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表达中国小麦花叶病毒(CWMV)外壳蛋白基因增强烟草对CWMV的抗病性 认领
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作者 杨锦 靳鹏 +4 位作者 刘芃 羊健 王洋 戴良英 陈剑平 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期291-295,共5页
【目的】中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)是引起小麦黄花叶病的重要病原之一。获得表达CWMV外壳蛋白(coat protein,CP)的转基因烟草Nicotiana benthamiana(OECP)并分析其抗病性,为培育小麦抗病材料奠定工作基础。【... 【目的】中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)是引起小麦黄花叶病的重要病原之一。获得表达CWMV外壳蛋白(coat protein,CP)的转基因烟草Nicotiana benthamiana(OECP)并分析其抗病性,为培育小麦抗病材料奠定工作基础。【方法】利用体外重组DNA技术构建含有CWMV外壳蛋白基因的表达载体,并通过农杆菌介导的转化方法,获得OECP。进一步利用Western Blot和PCR检测明确CWMV的外壳蛋白在OECP中能够正常的表达。【结果】部分转基因阳性植株出现矮化表型。此外,OECP阳性植株接种CWMV后7 d的定量分析表明,OECP中CWMV运动蛋白的表达量显著受到抑制。【结论】在烟草中表达CWMV的CP蛋白基因可显著增强烟草对CWMV的抗病性。 展开更多
关键词 植物保护学 中国小麦花叶病毒(CWMV) 外壳蛋白 表达 烟草 抗病性
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中国小麦花叶病毒(CWMV)单克隆抗体制备及其检测应用 认领 被引量:9
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作者 刘欢 李娜 +3 位作者 周雪平 任春梅 程兆榜 吴建祥 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期711-719,共9页
中国小麦花叶病是引起小麦(Triticum aestivum)严重减产的中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)造成的。本研究旨在以制备的抗CWMV特异性单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb)为核心建立检测CWMV的血清学方法,为该... 中国小麦花叶病是引起小麦(Triticum aestivum)严重减产的中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)造成的。本研究旨在以制备的抗CWMV特异性单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb)为核心建立检测CWMV的血清学方法,为该病毒病的诊断和科学防控提供技术支撑。用CWMV提纯病毒免疫小鼠(Mus musculus),经细胞融合、培养基筛选培养、阳性细胞的检测与单克隆化后,共获得4株能分泌抗CWMV单克隆抗体的杂交瘤细胞株5H5、7C2、9A7和12E5,并注射入BALB/c小鼠(Mus musculus)腹腔制备单抗腹水;间接酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)表明,4种单抗腹水效价均达到10-7,抗体类型及亚类均为Ig G1、kappa链。Western blot分析表明,4株单克隆抗体均能与CWMV的外壳蛋白亚基有特异性反应。利用制备的单抗建立检测田间小麦样品中CWMV的抗原包被酶联免疫吸附实验(antigen coating plate enzyme-linked immunosorbent assay,ACP-ELISA)和斑点酶联免疫吸附实验(dot-enzyme-linked immunosorbent assay,dot-ELISA),结果表明,该两种血清学方法检测感染CWMV小麦植物组织粗提液呈特异性阳性反应,而检测感染小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)的小麦、感染大麦黄花叶病毒(Barley yellow mosaic virus,Ba YMV)的大麦(Hordeum vulgare)和健康小麦均呈阴性反应,说明建立的两种方法能特异性地检测小麦植物中的CWMV。灵敏度分析表明,以5H5和12E5单抗为核心建立的ACP-ELISA方法检测小麦病叶的灵敏度达到1∶81 920(W/V,g/m L),而以7C2和9A7单抗为核心建立的ACP-ELISA方法检测小麦病叶灵敏度达到1∶40 960(W/V,g/m L)倍稀释;以12E5和5H5单抗为核心建立的dot-ELISA方法检测小麦病叶的灵敏度达到1∶2 560倍稀释(W/V,g/m L),而以7C2和9A7单抗为核心建立的dot-ELISA方法的检测灵敏度达到1∶1 280倍稀释(W/V,g/m L)。田间样品检测� 展开更多
关键词 中国小麦花叶病毒(CWMV) 单克隆抗体(MAb) 抗原包被酶联免疫吸附试验(ACP-ELISA) 斑点酶联免疫吸附试验(dot-ELISA)
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