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寄主对斜纹夜蛾实验种群生殖力的影响 预览
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作者 蒋立奔 林硕 +4 位作者 陈勇 余芸 陈艺欣 田厚军 魏辉 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期235-240,共6页
【目的】斜纹夜蛾Spodoptera litura Fabricius是一种多食性害虫,繁殖能力强,全球范围内均有分布。但是寄主对斜纹夜蛾繁殖力影响机制还不清楚。开展寄主对斜纹夜蛾实验种群生殖力的影响研究,为斜纹夜蛾的预测预报以及防治提供理论依据... 【目的】斜纹夜蛾Spodoptera litura Fabricius是一种多食性害虫,繁殖能力强,全球范围内均有分布。但是寄主对斜纹夜蛾繁殖力影响机制还不清楚。开展寄主对斜纹夜蛾实验种群生殖力的影响研究,为斜纹夜蛾的预测预报以及防治提供理论依据。【方法】通过单头饲养的方法,研究斜纹夜蛾取食甘蓝、空心莲子草和地瓜后的产卵量、卵黄原蛋白(Vg)及卵黄原蛋白受体(VgR)表达的变化。【结果】幼虫取食不同寄主的成虫寿命和产卵前期没有显著性差异,但成虫的产卵量、Vg及VgR表达量有显著差异。取食人工饲料的斜纹夜蛾产卵量最多,为(889±43.0)粒,其次为取食地瓜(496±53.1)粒、空心莲子草(362±37.3)粒,和甘蓝(193±9.7)粒。取食甘蓝、空心莲子草和地瓜的斜纹夜蛾雌虫卵巢Vg和VgR的相对表达量仅为取食人工饲料斜纹夜蛾的40%~80%,且取食不同寄主的斜纹夜蛾Vg和VgR的相对表达量与产卵量呈正相关关系。【结论】斜纹夜蛾取食不同寄主后,其卵巢内的Vg和VgR表达量存在差异,从而影响到斜纹夜蛾卵子发育,最终造成其生殖力存在差异。 展开更多
关键词 斜纹夜蛾 产卵量 卵黄原蛋白 卵黄原蛋白受体
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A monoclonal antibody against Lates calcarifer vitellogenin and a competitive ELISA to evaluate vitellogenin induction after exposure to xenoestrogen
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作者 Witchuda Prasatkaew Phochit Nanthanawat +1 位作者 Nanthika Khongchareonporn Sutin Kingtong 《环境科学学报:英文版》 SCIE EI CAS CSCD 2019年第1期325-333,共9页
A monoclonal antibody specific to sea bass(Lates calcarifer) vitellogenin(VTG) was developed,for use as a tool for monitoring endocrine disrupting chemicals(EDCs). VTG was induced in sea bass by intramuscular injectio... A monoclonal antibody specific to sea bass(Lates calcarifer) vitellogenin(VTG) was developed,for use as a tool for monitoring endocrine disrupting chemicals(EDCs). VTG was induced in sea bass by intramuscular injection of 17β-estradiol(E2: 2 mg/kg) every three days. Blood was collected three days after the last injection. Plasma VTG was then purified by chromatography in hydroxyapatite and a sephacryl-S300 column. Characterizations of purified VTG were done by phospholipoglycoprotein staining on a native-PAGE with confirmation by mass spectrometry(LC-MS/MS). Antibody was raised in mice by injection of purified VTG. After monoclonal antibody production, the hybridoma clone No. 41(MAb-sea bass VTG 41)was selected and developed for quantification of VTG by competitive enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA). The ELISA method was sensitive with a detection limit of VTG 40 ng/mL. MAb-sea bass VTG 41 was specific to VTG from E2-treated sea bass and others EDCs(Nonylphenol, Benzo[a]pyrene and CdCl2). Moreover, cross-reactivity was also found in E2-treated coral grouper(Epinephelus corallicola). The ELISA method obtained from this work can be further applied for the assessment of EDCs in Thailand and Southeast Asia’s aquatic environment. 展开更多
关键词 MONOCLONAL antibody VITELLOGENIN BIOMARKER ENDOCRINE disrupting chemicals(EDCs) ELISA
中草药淫羊藿和菟丝子对日本鳗鲡卵巢发育的影响 预览
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作者 赖晓健 陈仕玺 +4 位作者 赖国银 陈芸 陈锦民 李忠琴 王艺磊 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期314-321,共8页
在水温(21±1)℃下,给体重(592.5±52.5) g的日本鳗鲡(Anguilla japonica)雌亲鱼投喂每千克体重含0.034 g淫羊藿和0.034 g菟丝子浸膏的饲料90 d,对照组投喂人工配合饲料,研究淫羊藿和菟丝子对卵巢发育的影响。结果显示,饲料中... 在水温(21±1)℃下,给体重(592.5±52.5) g的日本鳗鲡(Anguilla japonica)雌亲鱼投喂每千克体重含0.034 g淫羊藿和0.034 g菟丝子浸膏的饲料90 d,对照组投喂人工配合饲料,研究淫羊藿和菟丝子对卵巢发育的影响。结果显示,饲料中添加淫羊藿和菟丝子的雌鱼卵巢大部分卵母细胞属第Ⅱ时相,性腺指数和肝体比均显著高于对照组(P<0.05);卵母细胞油滴明显增多,部分卵母细胞胞质已充满油滴,核仁变小增多;血清雌二醇(E2)和11-酮基睾酮(11-KT)水平显著升高(P<0.05),实验组11-KT含量约为对照组的4倍;肝脏卵黄蛋白原基因vtg表达量升高,实验组和对照组卵巢cyp19a1仅微量表达,肝脏未检测到erα和erβ的表达;实验组肌肉总脂肪酸、饱和脂肪酸(SFA)、单不饱和脂肪酸(MUFA)和高度不饱和脂肪酸(HUFA)含量均显著高于对照组(P<0.05),最主要的高度不饱和脂肪酸花生四烯酸(AA)、二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)含量均显著高于对照组(P<0.05)。本研究表明,在亲鱼培育饲料中添加中草药淫羊藿和菟丝子促进了日本鳗鲡卵母细胞油滴和肝脏卵黄蛋白原增加,提高了肌肉高不饱和脂肪酸的积累,为卵黄生成和卵母细胞进一步发育做好更充分的准备。 展开更多
关键词 雌二醇 11-酮基睾酮 卵黄蛋白原 高度不饱和脂肪酸 日本鳗鲡
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褐黄血蜱卵蛋白质组分析 预览
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作者 徐律 程天印 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期627-636,共10页
本研究旨在探明褐黄血蜱卵内蛋白组分,揭示蜱胚胎发育中的关键营养物质,为筛选可干扰胚胎发育的抗原分子奠定基础。采用液相色谱-串联质谱法对新鲜褐黄血蜱的卵蛋白成分进行分析,基于该蜱的唾液腺转录组翻译文库、中肠转录组翻译文库和U... 本研究旨在探明褐黄血蜱卵内蛋白组分,揭示蜱胚胎发育中的关键营养物质,为筛选可干扰胚胎发育的抗原分子奠定基础。采用液相色谱-串联质谱法对新鲜褐黄血蜱的卵蛋白成分进行分析,基于该蜱的唾液腺转录组翻译文库、中肠转录组翻译文库和Uniprot数据库对各蛋白成分进行鉴定。结果显示:从褐黄血蜱卵黄蛋白提取液中检出特异性肽段221条,由此鉴定蛋白53种,其中高可信蛋白12种,能够确定的功能蛋白有肌动蛋白(actin)和卵黄蛋白原Ⅱ(vitellogenin 2,Vg-2),且Vg-2与卵黄蛋白(vitellins,Vn)一级结构相同。蜱卵原生质所含蛋白较少;Vg-2是蜱卵内存在的唯一一种卵黄蛋白原。 展开更多
关键词 褐黄血蜱 液相色谱-串联质谱 卵黄蛋白原 特异性肽段
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Tradeoff between triglyceride consumption and ovariole development in Plutella xylostella(L.)released in mixed-host environments 预览
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作者 HUANG Bin SHI Zhang-hong HOU You-ming 《农业科学学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2019年第4期865-872,共8页
After exposure to mixed environments with multiple hosts,the frequency of flight take-offs for Plutella xylostella(L.)is known to increase with a concomitant decrease in female fecundity.The objective of the present s... After exposure to mixed environments with multiple hosts,the frequency of flight take-offs for Plutella xylostella(L.)is known to increase with a concomitant decrease in female fecundity.The objective of the present study was to elucidate the physiological mechanism underlying the increased flight activity and decreased fecundity of P.xylostella in mixed-host environments.We measured ovariole length,and triglyceride and vitellogenin(Vg)content in P.xylostella females after they were released into different host environments consisting of either a single host(Brassica campestris,Brassica oleracea or Brassica juncea)or a mixture of all three hosts.Our results indicated that ovariole length varied significantly between female adults from different host environments.Females from the B.campestris environment had the longest ovarioles,whereas those from the mixed environment had the shortest ones.A negative correlation was found between ovariole length and the flight take-off frequency of P.xylostella adults.Additionally,there were significant differences in the triglyceride content of P.xylostella females from different host environments.Our data revealed that more triglyceride was consumed by P.xylostella female adults from B.oleracea and the mixed environments than those from environments containing only B.campestris or B.juncea.In contrast,the relative Vg content in P.xylostella females from the mixed environment was lower than that in females from the B.campestris-,B.juncea-or B.oleracea-only environments.In conclusion,the mixed environment caused increased consumption of available energy resources(triglyceride)at the cost of retarding ovarian development and decreasing the amount of Vg produced. 展开更多
关键词 diamondback MOTH TRIGLYCERIDE LEPIDOPTERA ovariole length PLUTELLIDAE VITELLOGENIN
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Effects of lead stress on Vg expression in the beet armyworm over five successive generations 预览
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作者 SU Hong-hua YANG Yong +3 位作者 QIAN Yuan-yuan YE Zi-bo CHEN Yu-qing YANG Yi-zhong 《农业科学学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2019年第1期134-142,共9页
Heavy metals have been found to be endocrine disruptors in invertebrates. Lead is one of the most widespread elements of contamination, but there has been no research about the effects of lead stress on vitellogenin (... Heavy metals have been found to be endocrine disruptors in invertebrates. Lead is one of the most widespread elements of contamination, but there has been no research about the effects of lead stress on vitellogenin (Vg) gene expression in insects exposed to lead over multiple generations. In this paper, the effects of different concentrations of lead (0, 0.3, 4.8 and 76.8 mg kg^–1) on the expression of Vg in the beet armyworm over five successive generations were studied. The results showed that lead stress had significant effects on Vg expression in a dose-dependent manner. For females at the larval and adult stages, as lead concentration increased, Vg expression was significantly inhibited;for males at these two developmental stages, Vg expression was induced and increased as lead concentration increased. In addition, with the increase over stressed generations, inhibited effects for females and induced effects for males at the larval and adult stages became increasingly more obvious. However, at the pupal stage, Vg expression in the two genders was different from that at the larval and adult stages. The results indicate that lead stress can upregulate Vg expression in males which should be a useful indicator for environmental risk assessment. 展开更多
关键词 SPODOPTERA EXIGUA LEAD stress VITELLOGENIN gene EXPRESSION females males
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卵黄蛋白原的产生及其非营养功能的研究现状 预览
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作者 霍岩 陈晓英 +1 位作者 方荣祥 张莉莉 《生物技术通报》 CSCD 北大核心 2018年第2期66-73,共8页
卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vg)是卵黄蛋白的前体,为卵生动物胚胎发育提供必需的营养物质。作为卵内重要的营养蛋白,物种之间的Vg在蛋白结构及蛋白修饰上有高度的保守性,一般包括Vit N,DUF,v WD结构域及丝氨酸修饰区等。在卵黄发育期,... 卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vg)是卵黄蛋白的前体,为卵生动物胚胎发育提供必需的营养物质。作为卵内重要的营养蛋白,物种之间的Vg在蛋白结构及蛋白修饰上有高度的保守性,一般包括Vit N,DUF,v WD结构域及丝氨酸修饰区等。在卵黄发育期,在激素的诱导下,雌性成年个体内的Vg在脊椎动物的肝脏或昆虫脂肪体中大量表达,经过修饰及蛋白酶剪切后,形成Vg聚合体,分泌到血淋巴中并运输至卵巢,由卵巢上的Vg受体识别,通过内吞作用入卵,并在卵内进一步加工成为成熟的卵黄蛋白。除经典的营养运输外,Vg在入卵过程中发挥多重非营养功能。Vg与病毒的结构蛋白互作,可将病毒携带入卵实现其垂直传播过程;血淋巴中的Vg通过对病原微生物的识别,介导昆虫对微生物的免疫清除;Vg在非雌性个体中的表达对虫媒病毒的水平传播及社会型昆虫的行为调节发挥功能。综述了Vg的表达、修饰、运输及其在非营养功能方向的主要研究进展,以期为后续Vg的功能研究提供指导。 展开更多
关键词 卵黄蛋白原 非营养功能 非雌性表达 免疫
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中华鲟Vtg间接竞争ELISA检测方法的建立和应用 预览
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作者 冷小茜 叶欢 +2 位作者 杜浩 李创举 危起伟 《水生生物学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期779-785,共7页
卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vtg)被认为是一种理想的雌激素和类雌激素标志物,通过建立一种中华鲟Acipenser sinensis血浆Vtg水平的检测方法,进而开发一项中华鲟性腺成熟度的诊断技术。首先通过RACEPCR方法扩增得到中华鲟vtg基因cDNA序列,... 卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vtg)被认为是一种理想的雌激素和类雌激素标志物,通过建立一种中华鲟Acipenser sinensis血浆Vtg水平的检测方法,进而开发一项中华鲟性腺成熟度的诊断技术。首先通过RACEPCR方法扩增得到中华鲟vtg基因cDNA序列,氨基酸序列分析预测其蛋白分子量大小为196 kD。构建Vtg功能区段融合原核表达载体pET32a(+)-vtg并表达纯化重组蛋白,并以重组蛋白免疫兔子获得多克隆抗血清,Western blotting检测显示抗血清的特异性较好。以纯化的中华鲟重组Vtg蛋白为抗原,中华鲟Vtg多克隆抗血清为抗体,建立了中华鲟血浆Vtg的间接竞争酶联免疫检测方法(ELISA),标准曲线线性回归方程为y=–0.2916x+0.6794,相关系数R2为0.9976。该方法检测的灵敏度为4.12μg/mL,最低检测限为0.3μg/mL,批内和批间变异系数分别为2.52%和3.42%。通过对不同发育时期雌性中华鲟血样检测,表明此ELISA方法可初步用于雌性中华鲟性腺发育时期监测。 展开更多
关键词 中华鲟 卵黄蛋白原 ELISA 抗血清
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双酚A替代物对雄性斑马鱼性激素及卵黄蛋白原水平的影响 预览
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作者 杨倩 杨先海 +3 位作者 刘济宁 王蕾 陈英文 沈树宝 《南京工业大学学报:自然科学版》 北大核心 2018年第5期6-13,共8页
双酚AF(BPAF)、双酚AP(BPAP)、双酚B(BPB)、双酚F(BPF)、双酚S(BPS)和双酚Z(BPZ)是几种常用的双酚A替代物。目前,这些替代物的毒理学数据还比较匮乏,难以评估其是否为安全的替代物,因此,有必要开展双酚A替代物的毒理效应研... 双酚AF(BPAF)、双酚AP(BPAP)、双酚B(BPB)、双酚F(BPF)、双酚S(BPS)和双酚Z(BPZ)是几种常用的双酚A替代物。目前,这些替代物的毒理学数据还比较匮乏,难以评估其是否为安全的替代物,因此,有必要开展双酚A替代物的毒理效应研究。考虑到双酚A具有较强的内分泌干扰效应,而这些双酚A替代物也是否具有内分泌干扰效应是亟待解决的重要科学问题。基于此,选用雄性斑马鱼成鱼作为研究对象,在质量浓度为0、0.001、0.01、0.1和1 mg/L下暴露21 d后,采用酶联免疫吸附测定法分析了斑马鱼头尾匀浆液中性激素水平和卵黄蛋白原含量的变化情况。结果表明,与空白对照相比,这6种双酚A替代物能够导致睾酮(T)水平出现不同程度的显著性降低,17β-雌二醇(E2)出现不同程度的显著性升高;卵黄蛋白原(VTG)的含量也呈现显著性升高的趋势。根据这几种受试物对卵黄蛋白原诱导作用的最低可观察效应浓度(LOEC)值可以看出,双酚AF、双酚AP和双酚Z的雌激素效应强于双酚A,双酚B与双酚A处于同一等级,双酚F和双酚S相对较弱。本研究结果可作为双酚A替代物风险评价的依据。 展开更多
关键词 双酚A替代物 斑马鱼 性激素 卵黄蛋白原
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双须骨舌鱼卵黄蛋白原基因vtg的克隆、组织表达和原核表达分析
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作者 潘贤辉 刘奕 +5 位作者 周康奇 胡隐昌 郑曙明 宋红梅 牟希东 杨叶欣 《动物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期597-614,共18页
为探究双须骨舌鱼(Osteoglossum bicirrhosum)卵黄蛋白原vtg基因的结构和表达特征,本研究运用RACE技术克隆双须骨舌鱼vtg全长c DNA序列。序列分析发现,双须骨舌鱼vtg的c DNA全长为5 325 bp,开放阅读框(ORF)为5 121 bp,其5′和3′非... 为探究双须骨舌鱼(Osteoglossum bicirrhosum)卵黄蛋白原vtg基因的结构和表达特征,本研究运用RACE技术克隆双须骨舌鱼vtg全长c DNA序列。序列分析发现,双须骨舌鱼vtg的c DNA全长为5 325 bp,开放阅读框(ORF)为5 121 bp,其5′和3′非编码区(UTR)分别为46 bp和159 bp,共编码1 706个氨基酸,预测蛋白质分子量约为186.79 ku。同源性分析发现,双须骨舌鱼与同科的美丽仆骨舌鱼(Scleropages formosus)相似度达到84.78%,与鲤形目、鲈形目、鲱形目、鲽形目鱼类的相似度均高于50%。系统进化树分析结果显示,本文获得的双须骨舌鱼vtg基因与骨舌鱼目聚为一类,与鳗鲡目硬骨鱼类亲缘关系较近,与双须骨舌鱼进化地位相符。荧光定量PCR检测结果表明,在雌雄鱼性腺和肝中vtg均有表达,且在雌鱼肝中的相对表达量显著高雄鱼(P〈0.05),卵巢和精巢表达量无显著差异(P〉0.05);在雌雄鱼鳃、脾、肾、肌肉、心、头肾、脑等7个组织中均极微量表达,且无显著差异(P〉0.05)。在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期卵巢中vtg相对表达量依次增加,Ⅳ期显著高于Ⅱ和Ⅲ期(P〈0.05),也显著高于精巢Ⅳ期(P〈0.05);在雌鱼肝组织中呈先增后减趋势,且Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期之间无显著差异(P〉0.05),但每个时期都显著高于雄性(P〈0.05)。成功构建了原核表达载体p EASY-Blunt E2-vtg,并转入Transetta(DE3)表达感受态细胞中成功诱导出融合蛋白。Western-blotting检测显示,融合蛋白可被抗His标签特异性识别。综上表明,vtg表达水平高低与性别相关,并与性腺发育程度有关。此外,本研究结果也为后续深入研究卵黄蛋白原的生理功能打下基础。 展开更多
关键词 双须骨舌鱼 卵黄蛋白原 克隆 组织表达 原核表达
The expression characteristics of vitellogenin(VTG)in response to B(a)p exposure in polychaete Perinereis aibuhitensis 预览
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作者 李婉娟 薛圣伦 +4 位作者 庞敏 岳宗豪 杨大佐 周一兵 赵欢 《海洋湖沼学报(英文)》 SCIE CAS CSCD 2018年第6期2297-2307,共11页
In order to investigate the endocrine toxicity of B(a)p to marine polychaete Perinereis aibuhitensis,vitellogenin(VTG)cDNA from the P.aibuhitensis was isolated,recombinated and expressed for the fi rst time.The full l... In order to investigate the endocrine toxicity of B(a)p to marine polychaete Perinereis aibuhitensis,vitellogenin(VTG)cDNA from the P.aibuhitensis was isolated,recombinated and expressed for the fi rst time.The full length P.aibuhitensis vitellogenin gene(PaVTG)was 5 325 bp,and encoded 1 692 amino acids.It contained the vitellogenin_N domain of unknown function(DUF1943),a von Willebrand factor type D domain,as well as a conserved KALGNAG motif.The expression of VTG gene and protein were mainly up-regulated after exposed to B(a)p at transcriptional and translational levels.PaVTG gene expression did not change signifi cantly at day 4.At day 7 PaVTG expression was up-regulated in 0.5μg/L and 5μg/L B(a)p group.At day 14 PaVTG was signifi cantly up-regulated in 0.5–10μg/L B(a)p.The protein expression of PaVTG in 0.5μg/L and 10μg/L B(a)p group was up-regulated with time prolonging,but the expression in 5μg/L and 50μg/L B(a)p group exhibited fi rst increased and then decreased trend.With the increasing of B(a)p concentration PaVTG mRNA and protein expression both fi rstly increased then decreased.In contrast to B(a)p exposure,estradiol did not induce PaVTG gene and protein expression,until late times of exposure(14 d).Overall,the results in this study indicate that PaVTG could be used as a potential indicator of the eff ects environmental estrogenic compounds. 展开更多
关键词 Perinereis aibuhitensis VITELLOGENIN B(A)P expression profiles
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脊尾白虾翻译控制肿瘤蛋白基因TCTP克隆及自噬调控相关基因在卵巢发育期的表达 预览
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作者 马骊 葛倩倩 +2 位作者 许杨 彭素晓 李健 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2018年第4期101-109,共9页
为深入了解脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)卵巢发育和卵黄蛋白原发生的分子机制,本研究克隆得到脊尾白虾翻译控制肿瘤蛋白基因TCTP,并结合自噬调控基因TCTP、Hif-1α、Beclin1和Bcl-2在卵巢发育期的表达水平,阐释脊尾白虾卵黄蛋... 为深入了解脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)卵巢发育和卵黄蛋白原发生的分子机制,本研究克隆得到脊尾白虾翻译控制肿瘤蛋白基因TCTP,并结合自噬调控基因TCTP、Hif-1α、Beclin1和Bcl-2在卵巢发育期的表达水平,阐释脊尾白虾卵黄蛋白原合成过程中的分子调控特征。研究显示,脊尾白虾TCTP基因c DNA全长为732 bp,编码168个氨基酸,具有典型的TCTP1和TCTP2功能域以及PKC和TKⅡ等mTOR信号通路相关的磷酸化位点。同时发现,甲壳动物TCTP普遍缺乏在其他动植物中高度保守的C末端的cys残基。进化分析显示,脊尾白虾TCTP与中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)亲缘关系最近。4种自噬调控基因在脊尾白虾卵巢发育期的表达结果显示,肝胰腺TCTP基因从增殖期到产后恢复期呈递减趋势;肝胰腺Hif-1α、Beclin1和Bcl-2基因表达趋势相似,即从增殖期到小生长期高表达,大生长期极显著下降,表达量最低(P〈0.01),这与外源性卵黄蛋白原的合成趋势大致相反。这些自噬调控基因可能通过自噬作用共同调节外源性卵黄蛋白原的合成。卵巢TCTP基因在小生长期表达量最高;卵巢Hif-1α基因从增殖期到产后恢复期持续升高,这与内源性卵黄蛋白原表达趋势相似;卵巢Beclin1基因在大生长期表达量最高,与脊尾白虾卵巢Ec R表达趋势相似,与卵巢Bcl-2基因表达趋势相反,这些自噬调控基因可能通过自噬作用共同促进内源性卵黄蛋白的合成。本研究表明,自噬调控基因TCTP、Hif-1α、Beclin1和Bcl-2在脊尾白虾卵巢发育时期相互协调共同作用,可能通过自噬作用调节脊尾白虾卵黄蛋白原的合成和卵巢发育。 展开更多
关键词 脊尾白虾 TCTP 细胞自噬 卵黄蛋白 表达分析
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Dietary betaine activates hepatic VTGII expression in laying hens associated with hypomethylation of GR gene promoter and enhanced GR expression 预览
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作者 Nagmeldin A.Omer Yun Hu +5 位作者 Yan Hu Abdulrahman A.Idriss Halima Abobaker Zhen Hou Haibo Dong Ruqian Zhao 《畜牧与生物技术杂志:英文版》 SCIE CAS CSCD 2018年第2期381-390,共10页
Background:Vitellogenin(VTG)is a precursor of egg yolk proteins synthesized within the liver of oviparous vertebrates.Betaine is an important methyl donor that is reported to improve egg production of laying hens with... Background:Vitellogenin(VTG)is a precursor of egg yolk proteins synthesized within the liver of oviparous vertebrates.Betaine is an important methyl donor that is reported to improve egg production of laying hens with an unclear mechanism.In the present study,we fed betaine-supplemented diet(0.5%)to laying hens for 4 wk and investigated its effect on VTGII expression in the liver.Results:Betaine did not affect chicken weight,but significantly(P<0.05)increased egg laying rate accompanied with a significant(P<0.05)increase in hepatic concentration and plasma level of VTGII.Plasma estrogen level did not change,but the hepatic expression of estrogen receptorα(ERα)mRNA was significantly(P<0.05)up-regulated.Betaine did not affect the protein content of ERα,but significantly(P<0.05)increased hepatic expression of glucocorticoid receptor(GR)at both mRNA and protein levels.Also,ERα/GR interaction tended to be enhanced in the liver nuclear lysates of betainesupplemented hens as determined by co-immunoprecipitation.Furthermore,dietary betaine supplementation significantly increased(P<0.05)the hepatic expression of methyl-transfer enzymes,such as BHMT,GNMT,and DNMT1,which was associated with higher SAM/SAH ratio and hypomethylation of GR promoter regions.Conclusions:Betaine activates hepatic VTGII expression in association with modified DNA methylation of GR gene promoter,GR expression and ERα/GR interaction.Activation of hepatic VTGII expression may contribute,at least partly,to improved egg production in betaine-supplemented hens. 展开更多
关键词 BETAINE Glucocorticoid receptor HYPOMETHYLATION Laying HENS VITELLOGENIN
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金鱼卵黄原蛋白单抗夹心ELISA的开发及其在环境雌激素检测中的应用 预览
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作者 马淑伟 王军 +2 位作者 单瑞后 张振忠 汝少国 《中国海洋大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2018年第5期59-65,共7页
利用Western blot和ELISA方法,从实验室现有的斑马鱼(Danio rerio)卵黄脂磷蛋白(Lipovitellin,Lv)单克隆抗体库中筛选出了对金鱼(Carassius auratus)卵黄原蛋白(Vitellogenin,Vtg)具有高特异性、高亲和力的单抗H3A8。以纯化的单... 利用Western blot和ELISA方法,从实验室现有的斑马鱼(Danio rerio)卵黄脂磷蛋白(Lipovitellin,Lv)单克隆抗体库中筛选出了对金鱼(Carassius auratus)卵黄原蛋白(Vitellogenin,Vtg)具有高特异性、高亲和力的单抗H3A8。以纯化的单抗H3A8、金鱼Lv与HRP标记的Lv多克隆抗体建立了夹心ELISA,其工作范围为15.6-1 000ng·mL^-1,检出限为9.6ng·mL^-1,组内差异与组间差异分别为1.30%-4.99%和2.30%-4.37%,并且金鱼Vtg与Lv的标准曲线几乎重合,表明建立的夹心ELISA可以准确定量金鱼Vtg,并利用建立的ELISA测定了10、100、1 000ng/L 17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)暴露3和21d后雄性金鱼血浆与体表粘液中的Vtg含量,发现1 000ng·L-1 E2暴露3d、100与1 000ng·L-1 E2暴露21d均能显著升高雄鱼血浆和体表粘液中的Vtg含量,E2暴露21d后雄鱼血浆与体表粘液中的Vtg含量较为接近,建议将取样简便且对鱼体无伤害的体表粘液用作今后金鱼Vtg的检测样品。 展开更多
关键词 金鱼 卵黄原蛋白 单克隆抗体 ELISA 环境雌激素
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饲料磷脂对已交配和未交配雌性三疣梭子蟹卵巢发育、组织学和卵黄蛋白原表达的影响 预览
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作者 丁立云 付辉云 +4 位作者 侯迎梅 霍雅雯 孙蓬 金敏 周歧存 《水产学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期366-375,共10页
为探讨饲料磷脂对已交配和未交配雌性三疣梭子蟹卵巢发育、组织学结构和卵黄蛋白原基因表达的影响,本研究采用2×2双因子随机区组设计(日粮类型:0%和4%大豆卵磷脂;三疣梭子蟹交配处理:已交配和未交配),共4个处理组,以大豆卵磷... 为探讨饲料磷脂对已交配和未交配雌性三疣梭子蟹卵巢发育、组织学结构和卵黄蛋白原基因表达的影响,本研究采用2×2双因子随机区组设计(日粮类型:0%和4%大豆卵磷脂;三疣梭子蟹交配处理:已交配和未交配),共4个处理组,以大豆卵磷脂0%和4%两种人工配合饲料分别投喂交配和未交配两组三疣梭子蟹雌蟹,进行了为期12周的饲养实验。结果显示,无论三疣梭子蟹是否交配,饲料中添加4%大豆卵磷脂可显著增加三疣梭子蟹的卵巢指数,提高血清中卵黄蛋白原、孕酮和雌二醇的浓度,增大卵母细胞直径;同时上调肝胰腺卵黄蛋白原m RNA相对表达量,但无显著性差异,肝胰腺指数呈现出和卵巢指数相反的趋势;交配后的三疣梭子蟹卵巢指数、肝胰腺卵黄蛋白原m RNA表达量显著高于未交配组。组织学观察显示,交配使得三疣梭子蟹卵母细胞沉积更丰富的卵黄颗粒,促进卵母细胞成熟,交配处理对肝胰腺指数和血清中卵黄蛋白原及孕酮的水平无显著性影响。此外,饲料磷脂水平和交配处理的交互作用显著影响了三疣梭子蟹血清中类固醇激素孕酮和雌二醇的浓度。本实验结果显示,饲料中大豆磷脂和交配处理均能促进雌性三疣梭子蟹的卵巢发育,交配处理对卵母细胞成熟的促进作用更为明显。 展开更多
关键词 三疣梭子蟹 大豆磷脂 卵巢发育 组织学 卵黄蛋白原
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大劣按蚊卵黄蛋白原cDNA的克隆及转录水平研究 被引量:1
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作者 于莎莎 王英 +2 位作者 李秋霞 王维 刘子栋 《中国热带医学》 CAS 2017年第4期336-339,共4页
目的克隆大劣按蚊卵黄蛋白原c DNA,进行序列分析,并研究该基因在不同蚊期的转录水平变化。方法首先提取大劣按蚊总RNA,反转录成c DNA;然后设计昆虫卵黄蛋白原简并引物,以该c DNA为模板进行PCR扩增和测序,对所获取的序列进行生物信息学分... 目的克隆大劣按蚊卵黄蛋白原c DNA,进行序列分析,并研究该基因在不同蚊期的转录水平变化。方法首先提取大劣按蚊总RNA,反转录成c DNA;然后设计昆虫卵黄蛋白原简并引物,以该c DNA为模板进行PCR扩增和测序,对所获取的序列进行生物信息学分析;最后利用实时荧光定量PCR方法检测卵黄蛋白原基因在蚊卵、幼虫、蛹和成蚊各时期的转录水平变化。结果 PCR成功扩增出了清晰的单一目的条带,经测序为一段1 071 bp的序列,BLAST比对分析显示该序列与浅色按蚊、库态按蚊和斯氏按蚊的卵黄蛋白基因同源性高达90%,与冈比亚按蚊、微小按蚊和美彩按蚊的同源性达89%。对大劣按蚊各时期卵黄蛋白原转录水平的研究结果显示,4 d龄按蚊卵黄蛋白原m RNA水平是3 d龄按蚊的15.2倍,而吸血后卵黄蛋白原m RNA水平高效上调,是未吸血组的955.7倍(P〈0.01);吸血组6 d龄按蚊卵黄蛋白原m RNA表达较吸血组4 d龄按蚊骤降(下降近1 870倍),而与未吸血组6 d龄按蚊相比,差异无统计学意义。结论本研究成功地克隆了大劣按蚊卵黄蛋白原基因的c DNA;大劣按蚊血餐后24 h卵黄蛋白原基因高效表达,提示卵黄蛋白原基因可能参与了大劣按蚊蚊卵的发育。 展开更多
关键词 大劣按蚊 卵黄蛋白原 CDNA克隆 转录水平
罗氏沼虾5个专门化品系选择系繁殖力的比较分析
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作者 袁新程 戴习林 +4 位作者 朱其建 李玉峰 胡彦杰 周迅 丁福江 《上海海洋大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第5期674-681,共8页
为探讨罗氏沼虾繁殖性能,本实验通过测定5个罗氏沼虾专门化品系选择系(A、B、C、D、E系)连续3次抱卵的单位体质量抱卵量(FW)、卵巢发育周期(CO)、受精卵卵径(DE)、卵黄蛋白原(VTG)含量、组织蛋白酶D(CTSD)活性等指标,比较分... 为探讨罗氏沼虾繁殖性能,本实验通过测定5个罗氏沼虾专门化品系选择系(A、B、C、D、E系)连续3次抱卵的单位体质量抱卵量(FW)、卵巢发育周期(CO)、受精卵卵径(DE)、卵黄蛋白原(VTG)含量、组织蛋白酶D(CTSD)活性等指标,比较分析5个选择系的繁殖力,以期筛选出高繁殖力品系罗氏沼虾。结果显示:罗氏沼虾绝对抱卵量(F)、FW与体质量正相关显著(P〈0.05),F与FW呈极显著正相关(P〈0.01);5个选择系的三次抱卵FW平均值范围为(1.96-2.30)×10^3粒/g,各系间差异显著(P〈0.05),其中B和D的FW较高,分别为2.26×10^3粒/g和2.30×10^3粒/g;5个选择系受精卵中VTG含量、CTSD活性的平均值范围分别为3.48-5.80μg/g、271.81-320.82 U/g,各系间差异均显著(P〈0.05),其中受精卵VTG含量最高为B的5.80μg/g,CTSD活性最高为D的320.82 U/g,次之为B的303.09 U/g,两者无差异(P〉0.05);CO范围为18.8-23.8 d,第二次大于第一次(2-8 d),各系间无差异(P〉0.05),但均显著小于对照组(P〈0.05);DE平均值范围为542.3-552.0 nm,各系间无差异,B、D选择系DE均值较大,分别为551.7 nm、552.0 nm。因此可认为罗氏沼虾5个专门化品系选择系中B和D的繁殖力最强,A选择系次之,C和E选择系最弱,此可为罗氏沼虾专门化品系选择系的选育提供依据。 展开更多
关键词 罗氏沼虾 专门化品系 繁殖力 卵黄蛋白原 组织蛋白酶D
城市污水中环境雌激素的去除及环境风险评价 被引量:1
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作者 李好 李红萍 +2 位作者 孙志武 张震 高静 《环境与健康杂志》 北大核心 2017年第4期337-340,共4页
目的研究城市污水中环境雌激素(environmental estrogens,EEs)的去除情况,并评价其对受纳河流的影响。方法分别采集郑州某污水处理厂进水口、初沉池、二沉池、出水口及受纳河流上、下游1 000 m(以下简称"河上游、河下游")的水样,... 目的研究城市污水中环境雌激素(environmental estrogens,EEs)的去除情况,并评价其对受纳河流的影响。方法分别采集郑州某污水处理厂进水口、初沉池、二沉池、出水口及受纳河流上、下游1 000 m(以下简称"河上游、河下游")的水样,采用固相萃取-气质联用检测污水厂内水样雌酮(E1)、17β-雌二醇(E2)、4-辛基酚(OP)、4-壬基酚(NP)、双酚A(BPA)5种EEs的浓度。利用固相萃取/重组基因酵母法测定各采样点E2当量值(estradiol equivalents,EEQs)。各采样点水样按照5%和10%的体积分数配制暴露溶液,并设空白对照(除氯自来水);将210尾雄性锦鲤采用半静态方式暴露,每组15尾,每天更换1/2暴露溶液,连续暴露7 d。检测其血清卵黄蛋白原(vitellogenin,Vtg)并计算性腺成熟系数(gonadosomatic index,GSI)。结果所采水样均检测出EEs并诱导了雄性锦鲤血清Vtg的表达,并抑制其性腺的发育。出水口水样中雌激素活性均低于进水口和初沉池水样,差异有统计学意义(P〈0.05)。河下游水样中雌激素活性高于河上游水样,差异有统计学意义(P〈0.05)。各暴露组雄性锦鲤血清Vtg的浓度均高于对照组,差异有统计学意义(P〈0.05)。在5%污水暴露组中,进水口和初沉池水样暴露雄性锦鲤血清Vtg的浓度间,差异无统计学意义(P〉0.05);二沉池水样暴露雄性锦鲤血清Vtg浓度低于进水口、初沉池水样,差异均有统计学意义(P〈0.05)。在10%污水暴露组中,二沉池水样暴露雄性锦鲤血清Vtg的浓度高于进水口、初沉池水样,差异均有统计学意义(P〈0.05)。相同浓度下游河水暴露雄性锦鲤血清的Vtg浓度均高于上游水样,差异均有统计学意义(P〈0.05)。5%污水暴露组与10%组暴露组雄性锦鲤的GSI均低于对照组,差异有统计学意义(P〈0.05)。在5%和10%污水暴露组中,二沉池水样暴露雄性锦鲤的GSI高� 展开更多
关键词 环境雌激素 污水处理 血清卵黄蛋白原 性腺脏器比
脊椎动物雌激素对家蚕卵黄原蛋白基因表达的调控及其与蜕皮激素受体相互作用的MST分析 预览
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作者 王勇 彭楚玥 +3 位作者 吴金鑫 沈关望 林英 夏庆友 《昆虫学报》 CSCD 北大核心 2017年第12期1367-1375,共9页
【目的】雌激素雌二醇(E:)在脊椎动物中通过雌激素受体(ER)调节脊椎动物的生长发育和繁殖。昆虫中并没有ER,但有研究显示某些昆虫能对E:产生一定的应答。本研究在明确E,能影响家蚕Bombyxmori卵黄原蛋白基因(Bmvg)表达的前提... 【目的】雌激素雌二醇(E:)在脊椎动物中通过雌激素受体(ER)调节脊椎动物的生长发育和繁殖。昆虫中并没有ER,但有研究显示某些昆虫能对E:产生一定的应答。本研究在明确E,能影响家蚕Bombyxmori卵黄原蛋白基因(Bmvg)表达的前提下,分析其对这一基因表达的调控机制。【方法】取Bm增高量表达时的家蚕雌性幼虫(上蔟后60h)脂肪体,用不同浓度(0.001,0.05,0.5,5和50nmol/L)E2处理后,通过qRT—PCR检测Bmvg表达的变化,分析家蚕对E,的应答;克隆家蚕蜕皮激素受体基因(BmEcRBl),构建原核表达载体,表达并纯化BmEcRBl蛋白后与E,体外孵育,通过微量热泳动仪(MST)分析E:与BmEcRBl的结合情况。【结果】不同浓度E,均显著抑制离体培养的雌蚕脂肪体中Bm增基因的表达。MST实验证实,E,与BmEcRBl具有一定的亲和力,解离常数(Kd)为77.8±22μmol/L。【结论】结果说明,R对Bmvg表达的影响是通过与蜕皮激素(20E)竞争性结合BmEcRBl实现的。 展开更多
关键词 家蚕 雌二醇 蜕皮激素 卵黄原蛋白 蜕皮激素受体 基因表达 微量热泳动仪
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荧光转基因斑马鱼Tg(ere-vtg:egfp)质粒的构建及验证
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作者 孙冰 许慧慧 +3 位作者 夏敏杰 丁训城 胡晶莹 李卫华 《环境与职业医学》 CSCD 北大核心 2017年第6期511-516,共6页
[目的]本研究旨在构建一种对17α-炔雌醇(17α-ethynylestradiol,EE2)敏感的荧光转基因斑马鱼模型,提供一种可直观地监测水中环境雌激素(environmental estrogens,EEs)污染程度的生物检测方法。[方法]构建Tg(ere-vtg:egfp)质粒,... [目的]本研究旨在构建一种对17α-炔雌醇(17α-ethynylestradiol,EE2)敏感的荧光转基因斑马鱼模型,提供一种可直观地监测水中环境雌激素(environmental estrogens,EEs)污染程度的生物检测方法。[方法]构建Tg(ere-vtg:egfp)质粒,显微注射到1-2个细胞期的斑马鱼胚胎中,经10 ng/L EE2暴露发出绿色荧光,建立能稳定遗传的Tg(ere-vtg:egfp)转基因斑马鱼系。将转基因斑马鱼纯合子幼鱼和胚胎暴露于不同浓度的EE2进行敏感性鉴定,并将转基因斑马鱼纯合子幼鱼暴露于多种EEs、雌激素结构类似物中进行特异性鉴定。[结果]经显微注射Tg(ere-vtg:egfp)质粒并进行基因筛选,成功构建Tg(ere-vtg:egfp)转基因斑马鱼。EE2诱导Tg(ere-vtg:egfp)转基因斑马鱼表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)与浓度、时间有关。当EE2质量浓度大于0.1 ng/L(131 hpf)时,可见转基因斑马鱼胚胎表达明显的GFP。当暴露于不同结构的雌激素类化合物时,Tg(ere-vtg:egfp)转基因斑马鱼幼鱼呈现GFP表达,而对于非雌激素类化合物在各浓度下均没有GFP表达。[结论]采用Tg(ere-vtg:egfp)转基因斑马鱼可直观地动态监测环境中EEs污染情况。 展开更多
关键词 环境雌激素 转基因斑马鱼 卵黄蛋白原 绿色荧光蛋白 环境监测
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