期刊文献+
共找到51篇文章
< 1 2 3 >
每页显示 20 50 100
人源化抗PSMA单链抗体的筛选与鉴定 预览
1
作者 孟繁伟 徐海月 +1 位作者 方芳 王立国 《吉林医药学院学报》 2019年第3期166-168,共3页
目的利用全人单链可变区噬菌体抗体库筛选与前列腺特异性膜抗原(PSMA)特异性结合的全人单链抗体。方法利用PSMA重组抗原在全人单链可变区噬菌体抗体库进行富集筛选。阳性克隆用phage ELISA和Western-Blot鉴定。结果经4轮筛选,每轮筛选... 目的利用全人单链可变区噬菌体抗体库筛选与前列腺特异性膜抗原(PSMA)特异性结合的全人单链抗体。方法利用PSMA重组抗原在全人单链可变区噬菌体抗体库进行富集筛选。阳性克隆用phage ELISA和Western-Blot鉴定。结果经4轮筛选,每轮筛选抗体库的出入库比不断提高,表明每轮库中的阳性克隆得到富集。从第4轮筛选出库的平皿中挑取30个菌落克隆,诱导噬菌体。phage ELISA检测获得3株阳性克隆。3个阳性克隆经过测序比对,核酸序列基本一致。Western-Blot鉴定结果显示,筛选出的单链抗体能与PSMA重组蛋白特异性结合。结论成功从全人源单链抗体库中筛选出具有结合PSMA抗原的特异性的人源化单链抗体,从而为前列腺癌的靶向诊断和治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 PSMA 单链抗体 噬菌体展示技术
在线阅读 下载PDF
抗PSMA全人源单链抗体制备、鉴定及初步应用 预览
2
作者 涂少华 刘冲 +3 位作者 阳圣 朱敏 吴译筠 陶嵘 《标记免疫分析与临床》 CAS 2017年第8期943-946,960共5页
目的 构建抗PSMA全人源单链抗体库,筛选抗PSMA人源单链抗体(ScFv)并鉴定,应用人源ScFv进行分子显像.方法 从健康人外周血淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增人轻链和重链可变区基因,重叠PCR拼接轻重链可变区基因,构建ScFv的表达载... 目的 构建抗PSMA全人源单链抗体库,筛选抗PSMA人源单链抗体(ScFv)并鉴定,应用人源ScFv进行分子显像.方法 从健康人外周血淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增人轻链和重链可变区基因,重叠PCR拼接轻重链可变区基因,构建ScFv的表达载体pDF-ScFv,电转染大肠杆菌XL1 Blue,获得噬菌体单链抗体库,酶切鉴定及测序分析,用PSMA抗原进行富集筛选,阳性克隆用Western-Blot 和DNA指纹图谱鉴定.应用直接标记法将125I标记在ScFv上,通过尾静脉注入前列腺癌动物模型体内,2h后进行小动物SPECT/CT显像,观察人源ScFv对前列腺癌的定位性能.结果 成功构建抗PSMA全人源单链抗体库,库容约2.16×10^8,插入片段经酶切及DNA测序证实为人抗体轻链和重链可变区基因.筛选出6株ScFv阳性克隆,Western-Blot证实6株ScFv均能与PSMA抗原特异性结合,DNA指纹图谱鉴定6株ScFv可变区基因具有多样性.动物模型的分子显像:人源ScFv能与前列腺癌PSMA抗原特异性结合,并使肿瘤显像.结论 成功构建了一个全人源噬菌体单链抗体库,并筛选出了抗PSMA单链抗体,单链抗体在动物模型体内能靶向结合前列腺癌细胞,从而为前列腺癌的靶向诊断和治疗奠定了基础. 展开更多
关键词 PSMA 单链抗体 筛选
在线阅读 下载PDF
甲状腺未分化癌人源单链抗体制备及初步鉴定
3
作者 刘倩 刘琼 +4 位作者 李文波 许璐 周静 刘影 庞华 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期981-985,共5页
目的从大容量甲状腺未分化癌(anaplastic thyroid carcinoma,ATC)人源单链抗体(single chain variable fragments,sc Fv)库中筛选特异性抗ATC单链抗体并进行生物特性鉴定。方法对该抗体库进行4轮筛选后,挑取抗ATC阳性克隆感染E.coli... 目的从大容量甲状腺未分化癌(anaplastic thyroid carcinoma,ATC)人源单链抗体(single chain variable fragments,sc Fv)库中筛选特异性抗ATC单链抗体并进行生物特性鉴定。方法对该抗体库进行4轮筛选后,挑取抗ATC阳性克隆感染E.coli HB2151;并用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导该sc Fv抗体可溶性表达,ELISA法检测其可溶性表达;经HiTrap^TM Anti E-tag亲和柱层析纯化抗体;细胞ELISA鉴定可溶性抗体与细胞结合的特异性,分别设置TT细胞、ARO细胞、人肝癌Hep G2细胞及PBS空白对照组,用酶标仪检测各组在450 nm处的吸光度。SDS-PAGE法及Western blot检测抗体的表达和相对分子质量;流式细胞术观察细胞凋亡情况。结果经4轮筛选后抗体实现了显著富集,并得到了纯化抗体。ELISA结果表明筛选出的抗体与甲状腺未分化癌细胞能够特异性结合。SDS-PAGE和Western blot检测结果显示ATC抗体的相对分子质量约为2.9×10^4。流式细胞术结果显示ARO细胞经sc Fv特异性作用后细胞明显凋亡。结论成功获得抗ATC特异性人源单链抗体,鉴定结果显示抗体活性较好。 展开更多
关键词 噬菌体 单链抗体 甲状腺未分化癌 鉴定
利用大型天然噬菌体抗体库筛选抗死亡受体5人源抗体 被引量:1
4
作者 蒋效 何立东 +5 位作者 王欲晓 丁立 吴成林 熊丽娟 周丽君 王育红 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期833-837,共5页
目的从大容量天然噬菌体抗体库中筛选抗人死亡受体5(DR.5)单链抗体(scFv)并对其抗原结合活性进行鉴定。方法以前期真核表达纯化的DR5-Fc蛋白包被筛选管,从自主构建的大容量天然噬菌体抗体库中,通过4轮筛选过程获得噬菌体抗体,... 目的从大容量天然噬菌体抗体库中筛选抗人死亡受体5(DR.5)单链抗体(scFv)并对其抗原结合活性进行鉴定。方法以前期真核表达纯化的DR5-Fc蛋白包被筛选管,从自主构建的大容量天然噬菌体抗体库中,通过4轮筛选过程获得噬菌体抗体,采用免疫细胞化学染色、ELISA鉴定其抗原结合活性;DNA指纹图谱分析和序列测定确定其抗体类型。结果经过4轮筛选,获得26株与DR5特异性结合的阳性克隆,DNA指纹分析有4种不同的可变区片段;经过基因测序,分析可变区基因的亚群,并将其制备成可溶性的抗体,进一步用免疫细胞化学技术证实所获得的抗体可特异性结合SW480细胞的DR5蛋白。结论利用噬菌体抗体库技术成功获得了特异性抗DR5的人源性scFv。 展开更多
关键词 抗死亡受体5抗体 单链抗体 大容量噬菌体抗体
甲状腺髓样癌人源噬菌体单链抗体的筛选及初步鉴定 预览
5
作者 刘琼 庞华 +2 位作者 奚级梅 李文波 许璐 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1199-1203,共5页
目的:从大容量甲状腺髓样癌(medullary thyroid carcinoma,MTC)人源噬菌体单链抗体(single chain variable fragments,sc Fv)库中筛选出特异的抗MTC单链抗体,并对其生物学特性进行鉴定。方法:分别以甲状腺上皮细胞TEC细胞株和MTC... 目的:从大容量甲状腺髓样癌(medullary thyroid carcinoma,MTC)人源噬菌体单链抗体(single chain variable fragments,sc Fv)库中筛选出特异的抗MTC单链抗体,并对其生物学特性进行鉴定。方法:分别以甲状腺上皮细胞TEC细胞株和MTC细胞TT细胞株为抗原进行5轮"吸附-洗脱-扩增"的富集循环,筛选出抗MTC抗体,将筛选出的阳性克隆感染E.coli HB2151;异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导抗体可溶性表达,HiTrapTM Anti E-tag柱纯化表达抗体;SDS-PAGE和Western blot检测抗体表达和相对分子质量;ELISA检测可溶性sc Fv的特异性和免疫活性,分为TT细胞组、SW480细胞组、TEC细胞组和PBS空白对照组,分别检测各组在酶标仪A450 nm处的吸光度;四甲基偶氮唑盐比色分析法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)分别检测TT细胞组、SW 480细胞组与不同浓度sv Fv反应并读取A490 nm处的吸光度,设置空白对照PBS组,分别计算细胞抑制率。结果:5轮筛选后,抗体得到了明显富集。随机挑取单个细菌克隆,phage ELISA和sc Fv ELISA阳性率分别为65%和50%。SDS-PAGE、Western blot结果显示MTC特异性抗体分子量为28 k D左右。ELISA结果显示,TT细胞组的吸光度(0.41±0.12)较SW 480细胞组(0.20±0.03)、TEC细胞组(0.13±0.01)、PBS空白对照组(0.07±0.01)明显增加(P=0.000)。MTT法结果显示,TT细胞组和SW 480细胞组在sc Fv浓度为0.1、1、10μmol/L时,2细胞株间抑制率有统计学意义,统计量分别是t=2.881,P=0.02;t=5.073,P=0.006;t=7.324,P=0.000,且在sc Fv浓度为10μmol/L时,对TT细胞的抑制率最高(0.59±0.15)%。结论:利用噬菌体抗体库技术成功获得了特异性的抗MTC人源单链抗体。 展开更多
关键词 噬菌体抗体 单链抗体 甲状腺髓样癌 筛选
在线阅读 下载PDF
抗TSLP全人源单链抗体筛选与初步鉴定 预览 被引量:2
6
作者 朱建光 袁青 +2 位作者 黄黎 徐文峰 年四季 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1662-1665,1669共5页
目的:表达TSLP蛋白,从全人源单链抗体文库中筛选得到抗TSLP单链抗体。方法:扩增TSLP cDNA,将目的基因与表达载体pET101/D-TOPO连接,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并对表达产物进行纯化鉴定。以生物素化的TSLP蛋白为抗原从前期构建的... 目的:表达TSLP蛋白,从全人源单链抗体文库中筛选得到抗TSLP单链抗体。方法:扩增TSLP cDNA,将目的基因与表达载体pET101/D-TOPO连接,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并对表达产物进行纯化鉴定。以生物素化的TSLP蛋白为抗原从前期构建的全人源抗体文库中采用噬菌体展示技术筛选抗TSLP全人源单链抗体(scFv)。结果:扩增的TSLP cDNA片段大小为423 bp左右。表达的TSLP蛋白大小为26 kD左右,Dot blot及Western blot鉴定显示表达的蛋白正确,为TSLP目的蛋白。以生物素化的TSLP蛋白为抗原,采用噬菌体展示技术对全人源抗体文库进行3轮富集,通过ELISA检测有35%的scFv与TSLP有结合特性。将筛选的与TSLP结合能力强的单链抗体进行了Western blot鉴定和测序。结论:成功筛选到抗TSLP全人源单链抗体。 展开更多
关键词 TSLP 单链抗体 筛选
在线阅读 下载PDF
IL-4、IL-13蛋白表达及抗IL-4、IL-13人源单链抗体的筛选 预览 被引量:3
7
作者 袁青 黄黎 +2 位作者 郭夕源 叶迎春 年四季 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期644-648,共5页
目的:表达IL-4和IL-13蛋白,从人源单链抗体文库中分别筛选抗IL-4和抗IL-13单链抗体。方法:采用RT-PCR从健康志愿者外周血单核细胞(PBMC)mRNA中扩增IL-4和IL-13 cDNA;构建硫氧还蛋白融合表达载体,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并对... 目的:表达IL-4和IL-13蛋白,从人源单链抗体文库中分别筛选抗IL-4和抗IL-13单链抗体。方法:采用RT-PCR从健康志愿者外周血单核细胞(PBMC)mRNA中扩增IL-4和IL-13 cDNA;构建硫氧还蛋白融合表达载体,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并对表达产物进行纯化鉴定。以生物素化的IL-4和IL-13为抗原从前期构建的人源抗体文库中采用噬菌体展示技术分别筛选抗IL-4和抗IL-13人源单链抗体(scFv)。结果:扩增的IL-4 cDNA大小为280 bp,表达的融合蛋白大小为27 kD左右。扩增的IL-13 cDNA大小为252 bp,表达的融合蛋白大小为25 kD左右。分别以生物素化的IL-4和IL-13蛋白为抗原,采用噬菌体展示技术对人源抗体文库进行3轮富集后,分别有大约37%的scFvs与IL-4有结合特性,有约27%的scFvs与IL-13有结合特性。筛选了4株分别与IL-4和IL-13结合能力强的单链抗体进行了Western blot鉴定和测序。结论:成功筛选到抗IL-4和抗IL-13人源性单链抗体。 展开更多
关键词 IL-4 IL-13 单链抗体 筛选
在线阅读 下载PDF
抗类风湿人源单链抗体库的制备及筛选
8
作者 何光志 田维毅 +8 位作者 王平 王文佳 奚锦 俞琦 王乾宇 黄高 韩洁 蔡琨 安传伟 《中国慢性病预防与控制》 CAS 北大核心 2011年第5期 492-495,共4页
目的 通过噬菌体展示技术构建抗类风湿人源单链抗体库,为其进一步的临床应用研究奠定基础。方法提取患者外周淋巴细胞总RNA,逆转录合成cDNA,以人源免疫球蛋白H链和L链可变区的扩增引物,分别扩增出H链和L链可变区基因。采用SOE—PCR... 目的 通过噬菌体展示技术构建抗类风湿人源单链抗体库,为其进一步的临床应用研究奠定基础。方法提取患者外周淋巴细胞总RNA,逆转录合成cDNA,以人源免疫球蛋白H链和L链可变区的扩增引物,分别扩增出H链和L链可变区基因。采用SOE—PCR法将VH和比片段随机拼接成scFv片段,并克隆入噬菌粒载体pCANTAB5E中,构建噬菌体单链抗体库。结果初级库库容量为3×10^6,在大肠杆菌TG1中重组后得到1.2×10^6的次级抗体库。结论本研究成功构建类风湿人源单链抗体库,拟为类风湿病的预防、诊断、治疗奠定基础。 展开更多
关键词 关节炎 类风湿 单链抗体 制备及筛选
卵巢癌人源性核糖体展示抗体库的构建 预览
9
作者 李芳 马倩倩 +3 位作者 苏平平 李艳 牛苏梅 巴秋杰 《同济大学学报:医学版》 2010年第6期 15-18,共4页
目的构建库容量大、多样性好的卵巢癌人源性核糖体展示抗体库。方法从10名卵巢癌患者的外周血淋巴细胞中提取总RNA,通过聚合酶链式反应(PCR)技术扩增人全套重链可变区基因(variable region of heavychain,V_H)和轻链可变区基因(var... 目的构建库容量大、多样性好的卵巢癌人源性核糖体展示抗体库。方法从10名卵巢癌患者的外周血淋巴细胞中提取总RNA,通过聚合酶链式反应(PCR)技术扩增人全套重链可变区基因(variable region of heavychain,V_H)和轻链可变区基因(variable region of light chain,V_L),用重叠PCR技术对它们进行拼接,构建卵巢癌人源单链抗体库,并连接T载体转化大肠杆菌,经蓝白筛选,挑选阳性克隆,测序鉴定。结果成功构建卵巢癌人源单链抗体库,库容6.5×10~(13),经测序验证多样性良好。结论成功构建的卵巢癌人源单链抗体库可用于进一步筛选目标抗原,为开发治疗性人源抗体奠定了实验基础。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 核糖体展示 单链抗体 抗体
在线阅读 免费下载
一种新型结缔组织生长因子人源单链抗体的可溶性表达以及分离纯化 预览
10
作者 范小波 苟丽霞 +4 位作者 刘昭 沈子龙 刘乃丰 吴国球 奚涛 《东南大学学报:医学版》 CAS 2010年第4期 361-366,共6页
目的:研究单链抗体(scFv)在不同载体和菌株中的表达以及表达产物的免疫学活性评价。方法:将人源化单链抗体的基因通过酶切、连接等生物技术的方法克隆到pET28a、pET32a和pET-EI:X3种不同的载体中,并选用不同的表达菌株进行表达,观... 目的:研究单链抗体(scFv)在不同载体和菌株中的表达以及表达产物的免疫学活性评价。方法:将人源化单链抗体的基因通过酶切、连接等生物技术的方法克隆到pET28a、pET32a和pET-EI:X3种不同的载体中,并选用不同的表达菌株进行表达,观察单链抗体的表达情况并对抗体的可溶性表达进行优化,采用亲和层析和分子筛层析对目的蛋白进行纯化,并在体外研究目的蛋白的生物学活性。结果:抗结缔组织生长因子单链抗体在pET28a/BL21(DE3)中不能表达,在pET32a/BL21(DE3)和pET-EI:X/BLR(DE3)中均成功表达,但是在pET-EI:X/BLR(DE3)中scFv抗体无法从内含肽(intein)上裂解。scFv在pET32a/BL21(DE3)中表达量占总蛋白的30%左右,经过两步层析纯化后纯度达到85%以上。体外免疫试验显示,目的蛋白具有良好的免疫学活性。结论:人源化抗结缔组织生长因子单链抗体scFv在大肠杆菌中的表达需要分子伴侣,通过低温表达策略在pET32a/BL21(DE3)中成功得到表达。 展开更多
关键词 单链抗体 结缔组织生长因子 弹性蛋白 分离纯化
在线阅读 下载PDF
量子点与人源抗谷胱甘肽单链抗体的连接与表征 预览 被引量:2
11
作者 徐俊杰 王诗雯 +7 位作者 赵虹 陈桂秋 霍锐 田莉 段玉晶 李敏杰 杨柏 魏景艳 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第3期 506-509,共4页
用已构建的表达载体pPELB-B3,在大肠杆菌Rosetta中可溶性表达人源抗谷胱甘肽(GSH)单链抗体B3(scFv-B3),经Ni^2+螯合亲和层析纯化后,用点印迹法验证了其与GSH结合的特异性.将水相合成的半导体纳米粒子(半导体量子点,QDs)在N... 用已构建的表达载体pPELB-B3,在大肠杆菌Rosetta中可溶性表达人源抗谷胱甘肽(GSH)单链抗体B3(scFv-B3),经Ni^2+螯合亲和层析纯化后,用点印迹法验证了其与GSH结合的特异性.将水相合成的半导体纳米粒子(半导体量子点,QDs)在N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDC)的作用下,与scFvs连接.光谱分析和膜印迹结果表明,scFvs成功地共价连接到QDs表面,所得的QD-scFvs复合物能够较好地识别GSH.荧光显微镜观察QD-scFvs与人乳腺癌细胞MCF-7的作用结果,初步判断QD-scFvs能够跨膜进入细胞. 展开更多
关键词 量子点 单链抗体 谷胱甘肽过氧化物酶(GPX) 共价结合 印迹
在线阅读 下载PDF
具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的含硒人源单链抗体的制备 预览 被引量:4
12
作者 霍锐 石毅 +4 位作者 魏景艳 徐俊杰 吕绍武 闫飞 苏家明 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2008年第7期 1379-1383,共5页
以谷胱甘肽(GSH)为靶抗原,从噬菌体展示人源单链抗体库中筛选人源单链抗体(scFv)。经3轮筛选后,用ELISA方法检测出5个(2,11,16,24,32)可以和GSH结合的克隆。PCR产物的电泳和测序结果表明,只有3个克隆(11,16,24)具有完... 以谷胱甘肽(GSH)为靶抗原,从噬菌体展示人源单链抗体库中筛选人源单链抗体(scFv)。经3轮筛选后,用ELISA方法检测出5个(2,11,16,24,32)可以和GSH结合的克隆。PCR产物的电泳和测序结果表明,只有3个克隆(11,16,24)具有完整的scFv编码基因。选取和GSH结合力高的克隆11的scFv编码基因组装到表达载体pPELB上,在大肠杆菌Rosetta中进行可溶性表达,用Ni^2+螯合亲和层析纯化scFv-11,免疫点印迹结果证实该抗体能与GSH特异结合。通过化学突变将scFv-11的丝氨酸转变成硒代半胱氨酸(Sec)后,获得了具有谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活力的含硒(Se)人源单链抗体(Se-scFv-11),其活力为351U/μmol。 展开更多
关键词 单链抗体 噬菌体展示抗体 谷胱甘肽过氧化物酶 化学突变
在线阅读 下载PDF
去唾液酸糖蛋白受体H1亚单位的表达、纯化及其单链抗体的筛选与鉴定 被引量:5
13
作者 曹利民 司进 +6 位作者 朱荫昌 王炜煜 赵晓蓉 叶庆 李文涵 朱慧芬 沈关心 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期 756-761,共6页
目的去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)H1亚单位的重组、表达、纯化及其单链抗体的筛选与鉴定.方法将ASGPR H1亚单位糖识别区基因(CRDH1)定向克隆至原核表达载体pET-32c经IPTG诱导表达,表达产物用Ni2+螯合柱亲和纯化,免疫印迹技术(WB)检测;用... 目的去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)H1亚单位的重组、表达、纯化及其单链抗体的筛选与鉴定.方法将ASGPR H1亚单位糖识别区基因(CRDH1)定向克隆至原核表达载体pET-32c经IPTG诱导表达,表达产物用Ni2+螯合柱亲和纯化,免疫印迹技术(WB)检测;用纯化的CRDH1对人源噬菌体抗体库进行4轮固相筛选,阳性克隆用表达标记(Trx-His-s tag)进行差异筛选.取阳性噬菌体C3感染宿主菌HB2151,37℃振荡培养过夜,终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导表达,12%SDS-PAGE与Western blot鉴定以及免疫组化鉴定纯化的单链抗体C3与肝细胞结合的特性.结果CRDH1/pET-32c在原核系统经诱导表达出相对分子质量(Mr)约35×103大小的融合蛋白,以包涵体的形式存在;通过Ni2+亲和柱纯化获得CRDH1融合蛋白;经4轮筛选和差异筛选后,有2株可分泌性表达与CRDH1特异性结合的单链抗体,DNA序列分析表明单链抗体重链基因和轻链基因分别属于人免疫球蛋白VH3家族和VKI家族.噬菌体C3经诱导表达出Mr约28×103大小的融合蛋白,可溶性分泌表达于培养基中;通过Ni2+亲和柱纯化获得单链抗体,ELISA、Western blot表明单链抗体C3能较好结合rCRDH1,免疫组化显示该单链抗体可与肝癌细胞、肝细胞特异结合.结论成功表达ASGPR并筛选出其人源单链抗体.该单链抗体可与表达的rCRDH1以及肝细胞和肝癌细胞特异性结合,提示对肝脏疾病的靶向治疗有潜在的应用价值. 展开更多
关键词 去唾液酸糖蛋白受体 噬菌体抗体 单链抗体 去唾液酸糖蛋白受体 单链抗体 亲和纯化 差异筛选 亚单位 鉴定 H1 Western 噬菌体抗体
抗肉毒毒素A人源单链抗体在酵母细胞中的分泌表达 预览
14
作者 王慧 荫俊 +1 位作者 侯晓军 邢洪光 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期 50-53,共4页
将特异肉毒抗毒素基因克隆入载体pPIC9k,G418抗性加压筛选阳性整合克隆,在毕赤酵母细胞GS115中进行分泌表达.获得了稳定分泌表达ScFv的工程菌,SDS-PAGE分析可见,目的蛋白分子量约为26 kD,通过放大体积来探索重组抗毒素的诱导表达条件及... 将特异肉毒抗毒素基因克隆入载体pPIC9k,G418抗性加压筛选阳性整合克隆,在毕赤酵母细胞GS115中进行分泌表达.获得了稳定分泌表达ScFv的工程菌,SDS-PAGE分析可见,目的蛋白分子量约为26 kD,通过放大体积来探索重组抗毒素的诱导表达条件及纯化工艺,结果发现,1%甲醇诱导后72~84 h,目的蛋白的表达达到高峰,占酵母培养上清中总蛋白的15%以上,经两步层析纯化,目的蛋白纯度可达95%.竞争活性测定结果表明,重组抗毒素在体外具有良好的活性,可竞争肉毒抗毒素马血清与毒素的特异结合. 展开更多
关键词 单链抗体 分泌表达 纯化 毕赤酵母
在线阅读 下载PDF
人源抗A型肉毒毒素单链抗体的体外亲和筛选 预览 被引量:2
15
作者 王慧 荫俊 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期 22-25,共4页
以重组制备的A型肉毒毒素保护性抗原为配体,对人源噬菌体免疫抗体文库进行体外定向亲和筛选,获得特异结合子,其中与抗原高亲和力结合的抗体克隆B17基因全长750 bp,可编码250个氨基酸,抗体可变区基因同源分析表明,分属VH4和κ chainⅡ家... 以重组制备的A型肉毒毒素保护性抗原为配体,对人源噬菌体免疫抗体文库进行体外定向亲和筛选,获得特异结合子,其中与抗原高亲和力结合的抗体克隆B17基因全长750 bp,可编码250个氨基酸,抗体可变区基因同源分析表明,分属VH4和κ chainⅡ家族,是一株人源特异单链抗体基因.人源单链抗体B17在大肠杆菌中获得了重组表达,表达产物可以竞争特异肉毒抗毒素马血清与抗原的结合,是国内首次获得的抗A型肉毒毒素保护性抗原的人源单链抗体,可以在肉毒毒素检测和治疗研究中发挥作用. 展开更多
关键词 A型肉毒毒素 噬菌体文库 单链抗体 表达
在线阅读 下载PDF
抗A型肉毒毒素人源单链抗体的表达、纯化及结合活性分析 被引量:1
16
作者 王慧 荫俊 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2004年第5期414-416,共3页
目的:实现特异性抗A型肉毒毒素人源单链抗体(ScFv)的表达与纯化,并进行结合活性分析.。方法:克隆单链抗体基因ScFv(VH-Linker-Vk),利用pET22b表达载体构建重组表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG化学诱导,固相亲和层析纯化... 目的:实现特异性抗A型肉毒毒素人源单链抗体(ScFv)的表达与纯化,并进行结合活性分析.。方法:克隆单链抗体基因ScFv(VH-Linker-Vk),利用pET22b表达载体构建重组表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG化学诱导,固相亲和层析纯化蛋白,ELISA测定其特异结合活性。结果:pET22b可稳定表达人源单链抗体基因,表达产物占全茵蛋白的25%,表达蛋白全部以包涵体形式存在于胞内。经IMAC纯化,蛋白纯度大于95%。竞争性ELISA测定结果表明,重组抗毒素在体外具有良好的活性,可竞争肉毒马血清与肉毒毒素结合。结论:采用原核表达系统可实现抗A型肉毒毒素人源单链抗体的高效表达,重组人源单链抗体具有抗原特异结合活性。 展开更多
关键词 A型肉毒毒素 单链抗体 表达 纯化 大肠杆菌
人源抗HBsAg scFv与重组复合干扰素融合蛋白的高效表达及活性鉴定 预览 被引量:2
17
作者 刘顺爱 浅野龙太郎 +3 位作者 王学 熊谷泉 工藤俊雄 徐道振 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期 629-632,638,共5页
目的:制备人源抗乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)单链抗体(scFv)与重组复合干扰素(consensus interferon,cIFN)的融合蛋白,并鉴定其活性.方法:把人源抗HBsAg scFv-cIFN融合蛋白的表达载体pRA-cIFNscFv转化到大肠杆菌菌株BL21之后大量表达抗... 目的:制备人源抗乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)单链抗体(scFv)与重组复合干扰素(consensus interferon,cIFN)的融合蛋白,并鉴定其活性.方法:把人源抗HBsAg scFv-cIFN融合蛋白的表达载体pRA-cIFNscFv转化到大肠杆菌菌株BL21之后大量表达抗HBsAg scFv-cIFN融合蛋白.SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达蛋白,经纯化并变性复性包涵体蛋白后用ELISA、流式细胞仪、MTS非放射性活细胞比色定量法及HBsAg血凝抑制试验等进行融合蛋白的抗HBsAg抗体活性和干扰素活性测定.结果:SDS-PAGE和Western blotting结果显示,抗HBsAg scFv-cIFN融合蛋白在BL21大肠杆菌中大量表达,表达量超过10 mg/L培养基;ELISA和流式细胞仪结果显示,所表达的目的蛋白具有抗HBsAg 和IFNα的免疫活性,且特异性良好;MTS和HBsAg血凝抑制试验结果显示,融合蛋白具有明显的PLC/PRF/5细胞增殖抑制活性和HBsAg分泌抑制活性,表明所获得的抗HBsAg scFv-cIFN融合蛋白具有抗HBV病毒活性和HBV感染细胞增殖抑制活性.结论:用基因工程方法成功制备了人源抗HBsAg scFv-cIFN融合蛋白,此融合蛋白具有抗HBsAg抗体活性和IFNα活性,有待深入探讨此融合蛋白的应用价值. 展开更多
关键词 HBSAG 单链抗体 cIFN 融合蛋白 原核表达 活性
在线阅读 下载PDF
高亲和力抗乙型肝炎病毒PreS1的人源单链抗体的获得:天然及免疫抗体库的对比研究 预览
18
作者 张志超 胡学军 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第4期 572-575,共4页
以健康人的外周血淋巴细胞为来源,以偶联BSA的乙型肝炎病毒PreS1肽体外免疫,分别从免疫和未经免疫的淋巴细胞提取RNA,扩增抗体基因,构建大容量天然单链抗体(scFv)噬菌体展示文库和体外免疫scFv抗体库,以PreS1肽进行3轮淘选后,抗... 以健康人的外周血淋巴细胞为来源,以偶联BSA的乙型肝炎病毒PreS1肽体外免疫,分别从免疫和未经免疫的淋巴细胞提取RNA,扩增抗体基因,构建大容量天然单链抗体(scFv)噬菌体展示文库和体外免疫scFv抗体库,以PreS1肽进行3轮淘选后,抗原抗体反应结果显示,从免疫库中获得了亲和力10^-7-10^-8M的抗乙型肝炎病毒PreS1的单链抗体,高于天然库的结果(10^-6-10^-7M),测序结果表明两株抗体均为人抗体,为基因工程抗体用于临床治疗乙型肝炎奠定基础,同时证明淋巴细胞体外免疫方法构建的免疫抗体库优于大容量天然抗体库。 展开更多
关键词 高亲和力 乙型肝炎病毒PRES1 单链抗体 免疫抗体 对比研究 体外免疫 噬菌体展示
在线阅读 下载PDF
抗人免疫缺陷病毒1型gp120人源单链抗体的表达
19
作者 何红霞 貌盼勇 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 1998年第3期 233-236,共4页
目的 研究人源抗人免疫缺陷病毒1型(HV-1)gp120单链抗体(ScFv)。方法 以人工合成的HIV-lgp120v3环多肽多为抗原,利用噬菌体抗体库技术,筛选含有抗-gp120ScFv基因的噬菌体,提取质粒,转化... 目的 研究人源抗人免疫缺陷病毒1型(HV-1)gp120单链抗体(ScFv)。方法 以人工合成的HIV-lgp120v3环多肽多为抗原,利用噬菌体抗体库技术,筛选含有抗-gp120ScFv基因的噬菌体,提取质粒,转化大肠直菌HB2151,表达可溶性ScFv。结果 经SDS-PAGE和Westarn blot分析,表达产物分子量为28kD左右,且具有c-myc活性;ELISA和Dot blot结果表 展开更多
关键词 HIV-1 外膜糖蛋白 GP120 单链抗体 表达
抗HIV—1 g120人源单链抗体的筛选和初步鉴定
20
作者 何红霞 阎锡蕴 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1997年第2期 47-48,共2页
抗HIV-1gp120人源单链抗体的筛选和初步鉴定何红霞貌盼勇阎锡蕴1李秀玲1朱雷侯俊田波1(解放军302医院病毒研究室,北京1000391中科院微生物所)近年来发展起来的噬菌体抗体技术,采用PCR方法扩增抗体可变区... 抗HIV-1gp120人源单链抗体的筛选和初步鉴定何红霞貌盼勇阎锡蕴1李秀玲1朱雷侯俊田波1(解放军302医院病毒研究室,北京1000391中科院微生物所)近年来发展起来的噬菌体抗体技术,采用PCR方法扩增抗体可变区基因,重组到表达载体,与噬菌体外壳... 展开更多
关键词 艾滋病毒 GP120 单链抗体 噬菌体 鉴定
上一页 1 2 3 下一页 到第
使用帮助 返回顶部 意见反馈