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人STIM1基因真核表达载体的构建及其在肝细胞中的表达 被引量:1
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作者 张振亚 张宗明 潘丽洁 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2009年第15期1489-1492,共4页
目的:构建人STIM1基因真核表达载体,并观察其在人肝细胞株(HL-7702)中的表达.方法:提取HL一7702N胞总RNA,RT-PCR扩增,经纯化回收后将片段克隆至pGM—T载体,酶切琼脂糖凝胶电泳分析鉴定并测序,最后用重组质粒转染HL一7702N胞... 目的:构建人STIM1基因真核表达载体,并观察其在人肝细胞株(HL-7702)中的表达.方法:提取HL一7702N胞总RNA,RT-PCR扩增,经纯化回收后将片段克隆至pGM—T载体,酶切琼脂糖凝胶电泳分析鉴定并测序,最后用重组质粒转染HL一7702N胞,通过PCR-电泳和Westernblot法检测STIM1基因的表达.结果:PCR扩增的片段长度为342bp,测序结果以及重组质粒pGM-T-STIM1的酶切琼脂糖凝胶电泳鉴定结果均证明STIM1基因成功克隆到真核表达载体中.PCR一电泳和Westernblt实验结果分别显示转染重组质粒后的HL一7702细胞在基因与蛋白水平表达STIM1甥南姣增强.结论:成功构建了-&-STIM1基因的真核表达载体pGM-T-STIM1,并在人肝细胞株HL一7702中稳定表达,为研究STIM1蛋白在人肝细胞内Ca2+浓度调控方面及其对人肝细胞分泌功能的影响奠定了良好的实验基础. 展开更多
关键词 STIM1 真核表达载体 细胞株HL-7702 基因表达
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