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关节软骨细胞和骨髓间充质干细胞不同共培养方式对细胞增殖与分化的影响 预览
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作者 赵文慧 皮洪涛 +13 位作者 冯万文 李向东 王建伟 刘岳鹏 姜洋 马建新 夏亚一 王翠芳 邵林林 李春辉 郁洪阳 刘尚林 董言斌 马亚辉 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第1期24-29,共6页
背景:在关节软骨细胞和骨髓间充质干细胞共培养环境中,软骨细胞功能活跃,增殖速度加快,骨髓间充质干细胞促进了软骨细胞的表型维持,而且少量软骨细胞提供的微环境能够诱导骨髓间充质干细胞成软骨分化,降低了软骨分化过程中出现的肥大表... 背景:在关节软骨细胞和骨髓间充质干细胞共培养环境中,软骨细胞功能活跃,增殖速度加快,骨髓间充质干细胞促进了软骨细胞的表型维持,而且少量软骨细胞提供的微环境能够诱导骨髓间充质干细胞成软骨分化,降低了软骨分化过程中出现的肥大表型和软骨内骨化,但是影响共培养系统中细胞增殖分化的因素和细胞间相互作用的机制尚不明确。目的:观察软骨细胞和骨髓间充质干细胞接触共培养对细胞增殖分化的影响,进一步优化共培养方式,为探讨共培养系统中二者的相互作用机制提供依据。方法:分离和培养新西兰兔(南京医科大学实验动物中心提供)软骨细胞和骨髓间充质干细胞,取第2代软骨细胞和骨髓间充质干细胞,以1∶3的比例直接混合在24孔板进行接触共培养为接触共培养组,以1∶3比例分别在Transwell的上室和下室进行非接触共培养为非接触共培养组,共培养21 d。细胞爬片进行甲苯胺蓝染色、COL2a1及Cx43细胞免疫化学染色。应用CCK8检测共培养系统中细胞的增殖情况,ELISA检测共培养细胞上清液中糖胺聚糖和转化生长因子β3水平,Western blot检测共培养细胞COL2a1和Cx43的表达。然后添加转化生长因子β3进行软骨细胞和骨髓间充质干细胞接触共培养和非接触共培养,比较细胞增殖、糖胺聚糖水平、COL2a1及Cx43蛋白表达的变化。结果与结论:①随着共培养时间的延长,细胞增殖能力逐渐增高,接触共培养组细胞吸光度值明显高于非接触共培养组(P<0.05),糖胺聚糖和转化生长因子β3水平以及COL2a1和Cx43的蛋白表达明显高于非接触共培养组;②添加10μg/L转化生长因子β3共培养21 d,接触共培养组细胞增殖、糖胺聚糖水平、COL2a1及Cx43的表达与未添加转化生长因子β3比较无明显变化(P>0.05),而非接触共培养组的细胞增殖、糖胺聚糖水平、COL2a1及Cx43蛋白表达明显提高(P<0.05), 展开更多
关键词 关节软骨细胞 骨髓间充质干细胞 培养 增殖 分化 糖胺聚糖 Ⅱ型胶原 转化生长因子Β3 缝隙连接 连接蛋白 干细胞 软骨细胞 骨髓 间质干细胞 共同培养技术 转化生长因子Β3 连接蛋白43 组织工程
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脂肪来源干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖影响的分子机制 预览
2
作者 李响 吴志贤 +2 位作者 刘宏伟 梁杰 莫自增 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第1期61-67,共7页
背景:脂肪来源干细胞已广泛用于组织填充修复,但是其对皮肤瘢痕抑制和修复的作用机制还不清楚。目的:探讨脂肪来源干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物活性的影响及分子机制。方法:取第3代人脂肪来源干细胞,分别以0,3×104,6×104,1... 背景:脂肪来源干细胞已广泛用于组织填充修复,但是其对皮肤瘢痕抑制和修复的作用机制还不清楚。目的:探讨脂肪来源干细胞对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物活性的影响及分子机制。方法:取第3代人脂肪来源干细胞,分别以0,3×104,6×104,1.2×105/孔接种于Transwell小室的上室(0为对照组,只含细胞培养液),取第4代对数生长期的瘢痕疙瘩成纤维细胞,以6×104/孔接种于下室(脂肪干细胞与瘢痕疙瘩成纤维细胞比例分别为0.5∶1,1∶1和2∶1),进行人脂肪来源干细胞与瘢痕疙瘩成纤维细胞共培养,培养24 h取下室瘢痕疙瘩成纤维细胞进行相关指标检测。结果与结论:①人脂肪来源干细胞能够显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖、迁移和胶原合成能力,并且随着脂肪干细胞所占比例的升高,抑制作用显著增强;②人脂肪来源干细胞能够显著促进瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡,并且随着脂肪干细胞所占比例的升高,促进作用显著增强;③Western blot检测显示人脂肪来源干细胞能够显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞p-ERK、Bcl-2和β-catenin蛋白表达;④结果表明,脂肪来源干细胞通过抑制ERK/β-catenin通路抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、迁移,并促进凋亡。 展开更多
关键词 脂肪干细胞 瘢痕疙瘩成纤维细胞 培养 细胞增殖 细胞凋亡 ERK通路 干细胞 国家自然科学基金 干细胞 脂肪组织 瘢痕疙瘩 成纤维细胞 共同培养技术 细胞增殖 细胞凋亡 组织工程
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骨髓间充质干细胞旁分泌HGF体外调控肝星状细胞 预览
3
作者 李静 郑雪 +2 位作者 丁新 向辉 陈卫刚 《天津医药》 CAS 北大核心 2019年第1期1-5,共5页
目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)与肝星状细胞(HSCs)体外共培养体系中,BMSCs旁分泌肝细胞生长因子(HGF)对HSCs增殖、凋亡、活化的影响。方法全骨髓贴壁法分离、培养、纯化大鼠BMSCs,另培养HSCs。6孔板半透膜建立上下两层细胞非直... 目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)与肝星状细胞(HSCs)体外共培养体系中,BMSCs旁分泌肝细胞生长因子(HGF)对HSCs增殖、凋亡、活化的影响。方法全骨髓贴壁法分离、培养、纯化大鼠BMSCs,另培养HSCs。6孔板半透膜建立上下两层细胞非直接接触共培养体系,实验设H组(HSCs单独培养)、H-H组(HSCs与HSCs共培养)、M-H组(BMSCs与HSCs共培养)、M-H-C组(BMSCs与HSCs共培养并加c-met抑制剂),各组细胞培养48h后,流式细胞仪鉴定BMSCs,检测HSCs凋亡率,MTT法检测HSCs的增殖,免疫荧光共聚焦定量检测HSCs中α-肌动蛋白(α-SMA)的表达量,ELISA法检测共培养体系上清液中HGF的浓度。结果MSCs高表达阳性表面分子CD29、CD90,低表达造血细胞表面标记CD45;BMSCs能明显抑制HSCs的增殖、活化并促进其凋亡,且M-H组上清液中HGF的浓度明显高于其他组。结论BMSCs与HSCs共培养过程中,BMSCs通过旁分泌HGF促进HSCs的凋亡,抑制HSCs的增殖、活化。 展开更多
关键词 间质干细胞 骨髓 肝细胞生长因子 共同培养技术 旁分泌 肝星状细胞
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牙髓干细胞共培养改善1-甲基-4-苯基吡啶离子诱导的神经元凋亡 预览
4
作者 朱虹倩 《中国组织工程研究》 北大核心 2018年第17期2727-2732,共6页
背景:如何利用牙髓干细胞改善神经损伤对于神经退行性疾病的临床治疗具有重要的意义。目的:探讨牙髓干细胞共培养对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenyl pyridinium,MPP^+)诱导的神经元凋亡的影响。方法:分离培养人牙髓干细... 背景:如何利用牙髓干细胞改善神经损伤对于神经退行性疾病的临床治疗具有重要的意义。目的:探讨牙髓干细胞共培养对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenyl pyridinium,MPP^+)诱导的神经元凋亡的影响。方法:分离培养人牙髓干细胞,进行形态观察和成脂成骨诱导分化能力鉴定;分离中脑神经元细胞,利用Transwell小室进行牙髓干细胞和神经元共培养,然后加入MPP^+干预48 h,通过Tunel染色和western blot法检测牙髓干细胞对MPP^+诱导的神经元凋亡的影响。结果与结论:(1)牙髓干细胞形态呈梭形,且能够成功向成脂成骨方向诱导分化;(2)牙髓干细胞和神经元细胞共培养后,减轻了MPP^+诱导的神经元凋亡;(3)MPP^+处理后降低了Bcl-2的表达,促进了Bax和cleaved caspase3的表达,而在牙髓干细胞共培养条件下,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显上升,促凋亡蛋白Bax和cleaved caspase3表达明显下降;(4)结果表明,人牙髓干细胞可以保护或修复体外MPP^+诱导的神经元损伤,该保护作用可能是通过人牙髓干细胞的旁分泌作用来实现的。 展开更多
关键词 牙髓 干细胞 神经元 共同培养技术 1-甲基-4-苯基吡啶 细胞凋亡 组织工程 牙髓干细胞 MPP~+ 神经元细胞 Transwell共培养
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人脂肪间充质干细胞和滑膜间充质干细胞协同抑制炎性软骨细胞的退变 预览 被引量:1
5
作者 宋卓悦 王洋 +2 位作者 连晓磊 丁康 李广恒 《中国组织工程研究》 北大核心 2018年第17期2661-2668,共8页
背景:将具有目的功能的细胞通过注射的方法注入关节腔内来改变病变的微环境,作用于早期骨性关节炎的炎性软骨细胞,通过发挥植入细胞本身的特性来影响疾病的进程。目的:探讨联合应用人膝关节脂肪来源间充质干细胞及滑膜来源间充质干细... 背景:将具有目的功能的细胞通过注射的方法注入关节腔内来改变病变的微环境,作用于早期骨性关节炎的炎性软骨细胞,通过发挥植入细胞本身的特性来影响疾病的进程。目的:探讨联合应用人膝关节脂肪来源间充质干细胞及滑膜来源间充质干细胞对炎性软骨细胞的退变是否具有协同抑制作用。方法:原代培养脂肪来源间充质干细胞、滑膜来源间充质干细胞和炎性软骨细胞。体外二维培养条件下,采用MTS细胞增殖实验检测3种细胞的增殖情况,定量PCR及免疫荧光分析3种贴壁细胞成软骨标志物基因水平及蛋白水平的差异。体外3D混合培养条件下分3组:脂肪来源间充质干细胞+炎性软骨细胞组(A+C组),滑膜来源间充质干细胞+炎性软骨细胞组(S+C组),脂肪来源间充质干细胞+滑膜来源间充质干细胞+炎性软骨细胞组(A+S+C组)。收集3组混合培养的细胞团块,进行阿尔新蓝染色、番红O染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色,并做定量分析。采用定量PCR检测成软骨分化标志物的基因水平差异。收集培养液上清通过酶联免疫吸附技术检测促炎因子及抗炎因子的分泌情况。结果与结论:(1)体外二维培养条件下,脂肪来源间充质干细胞的增殖速率高于炎性软骨细胞和滑膜来源间充质干细胞,差异有显著性意义(P〈0.05);炎性软骨细胞的成软骨标志物Ⅱ型胶原、蛋白聚糖m RNA表达量以及Ⅱ型胶原蛋白表达量明显高于脂肪来源间充质干细胞和滑膜来源间充质干细胞(P〈0.01);(2)体外3D混合培养条件下,A+S+C组的成软骨分化特异性染色阳性区域面积百分比均明显高于S+C组和A+C组(P〈0.05);A+S+C组成软骨分化标志物蛋白聚糖及Ⅱ型胶原表达量明显高于S+C组和A+C组(P〈0.05);S+C组促炎因子白细胞介素1、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平明显高于A� 展开更多
关键词 脂肪组织 滑膜 间质干细胞 软骨细胞 共同培养技术 骨关节炎 组织工程 骨性关节炎 脂肪间充质干细胞 滑膜间充质干细胞 炎性软骨细胞 三维培养 软骨退变 软骨再生 炎症反应 成软骨分化 干细胞 国家自然科学基金
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共培养体系在关节软骨组织工程中的应用研究 预览
6
作者 邹健宇 刘日许 +1 位作者 郑仕聪 姚咏嫦 《中华关节外科杂志(电子版)》 CAS 2018年第6期835-841,共7页
软骨组织工程是未来修复关节软骨的重要策略,但面临着软骨细胞数量不足,体外培养去分化以及分化方向难以控制等瓶颈。共培养体系的提出为这些问题提供了新的解决方式。一系列的研究发现,共培养体系可以阻止软骨细胞在体外培养的去分化现... 软骨组织工程是未来修复关节软骨的重要策略,但面临着软骨细胞数量不足,体外培养去分化以及分化方向难以控制等瓶颈。共培养体系的提出为这些问题提供了新的解决方式。一系列的研究发现,共培养体系可以阻止软骨细胞在体外培养的去分化现象,并促使已发生去分化的软骨细胞实现再分化,同时促进体系中干细胞的软骨分化以及抑制其肥大化进程。本综述通过对国内外应用在软骨组织工程的共培养研究进行概述,总结共培养体系对于软骨组织工程软骨形成的作用,同时探讨其积极作用的机制。 展开更多
关键词 共同培养技术 软骨细胞 组织工程
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低氧诱导大鼠脂肪干细胞旁分泌对心肌的保护作用 预览
7
作者 高宇平 林媛媛 +4 位作者 李学文 范春辉 杨帆 郝大洁 葛文佳 《中国组织工程研究》 北大核心 2018年第9期1344-1349,共6页
背景:研究表明,脂肪组织来源干细胞能够有效改善心肌梗死后心功能,是一个非常有前景的心肌细胞再生来源。目前大部分研究是在正常氧体积分数下探讨脂肪干细胞介导的心肌保护作用。目的:观察低氧环境培养条件下脂肪干细胞的旁分泌及... 背景:研究表明,脂肪组织来源干细胞能够有效改善心肌梗死后心功能,是一个非常有前景的心肌细胞再生来源。目前大部分研究是在正常氧体积分数下探讨脂肪干细胞介导的心肌保护作用。目的:观察低氧环境培养条件下脂肪干细胞的旁分泌及抗凋亡等保护作用。方法:分离、培养大鼠脂肪细胞以及乳鼠心肌细胞,在正常氧体积分数下和低氧体积分数下(10%)共培养大鼠脂肪干细胞及过氧化氢损伤的乳鼠心肌细胞,通过酶联免疫吸附法检测细胞沉淀中还原型谷胱甘肽与氧化型谷胱甘肽比值(GSH/GSSG)以及培养基上清中血管内皮生长因子、胰岛素样生长因子、碱性成纤维细胞生长因子水平,Western blot检测细胞沉淀中凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果与结论:①过氧化氢损伤乳鼠心肌细胞后,还原型谷胱甘肽与氧化型谷胱甘肽比值、血管内皮生长因子、胰岛素样生长因子、碱性成纤维细胞生长因子水平下降;②在低氧状态下,损伤的心肌细胞与脂肪干细胞共培养能够使还原型谷胱甘肽与氧化型谷胱甘肽比值升高,促进脂肪干细胞旁分泌细胞因子,而且使凋亡蛋白Bax表达下降,Bcl-2表达上升;③结果表明,低氧状态促进脂肪干细胞旁分泌作用增强,从而起到抗凋亡、保护心肌的作用。 展开更多
关键词 干细胞 脂肪组织 肌细胞 心脏 共同培养技术 细胞低氧 组织工程
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胶原酶消化结合组织块培养法分离纯化兔肺成纤维细胞 预览 被引量:2
8
作者 罗涛 杨亚冬 +1 位作者 唐靓 张文元 《现代医药卫生》 2017年第17期2584-2587,共4页
目的 探讨胶原酶消化组织块结合法分离纯化新生兔肺成纤维细胞。方法 取新生兔肺,剪成组织块,用Ⅳ型胶原酶轻度消化后,进行组织块贴壁培养,分离纯化肺成纤维细胞,然后进行原代、传代培养,用MTT法测定细胞生长曲线。结果 组织块贴壁培养2... 目的 探讨胶原酶消化组织块结合法分离纯化新生兔肺成纤维细胞。方法 取新生兔肺,剪成组织块,用Ⅳ型胶原酶轻度消化后,进行组织块贴壁培养,分离纯化肺成纤维细胞,然后进行原代、传代培养,用MTT法测定细胞生长曲线。结果 组织块贴壁培养2 d,镜下可见组织块周边有少量长梭形细胞逸出,4 d时组织块周围有大量细胞爬出,生长迅速,7 d时接近融合,9 d时高度融合。传代2次后杂细胞基本去除,细胞活性状态较好的为1~4代。5~6代后细胞的增殖能力逐渐下降,细胞出现逐渐老化现象。结论 Ⅳ型胶原酶轻度消化后结合组织块贴壁法是一种较为可靠快速的肺成纤维细胞分离纯化培养方法,使用该法可获得具有典型形态特征及活性较好的肺成纤维细胞。 展开更多
关键词 成纤维细胞/肺 微生物胶原酶 培养技术 细胞培养技术 共同培养技术
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AG490对成骨细胞和破骨细胞之间相互作用的影响 预览 被引量:1
9
作者 程鑫 万启龙 李祖兵 《中华口腔医学研究杂志(电子版)》 CAS 2017年第2期73-80,共8页
目的 体外建立MC3T3-E1细胞与RAW 264.7细胞间接共培养体系,观察AG490对共培养体系中破骨细胞形成的影响.方法 MC3T3-E1细胞经矿化诱导培养后,与RAW 264.7细胞进行间接共培养,经一定浓度AG490(1、5、10μmol/L)分别处理后,细胞计数试... 目的 体外建立MC3T3-E1细胞与RAW 264.7细胞间接共培养体系,观察AG490对共培养体系中破骨细胞形成的影响.方法 MC3T3-E1细胞经矿化诱导培养后,与RAW 264.7细胞进行间接共培养,经一定浓度AG490(1、5、10μmol/L)分别处理后,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖,氮偶联法检测成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测成骨细胞相关基因骨保护素(OPG)、Ⅰ型胶原(COL1)、ALP、骨钙素(OCN)的表达,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)和苏木素染色检测破骨细胞的形成,蛋白印迹法(Western blot)检测破骨细胞中RANK的表达.采用单因素方差分析和双因素方差分析对数据进行统计分析.结果 AG490下调MC3T3-E1细胞矿化过程中OPG、COL1、ALP、OCN mRNA的表达(FOPG=30.120,POPG,AG4901μmol/L=0.021、POPG,AG4905μmol/L=0.221、POPG,AG49010μmol/L=0.003;FALP=67.352,PALP,AG4901μmol/L=0.034、PALP,AG4905μmol/L=0.001、PALP,AG49010μmol/L=0.156;FCOL1=28.158,PCOL1,AG4901μmol/L=0.054、PCOL1,AG4905μmol/L=0.002、PCOL1,AG49010μmol/L=0.4;FOCN=125.375,POCN,AG4901μmol/L〈0.001、POCN,AG4905μmol/L〈0.001、POCN,AG49010μmol/L〈0.001).与RAW264.7细胞单独培养作为对照组相比,MC3T3-E1细胞与RAW 264.7细胞间接共培养明显促进成熟破骨细胞的形成,AG490在这个过程中对破骨细胞的形成起到抑制作用(F=85.391,P共培养组-对照组〈0.001,P共培养+AG490组-共培养组=0.035),同时与对照组相比,明显抑制破骨细胞中RANK蛋白的表达(FRANK=376.25,PRANK,AG4901μmol/L=0.468、PRANK,AG4905μmol/L=0.003、PRANK,AG49010μmol/L〈0.001).结论 AG490抑制MC3T3-E1细胞成骨向分化,并通过影响OPG/RANKL/RANK信号轴的传递抑制成骨细胞与破骨前体细胞间接共培养过程中破骨细胞的形成. 展开更多
关键词 共同培养技术 核因子ΚB受体活化因子 AG490 成骨向分化 破骨向分化
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星形胶质细胞与GnRH神经元共培养可通过谷氨酸受体介导促进GnRH神经元分泌 预览 被引量:1
10
作者 陈勇 《福建医科大学学报》 北大核心 2017年第2期97-102,共6页
目的 探讨下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)神经元与星形胶质细胞共培养对GnRH神经元的影响及其可能的相关机制.方法 利用Transwell共培养系统,将GnRH神经元细胞株GT1-7与原代星形胶质细胞共培养10 d.免疫组织化学法检测GnRH神经元中... 目的 探讨下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)神经元与星形胶质细胞共培养对GnRH神经元的影响及其可能的相关机制.方法 利用Transwell共培养系统,将GnRH神经元细胞株GT1-7与原代星形胶质细胞共培养10 d.免疫组织化学法检测GnRH神经元中谷氨酸受体(GluR)的分布,蛋白免疫印迹法检测GluR在GnRH神经元中的表达,并分别通过高效液相色谱法和酶联免疫吸附法检测培养上清中的谷氨酸(Glu)和GnRH的浓度变化.结果 共培养组的GnRH神经元发生mGluR5和GluR1/2/3/4从胞质到胞核的移位,在胞核中的表达较单纯GT1-7培养组显著增加(P〈0.05),且Western-blot检测与免疫荧光检测结果一致.HPLC和ELISA检测结果表明,与单纯GT1-7培养组比较,共培养组上清中的Glu浓度显著减少,而GnRH的分泌则明显增加(P〈0.05).结论 GnRH神经元与星形胶质细胞共培养可通过改变GluR(代谢型或离子型)在细胞内的定位与表达,从而增加GnRH的分泌. 展开更多
关键词 神经元 促性腺激素释放激素 神经胶质 星形细胞 共同培养技术 受体 谷氨酸
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三维环境下软骨细胞诱导滑膜间充质干细胞向软骨样细胞的分化 预览 被引量:6
11
作者 杨萌 邵博 +10 位作者 龚忠诚 宁晓婷 刘慧 克热木·阿巴斯 凌彬 尹小朋 王冰 胡露露 王玥 胡鑫 林兆全 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2016年第11期1544-1550,共7页
背景:体外环境下软骨细胞与滑膜间充质干细胞共培养能够使滑膜间充质干细胞向软骨分化,关于体内环境下细胞共培养诱导干细胞分化的研究很少。目的:拟将滑膜间充质干细胞/软骨细胞与壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料植入大鼠背部皮下,了解... 背景:体外环境下软骨细胞与滑膜间充质干细胞共培养能够使滑膜间充质干细胞向软骨分化,关于体内环境下细胞共培养诱导干细胞分化的研究很少。目的:拟将滑膜间充质干细胞/软骨细胞与壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料植入大鼠背部皮下,了解细胞复合支架在体内向软骨分化的情况。方法:取SD大鼠膝关节滑膜组织及软骨组织,用酶消化法获得滑膜间充质干细胞及软骨细胞分别进行培养。实验设单纯软骨细胞组,单纯滑膜间充质干细胞组,滑膜间充质干细胞︰软骨细胞为1︰2组,无细胞材料组,取第3代滑膜间充质干细胞及第2代软骨细胞培养于壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料中移植于SD大鼠皮下,4,8周时取材进行苏木精-伊红染色、甲苯胺蓝染色和免疫组织化学检测。结果与结论:植入4,8周后,细胞支架材料保持圆盘状,单纯软骨细胞组、滑膜间充质干细胞︰软骨细胞为1︰2组可见细胞及细胞基质Ⅱ型胶原阳性表达,单纯软骨细胞组、滑膜间充质干细胞︰软骨细胞为1︰2组蛋白聚糖阳性表达,结果表明两种细胞混合培养于壳聚糖/Ⅰ型胶原复合支架材料中,在体内环境下能够形成软骨样组织。 展开更多
关键词 滑膜 间质干细胞 软骨细胞 共同培养技术 胶原Ⅱ型 组织工程 组织构建 软骨组织工程 滑膜间充质干细胞 培养技术 Ⅱ型胶原 蛋白聚糖 国家自然科学基金
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骨髓间充质干细胞体外向子宫内膜上皮细胞的分化 预览
12
作者 屈莉红 于佳群 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2016年第19期2770-2776,共7页
背景:以往研究表明,骨髓干细胞是子宫内膜细胞的子宫外来源,参与损伤后子宫内膜的再生功能重建。目的:探讨小鼠骨髓间充质干细胞在体外能否向子宫内膜上皮细胞方向分化。方法:将第2代骨髓间充质干细胞、子宫内膜间质细胞分别进行以下... 背景:以往研究表明,骨髓干细胞是子宫内膜细胞的子宫外来源,参与损伤后子宫内膜的再生功能重建。目的:探讨小鼠骨髓间充质干细胞在体外能否向子宫内膜上皮细胞方向分化。方法:将第2代骨髓间充质干细胞、子宫内膜间质细胞分别进行以下4组不同处理:①第1组为单纯小鼠骨髓间充质干细胞,用含体积分数为2%胎牛血清的DMEM/F12培养液培养;②第2组为单纯小鼠骨髓间充质干细胞,用含体积分数为2%胎牛血清、10^-7 mol/Lβ-雌二醇、10μg/L表皮生长因子的DMEM/F12培养液培养;③第3组为用Transwell小室进行骨髓间充质干细胞与子宫内膜间质细胞共培养,用含体积分数为2%胎牛血清的DMEM/F12培养液培养;④第4组为用Transwell小室进行骨髓间充质干细胞与子宫内膜间质细胞共培养,用含体积分数为2%胎牛血清、10-7 mol/Lβ-雌二醇、10μg/L表皮生长因子的DMEM/F12培养液培养。上述各组处理第5天,收集培养板底部骨髓间充质干细胞,RT-PCR检测上皮细胞标记(CK7,CK18,CK19,EMA)的基因表达,免疫荧光化学方法检测角蛋白表达。第3组细胞共培养后的第1,3,5,7天,RT-PCR检测上皮细胞标记(CK7,CK18,CK19,EMA)的基因表达。结果与结论:①CK7 mRNA表达在各组中依次上升,并在第4组中达到最高,各组之间经比较差异有显著性意义。第2,3,4组CK18,CK19 mRNA的表达均较第1组显著升高,且第2,3,4组间比较差异无显著性意义。EMA mRNA在第2,4组的表达比第1,3组升高,但组间比较差异也无显著性意义。②第4组角蛋白呈强阳性表达,第3组呈弱阳性表达,第1,2组呈阴性表达。③随着时间的推移,CK7 mRNA表达量不断上升,且第5,7天的表达量显著高于第1,3天,不同时间经比较差异有显著性意义。CK18,CK19,EMA mRNA在不同时间的表达量差异无显著性意义。④实验结果表明,小鼠骨髓间充质干细胞在一定条件下可向子宫内膜上皮细� 展开更多
关键词 骨髓 间质干细胞 子宫内膜 上皮细胞 细胞分化 共同培养技术 组织工程 干细胞 骨髓干细胞 骨髓间充质干细胞 Transwell共培养
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血管内皮祖细胞改善骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞的增殖及凋亡 预览 被引量:3
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作者 刘竹影 陈颖 +4 位作者 刘倩 梁源 张瑞 文艺 丁寅 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2016年第14期1999-2006,共8页
背景:研究发现雌激素缺乏骨髓间充质干细胞的活性降低。目的:观察血管内皮祖细胞对去势骨髓间充质干细胞增殖及凋亡特性的影响。方法:1选用6周龄健康雌性SD大鼠行双侧卵巢切除术,建立骨质疏松症动物模型,假手术组仅切除卵巢周围等量... 背景:研究发现雌激素缺乏骨髓间充质干细胞的活性降低。目的:观察血管内皮祖细胞对去势骨髓间充质干细胞增殖及凋亡特性的影响。方法:1选用6周龄健康雌性SD大鼠行双侧卵巢切除术,建立骨质疏松症动物模型,假手术组仅切除卵巢周围等量脂肪组织;2采用密度梯度离心结合差速贴壁法分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞;采用密度梯度离心法结合差速贴壁法利用促进内皮细胞生长的条件培养基诱导培养血管内皮祖细胞;3利用Transwell小室建立血管内皮祖细胞、去势骨髓间充质干细胞间接共培养体系,另设置正常骨髓间充质干细胞-骨髓间充质干细胞组,去势骨髓间充质干细胞-骨髓间充质干细胞组;4采用流式细胞术检测血管内皮祖细胞对去势骨髓间充质干细胞增殖和凋亡的影响。结果与结论:(1)间接共培养第3天,血管内皮祖细胞与去势骨髓间充质干细胞共培养组的S期细胞比例显著大于去势骨髓间充质干细胞组和正常骨髓间充质干细胞组,差异均有显著性意义(P〈0.05);(2)间接共培养第10天,血管内皮祖细胞与去势骨髓间充质干细胞共培养组骨髓间充质干细胞凋亡率显著小于去势骨髓间充质干细胞组和正常骨髓间充质干细胞组,差异均有显著性意义(P〈0.05);(3)通过血管内皮祖细胞和去势骨髓间充质干细胞间接共培养,发现血管内皮祖细胞可逆转体外去势骨髓间充质干细胞的增殖能力并且抑制其凋亡。 展开更多
关键词 骨髓 间质干细胞 骨质疏松 绝经后 内皮细胞 共同培养技术 细胞增殖 细胞凋亡 组织工程 干细胞 骨髓干细胞 血管内皮祖细胞 骨髓间充质干细胞 绝经后骨质疏松 去势大鼠骨质疏松模型 间接共培养 国家自然科学基金
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人真皮间充质干细胞对增生性瘢痕成纤维细胞α-SMA和DCN表达的影响 被引量:3
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作者 张文夺 邓呈亮 +4 位作者 郭常敏 聂开瑜 唐修俊 魏在荣 王达利 《中华整形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期285-292,共8页
目的 初步探讨人真皮间充质干细胞(human dermis derived mesenchymal stem cells, hDMSCs)对不同时期增生性瘢痕成纤维细胞(HSFB) α-平滑肌肌动蛋白(α smooth muscle actin,α-SMA)和核心蛋白多糖(decorin,DCN)表达的影响,... 目的 初步探讨人真皮间充质干细胞(human dermis derived mesenchymal stem cells, hDMSCs)对不同时期增生性瘢痕成纤维细胞(HSFB) α-平滑肌肌动蛋白(α smooth muscle actin,α-SMA)和核心蛋白多糖(decorin,DCN)表达的影响,以探讨间充质干细胞用于增生性瘢痕防治的可行性.方法 机械法联合酶消化法分离、培养hDMSCs,取第3代生长良好的细胞,以流式细胞仪检测hDMSCs的CD分子,免疫细胞化学检测角蛋白19和波形蛋白,向成脂、成软骨和成骨细胞诱导分化.根据临床上增生性瘢痕形成的病程将瘢痕标本分为6个月、1年、2年3组,每组3例.将3组HSFB分别与第3代生长良好的贴壁hDMSCs通过非接触式Transwell共培养体系培养21 d,并分别与相对应组HSFB普通6孔板培养21d进行对照,采用RT-PCR和Western Blot技术检测3组共培养后HSFB α-SMA和DCN的mRNA和蛋白的表达情况.结果 hDMSCs高表达CD73、CD105、CD44、CD90等间充质干细胞表面标志,不表达CD14、CD34、CD45等造血干细胞表面标志,波形蛋白阳性表达,不表达角蛋白19.经诱导可以向成脂、成软骨和成骨细胞分化,符合间充质干细胞的最低鉴定标准.普通6孔板培养的6个月、1年、2年3组HSFB的α-SMA mRNA及蛋白的表达量分别为198.20±15.46、0.29±0.070,175.24±17.04、0.38 ±0.110,125.73 ±6.99、0.33±0.085:DCNmRNA及蛋白的表达量分别为61.30 ±9.79、0.015 ±0.003,70.89±11.29、0.020±0.007,77.31±4.80、0.023±0.003.与5&#215;104 hDMSCs共培养处理后6个月、1年、2年3组HSFB0α-SMA mRNA及蛋白的表达量分别48.40±6.42、0.100±0.020,192.16±11.37、0.110±0.014,73.33 ±6.29、0.ll0±0.016;DCN mRNA及蛋白的表达量分别为156.92±14.91、0.049±0.015,154.42±18.17、0.033±0.008,140.82±7.32、0.030±0.004.与普通6孔板培养相比较,共培养各组HSFB的α-SMA mRNA及蛋白表达下调,DCN mRNA及蛋白表达上调,并以增生性瘢痕形成早期即6个月组变化较明显.结论 hDMSCs� 展开更多
关键词 真皮 间质干细胞 瘢痕 成纤维细胞 共同培养技术
骨髓间质干细胞和脂肪间质干细胞混合培养后的成骨能力 被引量:2
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作者 杨民 郑伟伟 林程 《中华骨科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第23期1524-1532,共9页
目的探讨骨髓间质干细胞(bone mesenchymal stem ceils, B MSC)和脂肪间质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSC)混合培养后的成骨分化能力。方法以贴壁法和酶消化法获得BMSC和ADSC,用流式细胞术鉴定细胞表型;对... 目的探讨骨髓间质干细胞(bone mesenchymal stem ceils, B MSC)和脂肪间质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSC)混合培养后的成骨分化能力。方法以贴壁法和酶消化法获得BMSC和ADSC,用流式细胞术鉴定细胞表型;对两种细胞进行成脂肪、成软骨、成骨诱导,分别以油红“O”染色、甲苯胺蓝染色、茜素红染色进行鉴定;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、茜素红染色鉴定成骨分化。取第3代BMSC和ADSC细胞加入成骨诱导液,根据不同处理方法分为四组:BMSC未诱导组、BMSC成骨诱导组、ADSC成骨诱导组、BMSC+ADSC成骨诱导组。成骨诱导第1、3、5、7、9、11天检测ALP活性,第7、14、21、28天检测钙离子吸光度,第14天采用RT-PCR和Western Blot检测骨钙素(Osteocalcin,OCN)、Runx2蛋白的表达。将BMSC、ADSC或BMSC+ADSC细胞植入羟基磷灰石,壳聚糖/聚乳酸(Hydroxylapatite/Chitosan/Poly L-latic acid,HA/CS/PLLA)支架材料,植入大鼠下肢骨缺损模型,术后8周取材检测复合材料的新骨形成面积。结果ADSC和BMSC两种细胞在成脂、成软骨、成骨诱导后染色均为阳性。诱导第1、3天,各组细胞ALP活性增加不明显,第5天以后活性开始明显增强,其中BMSC+ADSC组高于其他三组。诱导第7天,各组细胞钙离子吸光度无明显变化,第14天开始逐渐增高,其中BMSC+ADSC成骨诱导组高于其他三组。诱导第14天,BMSC+ADSC成骨诱导组OCN和Runx2基因表达(分别为78.24±8.11,1180.13±121.16)和蛋白表达(分别为6.54±0.59,4.43±0.51)较其他三组升高,差异有统计学意义(P〈0.05)。材料植入体内8周后,BMSC+ADSC组有大量板状骨形成,支架材料基本降解完全,新骨形成面积为(497.75±7.44)μm2,明显大于其他三组,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论BMSC与ADSC两种细胞混合培养较单一细胞� 展开更多
关键词 间质干细胞 骨髓 脂肪组织 共同培养技术 组织工程
甲状腺素诱导人脐血间充质干细胞向软骨细胞分化中的作用 预览 被引量:2
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作者 杨涛 江波 +1 位作者 徐鹏 林刚 《中国组织工程研究》 北大核心 2015年第1期7-11,共5页
背景:研究发现共培养可诱导人源干细胞向特定细胞分化,但如何获得更多的组织工程所需的种子细胞是研究中的难题。目的:探讨不同浓度甲状腺素在人脐血间充质干细胞向兔软骨细胞分化中的作用。方法:将人脐血间充质干细胞与兔软骨细胞按... 背景:研究发现共培养可诱导人源干细胞向特定细胞分化,但如何获得更多的组织工程所需的种子细胞是研究中的难题。目的:探讨不同浓度甲状腺素在人脐血间充质干细胞向兔软骨细胞分化中的作用。方法:将人脐血间充质干细胞与兔软骨细胞按照2∶1比例共培养,并用含有不同浓度甲状腺素(0,0.01,0.1,1,10μmol/L)的培养基分组刺激,共培养14 d后分别观察各组细胞形态,并提取细胞RNA和蛋白质,Real-time PCR检测聚集蛋白多糖m RNA及Ⅱ型胶原m RNA表达量,Western blotting技术检测Ⅱ型胶原及聚集蛋白多糖蛋白表达水平。结果与结论:加入0.01,0.1,1,10μmol/L的甲状腺素干预后,聚集蛋白多糖、Ⅱ型胶原m RNA和蛋白的表达水平均随甲状腺素浓度增加而增强,与单纯共培养组比较差异有显著性意义(P〈0.05)。实验证明高浓度甲状腺素可增强人脐血间充质干细胞与兔软骨细胞共培养后向软骨细胞分化的能力。 展开更多
关键词 胎血 间质干细胞 软骨细胞 共同培养技术 甲状腺素 干细胞 脐带脐血干细胞 培养 细胞分化 Ⅱ型胶原 聚集蛋白多糖 软骨组织工程 种子细胞
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慢性髓细胞白血病患者骨髓基质细胞与K562细胞共培养对伊马替尼耐药的影响 预览 被引量:2
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作者 王吉刚 张海婷 +4 位作者 周凡 刘彦琴 白颖 刘景华 李敏燕 《中国组织工程研究》 北大核心 2015年第6期849-853,共5页
背景:伊马替尼耐药是慢性髓细胞白血病治疗的一个主要问题,研究证实白血病细胞可通过与骨髓基质细胞黏附而获得耐药表型,但对于黏附功能缺陷的慢性髓细胞白血病而言,骨髓基质细胞在伊马替尼耐药形成中的作用及其机制尚不清楚。目的:体... 背景:伊马替尼耐药是慢性髓细胞白血病治疗的一个主要问题,研究证实白血病细胞可通过与骨髓基质细胞黏附而获得耐药表型,但对于黏附功能缺陷的慢性髓细胞白血病而言,骨髓基质细胞在伊马替尼耐药形成中的作用及其机制尚不清楚。目的:体外模拟慢性髓细胞白血病患者骨髓微环境,探讨其对伊马替尼敏感性的影响及可能机制。方法:分离、培养确诊但未经治疗的慢性髓细胞白血病患者骨髓基质细胞,与白血病细胞株K562细胞共培养构建慢性髓细胞白血病骨髓基质细胞-K562细胞共培养模型。MTT法检测0.2-3.2μmol/L伊马替尼作用48 h对K562细胞的增殖抑制率;将K562细胞暴露于0.5μmol/L伊马替尼72 h,流式细胞术检测K562细胞凋亡率及CXCR4表达。将0.5μmol/L伊马替尼作用4 h并以Calcein-AM荧光标记的K562细胞接种于基质细胞层培养24 h,去除悬浮细胞,收集黏附的K452细胞通过检测荧光强度计算细胞黏附率。结果与结论:慢性髓细胞白血病骨髓基质细胞与K562细胞共培养减弱了0.2-3.2μmol/L伊马替尼对K562细胞的增殖抑制作用;0.5μmol/L伊马替尼处理72 h,共培养组K562细胞凋亡率显著低于悬浮组(P=0.020)。悬浮组和共培养组伊马替尼作用后K562细胞CXCR4表达阳性率均显著高于作用前(P=0.001)。0.5μmol/L伊马替尼作用4 h使K562细胞与骨髓基质细胞的黏附率由(32.18±6.17)%提升至(68.97±11.08)%,差异有显著性意义(P=0.022)。结果表明慢性髓细胞白血病患者骨髓基质细胞与K562细胞共培养,能介导对伊马替尼耐药,可能与共培养及伊马替尼诱导K562细胞CXCR4的表达有关,但更多的机制还需深入研究。 展开更多
关键词 白血病 髓系 慢性 BCR-ABL阳性 K562细胞 共同培养技术 蛋白酪氨酸激酶类 干细胞 移植 慢性髓细胞白血病 骨髓基质细胞 骨髓微环境 伊马替尼 耐药
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不同来源软骨细胞共培养对骨髓间充质干细胞早期分化的影响 被引量:2
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作者 陈伟 王丽娜 +4 位作者 郝云甲 范家强 付海涛 张强 苑举辉 《中华老年医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期557-560,共4页
目的了解不同来源的软骨细胞在细胞隔离共培养的环境中,对相同来源的骨髓间充质干细胞(MSCs)早期向软骨系分化的影响。方法利用悬挂式细胞培养皿,将不同来源的软骨细胞(骨性关节炎患者的软骨细胞、正常成年人的软骨细胞、胎儿软骨... 目的了解不同来源的软骨细胞在细胞隔离共培养的环境中,对相同来源的骨髓间充质干细胞(MSCs)早期向软骨系分化的影响。方法利用悬挂式细胞培养皿,将不同来源的软骨细胞(骨性关节炎患者的软骨细胞、正常成年人的软骨细胞、胎儿软骨细胞)及对照MSCs,和同一来源的MSCs隔离培养在同一培养液中,共享细胞培养液,分别在培养3d、6d、9d、12d通过显微镜观察,并应用Real-timePCR技术测定经不同来源软骨细胞诱导的MSCs表达蛋白聚糖,Ⅱ型胶原(COL-2),软骨转录调控因子(SOX-9)信号的水平。结果MSCs在不同来源的软骨细胞诱导下,在细胞培养12d后,与对照组比较,出现了形态的明显区别。SOX-9的mRNA表达分别为对照组的1.7倍、1.6倍、1.2倍(P〈0.05);蛋白聚糖的mRNA表达分别为对照组的2.8倍、2.2倍、1.3倍(P〈0.05),COL2的mRNA表达变化不大;相应蛋白的信号水平变化表达也有较大差异,胎儿软骨细胞组相对于骨性关节炎患者的软骨细胞组及正常成年人的软骨细胞组更加明显。结论隔离共培养体系能够通过局部微环境的调节,具有间接促进MSCs定向诱导分化成软骨细胞的作用,不同来源的软骨细胞促分化的影响不同,但都具有促MSCs定向诱导分化成软骨细胞的能力。 展开更多
关键词 软骨细胞 细胞分化 共同培养技术 间质干细胞
人脐带间充质干细胞对异位子宫内膜细胞增殖及凋亡的影响 预览 被引量:1
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作者 王春梅 李洁 +1 位作者 孙文萍 吴德慧 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2015年第41期6628-6632,共5页
背景:间充质干细胞可以分泌多种细胞因子和生长因子,促进周围细胞的存活,发挥旁分泌作用。目的:探讨人脐带间充质干细胞对异位子宫内膜细胞增殖及凋亡的影响。方法:分离培养人脐带间充质干细胞和异位子宫内膜细胞,以异位子宫内膜细... 背景:间充质干细胞可以分泌多种细胞因子和生长因子,促进周围细胞的存活,发挥旁分泌作用。目的:探讨人脐带间充质干细胞对异位子宫内膜细胞增殖及凋亡的影响。方法:分离培养人脐带间充质干细胞和异位子宫内膜细胞,以异位子宫内膜细胞单独培养作为对照组,人脐带间充质干细胞与异位子宫内膜细胞共培养作为观察组。培养24,48,72 h时采用MTT法检测异位子宫内膜细胞增殖情况,流式细胞仪检测异位子宫内膜细胞凋亡情况,RT-PCR检测异位子宫内膜细胞PTEN基因表达情况。结果与结论:与对照组比较,培养24,48,72 h时观察组异位子宫内膜细胞增殖受到显著抑制,亚二倍体峰占细胞总数的比例显著升高(P〈0.05)。随着时间的推移,观察组细胞抑制率逐渐下降,各时间点比较差异有显著性意义(P均〈0.05)。与同期对照组比较,观察组细胞PTEN基因表达显著上调(P〈0.05)。培养48,72 h观察组细胞PTEN基因表达显著高于培养24 h(P〈0.05)。以上结果表明人脐带间充质干细胞可以通过上调PTEN基因表达,抑制异位子宫内膜细胞增殖,并促进其凋亡。 展开更多
关键词 脐带 间质干细胞 子宫内膜异位症 共同培养技术 PTEN磷酸水解酶 细胞增殖 细胞凋亡 组织工程 干细胞 脐带脐血干细胞 脐带间充质干细胞 PTEN基因
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柚皮苷对共培养体系中成骨细胞活性及破骨细胞分化的影响 预览
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作者 赵志虎 李风波 +8 位作者 马信龙 孙晓雷 马剑雄 张杨 王颖 卢斌 孙磊 王建宝 吕建伟 《中华老年骨科与康复电子杂志》 2015年第2期13-18,共6页
目的研究在成骨细胞一破骨细胞共培养体系中,柚皮苷对成骨细胞活性和破骨细胞分化的影响。方法将成骨细胞(MC3T3-E1细胞株)和破骨细胞(RAW264.7细胞株)以2:1的比例分别培养至Transwell小室的上室和下室。根据培养基是否含有柚皮... 目的研究在成骨细胞一破骨细胞共培养体系中,柚皮苷对成骨细胞活性和破骨细胞分化的影响。方法将成骨细胞(MC3T3-E1细胞株)和破骨细胞(RAW264.7细胞株)以2:1的比例分别培养至Transwell小室的上室和下室。根据培养基是否含有柚皮苷分为对照组和柚皮苷(2ng/ml组、20ng/ml组、200ng/ml组),培养7d后对下室破骨细胞进行TRAP染色和骨吸收陷窝鉴定;荧光定量PCR分析成骨细胞骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子KB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)基因和破骨细胞分化基因活化T细胞核因子-1(NFATc-1)、活化T细胞核因子-2(NFATc-2)和核因子κB受体激活蛋白(receptor activator of NF-κB,RANK)的相对表达量。结果与对照组相比,柚皮苷可以促进成骨细胞OPG、RANKL的表达量且可提高OPG/RANKL的比值,差异有统计学意义(尸〈0.05);20ng/ml柚皮苷TRAP(+)细胞数(5.824-3.37)明显少于对照组(20.56±7.69),差异有统计学意义(P〈0.05);柚皮苷可抑制破骨细胞NFATc-1、NFATc-2的表达,促进RANK的表达,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论柚皮苷可促进共培养条件体系中成骨细胞OPG和RANKL的表达以及抑制破骨细胞的分化,与上调OPG/RANKL的比值有关。 展开更多
关键词 柚皮苷 共同培养技术 成骨细胞 破骨细胞
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