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大鼠冠状病毒和仙台病毒的双重PCR检测方法的建立与应用 预览
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作者 孟钰榕 郑龙 +7 位作者 祝岩波 王璇 尤红煜 刘健敏 栗彦宁 连伟光 张东明 王俊霞 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期181-186,共6页
目的建立快速检测实验大鼠冠状病毒和仙台病毒的双重PCR方法。方法根据大鼠冠状病毒N基因、仙台病毒L基因设计特异性引物;经过双重PCR优化,特异性和敏感性的检测,建立双重PCR体系。应用该PCR体系检测人工感染仙台病毒组织DNA样本和实验... 目的建立快速检测实验大鼠冠状病毒和仙台病毒的双重PCR方法。方法根据大鼠冠状病毒N基因、仙台病毒L基因设计特异性引物;经过双重PCR优化,特异性和敏感性的检测,建立双重PCR体系。应用该PCR体系检测人工感染仙台病毒组织DNA样本和实验动物组织样本,并与ELISA方法比对。结果双重PCR扩增出大鼠冠状病毒(168bp)和仙台病毒(262bp)目的条带,PCR扩增产物测序结果利用核酸BLAST功能进行同源序列对比,仙台病毒和大鼠冠状病毒同源性分别为100%和99%。仙台病毒和大鼠冠状病毒的检测下限为1.56×10^2copies/μL。特异性检测对小鼠肝炎病毒扩增,产生片段大小近似大鼠冠状病毒产物。应用建立的双重PCR体系检测人工感染仙台病毒组织DNA样本,30份DNA标本均被检出;检测94份实验动物肺组织样本,结果均阴性。结论建立的双重PCR方法操作简单、快速、特异性强、灵敏度高,能够实现对实验动物仙台病毒和大鼠冠状病毒病原体的快速检测。 展开更多
关键词 大鼠冠状病毒 仙台病毒 双重PCR
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鏖战病毒疆场 甲子春秋何妨——记2017年度国家最高科学技术奖获得者侯云德 预览 被引量:1
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作者 赵玲 《中国科技奖励》 2018年第2期20-25,共6页
侯云德很低调。 如非必要,他鲜少接受采访。寥寥几次中,他也言简意赅,甚少谈及自身。他说:“我做的都是分内之事,我是带领着一帮人在做,不是我一人的功劳。”正因如此,身为中国工程院院士,曾经10次获得国家科技奖的他,却鲜有... 侯云德很低调。 如非必要,他鲜少接受采访。寥寥几次中,他也言简意赅,甚少谈及自身。他说:“我做的都是分内之事,我是带领着一帮人在做,不是我一人的功劳。”正因如此,身为中国工程院院士,曾经10次获得国家科技奖的他,却鲜有报道。直至登上2017年度国家最高科学技术奖的领奖台。从习近平总书记手中接过获奖证书时,人们才得以一窥其一甲子的功业。 展开更多
关键词 侯云德 病毒 仙台病毒 病毒 国家最高科学技术奖 人白细胞干扰素
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梗阻性和非梗阻性无精子症患者睾丸组织来源iPSCs系的建立 预览
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作者 郭飞翔 付欣 +4 位作者 陈嘉欣 马征来 张文 安庚 范勇 《基础医学与临床》 CSCD 2018年第12期1691-1695,共5页
目的利用梗阻性无精子症(OA)和非梗阻性无精子症(NOA)患者的睾丸组织建立诱导性多能干细胞(iPSCs)系,比较两者建系过程有无差别。方法分别取3例OA患者和特发性NOA患者5~6mm^3的睾丸组织,组织块培养方法进行原代培养,传至3~4代转染仙台病... 目的利用梗阻性无精子症(OA)和非梗阻性无精子症(NOA)患者的睾丸组织建立诱导性多能干细胞(iPSCs)系,比较两者建系过程有无差别。方法分别取3例OA患者和特发性NOA患者5~6mm^3的睾丸组织,组织块培养方法进行原代培养,传至3~4代转染仙台病毒,待细胞增殖满后转移至饲养层细胞上继续培养,第21~22天挑取克隆,建立iPSCs系并进行多能性和分化能力的鉴定。结果两株iPSCs系均成功建立,建系过程无明显差异,碱性磷酸酶(AP)染色均为阳性;八聚体结合转录因子4(OCT4)、性别决定基因相关蛋白2(SOX2)、阶段特异性胚胎抗原-4(SSEA-4)、肿瘤排斥抗原-1-60(TRA-1-60)的免疫荧光染色均为阳性;小鼠体内的畸胎瘤实验也表明获得的两株iPSCs系具有向3个胚层分化的潜能。结论利用仙台病毒非基因整合方法,OA患者和特发性NOA患者的睾丸组织均能建立iPSCs系。 展开更多
关键词 梗阻性无精子症 非梗阻性无精子症 诱导性多能干细胞 仙台病毒
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两种人牙源性iPSCs的重编程效应及生物学特性比较 预览
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作者 郭宇 徐静舒 +1 位作者 戴青原 谭小兵 《重庆医学》 2018年第8期1070-1073,共4页
目的 比较两种人牙源性iPSCs的重编程效应及其生物学特性。方法 原代培养人牙髓干细胞(DPSCs)和根尖乳头干细胞(SCAP),仙台病毒重编程系统将两种细胞诱导为诱导性多潜能干细胞(iPSCs),比较两种iPSCs的形态、重编程效率及时间,逆转... 目的 比较两种人牙源性iPSCs的重编程效应及其生物学特性。方法 原代培养人牙髓干细胞(DPSCs)和根尖乳头干细胞(SCAP),仙台病毒重编程系统将两种细胞诱导为诱导性多潜能干细胞(iPSCs),比较两种iPSCs的形态、重编程效率及时间,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测SeV及外源性转录基因的表达。结果 人DPSCs、SCAP均重编程为iPSCs,具有典型ES样克隆形态,重编程效率分别为(0.68±0.02)%、(0.7±0.01)%,差异无统计学意义(P〉0.05);重编程时间分别为(26.0±2.1)、(27.0±1.4)d,差异无统计学意义(P〉0.05)。RT-PCR结果显示,两种iPSCs无外源性病毒或转录基因序列的表达。结论 人DPSCs和SCAP可重编程为无病毒、无转录基因iPSCs,是iPSCs的理想来源。 展开更多
关键词 诱导性多潜能干细胞 牙髓干细胞 根尖乳头干细胞 仙台病毒 重编程
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血红蛋白Bart’s水肿胎儿综合征诱导多能干细胞系的建立 预览
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作者 冼业星 严金梅 +2 位作者 陈玉嫦 李东至 孙筱放 《实用医学杂志》 北大核心 2018年第7期1123-1127,1131共6页
目的建立血红蛋白Bart’s水肿胎儿综合征诱导多能干细胞模型。方法通过收集血红蛋白Bart’s水肿胎儿综合征孕妇患者羊水标本,分离培养其中的羊水细胞;然后通过使用仙台病毒将hOct3/4、hSox2、hKlf4和hL.Myc四种因子转导羊水细胞进... 目的建立血红蛋白Bart’s水肿胎儿综合征诱导多能干细胞模型。方法通过收集血红蛋白Bart’s水肿胎儿综合征孕妇患者羊水标本,分离培养其中的羊水细胞;然后通过使用仙台病毒将hOct3/4、hSox2、hKlf4和hL.Myc四种因子转导羊水细胞进行重编程;最后通过形态学、碱性磷酸酶染色、干细胞多能表面标志物免疫荧光、RT-PCR、EB自发三胚层分化和畸胎瘤体内分化潜能实验对获得的诱导多能干细胞进行检测分析。结果获得的诱导多能干细胞呈现出明显的干细胞样形态,碱性磷酸酶染色、多能性标志物免疫荧光染色及逆转录PCR等检测结果均符合干细胞特征,与人胚胎干细胞特性相似。体外EB自发分化和体内畸胎瘤分化实验也证实具有完全的三胚层分化发育潜力。结论成功建立血红蛋白Bart’s水肿胎儿综合征诱导多能干细胞系,为后续疾病特异性造血分化模型的建立、疾病治疗的研究及药物开发应用奠定基础。 展开更多
关键词 血红蛋白Bart’s水肿胎儿综合征 羊水细胞 诱导多能干细胞 仙台病毒 疾病模型
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Inactivated Sendai Virus Induces ROS-dependent Apoptosis and Autophagy in Human Prostate Cancer Cells 预览
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作者 QIAN Miao TAN Hai Ming +2 位作者 YU Ning WANG Tao ZHANG Quan 《生物医学与环境科学:英文版》 SCIE CAS CSCD 2018年第4期280-289,共10页
关键词 APOPTOSIS 仙台病毒 ROS 前列腺 APOPTOSIS 房间 癌症 RAPAMYCIN
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两种重编程系统诱导人牙源性多潜能干细胞的对比研究 预览
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作者 谭小兵 徐静舒 +2 位作者 孙贵虎 宋俊呈 戴青原 《重庆医学》 CAS 北大核心 2017年第1期90-93,共4页
目的 对比研究两种人牙源性多潜能干细胞重编程体系的特点。方法 分别利用STEMCCA慢病毒/饲养层和仙台病毒/基质胶两种重编程系统,将人根尖乳头干细胞重编程为iPS细胞,比较两种方法的诱导效率、诱导工作量、iPS细胞非整倍体核型比例、... 目的 对比研究两种人牙源性多潜能干细胞重编程体系的特点。方法 分别利用STEMCCA慢病毒/饲养层和仙台病毒/基质胶两种重编程系统,将人根尖乳头干细胞重编程为iPS细胞,比较两种方法的诱导效率、诱导工作量、iPS细胞非整倍体核型比例、外源性基因消除难易程度等情况。结果STEMCCA重编程体系需要制备饲养层细胞MEF,重编程效率约为0.1%,后期经Cre-Loxp酶切技术可得到无外源性转录基因的iPS细胞。仙台病毒重编程体系为无饲养层培养,基质胶制备方便、标准统一,重编程效率约为0.7%,明显高于STEMCCA系统(P〈0.05),外源性病毒和转录基因经自然传代后逐渐消除。结论与STEMCCA系统相比,仙台病毒/基质胶体系更适于人牙源性iPS细胞的诱导。 展开更多
关键词 多潜能干细胞 乳头 干细胞 病毒 人诱导性多潜能干细胞 根尖乳头干细胞 重编程 仙台病毒
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无精症患者非基因整合诱导多能干细胞系的建立 预览
8
作者 杨汉胜 俞茜 +2 位作者 刘雅丽 范勇 康祥锦 《天津医药》 CAS 2017年第5期454-457,共4页
目的利用非基因整合方法建立无精症患者的诱导多能干细胞系(iPSCs)。方法采用目前商品化的无血清完全培养基(TeSR?2)和胚胎干细胞培养基(StemAdhere?DefinedMatrix)限定培养体系,利用非基因整合的仙台病毒感染无精症患者外周血... 目的利用非基因整合方法建立无精症患者的诱导多能干细胞系(iPSCs)。方法采用目前商品化的无血清完全培养基(TeSR?2)和胚胎干细胞培养基(StemAdhere?DefinedMatrix)限定培养体系,利用非基因整合的仙台病毒感染无精症患者外周血单个核细胞,建立了无精症患者的iPSCs系,应用免疫荧光、核型分析、拟胚体和畸胎瘤实验对iPSCs系的多能性、核型及分化能力进行鉴定。结果建立的iPSCs系具有人胚胎干细胞的特征。免疫荧光显示,干细胞多能性标志基因表达的八聚体结合转录因子4(OCT4)、性别决定基因相关蛋白2(SOX2)以及干细胞特异表面抗原阶段特异性胚胎抗原-4(SSEA-4)、肿瘤排斥抗原-1-60(TRA-1-60)均阳性;核型分析显示其具有正常的核型;拟胚体和畸胎瘤实验显示其在体外和体内具有向3个胚层分化的能力。结论利用非基因整合方法成功构建了无精症患者的诱导多能干细胞系。 展开更多
关键词 无精子症 多能干细胞 单核细胞 仙台病毒 非整合方法
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羊口疮病毒VIR蛋白对宿主细胞IFN-α表达的显著抑制 被引量:1
9
作者 王玲玲 卢炳州 +2 位作者 郑海学 张克山 刘湘涛 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1346-1348,共3页
羊口疮病毒(ORFV)属于痘病毒科副痘病毒属,可引起严重的人兽共患传染病。VIR是ORFV编码的非结构蛋白之一,参与ORFV的免疫逃避。仙台病毒(SeV)可以诱导干扰素的产生。为研究VIR蛋白对IFN-α表达的影响,本研究以山羊成纤维上皮细胞... 羊口疮病毒(ORFV)属于痘病毒科副痘病毒属,可引起严重的人兽共患传染病。VIR是ORFV编码的非结构蛋白之一,参与ORFV的免疫逃避。仙台病毒(SeV)可以诱导干扰素的产生。为研究VIR蛋白对IFN-α表达的影响,本研究以山羊成纤维上皮细胞(GSFs)为对象,使用SeV单独刺激、SeV与VIR共同刺激GSFs,定量ELISA方法检测GSFs上清中IFNQ的质量浓度。结果显示,VIR蛋白对SeV刺激的IFNa表达和分泌有明显的抑制作用。本研究为深入研究ORFV突破宿主细胞天然免疫屏障奠定了基础。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 仙台病毒 VIR IFN-Α
仙台病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立 预览 被引量:1
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作者 周洁 赵丽娟 +3 位作者 陶凌云 倪丽菊 高诚 陈洪岩 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期293-298,共6页
目的建立一种快捷、灵敏的检测方法,即反转录-环介导等温扩增方(RT-LAMP)用于仙台病毒(SeV)的检测。方法根据Gen Bank公布的SeV序列(DQ219803.1),在其保守区域设计了六套LAMP引物,利用LAMP Real-Time Turbidimeter LA-320C仪监测... 目的建立一种快捷、灵敏的检测方法,即反转录-环介导等温扩增方(RT-LAMP)用于仙台病毒(SeV)的检测。方法根据Gen Bank公布的SeV序列(DQ219803.1),在其保守区域设计了六套LAMP引物,利用LAMP Real-Time Turbidimeter LA-320C仪监测反应进程并筛选最佳引物、反应条件,建立对SeV核酸进行特异性扩增的RT-LAMP检测方法,并可通过加入目测荧光检测试剂肉眼判断结果。对所建立的方法进行了敏感性、特异性评估并对92份样品进行了检测。结果该方法在63℃恒温下作用60 min,SeV RNA获得了高效率的特异性扩增,与其余常见小鼠病毒无交叉反应;最低检出量为2.1TCID_(50) SeV,比RT-PCR方法高102倍;肉眼判断结果与RealTime Turbidimeter LA-320仪监测结果一致;通过对92份样品的RT-LAMP,RT-PCR和间接ELISA方法的检测比对,三者符合率为100%。结论建立的SV RT-LAMP检测方法具有快速、特异、灵敏,操作简单的特点,具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 仙台病毒 RT-LAMP 实时监控 快速检测
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小鼠仙台病毒LAMP快速检测方法的建立
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作者 王会娟 王蕾 +4 位作者 严磊 皮广禄 王胜 谭毅 赖国旗 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期460-465,共6页
目的:建立一种实验小鼠仙台病毒(Sendai virus,Se V)的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法。方法:采用LAMP技术,以小鼠Se V(gi:9627219)F蛋白的基因序列为靶基因,采用Primer Exploer V4软... 目的:建立一种实验小鼠仙台病毒(Sendai virus,Se V)的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法。方法:采用LAMP技术,以小鼠Se V(gi:9627219)F蛋白的基因序列为靶基因,采用Primer Exploer V4软件设计LAMP的6条特异性引物,应用病毒RNA提取试剂盒提取Se V RNA,通过优化LAMP反应体系条件建立小鼠Se V特异性的LAMP检测方法(Se V/LAMP)。同时,对该方法的特异性、稳定性、重复性、灵敏度进行验证,并初步用于临床检测。结果:所建立的Se V/LAMP方法可特异性的检测出Se V RNA,其他常见病原体均为阴性。Se V/LAMP能检测出不同批次同一时间或同一批次不同时间的Se V RNA;Se V/LAMP检测Se V RNA的最低检测含量为0.33 pg,与ELISA检测方法相比较,其灵敏度高(分别为5/30和2/30)。临床检测,Se V的阳性率为27.5%(11/40);全部反应可在1 h内完成。通过添加荧光染料SYBR Green I可直观目测实验结果。结论:建立的LAMP方法,具有特异、准确、灵敏、快速、简便的特点,可用于实验小鼠Se V的快速检测。 展开更多
关键词 小鼠 仙台病毒 环介导等温扩增
仙台病毒载体的研究与应用进展
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作者 付志浩 李永红 +2 位作者 高凯 饶春明 王军志 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第14期1595-1599,共5页
仙台病毒(Sendai virus,Se V)属于副粘病毒科呼吸道病毒属,基因组为不分节段的单负链RNA,编码NP,P,M,F,HN,L等11个蛋白。应用反向遗传学构建的仙台病毒载体是新兴的RNA病毒载体,由于其宿主范围广、表达量高、胞质表达、安全性好等诸... 仙台病毒(Sendai virus,Se V)属于副粘病毒科呼吸道病毒属,基因组为不分节段的单负链RNA,编码NP,P,M,F,HN,L等11个蛋白。应用反向遗传学构建的仙台病毒载体是新兴的RNA病毒载体,由于其宿主范围广、表达量高、胞质表达、安全性好等诸多优点,目前广泛用于基因治疗药物和疫苗研究。本文从仙台病毒的基因组分子结构、致病性和免疫原性、载体的构建和类型以及其应用等方面进行详细论述。 展开更多
关键词 仙台病毒 载体 反向遗传学 基因治疗 疫苗
构建阵挛性癫痫伴破碎红纤维综合征患者来源的诱导多能干细胞系 预览 被引量:1
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作者 胡焕然 徐天慧 +5 位作者 梁栋 罗春玉 林颖 季修庆 胡平 许争峰 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2016年第8期584-589,共6页
目的构建阵挛性癫痫伴破碎红纤维综合征(MERRF)患者来源的诱导多能干细胞(i PSCs)。方法采集MERRF患者外周血并分离PBMC,用含有4个重编程转录因子(OCT4、SOX2、KLF4和c-MYC)的仙台病毒感染PBMC,获得患者来源的i PSCs;用细胞形态... 目的构建阵挛性癫痫伴破碎红纤维综合征(MERRF)患者来源的诱导多能干细胞(i PSCs)。方法采集MERRF患者外周血并分离PBMC,用含有4个重编程转录因子(OCT4、SOX2、KLF4和c-MYC)的仙台病毒感染PBMC,获得患者来源的i PSCs;用细胞形态学、免疫荧光染色、拟胚体形成分化和RT-PCR对i PSCs的多能性进行鉴定;核型分析验证其安全性;焦磷酸测序检测患者来源的i PSCs中线粒体DNA(mt DNA)第8344位的突变比例。结果患者来源的i PSCs经过多能性验证实验证明其具有多能性;核型分析表明,i PSCs核型正常;建立的6个i PSCs细胞系中,mt DNA 8344位点的突变比例分别为68.24%、60.51%、45.95%、24.06%、62.11%和0。结论通过非整合重编程技术成功构建MERRF患者来源i PSCs细胞系,为进一步研究MERRF疾病提供多能干细胞资源。 展开更多
关键词 诱导多能干细胞 重编程 阵挛性癫痫伴破碎红纤维综合征 仙台病毒 异质性
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长爪沙鼠仙台病毒(SeV)抗体ELISA检测方法的建立与应用 被引量:1
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作者 王吉 卫礼 +5 位作者 付瑞 李晓波 王淑菁 巩薇 岳秉飞 贺争鸣 《实验动物科学》 2015年第6期39-43,共5页
目的建立长爪沙鼠仙台病毒(Se V)抗体ELISA检测方法,用于长爪沙鼠体内仙台病毒抗体的检测。方法孵育鸡胚,接种Se V,制备鸡胚尿囊液正常抗原和Se V特异抗原,滴定酶结合物和抗原最佳工作浓度,并进行特异性、敏感性、精密性、稳定性实验... 目的建立长爪沙鼠仙台病毒(Se V)抗体ELISA检测方法,用于长爪沙鼠体内仙台病毒抗体的检测。方法孵育鸡胚,接种Se V,制备鸡胚尿囊液正常抗原和Se V特异抗原,滴定酶结合物和抗原最佳工作浓度,并进行特异性、敏感性、精密性、稳定性实验。结果正常抗原、特异抗原和酶结合物最佳工作浓度分别为0.1μg/m L、2μg/m L和1∶5 000;正常抗原、特异抗原批内变异系数分别为9.6%和8.4%,批间平均变异系数分别为9.0%和5.9%;检测灵敏度为1∶10 240;与沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)、小鼠肺炎(PVM)、呼肠孤病毒3型(Reo3)均无交叉反应。稳定性试验相对偏差小于25%。结论建立的ELISA方法特异性、敏感性强,重复性、稳定性好,检测结果,准确、可靠。可用于长爪沙鼠体内Se V抗体的检测。 展开更多
关键词 仙台病毒 ELISA 长爪沙鼠
光激化学发光免疫分析技术在仙台病毒检测中的应用 预览 被引量:1
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作者 常慧 高伟 +2 位作者 张江义 向志光 魏强 《中国比较医学杂志》 北大核心 2015年第5期58-61,共4页
目的应用光激化学发光免疫分析技术(Alpha LISA)建立仙台病毒检测方法。方法通过方阵实验筛选仙台病毒Alpha LISA检测的最佳抗原浓度以及供体微珠与受体微珠的最佳受试浓度及比例,对大鼠血清进行测试,确立血清检测浓度;对40份大鼠血... 目的应用光激化学发光免疫分析技术(Alpha LISA)建立仙台病毒检测方法。方法通过方阵实验筛选仙台病毒Alpha LISA检测的最佳抗原浓度以及供体微珠与受体微珠的最佳受试浓度及比例,对大鼠血清进行测试,确立血清检测浓度;对40份大鼠血清分别使用Alpha LISA检测方法和ELISA检测方法进行检测,并对检测结果进行比较。结果生物素化标记的仙台病毒多肽类抗原的最佳测试浓度为250 nmol/L,供体微珠与受体微珠的最佳比例为1:1,使用浓度为20μg/m L,在Alpha LISA检测方法中大鼠血清测试最佳使用浓度1:10000;共检测40份大鼠血清,ELISA方法检出阳性7份,阳性率为17.5%,Alpha LISA方法检出阳性8份,阳性率为20.0%,ELISA检测阳性的7份血清经Alpha LISA方法检测均为阳性,Alpha LISA检出的另外一份样品经IFA方法验证为阳性。结论初步建立了仙台病毒光激化学发光免疫分析技术(Alpha LISA)的检测方法,该方法敏感性堪比经典ELISA方法,且血清样本的用量减少,无需洗涤等步骤,在方法的简并性及准确性上有一定优势。 展开更多
关键词 仙台病毒 ALPHA LISA
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用非整合重编程技术构建人外周血单个核细胞来源的诱导多能干细胞 预览 被引量:1
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作者 梁栋 胡焕然 +7 位作者 李雅红 刘安 林颖 马定远 张菁菁 王艳 胡平 许争峰 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2015年第10期740-743,共4页
目的用非整合重编程技术构建人外周血单个核细胞(PBMC)来源诱导多能干细胞(i PSC)。方法收集健康人外周血标本,分离PBMC,用含4个重编程转录因子(OCT3/4、SOX2、KLF4和c-MYC)的仙台病毒感染PBMC,并用无饲养层细胞的培养体系培育获... 目的用非整合重编程技术构建人外周血单个核细胞(PBMC)来源诱导多能干细胞(i PSC)。方法收集健康人外周血标本,分离PBMC,用含4个重编程转录因子(OCT3/4、SOX2、KLF4和c-MYC)的仙台病毒感染PBMC,并用无饲养层细胞的培养体系培育获得i PSC。通过细胞形态学、碱性磷酸酶(AP)染色、免疫荧光染色、拟胚体形成和分化实验对i PSC细胞进行多能性验证;用核型分析和仙台病毒基因组RNA检测对其进行安全性验证。结果在仙台病毒感染后16 d后,PBMC出现i PSC样克隆。i PSC可进行传代培养,且经多能性验证实验证明其具有多能性;安全性验证结果表明,i PSC核型正常,外源性病毒基因组RNA可被完全清除。结论建立了对PBMC进行非整合重编程的诱导体系,并获得了具有多能性、核型正常且不含外源基因的i PSC。 展开更多
关键词 人外周血单个核细胞 重编程 诱导多能干细胞 非整合 仙台病毒
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紫外线灭活仙台病毒诱导人胶质瘤细胞系LN229凋亡作用 预览
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作者 石立莹 李梅 +2 位作者 张磊 耿鹏 李咏梅 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期597-601,共5页
目的探讨紫外线灭活仙台病毒致人胶质瘤LN229细胞凋亡作用及其机制。方法用不同剂量灭活病毒感染LN229细胞,24h后,MTT法检测灭活病毒对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;分光光度法检测caspase活性;Western blotting检测凋亡... 目的探讨紫外线灭活仙台病毒致人胶质瘤LN229细胞凋亡作用及其机制。方法用不同剂量灭活病毒感染LN229细胞,24h后,MTT法检测灭活病毒对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;分光光度法检测caspase活性;Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达水平。结果 MTT检测显示灭活仙台病毒能够剂量依赖性抑制LN229细胞增殖;流式细胞仪检测显示灭活病毒组细胞凋亡率呈剂量依赖性升高;caspase活性测定显示灭活病毒组细胞中caspase-3,-8和-9蛋白活性呈剂量依赖性增加;Western blotting结果显示,随着灭活病毒滴度增加,细胞中Bax、细胞色素c、Fas、FasL表达水平升高、而Bcl-2、caspase-8前体、caspase-9前体和caspase-3前体蛋白表达下降。结论灭活仙台病毒能够诱导LN229细胞剂量依赖性凋亡,其机制与线粒体途径和死亡受体途径相关。 展开更多
关键词 仙台病毒 人胶质瘤细胞系LN229 凋亡 线粒体途径 死亡受体途径
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人干扰素λ1基因启动子荧光素酶报告基因质粒的构建及其转录活性分析 被引量:2
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作者 庞立丽 邵长胜 段招军 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第6期752-755,760共5页
目的 构建人干扰素λ1(interferonλ1,IFNλ1)基因启动子荧光素酶报告基因载体,并探讨仙台病毒及质粒IRF3-5D和HA-IRF7对其转录活性的影响。方法 提取BEAS-2B细胞基因组DNA,以其为模板,PCR扩增IFNλ1基因启动子,插入荧光素酶报告基因... 目的 构建人干扰素λ1(interferonλ1,IFNλ1)基因启动子荧光素酶报告基因载体,并探讨仙台病毒及质粒IRF3-5D和HA-IRF7对其转录活性的影响。方法 提取BEAS-2B细胞基因组DNA,以其为模板,PCR扩增IFNλ1基因启动子,插入荧光素酶报告基因载体pGL3-enhancer,构建IFNλ1基因启动子荧光素酶报告基因质粒IFNL1-luc,将其转染293T细胞,同时用质粒IFNβ-luc和pGL3-enhancer转染作为对照。转染24 h后感染仙台病毒,于感染前和感染后4、12、18和24 h收集细胞,进行双荧光素酶活性检测;用质粒IRF3-5D或HA-IRF7与质粒IFNL1-luc共转染,36 h后收集细胞,进行双荧光素酶活性检测。结果IFNλ1基因启动子荧光素酶报告基因质粒IFNL1-luc经双酶切及测序鉴定,证明构建正确;分别转染质粒IFNL1-luc和IFNβ-luc的细胞感染仙台病毒后,荧光素酶活性倍数均随时间延长呈明显上升趋势,至18 h达到峰值(分别为1 000倍和2 300倍),转染质粒pGL3-enhancer的细胞感染仙台病毒后,不同时间点收集的细胞,荧光素酶活性倍数一直处于较低水平;质粒HA-IRF7或IRF3-5D对IFNL1-luc的活化倍数明显高于pGL3-enhancer(P〉0.05)。结论 成功构建了IFNλ1基因启动子荧光素酶报告基因质粒IFNL1-luc,仙台病毒及质粒IRF3-5D和HA-IRF7均能激活IFNL1-luc的转录,为进一步研究调控IFNλ1表达的信号转导通路奠定了基础。 展开更多
关键词 干扰素λ1 启动子 双荧光素酶报告基因 仙台病毒 转录 活性
仙台病毒核酸快速检测方法的建立和应用 预览 被引量:2
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作者 熊炜 林颖峥 +6 位作者 魏晓锋 郭雨燕 张强 刘俊平 李健 胡建华 黄忠荣 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第4期23-28,共6页
仙台病毒(Sendai virus,SeV)是一种常见的可引起啮齿类动物呼吸道疾病的病原,感染迅速,并且隐性感染率高,一旦感染较难从鼠群中清除,从而影响动物健康。为满足对入境噬齿类实验动物和野生动物仙台病毒快速检测的需要,本研究针对... 仙台病毒(Sendai virus,SeV)是一种常见的可引起啮齿类动物呼吸道疾病的病原,感染迅速,并且隐性感染率高,一旦感染较难从鼠群中清除,从而影响动物健康。为满足对入境噬齿类实验动物和野生动物仙台病毒快速检测的需要,本研究针对SeV编码基质蛋白和融合糖蛋白基因的保守序列设计引物和荧光探针,建立了仙台病毒RT-PCR和Real-time RT-PCR检测方法。将建立的方法应用于仙台病毒感染鼠不同临床样品和组织培养物的检测,证实两种核酸检测方法具有良好的特异性、灵敏性和稳定性,适合应用于出入境口岸实验和野生噬齿类动物仙台病毒疫情的快速检测。 展开更多
关键词 仙台病毒 REAL-TIME RT-PCR TAQMAN探针
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大鼠仙台病毒ELISA、间接免疫荧光和免疫印迹三种检测方法比较 预览 被引量:5
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作者 向志光 佟巍 +4 位作者 李雨函 刘先菊 张丽芳 王艳蓉 魏强 《中国比较医学杂志》 2013年第1期23-26,共4页
目的比较ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)、IFA(immuno-fluorescence assay)和WB(Western blot)三种方法在大鼠仙台病毒血清学检测中的差异。方法仙台病毒蛋白抗原经凝胶电泳分离转移后用于血清学检测的WB方法;使用IFA... 目的比较ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)、IFA(immuno-fluorescence assay)和WB(Western blot)三种方法在大鼠仙台病毒血清学检测中的差异。方法仙台病毒蛋白抗原经凝胶电泳分离转移后用于血清学检测的WB方法;使用IFA、ELISA方法对20份无菌大鼠、227份SPF大鼠以及63份清洁级大鼠送检血清样品进行检测,阳性及可疑样品用WB方法进行了验证。结果 20份无菌大鼠血清样品被3种方法检测为仙台病毒抗体阴性;SPF级大鼠样品被IFA方法判定为阴性,1.32%(3/227)被ELISA方法判定为阳性,其中有2/3被WB确认为阳性;ELISA、IFA和WB在清洁级大鼠样品中检出仙台病毒的阳性率分别为为18.12%、11.34%和15.87%。结论三种检测方法灵敏度从高到低依次为ELISA、WB和IFA。WB方法可作为IFA和ELISA难以确定结果的替代方法。 展开更多
关键词 仙台病毒 ELISA IFA Westernblot
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