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腺病毒介导的高效生产水牛转基因胚胎条件的摸索 预览
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作者 陆杏蓉 庞春英 +4 位作者 邓廷贤 段安琴 马小娅 梁莎莎 梁贤威 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第3期764-773,共10页
试验旨在探究腺病毒感染水牛颗粒细胞和胚胎的最佳条件,以提高转基因水牛胚胎的生产效率。以水牛颗粒细胞和体外发育的胚胎为研究对象,分别用0、1×10^0、1×10^-1、1×10^-2、1×10^-3、1×10^-4、1×10^-5GFU... 试验旨在探究腺病毒感染水牛颗粒细胞和胚胎的最佳条件,以提高转基因水牛胚胎的生产效率。以水牛颗粒细胞和体外发育的胚胎为研究对象,分别用0、1×10^0、1×10^-1、1×10^-2、1×10^-3、1×10^-4、1×10^-5GFU/mL腺病毒感染水牛颗粒细胞,获得最佳感染浓度后,在最佳浓度条件下分别感染24、48、72、96h,摸索最佳感染时间,用倒置荧光显微镜观察试验结果。利用腺病毒感染水牛颗粒细胞的最佳浓度和时间分别感染2细胞和4细胞期胚胎,对胚胎的最佳感染条件进行摸索,分析胚胎分裂率、囊胚率和转染囊胚率。结果显示,1×10^-2GFU/mL浓度和48h感染时间可获得水牛颗粒细胞的最佳腺病毒感染效率。腺病毒感染2细胞和4细胞期无透明带和非完整透明带胚胎后胚胎发绿光,而感染完整透明带胚胎后不发光,2细胞期胚胎感染后停止发育,4细胞期开始感染的非完整透明带胚胎可继续发育至囊胚。于4细胞期分别感染完整透明带组、非完整透明带组和无透明带组水牛胚胎,结果显示,非完整透明带转染组在囊胚率和囊胚转染效率上均优于其他组。综上,非完整透明带,1×10^-2GFU/mL和48h为感染浓度和时间,4细胞期为感染起始期的腺病毒介导的水牛转基因胚胎生产方法能够实现目标基因在水牛胚胎中的高效表达,从而达到提高转基因水牛胚胎生产效率的目的。 展开更多
关键词 腺病毒 水牛 转基因
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红花玉兰MwZFP10基因的克隆及功能分析 预览
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作者 梁爽 肖爱华 +3 位作者 马江 陈发菊 桑子阳 马履一 《西北植物学报》 CSCD 北大核心 2018年第8期1392-1400,共9页
该研究选取了湖北五峰地区红花玉兰新品种‘娇红1号’为研究材料,基于实验室前期对红花玉兰转录组测序差异显著表达基因中筛选到的645bp花发育相关的核心片段,采用RACE技术克隆得到1个SUPERMAN类基因MwZFP10(GenBank登录号为MH037314)... 该研究选取了湖北五峰地区红花玉兰新品种‘娇红1号’为研究材料,基于实验室前期对红花玉兰转录组测序差异显著表达基因中筛选到的645bp花发育相关的核心片段,采用RACE技术克隆得到1个SUPERMAN类基因MwZFP10(GenBank登录号为MH037314)。生物信息学分析显示,MwZFP10基因全长为1117bp,开放阅读框726bp,编码241个氨基酸,蛋白分子式为C1128H1760N322O383S14,分子量26.4kD,理论等电点4.42,含有一个C2H2型锌指结构域。对比分析发现MwZFP10属于SUPERMAN类锌指蛋白,具有N端的QALGGH和C端富含亮氨酸的L(I)DLXLR(K)L保守结构域。α螺旋(Hh)、延伸链(Ee)和β转角(Bt)构成红花玉兰MwZFP10蛋白的基本结构,蛋白的三级结构具有典型的锌指空间构型。MwZFP10蛋白为亲水性蛋白,可能定位于细胞核中。半定量和实时荧光定量结果显示,MwZFP10在花器官、叶片和苞片中均有表达,且花器官的雌蕊中表达量较高。过表达MwZFP10转基因拟南芥表现为植株矮小且不育,叶片卷缩,花器官发育畸形等特征。研究认为,MwZFP10基因在植物花器官的生长和发育中起重要作用。 展开更多
关键词 红花玉兰 锌指蛋白 基因克隆 花器官 转基因
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人PKD2基因慢病毒的构建及其对常染色体显性遗传性多囊肾病小鼠肾脏上皮细胞多囊蛋白-2和Wnt/β-catenin信号通路的修复作用
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作者 孟佳林 徐雨辰 +5 位作者 沈旭峰 李奥 樊松 郝宗耀 吴冠青 梁朝朝 《中华泌尿外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第1期62-68,共7页
目的构建携带人PKD2基因的重组慢病毒载体,并探讨该载体对Pkd2缺失小鼠肾脏上皮细胞中多囊蛋白-2(PC2)的表达,以及对下游Wnt/β-catenin信号通路的作用。 方法2016年8月至2017年2月采用XbaⅠ和XhoⅠ酶将PKD2基因从已有pcDNA3.1-TM-... 目的构建携带人PKD2基因的重组慢病毒载体,并探讨该载体对Pkd2缺失小鼠肾脏上皮细胞中多囊蛋白-2(PC2)的表达,以及对下游Wnt/β-catenin信号通路的作用。 方法2016年8月至2017年2月采用XbaⅠ和XhoⅠ酶将PKD2基因从已有pcDNA3.1-TM-PKD2质粒中切出,并插入慢病毒空载体pLV-sfGFP_2A_Puro,测序验证后获得重组慢病毒载体pLV-sfGFP-PKD2。然后,将重组慢病毒载体与包装质粒共脂质体转染293T细胞,包装病毒,获得病毒浓缩液。按照实验组(pLV-sfGFP-PKD2病毒感染)、对照组(pLV-sfGFP病毒感染)和空白组(未感染)进行分组,分别处理携带Pkd2基因的B3、D3细胞(Pkd2+/-)和Pkd2缺失的B2、E8细胞(Pkd2-/-),采用蛋白质印迹法、免疫荧光染色法检测PC2表达情况。最后,选取B3和B2细胞,利用增殖细胞核抗原(PCNA)荧光染色检测细胞增殖活性,实时荧光定量PCR检测PKD2下游Wnt/β-catenin信号通路的变化。 结果重组慢病毒载体酶切后凝胶电泳结果显示插入片段与PKD2基因一致,基因测序结果显示PKD2插入方向正确。经pLV-sfGFP-PKD2病毒感染后,实验组B2和E8细胞的PC2表达量分别为0.668±0.013和0.763±0.021,空白组B3和D3细胞的PC2表达量分别为0.687±0.015和0.776±0.008,差异均无统计学意义(P=0.164,P=0.409)。实验组B2细胞增殖活性(0.573±0.010)明显低于空白组(0.848±0.031),差异有统计学意义(P〈0.01);与空白组B3细胞(0.585±0.017)比较差异无统计学意义(P=0.369)。实时荧光定量PCR检测结果显示,实验组B2细胞中的Wnt7a和β-catenin基因表达量分别为0.037±0.005和0.554±0.008,与空白组B3细胞的0.037±0.004和0.571±0.013比较差异均无统计学意义(P=0.969,P=0.640)。 结论本研究成功构建携带人PKD2基因并具有感染能力的重组pLV-sfGFP-PKD2慢病毒,慢病毒可重建PKD2基因缺失的小鼠肾脏上皮� 展开更多
关键词 多囊肾 常染色体显性 WNT/Β-CATENIN信号通路 转基因 慢病毒
不同启动子调控转GhCDPK1基因烟草的抗逆性研究 预览
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作者 刘玉玲 朱新霞 +2 位作者 孙辉 艾尼江 冯国礼 《西北植物学报》 CSCD 北大核心 2017年第12期2309-2316,共8页
为探究不同启动子对陆地棉GhCDPK1基因抗逆功能的影响,该研究克隆了长度为824bp和1524bp的2个拟南芥RD29A的启动子序列,分别构建了35S启动子和2个RD29A启动子驱动的GhCDPK1融合表达载体,并利用农杆菌介导法转化烟草,分析了其驱动的转GhC... 为探究不同启动子对陆地棉GhCDPK1基因抗逆功能的影响,该研究克隆了长度为824bp和1524bp的2个拟南芥RD29A的启动子序列,分别构建了35S启动子和2个RD29A启动子驱动的GhCDPK1融合表达载体,并利用农杆菌介导法转化烟草,分析了其驱动的转GhCDPK1基因烟草,在逆境胁迫处理后的表型变化,叶绿素、丙二醛(MDA)和脯氨酸含量,过氧化物酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及细胞膜透性的生理变化。结果显示:RD29A启动子驱动的转GhCDPK1基因烟草,比35S启动子驱动表现出更强的耐逆性,其叶绿素含量、脯氨酸含量以及POD、SOD活性都高于35S启动子,而MDA含量与细胞膜的通透性低于35S启动子,且1524bp的RD29A2启动子片段驱动转GhCDPK1基因烟草的耐胁迫能力比824bp启动子片段更强。 展开更多
关键词 启动子 GhCDPK1 转基因 逆境胁迫
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合肥市大学生转基因食品认知和购买行为及其影响因素 被引量:1
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作者 吴起乐 李佳凡 赵存喜 《中国学校卫生》 北大核心 2017年第6期849-852,共4页
目的了解合肥市在校大学生对转基因食品的认知、态度和购买行为及其影响因素,为大学生科学认知转基因食品提供依据。方法自行设计调查问卷,通过随机分层整群抽取合肥市4所高校1624名大学生进行调查,平均年龄为(22.5±2.2)岁... 目的了解合肥市在校大学生对转基因食品的认知、态度和购买行为及其影响因素,为大学生科学认知转基因食品提供依据。方法自行设计调查问卷,通过随机分层整群抽取合肥市4所高校1624名大学生进行调查,平均年龄为(22.5±2.2)岁。采用二分类非条件Logistic回归分析进行因素分析。结果在校学生转基因技术认知平均得分为6.1分,但缺乏系统性。转基因食品相关知识信息来源主要为互联网(76.05%)、电视(55.67%)和报刊杂志(35.47%),专业书籍较少(24.82%)。支持转基因食品者仅为16.87%,其中不同年龄、户籍所在地、家庭经济收入对转基因食品的认知水平差异有统计学意义(χ^2值分别为19.885,22.371,20.338,P值均〈0.05);84.98%的大学生认为转基因食品需要醒目标示。不同年龄、家庭经济收入水平、接受度大学生购买行为构成的差异有统计学意义(P值均〈0.05)。大学生转基因食品知识获得渠道专业性不强,转基因食品购买行为与家庭经济收入水平成负相关;安全性、营养价值和价格是影响购买的主要因素(68.66%,47.78%,45.26%)。结论在转基因食品信息不对称的现况下,建议以强化客观公正的科普宣传、提高认知教育的专业性、借助新潮手段增强有效性、培养强制标示识别能力和阅读标签标识习惯为路径,做好相应的健康教育。 展开更多
关键词 转基因 食品 健康教育 因素分析 统计学 学生
Nanog慢病毒载体构建及在胚胎干细胞分化调控中的应用 预览
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作者 陈霏 万利 +1 位作者 李艳 李欣 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2016年第19期2763-2769,共7页
背景:在胚胎干细胞分化调控研究中,仍缺少安全有效的组织特异性启动子介导的荧光报告基因的慢病毒表达载体。目的:构建一个表达多能干细胞组织特异性启动子Nanog同时携带荧光报告基因和抗生素筛选基因的慢病毒表达载体Puro-Nanog-hrG... 背景:在胚胎干细胞分化调控研究中,仍缺少安全有效的组织特异性启动子介导的荧光报告基因的慢病毒表达载体。目的:构建一个表达多能干细胞组织特异性启动子Nanog同时携带荧光报告基因和抗生素筛选基因的慢病毒表达载体Puro-Nanog-hrGFP,建立小鼠胚胎干细胞转基因细胞系,并观察其在小鼠胚胎干细胞细胞诱导分化过程中的表达。方法:利用PCR扩增Nanog基因,通过LR反应连接荧光报告基因hr GFP构建慢病毒表达载体Puro-Nanog-hrGFP。慢病毒包装并转导小鼠胚胎干细胞后运用嘌呤霉素筛选得到小鼠胚胎干细胞转基因细胞系并进行鉴定,然后诱导其分化,观察随着小鼠胚胎干细胞的分化Nanog的表达情况。结果与结论:通过特定引物PCR鉴定证实,慢病毒表达载体Nanog-hrGFP构建成功,将其成功导入小鼠胚胎干细胞,经筛纯化得到表达绿色荧光的小鼠胚胎干细胞单克隆细胞系,并通过诱导其分化可观察到绿色荧光表达逐渐减弱,可为进一步调控干细胞分化奠定基础。 展开更多
关键词 干细胞 胚胎干细胞 转基因 组织工程 慢病毒 GATEWAY技术 NANOG 国家自然科学基金
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转LOS5玉米的大田抗旱性鉴定 预览 被引量:5
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作者 刘成 杨炳鹏 +10 位作者 孙宝成 章家长 唐怀君 王天宇 张登峰 谢小清 石云素 宋燕春 杨小红 黎裕 李建生 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第23期4469-4479,共11页
【目的】培育转基因抗旱玉米新品种是解决玉米生产问题的重要途径。通过鉴定和分析拟南芥LOS5转入玉米后对玉米田间抗旱性的影响,筛选抗旱性突出的转LOS5的玉米株系用于抗旱育种。【方法】在150、225、300、375、450和600 mm(CK)梯度... 【目的】培育转基因抗旱玉米新品种是解决玉米生产问题的重要途径。通过鉴定和分析拟南芥LOS5转入玉米后对玉米田间抗旱性的影响,筛选抗旱性突出的转LOS5的玉米株系用于抗旱育种。【方法】在150、225、300、375、450和600 mm(CK)梯度灌水胁迫处理条件下,大田鉴定8个转LOS5玉米株系及其受体郑58的抗旱性,测定产量和其他农艺性状的变化,明确LOS5在提高玉米抗旱性方面的主要田间表现形式,同时筛选抗旱性显著优于受体的转基因株系。【结果】随着累计灌水量600—150 mm逐渐降低,9个试验材料的产量和抗旱性均相应下降。8个转基因玉米株系的产量在225—450 mm灌水范围内均显著高于受体郑58,且在正常灌水600 mm的一半处理(300 mm)时差异最大化。300 mm灌水处理中,8个转基因株系的抗旱性指数为0.56—0.70,显著高于受体郑58(0.5),抗旱性提高12%—40%。抗旱性从强到弱的材料顺序是T8920B6、T8920B2、T8920B7、T8920B5、T8020B1、T8920B4、T8920B3、T8920B8和受体郑58。营养体生长和发育方面,在灌水150—225 mm处理中,8个转基因材料灌浆末期的叶色SPAD值38.4—42.4,均极显著高于受体郑58(28.7—37.5),但地上部生物重量、株高和穗位高没有显著差异;果穗发育方面,在灌水150—225 mm处理中,8个转基因株系的穗重为42.3—61.6 g,穗长为10.9—13.1 cm,均极显著高于受体(36.4—40.7 g和8.5—11.8 cm),但轴重和穗粗的差异不显著;籽粒发育方面,8个转基因株系的穗粒数为86.6—182.6,行粒数为8.4—15.6,也显著高于受体的穗粒数57.3—83.2和行粒数4.9—7.1,但穗行数和百粒重差异不显著。【结论】LOS5转入受体郑58后,对转基因玉米开花前营养生长的影响较小,但在开花之后维持受旱玉米的穗长、行粒数和灌浆后期叶色等方面发挥了积极作用,使受旱玉米的穗重、穗粒数和产量保持在相对较高的水平,从而提� 展开更多
关键词 玉米 LOS5 抗旱性 转基因
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茎瘤芥BjPKS1基因的克隆及遗传转化 预览
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作者 孙全 阿丽亚·司地克 +4 位作者 杨宏国 毕晶磊 何晓红 蔡应繁 朱利泉 《广东农业科学》 CAS 2016年第5期49-54,共6页
茎瘤芥(榨菜)具有瘤茎膨大的性状,该特征是一种重要的经济性状。在前期研究中,我们获得一个可能与瘤茎膨大有关的基因片段,该基因与拟南芥PKS1基因相似。通过RACE技术获得了该基因全长序列,命名为BjPKS1。该基因的mRNA序列全长1440bp... 茎瘤芥(榨菜)具有瘤茎膨大的性状,该特征是一种重要的经济性状。在前期研究中,我们获得一个可能与瘤茎膨大有关的基因片段,该基因与拟南芥PKS1基因相似。通过RACE技术获得了该基因全长序列,命名为BjPKS1。该基因的mRNA序列全长1440bp,其预测的ORF长度为1131bp,编码的氨基酸序列长度为376aa。多序列比对发现,预测的氨基酸序列与其他物种的PKS基因家族蛋白具有高度相似性,在多个区域都高度保守,进化分析显示Bj PKS与拟南芥的PKS1基因关系最近。荧光定量RT-PCR结果显示,该基因在茎瘤芥瘤茎膨大发育的过程中表达量明显上升。将该基因转化拟南芥,转基因植株株高和节间都明显缩短。结果表明BjPKS1可能具有其他物种中同源基因相似的分子功能,其在茎瘤芥瘤茎膨大过程中的作用有待进一步研究。 展开更多
关键词 榨菜 PKS1基因 瘤茎 膨大 转基因
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PLGA引导转NT-3基因小胶质细胞对损伤脊髓功能恢复的影响 预览 被引量:1
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作者 毕昆巍 戚超 +3 位作者 高甲科 王湘达 赵夏 于腾波 《青岛大学医学院学报》 CAS 2016年第6期642-644,共3页
目的研究乙交酯-丙交酯共聚物(PLGA)引导转神经营养素-3(NT-3)基因的小胶质细胞对神经轴突再生的影响,观察神经环路重建后神经功能的恢复情况。方法选取成年雌性Wistar大鼠60只,制备中度脊髓损伤动物模型。建模成功后,将其随机分为... 目的研究乙交酯-丙交酯共聚物(PLGA)引导转神经营养素-3(NT-3)基因的小胶质细胞对神经轴突再生的影响,观察神经环路重建后神经功能的恢复情况。方法选取成年雌性Wistar大鼠60只,制备中度脊髓损伤动物模型。建模成功后,将其随机分为空白对照组、PLGA移植组、细胞移植组和联合移植组,每组15只大鼠。并分别向各组大鼠脊髓损伤部位注入生理盐水、PLGA、活化的转NT-3基因小胶质细胞以及活化的转NT-3基因小胶质细胞与PLGA的复合体均5μL。在移植后第1、2、4、6周,根据大鼠恢复情况进行相应运动功能评分(BBB评分)。建模7周后,处死大鼠,每组随机选出5只大鼠取损伤区域脊髓行常规苏木精-伊红染色,光镜下比较损伤脊髓的形态学变化。结果各实验组BBB评分随着时间延长均有所升高,但联合移植组第2、4、6周后肢运动BBB评分较其他各组明显升高(F(时间)=1 869.848,F(组别)=1 000.339,F(时间×组别)=92.161,P〈0.01),并且在6周后可见有前后肢体协调活动。镜下观察显示,联合移植组大鼠损伤脊髓的液化坏死区域面积较其他各组小,修复区内可见大量的神经细胞与轴突长入,且分布较均匀,走形更规则。结论 PLGA引导转基因活化小胶质细胞可促进大鼠脊髓损伤后轴突再生和后肢运动功能的恢复。 展开更多
关键词 脊髓损伤 小神经胶质细胞 神经生长因子类 转基因 脊髓再生
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VEGF165在恒河猴骨髓间充质干细胞中的表达及鉴定 预览
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作者 郭再玉 张合亮 +4 位作者 水涛 张国哲 赵卫华 陈谦 侯延伟 《天津医药》 CAS 2016年第10期1209-1212,共4页
目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF165)转染恒河猴间充质干细胞(MSCs)后的表达情况,以及转染后对MSCs功能的影响。方法通过Ficoll法分离并培养恒河猴骨髓MSCs,进行细胞表型鉴定。转染pcDNA-eGFP-VEGF165至MSCs,荧光显微镜观察增... 目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF165)转染恒河猴间充质干细胞(MSCs)后的表达情况,以及转染后对MSCs功能的影响。方法通过Ficoll法分离并培养恒河猴骨髓MSCs,进行细胞表型鉴定。转染pcDNA-eGFP-VEGF165至MSCs,荧光显微镜观察增强型绿色荧光蛋白(eGFP)表达情况,同时流式细胞技术对转染成功的细胞进行细胞表型及eGFP表达鉴定,RT-PCR法检测转染后VEGF165表达情况。结果成功分离到纯度较高的MSCs,转染后的MSCs及子代细胞均有eGFP和VEGF165的表达,且保留了MSCs的特性。结论 VEGF165基因转染MSCs后可以稳定表达外源基因,且可以维持MSCs的特性。 展开更多
关键词 间质干细胞 血管内皮生长因子 恒河猴 转基因 间质干细胞移植 绿色荧光蛋白质类
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转内切葡聚糖酶基因罗伊乳酸杆菌的构建及其肉鸡饲喂效果验证 被引量:1
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作者 王磊 曹平华 +6 位作者 蔡蓓 高印 高康 杨雨鑫 杨明明 袁超 陈玉林 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期774-783,共10页
本研究旨在构建可胞外分泌内切葡聚糖酶,且具有降解β-葡聚糖能力的转内切葡聚糖酶基因罗伊乳酸杆菌,并对其进行肉鸡饲喂效果验证,为后续转基因乳酸杆菌在动物生产中的应用奠定基础。采用PCR和酶切连接方法构建pLEM4157(cel)载体,转化L... 本研究旨在构建可胞外分泌内切葡聚糖酶,且具有降解β-葡聚糖能力的转内切葡聚糖酶基因罗伊乳酸杆菌,并对其进行肉鸡饲喂效果验证,为后续转基因乳酸杆菌在动物生产中的应用奠定基础。采用PCR和酶切连接方法构建pLEM4157(cel)载体,转化Lactobacillus.reuteri XC1感受态细胞,进行聚丙烯胺凝胶电泳表达谱分析和内切葡聚糖酶活性测定,同时测定其肉鸡饲喂效果。结果表明,克隆的内切葡聚糖酶基因大小为1 500bp,经测序比对,与已报道基因序列相似性为99%,氨基酸序列相似性为100%;Native-PAGE和SDS-PAGE分析结果表明,内切葡聚糖酶基因celW成熟肽在罗伊乳酸杆菌的蛋白分子量均为52ku左右,与理论计算值相符;L.reuteri pLEM4157(cel)培养上清和胞内上清内切葡聚糖酶活性分别为(0.96±0.08)和(0.37±0.09)U·mL-1;L.reuteri pLEM4157(cel)对肉仔鸡生长性能无显著影响,但可显著降低21日龄肉仔鸡十二指肠、空肠pH,促进21日龄肉仔鸡肾、法氏囊、胸腺和胰腺的生长发育,增加42日龄肉仔鸡的胸腺和胰腺指数,提高肉仔鸡21日龄血清白球比、钙、磷含量和42日龄血清葡萄糖含量。L.reuteri pLEM4157(cel)成功分泌表达了内切葡聚糖酶,具有降解羧甲基纤维素的能力和一定的肉鸡饲喂效果。 展开更多
关键词 转基因 内切葡聚糖酶基因 罗伊乳酸杆菌 饲喂效果 肉鸡
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胰腺癌的动物模型研究 预览 被引量:1
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作者 尹航 刘海林 《胃肠病学》 2015年第2期109-112,共4页
胰腺癌恶性程度高、进展快、预后差,在我国位居肿瘤死亡率的第6位。为了研究胰腺癌的发生、发展机制,目前已建立了多种胰腺癌动物模型。本文就胰腺癌动物模型的制备方法、实验用途、临床相关性、局限性作一综述。
关键词 胰腺肿瘤 动物模型 基因工程小鼠 转基因
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转基因干细胞在慢性创面愈合过程中新生血管化的作用 预览 被引量:1
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作者 胡艳阁 方勇 《中华损伤与修复杂志(电子版)》 CAS 2015年第6期531-534,共4页
新生血管化在创面愈合和组织再生过程中有着重要的作用,它提供组织修复必须依赖的物质基础(氧气、营养物质等)。随着近年来分子生物学技术和细胞工程技术的发展,干细胞技术和目的基因转染在创面愈合和血管生成方面展现独特的优势。文章... 新生血管化在创面愈合和组织再生过程中有着重要的作用,它提供组织修复必须依赖的物质基础(氧气、营养物质等)。随着近年来分子生物学技术和细胞工程技术的发展,干细胞技术和目的基因转染在创面愈合和血管生成方面展现独特的优势。文章总结了创面愈合的过程,慢性创面难愈的部分原因,血管新生在慢性创面愈合过程中的作用,相关生长因子基因转染技术、效率及与转基因干细胞的联合应用在慢性创面愈合过程中血管新生中的新发现,为临床上治疗慢性创面等棘手问题提供参考。 展开更多
关键词 伤口愈合 新生血管化 病理性 转基因 干细胞
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超长链多不饱和脂肪酸在棉花中的异源合成 被引量:2
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作者 刘江 马燕斌 +6 位作者 孙全喜 吴霞 李雪滢 孙美红 李燕娥 李新征 亓宝秀 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期86-92,共7页
从球等鞭金藻、眼虫、高山被孢霉和拟南芥中分别克隆到Δ9链延长酶、Δ8去饱和酶、Δ5去饱和酶和Δ15去饱和酶基因,利用我们的多基因聚合方法,将这4个基因聚合到植物表达载体pCambia2300上,其中每个基因都含有独立的CaMV35S启动子和Tno... 从球等鞭金藻、眼虫、高山被孢霉和拟南芥中分别克隆到Δ9链延长酶、Δ8去饱和酶、Δ5去饱和酶和Δ15去饱和酶基因,利用我们的多基因聚合方法,将这4个基因聚合到植物表达载体pCambia2300上,其中每个基因都含有独立的CaMV35S启动子和Tnos终止子。利用农杆菌介导法将该表达载体转入棉花,通过卡纳霉素和PCR筛选获得转基因阳性植株,提取转基因阳性植株叶片总脂肪酸,用气相色谱分析法检测到花生四烯酸(AA,20:4Δ5,8,11,14)和二十碳五烯酸(EPA,20:5Δ5,8,11,14,17)含量分别达1.0%和5.0%。表明通过基因代谢工程在棉花中异源合成EPA是可行的,为进一步在棉籽中生产VLCPUFAs奠定了基础。 展开更多
关键词 去饱和酶 链延长酶 转基因 EPA 棉花
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银屑病相关基因动物模型机制研究进展 被引量:3
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作者 李红 胡晋红 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期809-813,共5页
银屑病是一种受多基因遗传因素影响和多种环境因素诱导所产生的慢性炎症性皮肤疾病,为了阐明银屑病复杂的发病机制和开展药物治疗学的研究,建立一个理想的动物模型是关键。近年来随着转基因技术的发展,构建各种银屑病相关的基因动物... 银屑病是一种受多基因遗传因素影响和多种环境因素诱导所产生的慢性炎症性皮肤疾病,为了阐明银屑病复杂的发病机制和开展药物治疗学的研究,建立一个理想的动物模型是关键。近年来随着转基因技术的发展,构建各种银屑病相关的基因动物模型成为热点。本文就现存的银屑病致病相关基因的动物模型产生银屑病的机制作一综述。 展开更多
关键词 银屑病 动物模型 转基因
AKT对低氧模型细胞的促增殖作用 预览 被引量:1
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作者 潘龙飞 李丽君 余蕾 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第13期1441-1443,1446共4页
目的验证转染丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT/PKB)基因对缺氧损伤内皮细胞的生物学作用。方法首先构建人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的氯化镍(NiCl2)模拟低氧模型,Western blot检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达以鉴定模型是否构建成功... 目的验证转染丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT/PKB)基因对缺氧损伤内皮细胞的生物学作用。方法首先构建人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的氯化镍(NiCl2)模拟低氧模型,Western blot检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达以鉴定模型是否构建成功。然后,分别转染血管内皮生长因子(VEGF)、AKT及两种基因联合转染模拟低氧模型。继续培养转染后细胞1、2、3、4d,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)试验检测细胞增殖率。结果转染VEGF组、转染AKT组、转染VEGF与AKT双质粒组细胞增殖能力较单纯NiCl2组(模型组)均有增高,转染AKT组高于单独转染VEGF组,转染VEGF与AKT双基因组最高。结论转染AKT基因能够促进缺氧损伤的内皮细胞增殖,单独转染AKT比单独转染VEGF的作用强,同时转染AKT、VEGF促内皮细胞增殖作用最强。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 丝氨酸 苏氨酸蛋白激酶 转基因 冠心病 内皮细胞
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稳定表达TSLC1基因骨肉瘤MG63细胞系的建立及鉴定 预览 被引量:3
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作者 覃莉 林阳 +1 位作者 杨开祥 祝文涛 《骨科》 CAS 2013年第2期66-68,76共4页
目的 建立稳定表达人肺癌抑癌基因-1(TSLC1)骨肉瘤细胞系并对其进行鉴定.方法 脂质体转染的方法 将真核表达载体pCI-TSLC1稳定转染至MG63细胞系,经克隆化培养以及G418筛选,获得了1株稳定高表达TSLC1蛋白的细胞系.对其表达的蛋白性质... 目的 建立稳定表达人肺癌抑癌基因-1(TSLC1)骨肉瘤细胞系并对其进行鉴定.方法 脂质体转染的方法 将真核表达载体pCI-TSLC1稳定转染至MG63细胞系,经克隆化培养以及G418筛选,获得了1株稳定高表达TSLC1蛋白的细胞系.对其表达的蛋白性质进行了鉴定,对其分泌动态、细胞纯度、遗传稳定性、外源基因整合等生物学特性做了鉴定.结果 获得高表达TSLC1的稳定细胞系,命名为M8T.生物学性状研究结果 表明该转基因细胞系纯度好,遗传性状稳定,抽提细胞RNA进RT-PCR,扩增到与预期结果 大小一致的DNA片段,说明TSLC1基因成功整合到细胞基因组中.细胞系无细菌和霉菌污染.结论 成功建立了稳定表达TSLC1的骨肉瘤细胞系M8T.该细胞系遗传性质稳定,为进一步研究抑癌基因TSLC1在骨肉瘤中的作用奠定了基础. 展开更多
关键词 基因 肿瘤抑制 骨肉瘤 转基因 细胞系
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一氧化氮合酶在β-淀粉样蛋白转基因果蝇中的表达
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作者 王根发 朱红莲 《中国医师杂志》 CAS 2011年第12期 1631-1633,共3页
目的 研究β-淀粉样蛋白转基因果蝇中一氧化氮合酶的表达及作用.方法 对β-淀粉样蛋白转基因果蝇(n=20)和正常对照组野生型果蝇(n=20)分别提取组织总RNA并逆转录为cDNA,通过RT-PCR法定量分析其一氧化氮合酶的表达水平.结果 β-淀粉... 目的 研究β-淀粉样蛋白转基因果蝇中一氧化氮合酶的表达及作用.方法 对β-淀粉样蛋白转基因果蝇(n=20)和正常对照组野生型果蝇(n=20)分别提取组织总RNA并逆转录为cDNA,通过RT-PCR法定量分析其一氧化氮合酶的表达水平.结果 β-淀粉样蛋白转基因果蝇中一氧化氮合酶mRNA的表达水平为(0.020±0.006),明显低于野生型果蝇(1.000±0.149),两者之间的差异有统计学意义(P<0.05).结论 一氧化氮合酶催化生成的一氧化氮是神经系统中一个重要的信使分子,与阿尔茨海默病密切相关. 展开更多
关键词 一氧化氮合酶/代谢 淀粉样β蛋白/遗传学 果蝇属/代谢/遗传学 转基因
载脂蛋白基因与空间记忆力及胆固醇代谢的相关性分析 预览
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作者 廖峥嵘 吕雨虹 +3 位作者 王忠海 张凤云 赵俊霞 琦祖和 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2011年第3期260-262,共3页
目的研究载脂蛋白E(apoE)基因在早老痴呆疾病中的作用。方法选取C57BL/6J鼠,通过显微注射法建立人突变apoEa近交系转基因鼠,PCR初筛,再将首建鼠与正常C57BL/6J鼠繁育,将获得的6只转基因鼠作为转基因组,经Southern杂交鉴定,同... 目的研究载脂蛋白E(apoE)基因在早老痴呆疾病中的作用。方法选取C57BL/6J鼠,通过显微注射法建立人突变apoEa近交系转基因鼠,PCR初筛,再将首建鼠与正常C57BL/6J鼠繁育,将获得的6只转基因鼠作为转基因组,经Southern杂交鉴定,同时出生的结果为阴性的6只小鼠作为对照组,用酶法测定2组小鼠2、9和12月龄血清TC水平,Y迷宫测定2组小鼠9和12月龄空间记忆能力。结果2组小鼠2和9月龄时,血清TC水平差异无统计学意义(P〉0.05),12月龄时转基因组鼠血清TC水平(3.02±0.14)mmol/L较同龄对照组鼠明显升高(2.11±0.01)mmol/L,差异有统计学意义(P〈0.01)。转基因组鼠9和12月龄时空间记忆力r(0.82±0.49)%,(0.82±0.05)%]较对照组鼠[(0.99±0.05)%,(0.98±0.03)%]明显下降,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论apoEa基因与TC代谢可能具有相关性,同时apoE1基因过渡表达损伤了转基因鼠的记忆能力。 展开更多
关键词 载脂蛋白E类 阿尔茨海默病 突变 转基因 胆固醇 记忆障碍
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猪回肠末端转基因大米和亲本大米主要营养素的消化率
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作者 李敏 胡贻椿 +1 位作者 朴建华 杨晓光 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期913-917,共5页
目的 比较转双反义淀粉分支酶(SBE)基因大米和亲本大米主要营养素的消化率.方法 7只五指山小型去势公猪进行回肠造瘘手术,术后小型猪按随机数字表法随机分为两组,采用交叉法分别喂饲转基因大米饲料和亲本大米饲料,收集食糜后分析两种... 目的 比较转双反义淀粉分支酶(SBE)基因大米和亲本大米主要营养素的消化率.方法 7只五指山小型去势公猪进行回肠造瘘手术,术后小型猪按随机数字表法随机分为两组,采用交叉法分别喂饲转基因大米饲料和亲本大米饲料,收集食糜后分析两种大米中主要营养素的消化率.结果 转基因大米和亲本大米蛋白质的表观消化率分别为69.50%±4.50%、69.61%±8.40%(t=0.01,P=0.994);真消化率分别为87.55%±4.95%、87.64%±9.40%(t=0.01,P=0.994);脂肪消化率分别为72.86%±0.34%、77.89%±13.09%(t=0.95,P=0.378),碳水化合物消化率分别为72.92%±7.43%、92.35%±5.88%(t=4.27,P=0.005);转基因大米中17种氨基酸的表观消化率和真消化率与亲本大米没有差别.结论 转基因大米中碳水化合物消化率低于亲本大米,其余主要营养素的消化率与亲本大米具有实质等同性. 展开更多
关键词 1 4-α-葡萄糖分支酶 淀粉 转基因 水稻 消化
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