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P.g-LPS诱导人脐静脉内皮细胞损伤及对NF-κB/iNOS/NO信号通路的影响
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作者 李昆蔓 陶军 +4 位作者 张丽敏 代静 周倩冰 周家敏 杨军英 《临床口腔医学杂志》 2019年第2期79-82,共4页
目的:研究牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,P. g-LPS)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增值和凋亡影响,并探讨其中的细胞信号机制。方法:实验分为对照组、5μg/m... 目的:研究牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,P. g-LPS)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增值和凋亡影响,并探讨其中的细胞信号机制。方法:实验分为对照组、5μg/mL组和10μg/ml组P. g-LPS,分别与HUVECs共培养。应用CCK-8法流式细胞术、Western Blot、硝酸酶还原法等测定HUVECs的增殖、凋亡、NO生成量和NF-κB p65、iNOS蛋白的表达。结果:与P. g-LPS共培养24h后HUVECs增殖活力较对照组下降(P<0. 05);HUVECs早期凋亡较对照组上升(P<0. 05),并随着P. g-LPS浓度增加,HUVEC早期凋亡比例升高(P<0. 05)。同时NO、NF-κB蛋白、iNOS蛋白的表达上调(P<0. 05)。结论:P. gLPS可诱导HUVECs增殖凋亡失衡,其作用机制可能是通过NF-κB/iNOS/NO通路介导的。 展开更多
关键词 牙龈卟啉单胞菌脂多糖 静脉内皮细胞 凋亡 牙周炎 动脉粥样硬化
CYP19增强脱氢表雄酮抑制高脂诱导的兔主动脉及人脐静脉内皮细胞MMP-9的表达 预览
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作者 周颖 赵敏 +2 位作者 肖芳 李桃 李晓超 《基础医学与临床》 CSCD 2019年第1期53-58,共6页
目的探讨脱氢表雄酮(DHEA)抗动脉粥样硬化(AS)的作用及其机制。方法将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为对照组、ox-LDL组(30mg/Lox-LDL)、DHEA(低或高浓度)干预组(30mg/Lox-LDL+0.1或1μmol/LDHEA)、DHEA+全反式维甲酸(ATRA)干预组(30mg/Lox... 目的探讨脱氢表雄酮(DHEA)抗动脉粥样硬化(AS)的作用及其机制。方法将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为对照组、ox-LDL组(30mg/Lox-LDL)、DHEA(低或高浓度)干预组(30mg/Lox-LDL+0.1或1μmol/LDHEA)、DHEA+全反式维甲酸(ATRA)干预组(30mg/Lox-LDL+1μmol/LDHEA+0.01μmol/LATRA)及DHEA组(1μmol/L)。用real-time PCR和ELISA检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA及蛋白的表达。通过脂质体介导的方法将pcDNA3.1-CYP19-GFP真核表达质粒(细胞色素P450芳香酶基因)及pcDNA3.1-GFP空质粒分别转染至HUVEC,给予ox-LDL诱导及DHEA干预,用real-timePCR和ELISA检测转染细胞MMP-9 mRNA及蛋白的表达。将兔分为对照组、高脂组(口服1%胆固醇和3%猪油)、DHEA干预组(口服0.27%DHEA)、DHEA+ATRA干预组[口服0.6mg/(kg·d)ATRA]及单DHEA组。用real-time PCR和免疫组织化学法检测兔主动脉MMP-9 mRNA及蛋白的表达。结果ox-LDL组HUVEC MMP-9的表达较对照组明显升高(P<0.05);DHEA干预组呈浓度依赖性使MMP-9的表达明显回降(P<0.05)。高脂组兔主动脉MMP-9的表达较对照组明显升高(P<0.05);DHEA干预组能明显缓解高脂组的变化(P<0.05)。CYP19+ox-LDL+DHEA组较空质粒+ox-LDL+DHEA组MMP-9的表达显著降低(P<0.05)。结论DHEA能抑制高脂诱导的兔主动脉及HUVEC MMP-9的表达,过表达细胞色素P450芳香酶基因(CYP19)能增强此作用。 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 脱氢表雄酮 细胞色素P450芳香酶基因 基质金属蛋白酶-9 静脉内皮细胞
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TLR4-MMP-2/MMP-9信号通路在氧糖剥夺-复糖复氧诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用
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作者 刘琳琳 魏海婷 +1 位作者 郭继锋 任峰 《河北医科大学学报》 CAS 2019年第2期198-202,共5页
目的探讨Toll样受体4(Toll like receptor4,TLR4)-基质金属蛋白酶2(matrix metalloprotein,MMP-2)/基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein,MMP-9)信号通路在氧糖剥夺-复糖复氧诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用。方法离体培养人脐静脉... 目的探讨Toll样受体4(Toll like receptor4,TLR4)-基质金属蛋白酶2(matrix metalloprotein,MMP-2)/基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein,MMP-9)信号通路在氧糖剥夺-复糖复氧诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用。方法离体培养人脐静脉内皮细胞株HUVEC-12,以1×106/mL接种于6孔板(每孔2mL)或1×104/mL接种于96孔板(每孔200μL),采用随机数字表法将36孔样本分为4组,对照组(C组)、氧糖剥夺组(O组),TAK242+氧糖剥夺组(TO组),CCT+氧糖剥夺处理组(MO组),每组6孔。O、TO和MO组人脐静脉内皮细胞接受氧糖剥夺6h后复糖复氧24h;TO和MO组人脐静脉内皮细胞接受氧糖剥夺前1h向培养基中分别加入TLR4特异性阻断剂TAK242(10μmol/mL)和MMP-2/MMP-9特异性抑制剂CCT(200μg/mL);对照组(C组)人脐静脉内皮细胞正常培养。按照各组处理收集细胞,AnnexinV-FITC/PI双染色-流式细胞法测定细胞凋亡率,MTT法测定细胞生存率,Transwell法检测HUVEC-12细胞电阻值及渗透性,酶联免疫吸附测定法检测TNF-α和IL-1β浓度,Western blot法测定MMP-2、MMP-9表达。结果与C组比较,O组、TO组和MO组HUVEC-12细胞凋亡率和葡聚糖-FITC荧光强度升高,存活率和电阻值降低,TNF-α、IL-1β、MMP-2和MMP-9表达水平升高(P<0.05);与O组比较,TO组HUVEC-12细胞凋亡率和葡聚糖-FITC荧光强度降低,存活率和电阻值升高,TNF-α、IL-1β、MMP-2和MMP-9表达水平下降(P<0.05);与O组比较,MO组HUVEC-12细胞凋亡率和葡聚糖-FITC荧光强度降低,存活率和电阻值升高,TNF-α和IL-1β表达水平下降(P<0.05);与TO组比较,MO组HUVEC-12细胞凋亡率和葡聚糖-FITC荧光强度升高,存活率和电阻值降低,TNF-α、IL-1β、MMP-2和MMP-9表达水平升高。结论氧糖剥夺-复糖复氧诱导HUVEC-12细胞凋亡的机制可能与激活TLR4-MMP-2/MMP-9信号通路相关。 展开更多
关键词 缺氧 静脉内皮细胞 细胞凋亡
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慢病毒Hoxa3载体的构建及其对人脐静脉内皮细胞迁移和血管新生的影响
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作者 毕雪飞 陶贵周 黄建华 《中国动脉硬化杂志》 CAS 2019年第1期18-22,共5页
目的构建慢病毒Hoxa3载体,观察其对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的转染效率,研究其对细胞迁移和血管新生的影响,并探讨Hoxa3促进血管新生的机制。方法以基因合成法从聚合酶链式反应文库获取人Hoxa3基因,酶切后插入慢病毒骨架载体,以三质粒... 目的构建慢病毒Hoxa3载体,观察其对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的转染效率,研究其对细胞迁移和血管新生的影响,并探讨Hoxa3促进血管新生的机制。方法以基因合成法从聚合酶链式反应文库获取人Hoxa3基因,酶切后插入慢病毒骨架载体,以三质粒联合转染293T细胞获得慢病毒Hoxa3载体,并进行滴度测定。转染HUVEC,获取最大转染效率。转染HUVEC后分对照组和慢病毒Hoxa3转染组,进行HUVEC迁移实验和小管形成实验,观察Hoxa3对HUVEC迁移和小管形成的影响。Western blot检测慢病毒Hoxa3载体转染HUVEC后尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uPAR)和基质金属蛋白酶14(MMP-14)蛋白表达的变化。结果成功构建慢病毒Hoxa3载体,病毒的滴度为8×10^11TU/L;30 MOI慢病毒载体对HUVEC的转染效率达到99%以上。Western blot结果显示慢病毒Hoxa3载体转染HUVEC后Hoxa3能够有效在HUVEC中表达。与对照组比较,慢病毒Hoxa3载体转染HUVEC后显著增强HUVEC的迁移和小管形成,显著增加uPAR和MMP-14蛋白的表达(P<0.05)。结论成功构建的慢病毒Hoxa3载体可促进HUVEC的迁移和小管形成,其作用机制可能为上调HUVEC的uPAR和MMP-14蛋白表达。 展开更多
关键词 慢病毒载体 Hoxa3 静脉内皮细胞 细胞迁移 血管新生
铁皮石斛多糖对人脐静脉内皮细胞基因表达谱的影响研究 预览
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作者 王瑞君 谢兰 +4 位作者 冯娟 赵文龙 郭志方 乔连生 宋维芳 《中国药房》 CAS 北大核心 2019年第6期801-806,共6页
目的:探讨铁皮石斛多糖对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)基因表达谱的影响。方法:以HUVEC为对象,采用MTS法检测不同剂量铁皮石斛多糖(50、100、200、400、800μg/mL)对HUVEC细胞增殖活性的影响,并计算30%细胞生长抑制浓度(IC30)以筛选后续试... 目的:探讨铁皮石斛多糖对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)基因表达谱的影响。方法:以HUVEC为对象,采用MTS法检测不同剂量铁皮石斛多糖(50、100、200、400、800μg/mL)对HUVEC细胞增殖活性的影响,并计算30%细胞生长抑制浓度(IC30)以筛选后续试验剂量;采用基因表达谱芯片技术检测铁皮石斛多糖作用24h后HUVEC细胞基因表达谱的变化情况,筛选差异表达基因;利用DAVID生物信息学资源数据库对差异表达前5位的基因进行GO富集分析和KEGG通路富集分析;以免疫相关差异表达基因为对象,采用实时荧光定量聚合酶链反应法(qRT-PCR)对芯片检测结果进行验证。结果:经100、200、400、800μg/mL铁皮石斛多糖作用后,HUVEC细胞的存活率均显著降低(P<0.05或P<0.01);IC30值为408μg/mL。经400μg/mL(据IC30值确定)铁皮石斛多糖作用后,HUVEC细胞中共有差异表达基因91个,其中表达上调的有84个、表达下调的有7个。上、下调表达差异前5位的基因分别为SELE、CCL2、CXCL6、IL8、ICAM1以及VWCE、CPT1A、CLU、CCL14、CINS4,主要与免疫调节、炎症反应等有关。HUVEC细胞中的差异表达基因主要分布于胞外区域,富集于细胞因子的产生及反应、刺激反应等生物学过程,发挥趋化因子及其受体活性等分子功能;其中上调表达基因SELE、ICAM1、CXCL2等主要富集于肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、甲型H1N1流感、单纯疱疹病毒感染等通路,下调表达基因CCL14主要富集于趋化因子信号通路。qRT-PCR验证结果显示,ICAM1基因的相对表达量显著升高,CCL14基因的相对表达量显著降低(P<0.05),与芯片检测结果一致。结论:经铁皮石斛多糖处理后,HUVEC细胞共有91个基因表达差异明显,且以表达上调为主。表达差异基因可能通过TNF信号通路、甲型H1N1流感、单纯疱疹病毒感染等通路参与机体免疫调节。 展开更多
关键词 铁皮石斛多糖 静脉内皮细胞 基因表达谱 免疫调节
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低强度脉冲超声对高糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用 预览
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作者 叶奎 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第17期2728-2733,共6页
背景:研究表明,人脐静脉内皮细胞参与多种原因引起的血管结构紊乱和功能障碍,有可能成为相关疾病治疗的新靶点。目的:探讨低强度脉冲超声对高糖环境诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及机制。方法:将人脐静脉内皮细胞随机分为正常... 背景:研究表明,人脐静脉内皮细胞参与多种原因引起的血管结构紊乱和功能障碍,有可能成为相关疾病治疗的新靶点。目的:探讨低强度脉冲超声对高糖环境诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及机制。方法:将人脐静脉内皮细胞随机分为正常对照组、高糖刺激模型组、低强度脉冲超声30,60,90m W/cm~2组。高糖刺激模型组和低强度脉冲超声组人脐静脉内皮细胞给予25 mmol/L葡萄糖高糖刺激处理24 h从而建立高糖模型;低强度脉冲超声组细胞造模后给予30,60,90 mW/cm~2低频脉冲处理,每天20 min,连续7 d。采用MTT法检测各组细胞活力,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,比色法检测各组细胞Caspase-3、9活性,分光光度法检测丙二醛水平、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶及谷胱甘肽过氧化物酶活性,Westernblot及RT-PCR检测各组细胞中JNK的表达。结果与结论:①与正常对照组比较,高糖刺激模型组细胞活力明显降低(P <0.01),细胞凋亡率升高(P <0.01),丙二醛水平以及Caspase-3、9活性均显著提高(P <0.01),超氧化物歧化酶、过氧化氢酶及谷胱甘肽过氧化物酶活性降低(P <0.01),JNK表达水平上调(P <0.01);②与高糖刺激模型组比较,低强度脉冲超声组细胞活力提高(P <0.01),细胞凋亡率、丙二醛水平以及Caspase-3、9活性降低(P <0.01),超氧化物歧化酶、过氧化氢酶及谷胱甘肽过氧化物酶活性提高(P <0.01),JNK表达水平下调(P <0.01),照射强度90 mW/cm~2时以上变化最明显;③低强度脉冲超声可能通过提高细胞的抗氧化能力以及调控细胞中的JNK信号转导通路以抵抗细胞凋亡,进而抑制高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤;照射强度90 mW/cm~2时作用最显著。 展开更多
关键词 静脉内皮细胞 低强度脉冲超声 高糖刺激 氧化应激 细胞凋亡 JNK信号通路
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黄连素激活核因子E2相关因子/血红素氧合酶-1增强内皮细胞抗过氧化氢损伤 预览
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作者 王臻 丁慧 杨瑞 《中国体外循环杂志》 2019年第1期41-47,共7页
目的探讨核因子E2相关因子(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)是否参与黄连素(BBR)介导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)抗过氧化氢(H2O2)引起的凋亡以及潜在的机制。方法不同浓度BBR(5和10μmol/L)预处理细胞12 h后,应用H2O2(200μmol/L,4 h)构建细... 目的探讨核因子E2相关因子(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)是否参与黄连素(BBR)介导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)抗过氧化氢(H2O2)引起的凋亡以及潜在的机制。方法不同浓度BBR(5和10μmol/L)预处理细胞12 h后,应用H2O2(200μmol/L,4 h)构建细胞损伤模型,CCK-8法检测细胞活性;TUNEL标记凋亡细胞;DCFH-DA检测细胞活性氧(ROS)水平;免疫荧光法标记Nrf2细胞内的分布情况;Western blot法检测Nrf2/HO-1通路和凋亡相关蛋白含量。此外,应用干扰核糖核酸(siRNA)特异性阻断Nrf2/HO-1后,重复上述检测。结果相对于对照组,H2O2降低细胞活性,增加细胞凋亡及ROS水平(P<0.05)。不同浓度的BBR有效抑制上述变化,且呈“剂量依赖性”(P<0.05)。同时,BBR进一步促进H2O2导致的Nrf2核内移位及HO-1表达增加(P<0.05)。应用siRNA不仅可以显著抑制Nrf2/HO-1的活化,而且明显逆转BBR对HUVECs的保护作用(P<0.05)。结论BBR通过激活Nrf2/HO-1通路,增强HUVECs清除ROS的能力,从而发挥抗H2O2损伤的作用。 展开更多
关键词 黄连素 核因子E2相关因子/血红素氧合酶-1 静脉内皮细胞 活性氧 凋亡
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黄芪甲苷与阿魏酸合用调控JAK-STAT通路促进血管内皮细胞增殖作用的研究 预览
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作者 李玉梅 鲍慧玮 +6 位作者 王楚盈 张亚杰 韩冬 潘建衡 方晶 黄金秋 刘仲康 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期1-8,共8页
目的探讨黄芪甲苷与阿魏酸合用调控JAK-STAT通路对氯化钴所致的缺氧人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖的作用及机制。方法建立人脐静脉内皮细胞氯化钴缺氧损伤模型,采用CCK-8和活细胞染色技术,检测... 目的探讨黄芪甲苷与阿魏酸合用调控JAK-STAT通路对氯化钴所致的缺氧人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖的作用及机制。方法建立人脐静脉内皮细胞氯化钴缺氧损伤模型,采用CCK-8和活细胞染色技术,检测药物对细胞的增殖作用;采用荧光染色技术,观察细胞形态的变化;采用划痕实验测定细胞迁移能力;通过成管实验,观察药物对内皮细胞体外成管作用;采用Western blot法检测各给药组对p-JAK2和p-STAT3蛋白表达的影响。结果与模型组相比,黄芪甲苷与阿魏酸联合作用于氯化钴所致的缺氧HUVECs 24 h,可明显促进HUVECs的增殖,并改善由于缺氧所致的细胞形态的变化,促进细胞的迁移,有利于血管生成。同时可上调p-STAT3和p-JAK2蛋白的表达。结论黄芪甲苷与阿魏酸合用对氯化钴所致的缺氧HUVECs有保护作用,其机制可能与激活JAK-STAT信号通路有关。 展开更多
关键词 黄芪甲苷 阿魏酸 静脉内皮细胞 p-JAK2 P-STAT3
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补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白1通过激活p38信号通路增加内皮细胞黏附
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作者 孟华 安松涛 +1 位作者 张燕 陈岩 《中国动脉硬化杂志》 CAS 2019年第1期34-39,共6页
目的探讨补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白1(CTRP1)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)黏附分子表达及黏附功能的影响及其分子机制。方法体外实验采用培养HUVEC和人单核细胞白血病细胞株THP-1细胞。(1)采用不同浓度rCTRP1(10、100、1 000μg/L)刺激H... 目的探讨补体C1q肿瘤坏死因子相关蛋白1(CTRP1)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)黏附分子表达及黏附功能的影响及其分子机制。方法体外实验采用培养HUVEC和人单核细胞白血病细胞株THP-1细胞。(1)采用不同浓度rCTRP1(10、100、1 000μg/L)刺激HUVEC 24 h,用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测血管细胞黏附分子1(VCAM-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1) m RNA和蛋白表达水平;(2)不同浓度rCTRP1(10、100、1 000μg/L)或TNF-α(10μg/L)分别刺激HUVEC 24 h,通过共孵育HUVEC和THP-1在倒置荧光显微镜下观察单个核细胞-内皮细胞黏附情况;(3)对照组:生理盐水和BSA(10μg)为阴性对照,TNF-α(3μg)为阳性对照;实验组:rCTRP1(3、10μg)分别腹腔注射小鼠,倒置显微镜下实时观察小鼠肠系膜上动脉中白细胞的滚动及黏附情况;(4) 1 000μg/L rCTRP1刺激HUVEC(15、30、60 min),采用Western blot检测p38、ERK、JNK、p65的磷酸化水平,应用SB203580抑制p38MAPK信号通路后,Western blot检测黏附分子VCAM-1、ICAM-1的蛋白表达。结果 (1)rCTRP1刺激HUVEC后,黏附分子VCAM-1和ICAM-1的m RNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),呈剂量依赖性,尤以ICAM-1明显;(2)体外实验:随着CTRP1刺激剂量增加,单个核细胞-内皮细胞黏附数显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);体内实验:小鼠腹腔注射rCTRP1后,血管内白细胞滚动速度显著下降,黏附在内皮的细胞数目显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05);(3) rCTRP1刺激HUVEC后p38和p65磷酸化水平显著增加,ERK、JNK磷酸化水平无明显变化,SB203580抑制p38MAPK信号通路后,rCTRP1诱导的VCAM-1和ICAM-1蛋白表达显著下降(P<0.05)。结论 CTRP1诱导内皮细胞分泌VCAM-1和ICAM-1,增加内皮细胞黏附能力,其机制可能是通过激活p38MAPK信号通路。 展开更多
关键词 CTRP1 静脉内皮细胞 细胞黏附 P38丝裂原活化蛋白激酶
氧化应激致人视网膜血管内皮细胞损伤中microRNA表达谱的改变及生物信息学分析
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作者 韩雪 张睿 +4 位作者 姜磊 谢冰 崔冬生 许顺江 周慧敏 《国际内分泌代谢杂志》 2018年第2期78-83,共6页
目的检测氧化应激引起人视网膜血管内皮细胞(HMREC)损伤过程中微小RNA(miRNA)表达谱的改变,并探讨这些差异性表达的miRNA在视网膜血管内皮损伤过程中的作用。方法利用不同浓度的H2O2溶液孵育人脐静脉内皮细胞(HUVEC)建立氧化应... 目的检测氧化应激引起人视网膜血管内皮细胞(HMREC)损伤过程中微小RNA(miRNA)表达谱的改变,并探讨这些差异性表达的miRNA在视网膜血管内皮损伤过程中的作用。方法利用不同浓度的H2O2溶液孵育人脐静脉内皮细胞(HUVEC)建立氧化应激模型,并用CCK一8细胞增殖实验检测细胞活性。采用基因芯片技术检测氧化应激介导的HUVEC中miRNA表达谱的变化,对差异性表达的miRNA进行生物信息学分析,用实时PCR方法在HMREC中进行验证。结果CCK.8检测HUVEC活力的结果显示,与同一时间对照组相比,100umol/LH2O2干预组8h和16hHUVEC存活率未发生明显改变(F100umol/L=3.897,P〉0.05),其他浓度H2O2干预组细胞存活率明显下降(F200umol/L=8.172、F800umol/L=239.214,P均〈0.05),且呈剂量和时间依赖性。400umol/L干预组24h细胞存活率下降接近50%(F400umol/L=6.905,P〈0.05)。微阵列分析显示,H2O2(400umol/L)孵育HUVEC24h后,共有116个miRNA的表达发生改变。其中有11个miRNA表达差异在1.5倍以上。生物信息学分析提示,差异表达的miRNA可能参与细胞的代谢调节、AMP活化蛋白激酶(AMPK)信号通路等多个生物学过程。实时PCR检测证实,在经过400umol/L H2O2处理24h后的HUVEC和HMREC的氧化应激模型中,miRNA-15b、miRNA-106b、miRNA-497均显著下调(FmiRNA-15b,HUVEC=9.9、FmiRNA-106h.HUVEC=8.4、FmiRNA497,HUVEC=63.5、FmiRNA-15bHMRFc=643.7、FmiRNA-106b、HMREC=81.4、FmiRNA-497,HMREC=199.9,P均〈0.05),而miRNA-195、miRNA-638、miRNA-1246、miRNA-4267和miRNA-4734均显著上调(FmiRNA-195,HuvEc=592.1、Fm。RNA-6388.HUVEC=812、FmiRNA-1246.HUVEC=58.5、FmiRNA4267.HUVEE=1179.1、FnuRNA却34,HuvEc=173、FmiRNA-195,himREc=67.8、FmiHMREC=103.7、FmiRNA-1246,himREc=2078.9、FmIRNA-4267HMREc:234.6、FmiRNA4734,HMREC=10.7,P均〈0.05)。结论氧化应激可导致HMREC� 展开更多
关键词 氧化应激 microRNA 静脉内皮细胞 视网膜血管内皮细胞 生物信息学分析
EOFAZ抑制TNF-α诱导的血管新生和炎症损伤 预览
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作者 付凌云 杨红 +4 位作者 林丹 黄妮雯 徐旖旎 陶玲 沈祥春 《中国药理学通报》 CSCD 北大核心 2018年第11期1594-1599,共6页
目的研究艳山姜挥发油(essential oil of Fructus Alpiniae zerumbet,EOFAZ)对肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)诱导内皮细胞血管新生及炎性损伤的作用,以及作用机制。方法分别建立TNF-α诱导的体外内皮细胞血管新生及... 目的研究艳山姜挥发油(essential oil of Fructus Alpiniae zerumbet,EOFAZ)对肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)诱导内皮细胞血管新生及炎性损伤的作用,以及作用机制。方法分别建立TNF-α诱导的体外内皮细胞血管新生及体内小鼠胸主动脉炎性损伤模型。采用体外血管新生小管成环实验,分析TNF-α诱导HUVECs的血管新生;Western blot和qRT-PCR实验法分别检测HUVECs中VEGFR-2蛋白和mRNA的表达;ELISA法检测小鼠血清中VEGFR-2的分泌水平;采用HE染色分析小鼠胸主动脉炎性损伤。结果EOFAZ和ERK抑制剂U0126明显抑制TNF-α诱导的HUVECs血管新生小管成环数量(P<0.01);EOFAZ能够下调TNF-α诱导小鼠血清中VEGFR-2的分泌(P<0.01);EOFAZ和U0126对TNF-α诱导的HUVECs中VEGFR-2的蛋白和mRNA表达有抑制作用(P<0.01);EOFAZ能够抑制TNF-α诱导小鼠胸主动脉炎性细胞的浸润。结论EOFAZ能抑制TNF-α诱导血管新生和炎性损伤,其机制与通过ERK信号通路下调VEGFR-2的表达有关。 展开更多
关键词 艳山姜挥发油 静脉内皮细胞 肿瘤坏死因子Α 细胞外信号调节激酶 血管新生 炎症 血管内皮细胞生长因子受体-2
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Kv1.5蛋白对内毒素致血管内皮细胞氧化应激损伤的影响 预览
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作者 许美霞 邹丽绢 +2 位作者 张晓霞 杨涛 许涛 《华中科技大学学报:医学版》 CSCD 北大核心 2018年第3期305-308,共4页
目的研究Kv1.5蛋白对内毒素(LPS)所致血管内皮细胞氧化应激损伤的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),给予5μg/mL LPS刺激建立脓毒症细胞模型,并分为:空白对照组、LPS组、LPS+MT1组(以Kv1.5特异性通道阻滞剂MT 250nmo... 目的研究Kv1.5蛋白对内毒素(LPS)所致血管内皮细胞氧化应激损伤的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),给予5μg/mL LPS刺激建立脓毒症细胞模型,并分为:空白对照组、LPS组、LPS+MT1组(以Kv1.5特异性通道阻滞剂MT 250nmol/L预处理30min)及LPS+MT2组(MT浓度为500nmol/L)。采用MTT法检测内皮细胞存活率;ELISA法检测细胞上清液中内皮细胞E-选择素(E-selectin)、细胞间粘附分子(ICAM-1)浓度变化;激光共聚焦显微镜观察内皮细胞内ROS水平;比色法检测脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与空白对照组比较,LPS组内皮细胞存活率明显下降[(32.54±1.87)%vs.(98.64±0.92)%,P〈0.01],而LPS+MT1组及LPS+MT2组内皮细胞存活率分别为(77.39±1.15)%、(93.22±1.15)%,均较LPS组上升(均P〈0.01);LPS组内皮细胞E-selectin、ICAM-1分泌增加(均P〈0.01),予以250、500nmol/L MT预处理后,E-selectin、ICAM-1分泌减少(均P〈0.01);激光共聚焦显微镜观察内皮细胞内ROS水平发现,LPS组细胞内ROS水平升高为空白对照组的(3.39±0.42)倍(P〈0.05),予以250、500nmol/L MT预处理后,ROS水平分别为空白对照组的(1.88±0.36)倍、(1.46±0.47)倍,与LPS组比较,差异有统计学意义(均P〈0.05);且LPS组较空白对照组MDA水平上升、SOD活性降低(均P〈0.01),而MT预处理可降低MDA含量、增加SOD活性(均P〈0.01)。结论 Kv1.5蛋白与内毒素诱导的血管内皮细胞损伤密切相关;MT通过阻断Kv1.5通道可减轻内皮细胞脂质过氧化损伤。 展开更多
关键词 Kv1.5蛋白 活性氧 静脉内皮细胞 内皮细胞氧化应激损伤
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人脐静脉内皮细胞永生化的研究进展
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作者 李盛波 郑勇斌 《医学综述》 2018年第22期4450-4455,共6页
原代人脐静脉内皮细胞培养技术存在诸多不足,永生化能延长细胞生命周期并保持稳定的内皮细胞源性,使不同细胞及细胞代之间保持同质性,为血管内皮细胞及其相关疾病的研究提供良好的细胞模型。目前以猿猴病毒40大T抗原基因和人端粒酶逆转... 原代人脐静脉内皮细胞培养技术存在诸多不足,永生化能延长细胞生命周期并保持稳定的内皮细胞源性,使不同细胞及细胞代之间保持同质性,为血管内皮细胞及其相关疾病的研究提供良好的细胞模型。目前以猿猴病毒40大T抗原基因和人端粒酶逆转录酶催化亚基基因诱导人脐静脉内皮细胞永生化最常用;介导外源基因进入内皮细胞的载体常见的有病毒类和非病毒类两种,以逆转录病毒载体或慢病毒载体最常用。可回复性永生化技术有望为内皮细胞永生化提供更好的选择性。 展开更多
关键词 静脉内皮细胞 永生化 猿猴病毒40大T 端粒酶逆转录酶催化亚单基
全文增补中
促红细胞生成素预处理对离体血管内皮细胞缺血再灌注模型中内皮型一氧化氮合酶表达的影响
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作者 王源江 李红戈 +3 位作者 赵振强 王埮 李嫚 陈志斌 《实用医学杂志》 北大核心 2018年第19期3163-3167,3171共6页
目的研究重组人促红细胞生成素预处理对离体血管内皮细胞缺血再灌注模型中内皮型一氧化氮合酶表达的影响及其可能的作用机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞株(Ea.hy926),采用MTT法检测细胞活性,细胞免疫荧光激光共聚焦荧光显微镜... 目的研究重组人促红细胞生成素预处理对离体血管内皮细胞缺血再灌注模型中内皮型一氧化氮合酶表达的影响及其可能的作用机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞株(Ea.hy926),采用MTT法检测细胞活性,细胞免疫荧光激光共聚焦荧光显微镜定位检测及Western Blot检测eNOS和Caspase-3在VECs中的表达。结果缺血再灌注损伤可明显降低VECs的细胞活力,而给予重组人促红细胞生成素预处理可显著改善缺血再灌注损伤下VECs的细胞活力;缺血再灌注损伤可显著减少VECs内eNOS表达、显著增加Caspase-3表达;而rhEPO预处理可显著提高缺血再灌注损伤下VECs内eNOS表达、显著减少Caspase-3表达。结论rhEPO预处理可提高缺血再灌注损伤下内皮细胞的细胞活力,并能显著提高eNOS表达水平,提高血管内皮细胞对缺血再灌注损伤的耐受力。 展开更多
关键词 重组促红细胞生成素 预处理 静脉内皮细胞 缺血再灌注 内皮型一氧化氮合酶 缺血耐受力
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人剪切修复基因D介导ox-LDL促进HUVEC凋亡作用
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作者 俞菊梅 胡利琳 +3 位作者 丁颖 元文峰 李菊香 孙国芳 《中国动脉硬化杂志》 2018年第1期19-24,共6页
目的 探讨人剪切修复基因D(XPD)是否介导氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)促进人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡。 方法 以ox-LDL建立HUVEC凋亡模型。用脂质体将XPD-siRNA转染HUVEC,给予ox-LDL处理。实验分6组:空白对照组;阴性对照siRNA... 目的 探讨人剪切修复基因D(XPD)是否介导氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)促进人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡。 方法 以ox-LDL建立HUVEC凋亡模型。用脂质体将XPD-siRNA转染HUVEC,给予ox-LDL处理。实验分6组:空白对照组;阴性对照siRNA组;XPD-siRNA组;ox-LDL组;ox-LDL +阴性对照siRNA组;ox-LDL+XPD-siRNA组。MTT测定细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期;用RT-PCR和Western blot检测XPD、Bax和Bcl-2的表达。 结果 建立HUVEC凋亡模型ox-LDL的最佳浓度为100 mg/L。与阴性对照siRNA组相比,XPD-siRNA组的细胞凋亡率明显下降(P〈0.05),存活率明显增加(P〈0.01),G0/G1期细胞减少(P〈0.05)、S期细胞增加(P〈0.05),XPD、Bax表达降低(P均〈0.05),Bcl-2表达增高(P〈0.05);与空白对照组相比,ox-LDL组细胞凋亡率明显增加(P〈0.01),细胞存活率下降(P〈0.05),G0/G1期细胞增加(P〈0.05)、S期细胞明显减少(P〈0.01),XPD、Bax表达升高(P均〈0.05),Bcl-2表达降低(P〈0.05);与ox-LDL+阴性对照siRNA组相比,ox-LDL+XPD-siRNA组细胞凋亡率下降(P〈0.05),细胞存活率明显增加(P〈0.01),G0/G1期细胞减少(P〈0.05)、S期细胞增加(P〈0.05),XPD、Bax表达降低(P均〈0.05),Bcl-2表达增高(P〈0.05)。 结论 XPD能介导ox-LDL促进HUVEC凋亡作用。 展开更多
关键词 剪切修复基因D RNA干扰 静脉内皮细胞 氧化型低密度脂蛋白 细胞凋亡
白杨素减轻人脐静脉内皮细胞的氧化应激损伤
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作者 高雪梅 张夏丽 +6 位作者 陈敏 李洁 罗乐 韩斯嘉 董季 宋振蓉 张轩萍 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2018年第9期1022-1026,共5页
目的:观察白杨素对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)氧化应激损伤的保护作用。方法:常规培养HUVEC细胞,分为5组:对照组,不加任何干预;H2O2组,用400μmol/L过氧化氢处理2 h;白杨素高、中、低剂量组... 目的:观察白杨素对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)氧化应激损伤的保护作用。方法:常规培养HUVEC细胞,分为5组:对照组,不加任何干预;H2O2组,用400μmol/L过氧化氢处理2 h;白杨素高、中、低剂量组,提前用100、50、25μmol/L的白杨素孵育12 h,然后用400μmol/L过氧化氢处理2 h。处理结束后,用MTT法检测活细胞数目,并检测乳酸脱氢酶(LDH)的漏出。收集细胞上清液及细胞裂解液,检测NO、丙二醛(MDA)产量及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、超氧化物歧化酶(SOD)活性。用荧光染料DCEF-DA染色后,酶标仪检测活性氧(ROS)的产量。用荧光定量RTPCR的方法检测黏附分子的表达。结果:过氧化氢导致内皮细胞活细胞数目减少,LDH漏出增多,MDA、ROS产生增多,SOD活性下降,黏附分子表达增多,内皮细胞NO产生减少,eNOS活性下降。提前用白杨素预孵,可以增加细胞存活率,减轻氧化应激损伤,减少黏附分子的表达,eNOS蛋白活性增加,细胞NO的产量增加。结论:白杨素可以减轻HUVEC的氧化应激损伤,减少黏附分子的表达,增加细胞NO的合成能力。 展开更多
关键词 白杨素 静脉内皮细胞 氧化应激
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红景天苷对高糖损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用研究 预览
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作者 廖占林 刘鹏程 +2 位作者 张蕾 梁立峰 张惠莉 《疑难病杂志》 CAS 2018年第5期494-497,502共5页
目的 观察红景天苷对高糖诱导血管内皮细胞损伤的保护作用及其可能机制. 方法 实验于2017年2月-2017年11月在青海大学高原医学研究中心实验室进行.体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)株贴壁后,以MTS法观察不同浓度葡萄糖对人脐静脉内皮... 目的 观察红景天苷对高糖诱导血管内皮细胞损伤的保护作用及其可能机制. 方法 实验于2017年2月-2017年11月在青海大学高原医学研究中心实验室进行.体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)株贴壁后,以MTS法观察不同浓度葡萄糖对人脐静脉内皮细胞活力的影响,根据糖浓度分组.糖浓度5.5 mmol/L作为正常对照组,糖浓度45 mmol/L作为模型组,以不同红景天苷浓度(1×10^-5 mol/L、5×10^-5 mol/L、1×10^-4 mol/L、2×10^-4 mol/L)作用于模型损伤组,并通过MTS法观察细胞活力,WST-1法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力,TBA法测定细胞内丙二醛(MDA)含量,观察红景天苷对血管内皮细胞损伤的保护作用. 结果 与模型损伤组比较,细胞培养24 h、 48 h ,红景天苷5×10^-5 mol/L、1×10^-4 mol/L、2×10^-4 mol/L组细胞活力均明显增加( F =5.111、16.330, P 〈 0.01 ),细胞内MDA含量均明显下降( F =22.567、28.382, P 〈0.01),细胞内SOD活力均明显增加(F=23.388、82.244,P〈0.01 ); 培养48 h,红景天苷1×10^-5 mol/L组细胞活力与模型损伤组比较显著增加( P =0.04). 结论 红景天苷可以降低高糖损伤的HUVEC的氧化应激水平,从而对高糖损伤的血管内皮细胞提供一定的保护作用. 展开更多
关键词 糖尿病血管病变 红景天苷 高糖 静脉内皮细胞 超氧化物歧化酶 丙二醛
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黄诺玛苷对高糖诱导HUVEC细胞氧化应激及VEGF和ICAM-1蛋白表达的影响 预览 被引量:1
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作者 王丽丽 李琳琳 +4 位作者 张楠楠 王烨 骆新 陶义存 毛新民 《中国医药导报》 CAS 2018年第10期8-12,共5页
目的观察两色金鸡菊黄酮类化合物黄诺玛苷对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化应激及血管内皮生长因子(VEGF)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)蛋白表达的影响。方法将HUVEC细胞分为正常对照组(NG)、高糖模型组(HG)及不同浓度... 目的观察两色金鸡菊黄酮类化合物黄诺玛苷对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化应激及血管内皮生长因子(VEGF)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)蛋白表达的影响。方法将HUVEC细胞分为正常对照组(NG)、高糖模型组(HG)及不同浓度黄诺玛苷组(50、100、200、400μmol/L)。酶联免疫吸附测定法(ELASA)检测细胞上清液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性。用Western blot方法检测细胞中VEGF和ICAM-1蛋白表达水平。结果与NG组比较,HG组MDA明显升高,SOD、CAT、GSH-Px明显降低(P〈0.05或P〈0.01)。与HG组比较,黄诺玛苷干预后,MDA含量显著降低(P〈0.05),SOD、CAT、GSH-Px活力显著上升(P〈0.05)。Western blot结果显示,与NG组比较,HG组VEGF和ICAM-1蛋白表达量增多(P〈0.05或P〈0.01)。与HG组比较,黄诺玛苷干预后VEGF和ICAM-1蛋白表达量随浓度递增而依次减少(P〈0.05或P〈0.01)。结论黄诺玛苷可能通过改善氧化应激水平和下调VEGF、ICAM-1的表达对高糖诱导HUVEC损伤具有一定保护作用。 展开更多
关键词 黄诺玛苷 静脉内皮细胞 氧化应激 血管内皮生长因子 细胞间黏附分子-1
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水通道蛋白基因在人脐静脉内皮细胞中的表达 预览
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作者 徐亦辰 王慧丰 +4 位作者 华荣 王娟 李云娟 赵文靖 莫毅 《广西医学》 CAS 2018年第14期1616-1618,1623共4页
目的探索水通道蛋白(AQP)基因在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中的表达情况。方法使用胰蛋白酶消化法从新生儿脐带中分离HUVECs,培养传代后通过形态学观察及免疫细胞化学染色法对内皮细胞进行鉴定。采用反转录聚合酶链反应法检测HUVECs... 目的探索水通道蛋白(AQP)基因在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中的表达情况。方法使用胰蛋白酶消化法从新生儿脐带中分离HUVECs,培养传代后通过形态学观察及免疫细胞化学染色法对内皮细胞进行鉴定。采用反转录聚合酶链反应法检测HUVECs中AQP基因的表达情况。结果 HUVECs轮廓以梭形和多边形为主,细胞核位于细胞中央。免疫细胞化学染色结果显示,v WF、CD31染色阳性,胞浆内可见棕黄色颗粒。反转录聚合酶链反应检测结果显示,HUVECs中检测到AQP1、AQP5基因的表达。结论 HUVECs中有AQP1、AQP5基因表达,其可能参与腹水的形成。 展开更多
关键词 水通道蛋白 静脉内皮细胞 腹水
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黄芪苷Ⅳ对微囊泡损伤的大鼠胸主动脉环舒张功能的保护作用
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作者 李烨仪 尚曼 +7 位作者 张琨玮 韦苏 刘超 祝倩 赵俊玉 吴艳娜 宋君秋 刘艳霞 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期164-168,共5页
目的:以缺氧/复氧诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)释放的微囊泡(H/R-EMVs)处理大鼠胸主动脉环,造成其舒张功能损伤,探究黄芪苷Ⅳ(AST)对大鼠胸主动脉环舒张功能的影响及相关机制。方法:采用缺氧12h/复氧4 h的方法诱导体外培养的HU... 目的:以缺氧/复氧诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)释放的微囊泡(H/R-EMVs)处理大鼠胸主动脉环,造成其舒张功能损伤,探究黄芪苷Ⅳ(AST)对大鼠胸主动脉环舒张功能的影响及相关机制。方法:采用缺氧12h/复氧4 h的方法诱导体外培养的HUVECs产生MVs,H/R-EMVs保存于D-Hank’s液中备用。雄性Wistar大鼠开胸取出胸主动脉,制备3~4 mm宽、内皮完整的胸主动脉环。实验分为6组:H/R-EMVs组,在孵育胸主动脉环的培养基中加入H/R-EMVs,使其终浓度为10μg/ml;不同剂量AST组分别采用10、20、40、60 mg/L AST与10μg/ml H/R-EMVs共同孵育胸主动脉环;对照组给予等体积的D-Hank’s溶液。孵育时间为4 h,每组各测定5个血管环。观察AST对舒张功能的影响,检测一氧化氮(NO)含量及t-eNOS、p-eNOS、t-Akt、p-Akt、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白质水平。结果:H/R-EMVs对大鼠胸主动脉环舒张功能有明显的抑制作用(P〈0.01)。与H/R-EMVs组相比,AST20、40和60 mg/L组剂量依赖性地提高大鼠胸主动脉环的舒张率(P〈0.01),使NO含量增加(P〈0.05,P〈0.01);t-eNOS、t-Akt和ERK1/2蛋白质水平不变,p-eNOS、p-Akt和p-ERK1/2蛋白质水平增高(P〈0.01)。结论:AST可显著改善H/R-EMVs损伤的大鼠胸主动脉环的舒张功能,其机制与提高NO含量及增加p-eNOS、p-Akt和pERK1/2蛋白质水平有关。 展开更多
关键词 黄芪苷Ⅳ 微囊泡 缺氧/复氧 静脉内皮细胞 胸主动脉环 大鼠
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