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基于耐药特性联合单细胞培养识别肝癌干细胞克隆亚群 被引量:1
1
作者 陈娟 区泳芳 +3 位作者 蔡捷 陶璐 陈相宜 邝晓聪 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2014年第3期319-326,共8页
目的:基于癌干细胞的耐药特性联合单细胞培养方法识别肝癌干细胞所在的克隆亚群.方法:以BEL-7404细胞系为研究对象,裸鼠体内移植瘤形成实验,并予阿霉素(adriamycin,ADM)8 mg/kg干预,待肿瘤直径为1.5 cm时取移植瘤细胞做原代培养,并... 目的:基于癌干细胞的耐药特性联合单细胞培养方法识别肝癌干细胞所在的克隆亚群.方法:以BEL-7404细胞系为研究对象,裸鼠体内移植瘤形成实验,并予阿霉素(adriamycin,ADM)8 mg/kg干预,待肿瘤直径为1.5 cm时取移植瘤细胞做原代培养,并在裸鼠体内连续传代4代,并将第4代移植瘤细胞命名为"BEL-7404-ADM-P4",根据成瘤时间检测肝癌干细胞富集情况.联合单细胞培养,取BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4所形成的克隆根据克隆形态分为全克隆、部分克隆、旁克隆,检测BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4单克隆中全克隆、部分克隆、旁克隆的癌干特性,即增殖能力、克隆形成率及悬浮球形成率;取其全克隆、部分克隆、旁克隆做hoechst33342染色,并在共聚焦显微镜下观察其染色情况;根据BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4单克隆中全克隆、部分克隆、旁克隆的增殖能力、克隆形成率及悬浮球形成率以及hoechst33342染色情况识别癌干细胞所在的克隆亚群.结果:裸鼠体内低剂量阿霉素干预,在体内连续成瘤传代过程中,裸鼠皮下移植瘤成瘤率均为100%,且成瘤时间从第一代到第四代均有所缩短,以此达到了肝癌干细胞的初步富集;增殖能力:全克隆增殖速度最快,细胞量最大,部分克隆次之,旁克隆增殖速度最慢,并于第10天开始出现细胞皱缩死亡;克隆形成率:BEL-7404-ADM-P4-H高于BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4-M,差异有统计学意义(P〈0.05);悬浮球形成率:仅BEL-7404-H及BEL-7404-ADM-P4-H可形成悬浮球,其余细胞系不形成悬浮球,而BEL-7404-H及BEL-7404-ADM-P4-H悬浮球形成率比较,无统计学意义(P〉0.05);BEL-7404及BEL-7404-ADM-P4单克隆中全克隆、部分克隆、旁克隆hoechst33342染色情况:BEL-7404及BEL-7404-A D M-P4单克隆中全克隆都有极少数不染和低染的细胞存在,但部分克隆、旁克隆全染,且BEL-7404单克隆中全克隆、部分克隆、旁克隆hoechst33342荧光强度均强� 展开更多
关键词 阿霉素干预 肝癌干细胞 单细胞培养 克隆 部分克隆 克隆
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全克隆与肿瘤干细胞 被引量:1
2
作者 周志华(综述) 王卫兵(综述) 张建东(综述) 《国际病理科学与临床杂志》 CAS 2011年第5期 420-423,共4页
干细胞在体外单个培养时,形成的克隆具有规则而致密的形态,这种独特的克隆被称为全克隆。近年来发现肿瘤内也存在具有干细胞特性的肿瘤细胞,即肿瘤干细胞,是肿瘤发生、复发和转移的根源。而研究证实,多种类型的肿瘤干细胞在体外单克隆... 干细胞在体外单个培养时,形成的克隆具有规则而致密的形态,这种独特的克隆被称为全克隆。近年来发现肿瘤内也存在具有干细胞特性的肿瘤细胞,即肿瘤干细胞,是肿瘤发生、复发和转移的根源。而研究证实,多种类型的肿瘤干细胞在体外单克隆培养亦可形成特征性的全克隆,这对分离富集肿瘤干细胞及深入研究其生物学特性具有重要意义。全克隆可望作为肿瘤干细胞研究一个有用的体外模型。 展开更多
关键词 克隆 肿瘤干细胞 克隆
阿霉素对肾上腺皮质癌细胞系SW-13克隆特性的影响
3
作者 曾文清 陈小舟 +3 位作者 黄振兴 杨海燕 邝晓聪 罗佐杰 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第3期343-346,共4页
目的:研究阿霉素在体干预对肾上腺皮质癌系SW-13克隆特性的影响。方法:通过建立阿霉素干预裸鼠连续传代SW-13细胞系皮下移植瘤模型,将空白组及实验组细胞进行单细胞克隆行成试验,观察单个细胞生长曲线,并计算克隆形成率及3种克隆... 目的:研究阿霉素在体干预对肾上腺皮质癌系SW-13克隆特性的影响。方法:通过建立阿霉素干预裸鼠连续传代SW-13细胞系皮下移植瘤模型,将空白组及实验组细胞进行单细胞克隆行成试验,观察单个细胞生长曲线,并计算克隆形成率及3种克隆(全克隆、部分克隆和旁克隆)的百分比,并进行Hoechst33342试验检测细胞的耐药性。结果:SW-13细胞系经过阿霉素干预裸鼠连续传代移植瘤模型后,克隆形成率较空白对照组增加(P〈0.05);全克隆的百分比高于空白对照组(P〈0.05);经Hoeehst33342试验发现经阿霉素干预肾上腺皮质癌细胞荧光减弱。结论:阿霉素在体干预提高肾上腺皮质癌细胞系SW-13的克隆形成能力及全克隆形成能力,并提高其耐药性。 展开更多
关键词 肾上腺皮质肿瘤 克隆 克隆 阿霉素 BALB/c-nu裸鼠
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肝癌干细胞体外富集模式的构建 预览 被引量:1
4
作者 杨帅 陈娟 +3 位作者 佘佐亚 陈相宜 蔡捷 邝晓聪 《山东医药》 CAS 北大核心 2016年第23期1-4,共4页
目的 构建肝癌干细胞体外富集模式。方法 选择肝母细胞瘤Hep G2细胞系,以有限稀释法培养体外单细胞,观察体外单细胞克隆培养的克隆细胞生长曲线和形成全克隆、部分克隆以及旁克隆的比例,选取全克隆逐级扩增,取1×104和1×106的H... 目的 构建肝癌干细胞体外富集模式。方法 选择肝母细胞瘤Hep G2细胞系,以有限稀释法培养体外单细胞,观察体外单细胞克隆培养的克隆细胞生长曲线和形成全克隆、部分克隆以及旁克隆的比例,选取全克隆逐级扩增,取1×104和1×106的Hep G2细胞进行裸鼠皮下成瘤实验,qRT-PCR检测全克隆癌干细胞表面标志物ABCG2、ALDH1A3、CD44、CXCR4、OCT4 mRNA,悬浮球形成实验计算全克隆悬浮球形成率。对全克隆细胞加0.5、0.3、0.2、0.1、0.05、0.01μg/m L浓度的阿霉素干预48 h,观察全克隆生长情况;对于干预后存活的全克隆全部进行逐级扩增和裸鼠荷瘤实验。结果 Hep G2细胞克隆形成率为32.78%±9.03%,其中全克隆、部分克隆、旁克隆百分比分别为7.12%±2.96%、62.67%±13.39%、30.21%±14.87%;所有全克隆均可逐级扩增;1×104、1×106个Hep G2细胞全克隆接种裸鼠成瘤率分别为12.5%、100%;与Hep G2细胞相比,单细胞全克隆ABCG2、CD44、ALDH1A3、CXCR4和OCT4表达倍数分别为2.26±0.33、2.67±0.55、3.96±1.56、2.56±0.55、1.05±0.40,两者ABCG2、ALDH1A3、CD44、CXCR4相比,P均〈0.05;只有Hep G2全克隆细胞可形成悬浮球。单细胞克隆培养后的全克隆进行阿霉素干预,发现仅加入0.1、0.05、0.01μg/m L阿霉素的Hep G2细胞全克隆存活,接种裸鼠成瘤率均为100%。结论 成功构建了肝癌干细胞体外富集模式。 展开更多
关键词 肿瘤干细胞 肝癌干细胞 细胞克隆 细胞培养
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禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)全基因克隆及序列分析 预览 被引量:32
5
作者 张建林 于康震 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第3期 232-235,共4页
本研究用无特定病原体(SPF)鸡胚增殖禽流感病毒鹅体分离株A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)(GD1/96),提取病毒基因组总RNA,运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别扩增该病毒分... 本研究用无特定病原体(SPF)鸡胚增殖禽流感病毒鹅体分离株A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)(GD1/96),提取病毒基因组总RNA,运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别扩增该病毒分离株的8个基因片段的cDNA,分别克隆后进行序列测定。序列分析结果表明,所扩增到的8个片段均包含相应的病毒基因的完整开放阅读框架。GD1/96株与1997年香港禽流感事件中的4株香港流感病毒分离株(分别来自人、鸡、鸭和鹅)的HA基因的高度同源性说明它们可能起源于同一种系,但NS基因的差异说明它们分属于不同的基因群系。GD1/96株与香港流感病毒分离株的核苷酸和推导的氨基酸序列的同源性较低(63.9% ̄98.1%),而香港流感病毒分离株之间的核苷酸和氨基酸序列的同源性很高(96.5% ̄100%),且香 展开更多
关键词 禽流感病毒 分离株 基因克隆 序列分析
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鸭圆环病毒全基因组克隆与序列分析 预览 被引量:28
6
作者 傅光华 程龙飞 +3 位作者 施少华 彭春香 陈红梅 黄瑜 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期 138-143,共6页
为研究鸭圆环病毒全基因组的分子生物学特性,运用重叠PCR技术从鸭组织脏器提取的DNA中扩增出2条核苷酸序列,拼接后对其核酸组成、基因组结构及病毒的遗传变异进行分析。结果表明所获病毒核酸为大小1995nt的环型DNA,包含6个ORF,与登... 为研究鸭圆环病毒全基因组的分子生物学特性,运用重叠PCR技术从鸭组织脏器提取的DNA中扩增出2条核苷酸序列,拼接后对其核酸组成、基因组结构及病毒的遗传变异进行分析。结果表明所获病毒核酸为大小1995nt的环型DNA,包含6个ORF,与登录在GenBank中克隆株MuDCV(AY228555)的同源性高达97.4%,可见所扩增的核酸序列为鸭圆环病毒基因组序列。 展开更多
关键词 鸭圆环病毒 基因组克隆 序列分析
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猪Ⅱ型圆环病毒豫A株的全基因组克隆与序列分析 预览 被引量:14
7
作者 曹胜波 陈焕春 +3 位作者 肖少波 赵俊龙 吕建强 钱平 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期 137-141,共5页
参照国外发表的猪Ⅱ型圆环病毒(porcine circovirus type 2,PCV-2)全基因组序列,设计一对PCV-2特异性引物,用该室分离的PCV-2豫A株感染PK-15细胞,从中提取PCV-2复制型基因组DNA,并以之为模板进行PCR扩增.回收PCR产物,构建重组测序质粒T-... 参照国外发表的猪Ⅱ型圆环病毒(porcine circovirus type 2,PCV-2)全基因组序列,设计一对PCV-2特异性引物,用该室分离的PCV-2豫A株感染PK-15细胞,从中提取PCV-2复制型基因组DNA,并以之为模板进行PCR扩增.回收PCR产物,构建重组测序质粒T-PCV-2.测序结果表明,猪Ⅱ型圆环病毒豫A株的全基因组为1767bp,与GenBank收录的PCV-2国外分离株核苷酸的同源性可高达97%.序列分析表明,复制型豫A株的基因组包含10个读码框架,其中ORF1、ORF2是其两个最主要的读码框架,分别编码314、234个氨基酸.豫A株和PCV-1间的ORF1、ORF2的氨基酸序列同源性分别为85%、66%,与其它PCV-2毒株间的ORF1氨基酸同源性均在98%以上,而ORF2的氨基酸同源性为92%~97%. 展开更多
关键词 猪Ⅱ型圆环病毒豫A株 基因组克隆 序列分析 PCV-2
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在MDCK细胞上高产的乙型流行性感冒病毒株的筛选及其全基因组克隆 预览 被引量:6
8
作者 齐立 吴昆昱 +4 位作者 李梓 张烨 董婕 张立国 张智清 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期 195-199,共5页
流行性感冒(流感)病毒可引起世界范围的大流行,因此需要及时地生产流感疫苗来预防流感的流行.乙型流感病毒是疫苗的重要组成部分.传统制备疫苗的方法是使用鸡胚生产,存在很多缺陷,应用哺乳动物细胞生产流感疫苗是个更好的选择.但是,乙... 流行性感冒(流感)病毒可引起世界范围的大流行,因此需要及时地生产流感疫苗来预防流感的流行.乙型流感病毒是疫苗的重要组成部分.传统制备疫苗的方法是使用鸡胚生产,存在很多缺陷,应用哺乳动物细胞生产流感疫苗是个更好的选择.但是,乙型流感病毒感染MDCK细胞后,很难得到持续的高产.此实验筛选到的乙型流感病毒在MDCK细胞连续传代15代后,PFU值从第1代的8×104到第15代2×109,TCID50从第1代6.5到第15代的8.0.将筛选到的毒株进行全基因组克隆,用两套引物获得乙型流感病毒的全部8个节段.此结果为利用反向遗传技术将高产毒株与流行毒株重配,进而在哺乳动物细胞上生产基因工程流感疫苗打下基础. 展开更多
关键词 流行性感冒 病毒 乙型流感 毒株 通用引物 哺乳动物细胞 疫苗 基因组克隆
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乙型肝炎病毒全基因克隆及序列分析发现-D/C基因型重组株 预览 被引量:9
9
作者 黄维金 张华远 +4 位作者 王佑春 林京香 吴星 周诚 李河民 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期 418-422,共5页
目的 构建含有adr、adw、ayw3个血清型的HBV全基因组质粒,并进行测序及序列分析。方法 从HBsAg携带者的血清中扩增出S区克隆,筛选出adr、adw、ayw血清型的血清,然后扩增HBV的全基因组,对扩增产物进行克隆测序。利用DNAStar的MegAlig... 目的 构建含有adr、adw、ayw3个血清型的HBV全基因组质粒,并进行测序及序列分析。方法 从HBsAg携带者的血清中扩增出S区克隆,筛选出adr、adw、ayw血清型的血清,然后扩增HBV的全基因组,对扩增产物进行克隆测序。利用DNAStar的MegAlign,Phylogenetic tree对HBV全基因序列以及分段序列进行比较和进化树分析。结果 构建了含有adw、adr、ayw 3种血清型的HBV全基因组质粒,代码分别为:H1、H2、H3,对3株完成序列测定,按照S区核苷酸顺序划分基因型分别为B、C、D,全序列分型显示H1、H2为B、C基因型,与按S区的分型一致,但H3为C基因型,与按S区的分型不同,进一步的序列分析表明H3为一株异常的基因型,按照S区和preS2区分型为D基因型,但是全基因组/C/P/X区的进化树分析,H3株均位于C基因型,提示该异常的基因型可能是由于D/C基因型间基因重组引起,对重组位点进行了分析:3181nt-10nt、799-834nt为可能的重组位点所在区。结论 H3病毒株的发现进一步证明了HBV基因型间的基因重组,但澄清该问题需要在HBV感染的高流行区进一步的积累HBV异常基因型的全序列,以及发现新的基因型资料。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 基因克隆 序列分析 D/C基因型 重组
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鸡贫血病毒哈尔滨分离株全基因克隆和序列分析 预览 被引量:5
10
作者 何成强 丁乃峥 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期 436-441,共6页
通过PCR方法克隆了从哈尔滨分离的一株鸡贫血病毒(CAV)的全基因,并对其进行了测序,该病毒基因组为环状,全长2298bp,含有三个互相重叠的开放读码框和一个调控区,将克隆的基因与GenBank收录的CAV基因比较,同源性至少为97%,未发... 通过PCR方法克隆了从哈尔滨分离的一株鸡贫血病毒(CAV)的全基因,并对其进行了测序,该病毒基因组为环状,全长2298bp,含有三个互相重叠的开放读码框和一个调控区,将克隆的基因与GenBank收录的CAV基因比较,同源性至少为97%,未发现与本次克隆的CAV基因完全一致的分离株,与德国分离株Cux-1l,26p4和马来西亚分离株分别有42,42和72个核苷酸不同,同源性分别为98.2%,98.2%和96.9%。与德国分离株Cux 1b相比,除在调控区内少一个类似增强子的重复序列外,尚有39处核苷酸不同,它与分离于欧洲的几株CAV的亲源性要比来自亚洲的马来西亚株近,对CAV哈尔滨分离株,26p4,Cux-1b,Cux-1a和马来西亚株的VP1,VP2和VP3蛋白比较,VP2的保守性最高。 展开更多
关键词 鸡贫血病毒 哈尔滨分离株 基因克隆 序列分析
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重型乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒全基因克隆及测序 预览 被引量:2
11
作者 吴炜 李兰娟 +3 位作者 陈瑜 李君 钱香 程东庆 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期 734-737,共4页
目的建立重型乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒(HBV)DNA克隆并测序,从全基因水平分析HBV基因变异与重型乙型肝炎发病的关系.方法 10例重型乙型肝炎患者血清提取HBV DNA,聚合酶链反应(PCR)扩增HBV全基因.PCR产物构建到pUCm-T载体上,转化至... 目的建立重型乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒(HBV)DNA克隆并测序,从全基因水平分析HBV基因变异与重型乙型肝炎发病的关系.方法 10例重型乙型肝炎患者血清提取HBV DNA,聚合酶链反应(PCR)扩增HBV全基因.PCR产物构建到pUCm-T载体上,转化至大肠杆菌感受态DH-5α细胞,经酶切鉴定,获得含3.2 Kb HBV DNA的重组克隆菌,全基因测序,分析各读码框核苷酸和氨基酸变化.结果 4例成功构建HBV DNA克隆,并完成全基因测序.其中3例在前C区发生G1896A变异,产生一个终止密码子,导致HBeAg缺失;1例在C启动子区1762、1764双位点出现突变;有多处点突变及缺失变异分布于PreS2区及C区已知细胞毒T淋巴细胞、B淋巴细胞和T淋巴细胞的细胞表位.结论该法可用于临床研究H B V病毒基因结构与重型乙型肝炎发病的关系,并为进一步研究其H B V基因功能奠定基础. 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 基因 病毒 肝炎 重型 血清乙型肝炎病毒 重型乙型肝炎 乙型肝炎患者 基因测序 基因克隆 乙型肝炎病毒(HBV) 聚合酶链反应(PCR)
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5株猪圆环病毒2型全基因克隆和序列分析 预览 被引量:5
12
作者 唐志玲 肖建雄 +1 位作者 陈瑞爱 罗满林 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第5期14-18,共5页
为了解广东地区猪圆环病毒2型(PCV2)流行势态及毒株的基因变异情况,从广东珠三角地区疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)患病死亡猪中采集淋巴结,将PCR鉴定为阳性的病料在PK-15细胞上进行增殖培养,成功分离到5株猪圆环病毒2型毒株... 为了解广东地区猪圆环病毒2型(PCV2)流行势态及毒株的基因变异情况,从广东珠三角地区疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)患病死亡猪中采集淋巴结,将PCR鉴定为阳性的病料在PK-15细胞上进行增殖培养,成功分离到5株猪圆环病毒2型毒株,分别标记为GD-jm、GD-sz、GD-pz、GD-gj和GD-ss。再从细胞培养物中提取病毒基因组DNA,对5株PCV2分离株全基因组进行PCR扩增并克隆到pMD18-T Simple Vector进行测序,测序结果提交GenBank,登录号分别为JX912914、JX912915、JX945575、JX945576和JX945577。借助相关生物学软件作同源性分析,这5株PCV2基因组长度均为1767bp,其中3株为PCV2b亚型,2株为PCV2d亚型。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 基因克隆 序列分析
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10株猪圆环病毒2型(PCV2)河南株全基因组的克隆与序列分析 被引量:5
13
作者 陈陆 彭志锋 +5 位作者 杨霞 陈圆圆 王宏魁 孙彦婷 郑鹿平 王川庆 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期166-173,共8页
为了解猪圆环病毒2型(PCV2)河南株的起源及遗传变异,从河南省不同临床表现的病猪中克隆了10株PCV2的全基因组,并对其进行了序列测定及分析。结果表明,河南株之间以及与中国其他地区PCV2流行株之间同源性均很高;河南株均处于欧洲... 为了解猪圆环病毒2型(PCV2)河南株的起源及遗传变异,从河南省不同临床表现的病猪中克隆了10株PCV2的全基因组,并对其进行了序列测定及分析。结果表明,河南株之间以及与中国其他地区PCV2流行株之间同源性均很高;河南株均处于欧洲分支中,提示PCV2河南株可能起源于欧洲株;河南省不同年份的PCV2中确实存在一定的基因差异,但PCV2全基因组从总体上来说遗传进化相对稳定;河南省猪群中与PCV相关的疾病不是由PCV2变异毒株引起的。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 基因组克隆 序列分析
吉林磐石新分离株PCV2全基因克隆及Cap蛋白B细胞抗原表位预测 预览
14
作者 苗丽娟 尹柏双 +1 位作者 张立春 刘东旭 《吉林农业科技学院学报》 2018年第4期1-3,7,115共5页
对吉林市磐石某猪场采集疑似为猪圆环病毒2型感染的病死猪的脏器进行PCR检测,同时接种PK15细胞,成功分离到1株猪圆环病毒2型。通过对该毒株全基因组进行克隆并测序,采用DNAstar软件对Cap蛋白进行二级结构分析和B淋巴细胞抗原表位的预测... 对吉林市磐石某猪场采集疑似为猪圆环病毒2型感染的病死猪的脏器进行PCR检测,同时接种PK15细胞,成功分离到1株猪圆环病毒2型。通过对该毒株全基因组进行克隆并测序,采用DNAstar软件对Cap蛋白进行二级结构分析和B淋巴细胞抗原表位的预测,结果表明:该新分离株Cap蛋白具有多处抗原优势表位,为抗原表位鉴定、基因工程疫苗研制和单克隆制备奠定基础。 展开更多
关键词 PCV2 基因克隆 B细胞抗原表位预测
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4株鸭圆环病毒全基因组克隆与遗传进化分析
15
作者 张济培 陈冈 +5 位作者 廖洁丹 曹梦蕊 李荣旭 伍辉吉 张溢珊 陈济铛 《中国家禽》 北大核心 2018年第17期49-51,共3页
通过对广东佛山、中山等地出现以脱毛,皮肤潮红,生长缓慢为特征的樱桃谷商品肉鸭群的病鸭组织进行病原检测,初步诊断为鸭圆环病毒(DuCV)感染。采用常规PCR方法,扩增出4株DuCV的全基因序列,并进行序列比较及遗传进化分析。结果显... 通过对广东佛山、中山等地出现以脱毛,皮肤潮红,生长缓慢为特征的樱桃谷商品肉鸭群的病鸭组织进行病原检测,初步诊断为鸭圆环病毒(DuCV)感染。采用常规PCR方法,扩增出4株DuCV的全基因序列,并进行序列比较及遗传进化分析。结果显示:4株DuCV全基因与德国株AY228555,广西株KC460527、KC460530、KC460532、KC460535属于同一进化分支,同源性为94.8%-99.3%,均属于DuCV-1型;而与DuCV-2型代表株台湾株AY394721的同源性为82.9%-83.4%。该研究为鸭圆环病毒感染的监控和诊断提供了依据。 展开更多
关键词 鸭圆环病毒 基因克隆 序列分析
抗鸡生肌蛋白单克隆抗体制备及其在DNA-蛋白质相互作用中的应用 预览 被引量:4
16
作者 徐海燕 肖国芝 《北京医科大学学报》 CSCD 1996年第2期 83-85,共3页
目的:制备抗鸡生肌蛋白单克隆抗体并鉴定其抗原识别特异性。方法:以重组的谷胱甘肽转硫酶-生肌蛋白融合蛋白为抗原,采用杂交瘤技术制备抗生肌蛋白单抗,并结合蛋白印迹及胶阻滞分析进行特异性鉴定。结果:所得6株杂交瘤中有一株分... 目的:制备抗鸡生肌蛋白单克隆抗体并鉴定其抗原识别特异性。方法:以重组的谷胱甘肽转硫酶-生肌蛋白融合蛋白为抗原,采用杂交瘤技术制备抗生肌蛋白单抗,并结合蛋白印迹及胶阻滞分析进行特异性鉴定。结果:所得6株杂交瘤中有一株分泌单抗(S45)只专一识别生肌蛋白,并可与DNA-生肌蛋白复合物结合,形成DNA-生肌蛋白-抗体超级复合物。结论:该单抗可用于胚胎发育过程生肌蛋白的表达及骨骼肌特异基因表达调控研究。 展开更多
关键词 肌蛋白类 抗体克隆/生产和制备 DNA探针
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乙肝病毒血清标志物检测方法及临床意义研究进展 预览 被引量:2
17
作者 韦平宣 《广西医学》 CAS 2006年第11期 1755-1757,共3页
1965年Blumberg等在研究输血时首次发现澳大利亚抗原(即乙肝病毒表面抗原HBsAg),1970年Dane等在电镜下发现了完整乙型肝炎病毒(HBV)颗粒(即Dane’s颗粒),1980年Price等成功进行了HBVDNA全基因克隆、测序工作。这些工作为现今乙... 1965年Blumberg等在研究输血时首次发现澳大利亚抗原(即乙肝病毒表面抗原HBsAg),1970年Dane等在电镜下发现了完整乙型肝炎病毒(HBV)颗粒(即Dane’s颗粒),1980年Price等成功进行了HBVDNA全基因克隆、测序工作。这些工作为现今乙型肝炎免疫和分子生物学检测奠定了基础。经过几十年不断发展,我国已形成了一套完整的检测系统,敏感、特异、快速、定量的乙肝病毒血清标志物的检测方法为诊断治疗及研究提供了重要的工具。 展开更多
关键词 乙肝病毒表面抗原 血清标志物检测 临床意义 乙肝病毒血清标志物 乙型肝炎病毒 分子生物学检测 HBVDNA 基因克隆
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猪圆环病毒2型广东分离株的遗传演化分析 被引量:3
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作者 胡俊 程松 +2 位作者 翟少伦 刘建奎 罗满林 《畜牧与兽医》 北大核心 2015年第7期5-9,共5页
为了解广东地区猪圆环病毒2型(PCV2)毒株的遗传变异情况,从广东不同地区的规模化猪场采集疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)病猪的淋巴结、肺脏和脾脏。对PCR鉴定为阳性的病料在PK-15细胞上增殖培养6代,采用PCR和相关分子生物学... 为了解广东地区猪圆环病毒2型(PCV2)毒株的遗传变异情况,从广东不同地区的规模化猪场采集疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)病猪的淋巴结、肺脏和脾脏。对PCR鉴定为阳性的病料在PK-15细胞上增殖培养6代,采用PCR和相关分子生物学软件对12个分离株进行全基因组克隆和测序分析。结果显示,分离株基因组全长为1 767 nt或1 768 nt,核苷酸序列同源性为94.6%~99.9%。遗传演化分析表明,12个分离株分布于3个大群,其中5株属于PCV2b,4株属于PCV2d,3株属于PCV2e,提示广东地区PCV2流行毒株已发生变化。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 基因克隆 序列分析 遗传变异
百合无症病毒大连分离物全基因组克隆及其序列分析 被引量:3
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作者 徐品三 吕文霞 +2 位作者 夏秀英 李焕改 贾娟 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期641-644,共4页
百合无症病毒(Lily symptomless virus,LSV)属于香石竹潜隐病毒属(Carlavirus),是严重影响百合生长的主要病毒之一。LSV由美国Brierley和Smith首次从俄勒冈州带有坏死斑点的百合中分离得到。此后,在世界各地均有报道,我国江南... 百合无症病毒(Lily symptomless virus,LSV)属于香石竹潜隐病毒属(Carlavirus),是严重影响百合生长的主要病毒之一。LSV由美国Brierley和Smith首次从俄勒冈州带有坏死斑点的百合中分离得到。此后,在世界各地均有报道,我国江南、江北以及东北各地也有发生。LSV不会引起百合植株产生明显症状,但会使鳞茎变小,严重退化。 展开更多
关键词 百合无症病毒 基因组克隆 分离物 序列分析 大连 VIRUS SMITH 潜隐病毒
三株传染性法氏囊病病毒超强毒株全基因组的克隆与序列分析 被引量:3
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作者 高立 李凯 +5 位作者 祁小乐 高玉龙 高宏雷 王永强 孔宪刚 王笑梅 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期887-894,共8页
为了获得本实验室3株(HuB-1、HeB10XS02、SD10LY01)传染性法氏囊病病毒(IBDV)分离毒株的全基因组序列,并了解其序列特征,首先测定了这3株毒株对SPF鸡的致死率,然后利用融合PCR技术扩增获得全基因组序列,对其进行遗传进化分析。结果显示,... 为了获得本实验室3株(HuB-1、HeB10XS02、SD10LY01)传染性法氏囊病病毒(IBDV)分离毒株的全基因组序列,并了解其序列特征,首先测定了这3株毒株对SPF鸡的致死率,然后利用融合PCR技术扩增获得全基因组序列,对其进行遗传进化分析。结果显示,3株毒株对SPF鸡的致死率均在60%以上,为IBDV超强毒株(vvIBDV)。遗传进化分析表明,3株分离毒株的A节段均位于超强毒分支。IBDV的B节段分为明显的3个亚群,其中HuB-1、SD10LY01的B节段属于第Ⅲ亚群,HeB10XS02的B节段则属于第Ⅱ亚群。第Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ亚群之间在VP1蛋白上存在17个保守氨基酸差异位点,其中第145~147位氨基酸形成独特的'三联体'基序,不同亚群具有不同的基序。本研究结果为更好地了解vvIBDV基因组特征以及致病性分子基础的研究提供了重要理论依据。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒超强毒株(vvIBDV) 基因组克隆 序列分析
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