材料,Trizol法提取样本总RNA,并合成cDNA,根据已报道的小鼠(Mus musculus)各组织中相对... 旨在选择小鼠卵巢组织中合适的内参基因,为研究卵巢发育过程中基因表达提供可靠数据。以不同年龄(0日龄、3周龄、5周龄、8周龄)小鼠卵巢组织为试验材料,Trizol法提取样本总RNA,并合成cDNA,根据已报道的小鼠(Mus musculus)各组织中相对稳定表达的8个常见内参基因(Gapdh、β-actin、β-tubulin、18S rRNA、16S rRNA、H2afz、Ubc、Rpl13a)的GenBank登录序列设计引物,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法构建卵巢cDNA等梯度(1:10)稀释后的标准曲线;利用geNorm分析候选内参基因的表达稳定性(M);NormFinder筛选表达最稳定的内参基因;BestKeeper计算qRT-PCR结果的标准差(SD)和变异系数(CV),从而预测候选内参基因的稳定性。结果表明,8个内参基因的引物特异性较强,具有良好的线性关系;候选内参基因的表达稳定度排序:Gapdh=β-actin﹥18S rRNA﹥Ubc﹥16S rRNA﹥H2afz﹥Rpl13a﹥β-tubulin;其中Gapdh表达稳定性最好,且标准差及方差系数最小(SD:0.32,CV:1.95),H2afz标准差及方差系数最大(SD﹥1.0,CV:5.76)。综上表明,本研究成功获得出生后小鼠卵巢发育过程中稳定表达的内参基因(Gapdh和β-actin),可作为其基因表达研究中的最佳候选内参。 展开更多
关键词 小鼠 卵巢 QRT-PCR 内参基因 表达稳定性
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紫斑牡丹种子高积累碳十八不饱和脂肪酸的多基因调控
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作者 韩平 阮成江 +6 位作者 丁健 吴波 张莞晨 阮东 熊朝伟 刘文浩 王国辉 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期2101-2108,共8页
为研究紫斑牡丹种子C18不饱和脂肪酸的高积累与相关基因SAD、FAD2、FAD3、FAD7和FAD8表达间的关系,以四个不同发育时期(6月20日, 7月7日, 7月17日和7月27日)的种子为材料,利用气相色谱飞行时间质谱测定种子油脂的脂肪酸组成,采用实时荧... 为研究紫斑牡丹种子C18不饱和脂肪酸的高积累与相关基因SAD、FAD2、FAD3、FAD7和FAD8表达间的关系,以四个不同发育时期(6月20日, 7月7日, 7月17日和7月27日)的种子为材料,利用气相色谱飞行时间质谱测定种子油脂的脂肪酸组成,采用实时荧光定量PCR方法分析相关基因的表达模式,分析相关基因在不同发育期种子中的表达差异对种子油脂中碳十八不饱和脂肪酸积累的影响。结果表明:(1)紫斑牡丹种子油脂的不饱和脂肪酸占总脂肪酸的94.09%,其中碳十八不饱和脂肪酸占93.84%;不同种子发育期的油酸和亚麻酸呈一直上升趋势,而亚油酸则呈一直下降趋势;(2)种子发育过程中,KAR基因的持续上调表达合成了更多的C16:0-ACP;FATB和Δ9D基因下调表达,分别减弱了C16:0-ACP向棕榈酸和棕榈油酸的转化,KASⅡ基因的高表达促进了C16:0-ACP向C18:0-ACP的转化,为C18脂肪酸合成提供了充足原料;(3)种子发育过程中,SAD基因持续上调表达加快了种子中油酸的合成积累;FAD2基因表达量一直维持在相对较高水平,保证了种子油脂亚油酸占比一直在20%以上;发育初期FAD3基因表达量和发育末期FAD8基因表达量的迅速上升,加快了亚麻酸的合成。紫斑牡丹种子C18不饱和脂肪酸的高积累主要来源于SAD、FAD2、FAD3和FAD8基因的协同高表达。这为理解种子油富集碳18不饱脂肪酸的基因调控机制提供了理论依据,对木本油料油脂脂肪酸组份的遗传改良具有重要意义。 展开更多
关键词 紫斑牡丹 种子油脂 碳十八不饱和脂肪酸 QRT-PCR 多基因协同调控
沙棘果实不同器官脂肪酸差异的多基因协同调控
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作者 张莞晨 阮成江 +4 位作者 丁健 刘祾悦 韩平 蔡爽 熊朝伟 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期2117-2125,共9页
为探讨沙棘果肉高积累碳16脂肪酸和种子高积累碳十八不饱和脂肪酸的基因调控差异,以沙棘品系“TF-23”4个不同发育期(7月10日, 7月26日, 8月11日, 8月26日)的果肉和种子为研究材料,采用气相色谱飞行时间质谱法测定干果肉和种子油脂的脂... 为探讨沙棘果肉高积累碳16脂肪酸和种子高积累碳十八不饱和脂肪酸的基因调控差异,以沙棘品系“TF-23”4个不同发育期(7月10日, 7月26日, 8月11日, 8月26日)的果肉和种子为研究材料,采用气相色谱飞行时间质谱法测定干果肉和种子油脂的脂肪酸组份及不同组份的相对百分含量,运用qRT-PCR分析脂肪酸形成相关基因KAR、FATB、Δ9D、KCS1、KASⅡ、SAD、FAD2、FAD3、FAD7和FAD8的表达模式,验证多基因表达对果实不同器官脂肪酸形成积累差异的影响。结果表明:(1)沙棘干果肉油和种子油中共检测出8种主要脂肪酸,果肉油脂中棕榈酸(35.15%)、棕榈油酸(26.21%)和异油酸(24.22%)为主要组份,种子油脂中异油酸(15.98%)、亚油酸(43.43%)和亚麻酸(26.70%)为主要组份。(2)沙棘果肉高积累棕榈酸、棕榈油酸和异油酸源于KAR、FATB、Δ9D和KCS1基因的高表达协同KASⅡ基因的低表达。(3)沙棘种子油脂高富集亚油酸、亚麻酸和异油酸源于种子发育过程中KCS1、KASⅡ、SAD、FAD2和FAD3基因的协同高表达。首次揭示出调控沙棘果肉和种子富集不同脂肪酸的关键基因是KASⅡ基因,种子中KASⅡ基因高表达为亚油酸和亚麻酸的富集提供了充足底物C18:0,果肉中KASⅡ基因低表达协同FATB和Δ9D基因高表达促进了棕榈酸和棕榈油酸的富集。这可为进一步遗传改良沙棘果肉和种子油脂肪酸组成提供科学参考,对沙棘开发利用具有重要意义。 展开更多
关键词 沙棘 果实不同器官 脂肪酸 QRT-PCR 多基因协同调控
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