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高原鼠兔瘦素蛋白乳腺特异表达载体的构建及细胞表达
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作者 庞礴 于鸿浩 +4 位作者 张湑泽 谢玲 付林 赵新全 郭松长 《兽类学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期84-93,共10页
瘦素(Leptin)蛋白是调节机体能量代谢的关键因子之一。前期研究显示高原鼠兔Leptin蛋白发生了适应性进化。功能实验表明,在温暖或寒冷条件下高原鼠兔Leptin通过减少食物摄取和增加能量消耗调节能量平衡,显示了其调节适应性产热过程的潜... 瘦素(Leptin)蛋白是调节机体能量代谢的关键因子之一。前期研究显示高原鼠兔Leptin蛋白发生了适应性进化。功能实验表明,在温暖或寒冷条件下高原鼠兔Leptin通过减少食物摄取和增加能量消耗调节能量平衡,显示了其调节适应性产热过程的潜力。本研究以高原鼠兔Leptin cDNA为模板扩增高原鼠兔obese(ob)基因编码区序列504bp,改造并构建哺乳动物真核细胞乳腺特异表达载体pBC1-lep,同时通过组织块法原代培养建立奶山羊乳腺上皮细胞系,并通过pBC1-lep质粒脂质体法转染及转基因细胞的筛选,成功获得转染Leptin的阳性细胞。本研究为利用转基因动物实现奶山羊乳腺中特异表达高原鼠兔Leptin提供了一条可能的途径,完成了乳腺特异真核表达载体的构建。 展开更多
关键词 高原鼠兔 瘦素蛋白 乳腺上皮细胞 乳腺特异表达载体 pBC1
低水平葡萄糖对奶牛乳腺上皮细胞促炎症因子表达的影响 预览
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作者 张金友 黄鹤 +4 位作者 李伟 韩欢胜 甘文平 宋伟红 卫喜明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第5期1525-1531,共7页
本研究旨在探讨低葡萄糖水平对奶牛乳腺上皮细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、溶菌酶(LYZ)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素-6(IL-6)、乳铁蛋白(LF)和白细胞介素-8(CXCL8)等促炎症因子mRNA表达的影响。采用酶消化法将奶牛乳腺上... 本研究旨在探讨低葡萄糖水平对奶牛乳腺上皮细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、溶菌酶(LYZ)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素-6(IL-6)、乳铁蛋白(LF)和白细胞介素-8(CXCL8)等促炎症因子mRNA表达的影响。采用酶消化法将奶牛乳腺上皮细胞分离纯化后,分别在含有0.25、1.00和4.50mg/mL葡萄糖的完全培养液中培养24h,采用实时荧光定量PCR技术检测细胞中相关基因的表达。结果表明,上述基因的mRNA相对表达量在各葡萄糖浓度之间没有明显差异(P>0.05)。其中TNF-α和LYZ在各浓度葡萄糖中的表达量均非常少,iNOS的表达量居中,而IL-6、LF和CXCL8在各浓度组中的表达量相对较高。试验结果提示,葡萄糖浓度的减少并没有直接影响乳腺上皮细胞中TNF-α、LYZ、iNOS、IL-6、LF和CXCL8mRNA的基础性表达;乳腺上皮细胞在未受到感染的情况下,能够表达一定数量的iNOS、IL-6、LF和CXCL8,这些因子可以作为先天性免疫防御的储备,在受到感染的情况下能迅速应对病菌的入侵。 展开更多
关键词 奶牛 乳腺上皮细胞 葡萄糖 炎症
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雌激素对奶牛乳腺上皮细胞中酪蛋白和甘油三酯表达的影响 预览
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作者 武开乐 库西塔别克·买买提依不拉音 +2 位作者 马静 邵伟 余雄 《饲料工业》 北大核心 2019年第11期36-42,共7页
为探讨雌激素对乳腺上皮细胞中酪蛋白及甘油三酯表达的影响,试验于2018年2月至2018年4月在新疆肉乳用草食动物营养实验室进行,实验选取扩增生长状态良好的乳腺上皮细胞,添加0、50、100、200μmol/l雌激素孵育乳腺上皮细胞后,分别在12、2... 为探讨雌激素对乳腺上皮细胞中酪蛋白及甘油三酯表达的影响,试验于2018年2月至2018年4月在新疆肉乳用草食动物营养实验室进行,实验选取扩增生长状态良好的乳腺上皮细胞,添加0、50、100、200μmol/l雌激素孵育乳腺上皮细胞后,分别在12、24、48、72 h后检测各组细胞酪蛋白及甘油三酯表达的情况。结果显示,在12 h时,添加50μmol/l雌激素组CSN1的表达量极显著高于对照组(P<0.01),添加50μmol/l雌激素组TG表达量极显著高于对照组(P<0.01);50μmol/l雌激素添加组CSN1表达量显著高于200μmol/l雌激素添加组(P<0.05),且极显著高于100μmol/l雌激素添加组(P<0.01),100μmol/l雌激素添加组CSN2表达量显著高于200μmol/l雌激素添加组(P<0.05),50μmol/l雌激素添加组TG表达量极显著高于100、200μmol/l雌激素添加组(P<0.01);添加50μmol/l雌激素时,12、48、72 h的CSN1表达量显著高于24 h(P<0.05),在72 hCSN2表达量显著高于其他各时间点(P<0.05),24、72 h时TG表达量显著高于12、48h(P<0.05)。结果发现,添加雌激素可以促进乳腺上皮细胞中CSN1、CSN2及TG的表达。200μmol/l在一定条件下促进CSN1的表达效果最好;100、200μmol/l雌激素添加组均能够促进CSN2的表达,且100μmol/l促进CSN2的表达效果最好,尤其是在12、24 h;50、200μmol/l雌激素添加组可以促进TG的表达,但100μmol/l雌激素添加组能够抑制TG的表达。 展开更多
关键词 雌激素 乳腺上皮细胞 酪蛋白 甘油三酯 表达
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视黄醇对大肠杆菌诱导的大鼠乳腺上皮细胞NF-κB信号通路的抑制作用 预览
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作者 卢劲晔 顾蓓蓓 +2 位作者 马卉 卢炜 刘静 《江苏农业科学》 2019年第6期35-35,36-38共2页
为探讨视黄醇对大肠杆菌诱发的大鼠乳腺上皮细胞炎症反应的影响,原代培养大鼠乳腺上皮细胞,试验组预先经视黄醇处理24h后,对照组和试验组分别经大肠杆菌处理30min和60min,收集细胞和上清液。结果显示,大肠杆菌诱发能显著提高TLR4和NF-κ... 为探讨视黄醇对大肠杆菌诱发的大鼠乳腺上皮细胞炎症反应的影响,原代培养大鼠乳腺上皮细胞,试验组预先经视黄醇处理24h后,对照组和试验组分别经大肠杆菌处理30min和60min,收集细胞和上清液。结果显示,大肠杆菌诱发能显著提高TLR4和NF-κB表达,进而促进促炎性细胞因子TNF-α、IL-1β的释放以及炎性介质iNOS(诱导型-氧化氮合酶)的表达。视黄醇处理能抑制NF-κB表达,进而降低炎性细胞因子和炎性介质的释放和表达,从而达到保护乳腺上皮细胞的作用。 展开更多
关键词 视黄醇 乳腺上皮细胞 大鼠 NF-ΚB信号通路
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奶牛乳腺上皮细胞的培养及NOD2定位 预览
5
作者 徐丹丹 王刚 《养殖与饲料》 2019年第6期6-7,共2页
为获得纯净的奶牛乳腺上皮细胞并对细胞中的NOD2受体进行定位,本试验采用胶原酶Ⅰ消化法培养奶牛乳腺上皮细胞,通过免疫荧光技术对细胞进行鉴定并对细胞中NOD2进行定位。结果显示:本试验获得了纯净的奶牛乳腺上皮细胞;NOD2受体多表达于... 为获得纯净的奶牛乳腺上皮细胞并对细胞中的NOD2受体进行定位,本试验采用胶原酶Ⅰ消化法培养奶牛乳腺上皮细胞,通过免疫荧光技术对细胞进行鉴定并对细胞中NOD2进行定位。结果显示:本试验获得了纯净的奶牛乳腺上皮细胞;NOD2受体多表达于奶牛乳腺上皮细胞的细胞核中,且以核仁的表达量最高。 展开更多
关键词 奶牛 乳腺上皮细胞 胶原酶Ⅰ NOD2
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奶牛BTN1A1基因超表达促进乳腺上皮细胞脂滴合成
6
作者 张梦璐 樊晓娜 +5 位作者 邢智洋 王月影 王江 褚贝贝 韩立强 杨国宇 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期856-863,共8页
嗜乳脂蛋白(butyrophilin subfamily 1 member A1, BTN1A1)作为一种脂滴蛋白,与乳脂肪球的形成和分泌有关。为研究奶牛(Bos taurus) BTN1A1基因超表达对乳腺上皮细胞脂滴合成的影响,本研究PCR扩增了奶牛BTN1A1基因的CDS,构建Lenti-BTN1A... 嗜乳脂蛋白(butyrophilin subfamily 1 member A1, BTN1A1)作为一种脂滴蛋白,与乳脂肪球的形成和分泌有关。为研究奶牛(Bos taurus) BTN1A1基因超表达对乳腺上皮细胞脂滴合成的影响,本研究PCR扩增了奶牛BTN1A1基因的CDS,构建Lenti-BTN1A1慢病毒重组载体,用包装好的病毒感染奶牛乳腺上皮细胞,通过嘌呤霉素筛选获得超表达BTN1A1的乳腺上皮细胞株,提取细胞DNA,对超表达细胞株进行基因型鉴定,采用qRT-PCR和Western blot分析细胞株中BTN1A1基因和蛋白的表达;用尼罗红对细胞脂滴进行荧光标记,分析BTN1A1超表达对细胞脂滴的影响,构建BTN1A1-pEGFP-N1载体,观察BTN1A1蛋白与脂滴的共定位。结果显示,克隆的BTN1A1基因CDS区序列大约1 580 bp,成功构建重组的BTN1A1慢病毒载体,用5 μg/mL嘌呤霉素筛选得到BTN1A1超表达细胞株,基因型鉴定表明细胞株基因组中成功插入BTN1A1基因;与对照组细胞相比,超表达细胞株的BTN1A1基因mRNA表达增加489倍(P<0.001),蛋白表达也明显增强;检测脂滴的荧光值发现,随着细胞培养时间的延长,BTN1A1超表达显著增加了细胞脂滴含量(P<0.01),共定位发现BTN1A1蛋白主要分布于细胞脂滴上。结果表明,超表达BTN1A1促进乳腺上皮细胞的脂滴合成。本研究为阐明奶牛乳腺上皮细胞的脂滴合成机制提供了基础数据。 展开更多
关键词 嗜乳脂蛋白 乳腺上皮细胞 超表达 脂滴
SIGIRR对奶牛乳腺上皮细胞TLR4致炎信号通路的负调控作用
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作者 周秋格 刘畅 +2 位作者 赖金伦 郭爱珍 胡长敏 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期404-410,共7页
旨在探究SIGIRR对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)TLR4信号通路的负调控作用。构建SIGIRR—pEGFP真核表达载体,脂质体法转染HEK293T及BMECs,荧光显微镜观察及Westernblot验证融合蛋白SIGIRR—pEGFP的表达;LPS刺激转染后BMECs,检测TLR4及... 旨在探究SIGIRR对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)TLR4信号通路的负调控作用。构建SIGIRR—pEGFP真核表达载体,脂质体法转染HEK293T及BMECs,荧光显微镜观察及Westernblot验证融合蛋白SIGIRR—pEGFP的表达;LPS刺激转染后BMECs,检测TLR4及其信号通路分子IRAK1、IRAK4和TRAF6的变化,以及下游炎性因子IL-6、IL-8、IL-18和TNF-a的表达量。结果显示,成功构建SIGIRR-pEGFP真核表达载体,荧光检测重组质粒转染到HEK293T和BMECs中;Westernblot鉴定融合蛋白SIGIRR—pEGFP表达正确;重组质粒转染BMECs后,SIGIRR表达量较转染空载质粒组及空白未转染组显著升高(P〈0.01);炎性因子IL-6、IL-8、IL-10、TNFa、TLR4及下游信号分子IRAK1、IRAK4、TRAF6表达量显著降低(P〈0.01),转染空载质粒组与空白未转染组相比仅IRAKl表达量有差异(P〈0.05)。结果表明,本试验通过研究牛SIGIRR在BMECs中的作用,证实sIGIRR基因具有炎性负调控LPS-TLR4信号通路的作用,具有潜力成为临床治疗奶牛乳腺炎的新靶标。 展开更多
关键词 奶牛 乳腺 乳腺上皮细胞 SIGIRR TLR4信号通路 负性调控
氨基酸和乳腺发育对母畜产奶量和新生幼畜生长的营养意义(续) 预览
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作者 唐彩琰 夏俊花 +2 位作者 Reza Rezaei Zhenlong Wu Yongqing Hou 《国外畜牧学:猪与禽》 2018年第5期74-75,共2页
4乳腺上皮细胞(Mammary Epithelial Cells,MEC)合成乳汁 分析乳汁的组成成分不仅可以揭示乳汁中的常量和微量营养物质的含量,而且还能揭示乳汁含有的各种保护性因子,如抗菌脂质和蛋白质.大部分保护性因子并不是由乳腺自身专门产生的... 4乳腺上皮细胞(Mammary Epithelial Cells,MEC)合成乳汁 分析乳汁的组成成分不仅可以揭示乳汁中的常量和微量营养物质的含量,而且还能揭示乳汁含有的各种保护性因子,如抗菌脂质和蛋白质.大部分保护性因子并不是由乳腺自身专门产生的,相反它们直接来自母体的血液,并被转运到乳汁中.乳蛋白质包括酪蛋白、乳白蛋白、骨桥蛋白、松弛肽以及能结合铁离子以阻止微生物生长的乳铁蛋白、能水解细菌细胞壁的溶菌酶、 展开更多
关键词 微生物生长 乳腺发育 营养物质 新生幼畜 产奶量 氨基酸 母畜 乳腺上皮细胞
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金黄色葡萄球菌和大肠杆菌感染对BMEC炎性因子mRNA表达的影响 被引量:1
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作者 赵凌 潘阳阳 +5 位作者 何翃闳 李秦 樊江峰 王萌 崔燕 余四九 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2018年第7期910-917,共8页
为了探讨金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli)在不同时间点对奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)相关炎性因子转录水平的调节作用。本试验通过体外培养BMECs并对其进行免... 为了探讨金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli)在不同时间点对奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)相关炎性因子转录水平的调节作用。本试验通过体外培养BMECs并对其进行免疫细胞化学方法鉴定。选取纯化后的原代BMECs,分别加入活菌比(MOI)为100∶1的最佳浓度的金黄色葡萄球菌或大肠杆菌对细胞进行感染,分别在感染后第0、3、6、9、12小时采样,采用qRT-PCR法检测IL1R1、IL-1β及TNF-α基因mRNA的表达情况。结果显示,在添加1×102CFU/m L金黄色葡萄球菌作用至第6小时IL1R1基因相对表达量显著高于其他时间点(P〈0.5);在添加1×104CFU/m L金黄色葡萄球菌作用至第9小时,IL-1β基因相对表达量显著高于其他时间点(P〈0.5);在添加1×103CFU/m L金黄色葡萄球菌作用至第12小时,TNF-α基因相对表达量显著高于其他时间点(P〈0.5)。在添加1×101CFU/m L大肠杆菌作用至第6小时,IL1R1基因相对表达量显著高于其他时间点(P〈0.5);在添加1×103CFU/m L大肠杆菌作用至第9小时,IL-1β基因相对表达量显著高于其他时间点(P〈0.5);在添加1×104CFU/m L大肠杆菌作用至第12小时,TNF-α基因相对表达量显著高于其他时间点(P〈0.5)。本试验结果表明,使用最佳浓度金黄色葡萄球菌或大肠杆菌作用于BMECs时,在最佳感染时间点可显著上调IL1R1、IL-1β及TNF-α基因mRNA的表达量。IL1R1、IL-1β及TNF-αmRNA表达量在临床上可作为创伤后炎症反应的敏感指标,能评价炎症反应的严重程度,对乳腺炎的病程诊断具有重要意义。本试验结果为进一步研究细菌感染引起乳腺炎的致病机理提供了理论依据。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 奶牛 乳腺上皮细胞 实时荧光定量PCR
赖氨酸对奶牛乳腺上皮细胞内乳蛋白合成相关基因表达和蛋白磷酸化的影响 预览
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作者 陈璐 赵艳丽 +2 位作者 郭晓宇 史彬林 闫素梅 《动物营养学报》 CSCD 北大核心 2018年第8期3142-3150,共9页
本试验旨在研究赖氨酸(Lys)对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)内乳蛋白合成相关基因表达和蛋白磷酸化的影响,深入探讨Lys对乳蛋白合成影响的机理。将第3代BMECs随机分为6组,各组培养基中Lys的浓度分别为0.5(对照)、1.0、2.0、4.0、8.0和1... 本试验旨在研究赖氨酸(Lys)对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)内乳蛋白合成相关基因表达和蛋白磷酸化的影响,深入探讨Lys对乳蛋白合成影响的机理。将第3代BMECs随机分为6组,各组培养基中Lys的浓度分别为0.5(对照)、1.0、2.0、4.0、8.0和16.0 mmol/L,每组6个重复。37℃、5%CO_2培养48 h,之后采用化学发光法测定BMECs内三磷酸腺苷(ATP)的含量,采用实时荧光定量PCR法测定乳蛋白合成相关基因表达量以及采用蛋白质免疫印迹法测定乳蛋白合成相关蛋白的磷酸化水平。结果表明:随着Lys浓度的增加,ATP含量呈趋于显著的二次曲线升高(P=0.050);κ-酪蛋白(CSN3)(P=0.093)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)(P=0.005)、真核起始因子4E(e IF4E)(P=0.076)和磷酸腺苷活化的蛋白激酶α1(AMPKα1)基因表达量(P=0.045)呈显著或趋于显著的二次曲线变化,均为先升高后降低;α-酪蛋白(CSN1S1)基因表达量(P=0.081)及mTOR(P=0.038)和p70核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)磷酸化水平(P=0.022)呈显著或趋于显著的一次线性降低;磷酸腺苷活化的蛋白激酶(AMPK)的磷酸化水平呈显著的一次线性升高(P=0.014)。方差分析结果显示,添加Lys显著影响ATP含量、乳蛋白合成相关基因表达量及e IF4E磷酸化水平(P〈0.05),其中,ATP含量以2.0-16.0 mmol/L组,CSN1S1、β-酪蛋白(CSN2)、信号转导和转录激活因子5(STAT5)基因表达量以1.0-2.0 mmol/L组,mTOR基因表达量以1.0-8.0 mmol/L组,CSN3基因表达量以1.0-4.0 mmol/L组,酪氨酸激酶2(JAK2)基因表达量以1.0-16.0 mmol/L组,S6K1基因表达量以2.0 mmol/L组,e IF4E基因表达量以2.0-8.0 mmol/L组,e IF4E磷酸化水平以2.0-4.0 mmol/L组时促进效果较好,但16.0 mmol/L组CSN1S1、CSN3、STAT5及mTOR基因表达量受到抑制,1.0-16.0 mmol/L组真核起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)基因表达量受到抑制。总之,Lys浓度为1.0-2.0 mmo 展开更多
关键词 奶牛 乳腺上皮细胞 赖氨酸 乳蛋白
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PDGF-B基因沉默对LPS介导小鼠乳腺上皮细胞分泌IL-6和TNF—α的影响
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作者 易琼 张小艺 王鲁 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期372-377,392共7页
旨在观察PDGF—B基因沉默对LPS诱导小鼠乳腺上皮细胞分泌IL-6和TNF—α的影响,为揭示乳腺上皮细胞的免疫机制提供参考数据。采用siRNA转染技术对PDGF—B基因进行沉默,用实时荧光定量RT—PCR方法筛选最佳转染条件,并检测沉默后LPS介... 旨在观察PDGF—B基因沉默对LPS诱导小鼠乳腺上皮细胞分泌IL-6和TNF—α的影响,为揭示乳腺上皮细胞的免疫机制提供参考数据。采用siRNA转染技术对PDGF—B基因进行沉默,用实时荧光定量RT—PCR方法筛选最佳转染条件,并检测沉默后LPS介导其下游信号P13KmRNA的表达量,用ELISA法检测其下游信号P13K蛋白含量和LPS介导细胞分泌前炎症细胞因子IL-6和TNF—α的含量。结果显示,选用PDGF-B-mus-886片段的50nmol/L浓度转染组能极显著抑制PDGF-B的mRNA表达(P〈0.01);PDGF—B沉默后,LPS刺激下其下游P13K的mRNA和蛋白表达量与对照组相比均呈显著性降低(P〈0.05);细胞分泌IL-6的量与对照组相比呈显著性降低(P〈0.05),而分泌TNF-α的量各组无显著性变化(P〉0.05)。结果表明,PDGF-B可引起LPS介导乳腺上皮细胞IL-6分泌量的改变,因此,PDGF-B可作为靶基因深入研究乳腺上皮细胞的免疫功能,为乳腺炎症、肿瘤等相关乳腺疾病的治疗提供新的思路及试验数据,为新药的开发和应用提供理论依据。 展开更多
关键词 PDGF—B siRNA 乳腺上皮细胞 IL-6 TNF—α LPS 小鼠
脂磷壁酸体外诱导奶牛乳腺上皮细胞炎症模型的建立与评价
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作者 孙静 冶冬阳 +7 位作者 王旭荣 侯艳华 张凯 张景艳 王磊 张康 李建喜 杨志强 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2018年第8期1057-1065,共9页
旨在通过脂磷壁酸(LTA)诱导的方法,体外建立奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)炎症模型,为奶牛乳腺炎的研究提供合理模型。采用Ⅱ型胶原酶消化法分离培养BMECs,利用差时胰酶消化法纯化BMECs。通过测定BMECs骨架蛋白——角蛋白18对所培养的细... 旨在通过脂磷壁酸(LTA)诱导的方法,体外建立奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)炎症模型,为奶牛乳腺炎的研究提供合理模型。采用Ⅱ型胶原酶消化法分离培养BMECs,利用差时胰酶消化法纯化BMECs。通过测定BMECs骨架蛋白——角蛋白18对所培养的细胞进行鉴定,以确定其为BMECs,并用LTA侵染BMECs,以培养细胞的形态学特征和炎性因子作为炎症发生和发展的判断指标。用不同质量浓度(0、10、20、40、80 g/m L)的LTA对BMECs作用不同时间(12、24、48 h),采用MTT法检测细胞活力;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)快速检测奶牛肿瘤坏死因子(TNF-α)和奶牛白细胞介素1β(IL-1β)的蛋白表达水平;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测炎性应答标志TNF-α和IL-1β基因的表达水平,以确定建立模型的最佳质量浓度与时间。结果表明,在体外培养的BMECs特异性蛋白——角蛋白18表达呈阳性;MTT、ELISA和qRT-PCR试验结果显示LTA质量浓度为40 g/m L时处理BMECs 24 h可明显提高TNF-α和IL-1β的蛋白和基因表达水平。 展开更多
关键词 奶牛 乳腺上皮细胞 体外培养 脂磷壁酸 细胞因子 炎症模型
中国荷斯坦奶牛PRL基因第3外显子多态性对牛乳腺上皮细胞增殖的影响
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作者 侯佳妮 牛淑玲 +1 位作者 刘春杰 徐晶 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2018年第15期97-100,241共5页
为了研究催乳素(prolactin,PRL)基因6 216位点(A/G)突变对牛乳腺上皮细胞增殖能力的影响,试验通过体外合成PRL基因编码区(CDs区)及突变后的PRL基因CDs区PRL-mut构建真核表达载体,设置PRL转染组、PRL-mut转染组、空载转染组,通过q ... 为了研究催乳素(prolactin,PRL)基因6 216位点(A/G)突变对牛乳腺上皮细胞增殖能力的影响,试验通过体外合成PRL基因编码区(CDs区)及突变后的PRL基因CDs区PRL-mut构建真核表达载体,设置PRL转染组、PRL-mut转染组、空载转染组,通过q PCR和免疫印迹试验(Westernblot)在细胞水平上验证了PRL和PRL-mut的功能,检测了细胞的增殖水平。结果表明:荧光显微镜下三组均有较强的绿色荧光;与PRL转染组相比,PRL-mut转染组可显著增加PRLP、Stat5a和SREBP的mRNA和蛋白质表达水平(P〈0.05);与PRL转染组、空载转染组相比,PRL-mut转染组细胞增殖显著增加(P〈0.05)。说明PRL-mut基因可显著促进牛乳腺上皮细胞增殖。 展开更多
关键词 乳腺上皮细胞 PRL PRL-mut 细胞增殖
赖氨酸对奶牛乳腺上皮细胞内乳糖合成相关基因表达的影响
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作者 陈璐 赵艳丽 +2 位作者 郭晓宇 史彬林 闫素梅 《动物营养学报》 CSCD 北大核心 2018年第9期3593-3598,共6页
本试验旨在研究赖氨酸(Lys)对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)内乳糖合成相关基因表达的影响,深入探讨Lys对乳糖合成的影响机理。将第3代BMECs随机分为6个组,每组6个重复,各组细胞培养液中Lys的终浓度分别为0.5(对照)、1.0、2.0、4.0、8.... 本试验旨在研究赖氨酸(Lys)对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)内乳糖合成相关基因表达的影响,深入探讨Lys对乳糖合成的影响机理。将第3代BMECs随机分为6个组,每组6个重复,各组细胞培养液中Lys的终浓度分别为0.5(对照)、1.0、2.0、4.0、8.0和16.0 mmol/L,细胞在37℃、5%CO2条件下培养48 h。结果表明:适宜浓度Lys对乳糖含量和葡萄糖转运载体蛋白1(GLUT1)、已糖激酶Ⅰ(HKⅠ)和已糖激酶Ⅱ(HKⅡ)基因表达量的影响呈显著的剂量依赖关系(P〈0.05);方差分析结果显示,添加Lys显著或趋于显著影响乳糖含量及乳糖合成相关基因表达。 展开更多
关键词 奶牛 乳腺上皮细胞 赖氨酸 乳糖 基因表达
全文增补中
PRSS23基因干扰与过表达载体构建及对牛MEC的影响
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作者 李晓慧 耿亚楠 +6 位作者 姜平 夏立新 刘小川 葛言亮 孙豪 杨润军 赵志辉 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期1008-1012,1034共6页
以奶牛乳腺上皮细胞为材料,在克隆PRSS23基因的基础上,构建真核过表达栽体和干扰栽体并将其转染到奶牛乳腺上皮细胞中,利用qRTPCR的方法检测PRSS23基因在mRNA水平上的表达情况,同时测定细胞内甘油三酯的含量。结果显示:在mRNA水平... 以奶牛乳腺上皮细胞为材料,在克隆PRSS23基因的基础上,构建真核过表达栽体和干扰栽体并将其转染到奶牛乳腺上皮细胞中,利用qRTPCR的方法检测PRSS23基因在mRNA水平上的表达情况,同时测定细胞内甘油三酯的含量。结果显示:在mRNA水平上,过表达组与对照组相比表达量差异显著,其甘油三酯水平显著升高;干扰组与对照组相比,在mRNA水平上差异表达显著,甘油三酯含量也显著升高。 展开更多
关键词 PRSS23 乳脂代谢 过表达载体 干扰载体 乳腺上皮细胞
奶牛乳腺上皮细胞中SCAP和SREBP1蛋白调控SCD基因表达的作用研究 预览 被引量:1
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作者 韩立强 孙宇 +2 位作者 付彤 廉红霞 高腾云 《畜牧兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期652-658,共7页
旨在研究奶牛乳腺上皮细胞中固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)对固醇调节元件结合蛋白(SREBP1)调控的硬脂酰辅酶A去饱和酶基因(SCD)表达的影响。培养奶牛乳腺上皮细胞,在细胞中转染奶牛SCD基因启动子载体,同时转染SREBP1和... 旨在研究奶牛乳腺上皮细胞中固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)对固醇调节元件结合蛋白(SREBP1)调控的硬脂酰辅酶A去饱和酶基因(SCD)表达的影响。培养奶牛乳腺上皮细胞,在细胞中转染奶牛SCD基因启动子载体,同时转染SREBP1和SCAP真核表达载体作为处理,采用双荧光素酶报告基因系统检测转染SREBP1和SCAP对SCD基因启动子活性的影响;采用免疫荧光技术观察SREBP1在细胞核的表达,采用荧光定量PCR检测SCD基因mRNA的表达。结果表明,与转染pcDNA3.1载体的对照组相比,转染SCAP对SCD启动子活性无显著影响;转染SREBP1和共转染SCAP/SREBP1极显著增加SCD基因启动子活性值(P〈0.01),并且SCAP的转染剂量与SCD的启动子活性值之间具有极显著的量效关系(P〈0.01);在乳腺上皮细胞中转染SCAP后,能够增强SREBP1在细胞核的表达;细胞转染SREBP1和共转染SCAP/SREBP1后,SCD基因mRNA的表达分别显著上调1.23倍和1.54倍(P〈0.05)。本研究表明,奶牛SCAP可以增加SREBP1蛋白在细胞核中的表达,促进对SCD基因的转录激活作用。 展开更多
关键词 奶牛 乳腺上皮细胞 固醇调节元件结合蛋白 固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白 基因表达调控
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奶牛脐带间充质干细胞介导PI3K/Akt/mTOR信号通路对乳腺上皮细胞凋亡调控研究 预览
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作者 王立文 余雄 +2 位作者 赵艳坤 李杨 邵伟 《中国畜牧杂志》 北大核心 2018年第3期50-53,共4页
本实验旨在探究脐带间充质干细胞(UC-MSCs)介导磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路对乳腺上皮细胞(BMECs)凋亡的调控作用。将处于对数生长期的UC-MSCs与BMECs按照1:2的比例混合共培养72... 本实验旨在探究脐带间充质干细胞(UC-MSCs)介导磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路对乳腺上皮细胞(BMECs)凋亡的调控作用。将处于对数生长期的UC-MSCs与BMECs按照1:2的比例混合共培养72 h,对照单独培养的UC-MSCs和BMECs,再分别用PI3K抑制剂LY294002(50μmol/mL)和mTOR抑制剂RAPA(50 nmol/mL)孵育细胞48 h,采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况。结果表明:将UC-MSCs与BMECs共培养,能够显著抑制BMECs细胞凋亡,加入PI3K抑制剂LY294002和mTOR抑制剂RAPA孵育BMECs后,极显著地促进了BMECs细胞凋亡(P〈0.01),但是与UC-MSCs共培养后,这种抑制作用明显得到抵消。UC-MSCs通过介导PI3K/Akt/mTOR信号通路参与调控BMECs的凋亡;抑制剂LY294002和RAPA通过阻断PI3K/Akt/mTOR通路促进BMECs凋亡。综上可知,UC-MSCs能够激活被阻断的PI3K/Akt/mTOR信号通路,使其重新参与调控BMECs。 展开更多
关键词 脐带间充质干细胞 乳腺上皮细胞 共培养 PI3K/AKT/MTOR 凋亡
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苜蓿黄酮对脂多糖刺激下乳成分合成相关基因表达的影响
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作者 占今舜 陈小连 +1 位作者 詹康 赵国琦 《中国农业大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期50-56,共7页
为探索苜蓿黄酮对脂多糖(LPS)刺激下乳成分合成相关基因表达的影响,采用体外细胞培养技术,将奶牛乳腺上皮细胞分成4个组:1)基础培养基(Con);2)基础培养基中加入1μg/mL的LPS(L);3)基础培养基中加入1μg/mL的LPS和75μg/mL苜... 为探索苜蓿黄酮对脂多糖(LPS)刺激下乳成分合成相关基因表达的影响,采用体外细胞培养技术,将奶牛乳腺上皮细胞分成4个组:1)基础培养基(Con);2)基础培养基中加入1μg/mL的LPS(L);3)基础培养基中加入1μg/mL的LPS和75μg/mL苜蓿黄酮(L+F);4)基础培养基中加入75μg/mL苜蓿黄酮(F)。细胞在37℃,5%CO2的培养箱中培养12h后,对其乳成分合成相关基因的表达进行测定。结果表明:1)相对于对照组,L组和L+F组的酪氨酸激酶(JAK2)表达显著降低(P〈0.01),信号转导子和转录激活子(STAT5)和真核起始因子4E(eIF4E)表达显著升高(P〈0.05)。L+F组真核细胞始动因子4E结合蛋白1(4EBP1)的表达显著高于F组(P〈0.01),核糖体S6蛋白激酶1(S6K1)的表达显著高于L组和对照组(P〈0.05)。2)F组胆固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)的表达显著低于L组(P〈0.05),过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)的表达则相反;F组脂肪酸转运蛋白1(FATP1)和脂肪酸转运蛋白4(FATP4)的表达显著低于L和L+F组(P〈0.01),脂肪酸结合蛋白3(FABP3)和乙酰辅酶A羧化酶(ACACA)的表达则相反;对照组硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)的表达显著高于其他各组(P〈0.01)。3)L+F组葡萄糖转运蛋白1(Glut1)(P〈0.05)、葡萄糖转运蛋白4(Glut4)(P〈0.05)和葡萄糖转运蛋白8(Glut8)(P〈0.01)的表达显著高于对照组,F组己糖激酶2(HK2)的表达显著低于L组和L+F组(P〈0.05),而β-1,4-半乳糖基转移酶(β-1,4-Gal T)的表达最低。因此,在无LPS刺激下,添加苜蓿黄酮可能会抑制乳脂合成;在LPS刺激下,添加苜蓿黄酮可能会促进乳蛋白和乳糖的合成。 展开更多
关键词 苜蓿黄酮 脂多糖 乳腺上皮细胞 奶牛
崂山奶山羊乳腺上皮细胞系的建立及鉴定 预览
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作者 丰艳妮 崔连涛 +5 位作者 初美强 王彦迪 赵勇 于帅 马冬雪 闵令江 《中国畜牧杂志》 北大核心 2018年第1期112-115,共4页
实验采用组织块培养法、高密度培养和连续传代法等对崂山奶山羊乳腺上皮细胞进行培养、传代及鉴定。在对纯化的乳腺上皮细胞进行形态观察和生长动力学分析的基础上,进行染色体核型分析、免疫组化、质粒转染等方面的研究。结果表明:利... 实验采用组织块培养法、高密度培养和连续传代法等对崂山奶山羊乳腺上皮细胞进行培养、传代及鉴定。在对纯化的乳腺上皮细胞进行形态观察和生长动力学分析的基础上,进行染色体核型分析、免疫组化、质粒转染等方面的研究。结果表明:利用组织块培养法能够有效地进行崂山奶山羊乳腺上皮细胞的培养,并已传至40代,核型分析其染色体众数为60条,证明得到具有正常形态的崂山奶山羊乳腺细胞;进一步免疫组化显示培养细胞的波形蛋白、细胞上皮膜抗原、角蛋白和β-酪蛋白等上皮细胞标记蛋白呈阳性,证明该细胞为崂山奶山羊乳腺上皮细胞;最后油红染色可见到明显的脂肪滴,外源质粒PEGFP-N1-H-FABP能够稳定地在培养细胞中表达,表明所获得的细胞具有分泌功能。由此可见,利用组织块培养法能够成功建立崂山奶山羊乳腺上皮细胞系,并且所培养的乳腺上皮细胞具备一定的泌乳潜能。 展开更多
关键词 崂山奶山羊 乳腺上皮细胞 鉴定 特性
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黄曲霉毒素B1在乳畜中的转化 预览
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作者 吴坤坦 齐德生 《饲料工业》 北大核心 2018年第20期59-64,共6页
黄曲霉毒素主要是由曲霉菌产生的一类具有高致癌性的次级代谢产物,我国饲料及饲料原料普遍受到黄曲霉毒素B1污染。乳畜摄入黄曲霉毒素B1后,代谢生成的羟基化产物黄曲霉毒素M1可通过乳汁污染乳及乳制品,并因这两种毒素都具有极强的毒... 黄曲霉毒素主要是由曲霉菌产生的一类具有高致癌性的次级代谢产物,我国饲料及饲料原料普遍受到黄曲霉毒素B1污染。乳畜摄入黄曲霉毒素B1后,代谢生成的羟基化产物黄曲霉毒素M1可通过乳汁污染乳及乳制品,并因这两种毒素都具有极强的毒性越来越受到人们的关注。黄曲霉毒素B1在乳畜的肝脏、瘤胃和乳腺等部位均可代谢转化,黄曲霉毒素M1向乳中的转移受到多种因素的影响。文章从黄曲霉毒素Bl的代谢与转移排泄、影响黄曲霉毒素M1的转化因素以及黄曲霉毒素B1对乳腺上皮细胞和瘤胃微生物的影响进行论述。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素B1 瘤胃微生物 乳腺上皮细胞 黄曲霉毒素M1 转化效率
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