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口蹄疫病毒基因组结构及其功能 预览 被引量:15
1
作者 刘庆军 张永光 《动物医学进展》 CSCD 2005年第5期 1-5,共5页
口蹄疫病毒的基因组结构和功能是开展口蹄疫其他研究如鉴别诊断、新型疫苗研制和疫源追踪等工作的基础.口蹄疫病毒的基因组由5′-UTR、ORF和3′-UTR及Poly(A)组成,全长约8 500 nt.VPg可能充当RNA合成引物的作用,5′-UTR内的Poly(C)和内... 口蹄疫病毒的基因组结构和功能是开展口蹄疫其他研究如鉴别诊断、新型疫苗研制和疫源追踪等工作的基础.口蹄疫病毒的基因组由5′-UTR、ORF和3′-UTR及Poly(A)组成,全长约8 500 nt.VPg可能充当RNA合成引物的作用,5′-UTR内的Poly(C)和内部核糖体进入位点(internalribosoma entrysite,IRES)是当前研究的热点之一.Poly(C)可能与病毒的感染性有关,IRES对翻译的起始有重要作用.一般认为Poly(A)越长,病毒的感染性越强.病毒的ORF包括P1、P2、P3基因.L、P2、P3研究的相对较少,其中3A与病毒的宿主嗜性有关,3D为RNA聚合酶,可作为免疫和自然感染动物的鉴别诊断抗原.P1为口蹄疫病毒的抗原结构,是研究口蹄疫免疫机制和新型疫苗的基础.VP1可以作为分子流行病学调查,被很多国家所采用. 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 基因组结构 POLY(A) 内部核糖体进入位点 RNA聚合酶 流行病学调查 RNA合成 鉴别诊断 疫苗研制 IRES 诊断抗原 感染动物 抗原结构 新型疫苗 免疫机制 感染性 VPG VP1 基础 疫源 全长 宿主
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siRNA抑制丙型肝炎病毒IRES介导的基因表达 预览 被引量:12
2
作者 饶林 詹林盛 +1 位作者 彭剑淳 王全立 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期 38-43,共6页
以HCV IRES为靶位,应用T7 RNA多聚酶体外转录合成了5条小干扰RNA (siRNA),脂质体转染法将其导入HCV IRES介导萤光素酶表达的转基因细胞(Hep G2.9706)中,通过测定萤光素酶的量,评价T7 siRNA对HCV介导基因表达的抑制作用。结果表明... 以HCV IRES为靶位,应用T7 RNA多聚酶体外转录合成了5条小干扰RNA (siRNA),脂质体转染法将其导入HCV IRES介导萤光素酶表达的转基因细胞(Hep G2.9706)中,通过测定萤光素酶的量,评价T7 siRNA对HCV介导基因表达的抑制作用。结果表明,所合成的5条T7 siRNAs,均能特异性地抑制萤光素酶基因的表达,抑制率分别为94.31%、80.01%、78.01%、80.33%、85.64%,其中以靶向HCV IRES第二茎环结构的T7 siRNAl抑制率最高,且对HCV基因的抑制作用有剂量依赖性,随T7 siRNAl量的增加,抑制率逐渐增强,siRNA抑制HCV基因的作用具有良好的特异性,改变其中1个核苷酸即无显著抑制作用。 展开更多
关键词 RNA干涉 T7 siRNA 萤光素酶 内部核糖体进入位点 丙型肝炎病毒
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HCV IRES介导萤火虫荧光素酶翻译的双顺反子载体的构建与在小鼠体内的表达 预览 被引量:6
3
作者 詹林盛 饶林 +1 位作者 彭剑淳 王全立 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期 330-334,共5页
将HCV IRES插入双报告基因海肾荧光素酶(Rluc)基因和萤火虫荧光素酶(Fluc)基因之间,建立了“依赖帽子的扫描机制”翻译表达Rluc,HCV IRES调控Fluc翻译的双顺反子表达载体pCIRluc-HCV IRES-Fluc,通过酶切反应及转染HepG2细胞鉴定双荧... 将HCV IRES插入双报告基因海肾荧光素酶(Rluc)基因和萤火虫荧光素酶(Fluc)基因之间,建立了“依赖帽子的扫描机制”翻译表达Rluc,HCV IRES调控Fluc翻译的双顺反子表达载体pCIRluc-HCV IRES-Fluc,通过酶切反应及转染HepG2细胞鉴定双荧光素酶瞬间表达活性等试验,证实获得了表达双荧光素酶的双顺反子载体,并应用水压转染法将双顺反子表达质粒导入小鼠体内,在小鼠肝脏检测到高水平表达的Rluc和Fluc,该研究成功构建一种HCV IRES介导萤火虫荧光素酶基因表达的双顺反子载体,并在HepG2细胞及小鼠体内进行了瞬时表达,为进一步建立稳定评价靶向HCV IRES药物作用的细胞及小动物模型研究奠定了基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 HEPG2肝癌细胞 内部核糖体进入位点 荧光素酶
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口蹄疫病毒基因组内部核糖体进入位点一级和二级结构分析 预览 被引量:3
4
作者 张显升 赵启祖 +6 位作者 刘在新 江鹏斐 常惠芸 陈应理 李冬 魏怀录 谢庆阁 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期 142-148,共7页
以口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)强毒China/99株牛舌水泡皮为材料,用RT-PCR法提取RNA及扩增目的cDNA,然后与pGEM-T Easy载体连接并转化JM109菌株,再经重组质粒电泳、PCR和EcoRI酶切鉴定.用DNAstar软件比较了内部核糖... 以口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)强毒China/99株牛舌水泡皮为材料,用RT-PCR法提取RNA及扩增目的cDNA,然后与pGEM-T Easy载体连接并转化JM109菌株,再经重组质粒电泳、PCR和EcoRI酶切鉴定.用DNAstar软件比较了内部核糖体进入位点(IRES)的序列差异,并用RNAdraw软件绘制和分析了该区段的二级结构.8株FMDV IRES核苷酸序列比较表明该区段较为保守,并对非保守区域进行了分析.二级结构分析表明,FMDV IRES至少有3种二级结构图形:第一型有5个结构域,与Pilipenko等报道的一致;第二和三型分别有6和11个结构域,与Pilipenko等报道的结果不同.无论FMDV IRES二级结构如何不同,但单链区大部分核苷酸序列或基序相同,如AACUCC、GAAA、CUUU、AGG、AACC、GUAA等.茎环柄部核苷酸对维持二级结构的空间构像具有十分重要的作用,环中或单链区序列(基序)在维持其功能方面具有很重要的作用,如GAAA和CUUU基序分别是三级结构的组件和嘧啶区结合蛋白的结合位点. 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 基因组 内部核糖体进入位点 二级结构 一级结构
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小RNA病毒基因表达调控研究进展 预览 被引量:1
5
作者 姜明国 信爱国 杨立芳 《动物医学进展》 CSCD 2006年第3期 54-58,共5页
小RNA病毒科属于正链RNA病毒,该科各属病毒基因组结构和基因表达机制具有保守性。文章对小RNA病毒科病毒基因表达调控,包括非依赖帽状结构的翻译起始、宿主细胞翻译的关闭、病毒多聚蛋白的加工处理和RNA的复制研究进行综述,为阐明该... 小RNA病毒科属于正链RNA病毒,该科各属病毒基因组结构和基因表达机制具有保守性。文章对小RNA病毒科病毒基因表达调控,包括非依赖帽状结构的翻译起始、宿主细胞翻译的关闭、病毒多聚蛋白的加工处理和RNA的复制研究进行综述,为阐明该科病毒的致病机理和研究真核生物的基因表达调控提供可借鉴的资料。 展开更多
关键词 小RNA病毒 基因表达 内部核糖体进入位点 RNA结构元件
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双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)的克隆表达及其对丙型肝炎病毒蛋白合成的抑制作用 预览 被引量:2
6
作者 贾因棠 魏来 +2 位作者 蒋栋 丛旭 费然 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期 24-30,共7页
α干扰素为治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的主要药物,但部分患者呈干扰素耐受而不能获得持久的病毒阴转,其可能的原因之一是病毒通过其编码的蛋白(NS5A及E2)抑制干扰素诱导的抗病毒效应分子——双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)的活性... α干扰素为治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染的主要药物,但部分患者呈干扰素耐受而不能获得持久的病毒阴转,其可能的原因之一是病毒通过其编码的蛋白(NS5A及E2)抑制干扰素诱导的抗病毒效应分子——双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)的活性.而关于PKR是否在IFN-α抗HCV的机理中起抑制作用目前仍有争议.为研究PKR对HCV蛋白合成环节是否有抑制作用,通过构建野生型PKR真核表达载体(pPKRwt)及主要起负性调节作用的缺失突变PKR真核表达栽体(pPKRA6),并将pPKRwt/pPKRA6与HCV复制子RNA同时转染Huh7细胞进行共表达,用Western印迹检测HCVIRES下游的NFTⅡ蛋白表达水平,与转染空载体的对照细胞及单用IFN-α处理的细胞相比较.结果显示:表达PKRwt的细胞中NPTⅡ蛋白水平低于转染空载体的对照细胞,但高于经IFN-α单独处理的细胞;表达PKRA6的细胞中NPTⅡ蛋白水平与对照细胞无明显差别,但PKRA能部分抵消IFN-α的抑制作用,说明在IFN-α抑制HCV IRES指导的蛋白合成中,PKR有一定的抑制作用,但可能还有其它的PKR非依赖机制参与. 展开更多
关键词 双链RNA依赖的蛋白激酶 丙型肝炎病毒 复制子 Α干扰素 内部核糖体进入位点
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依赖于5′端非编码区高级结构的真核生物mRNA翻译调控 预览 被引量:6
7
作者 余光创 秦宜德 +1 位作者 伯晓晨 王升启 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期 881-887,共7页
翻译水平的调控是真核基因表达调控的重要环节.近年来的研究表明,许多真核基因的翻译依赖于RNA5′端非编码区的结构元件.一些小结构元件,如铁离子反应元件,具有1个茎环结构,由铁离子介导控制转铁蛋白的翻译.核糖开关通过结合特定代谢分... 翻译水平的调控是真核基因表达调控的重要环节.近年来的研究表明,许多真核基因的翻译依赖于RNA5′端非编码区的结构元件.一些小结构元件,如铁离子反应元件,具有1个茎环结构,由铁离子介导控制转铁蛋白的翻译.核糖开关通过结合特定代谢分子在2种结构状态下切换,调控可变剪接和翻译起始.另1个高度结构化的mRNA元件是内部核糖体进入位点,通过富集核糖体和起始因子促进基因的表达.本文综述了依赖于小结构元件、内部核糖体进入位点和核糖开关的真核基因翻译起始调控相应的研究成果和研究方法.对于研究的前景以及可能存在的挑战也作出阐述. 展开更多
关键词 非编码区 翻译调控 核糖开关 内部核糖体进入位点
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双顺反子真核表达载体pVAX1-IRES的构建与鉴定 被引量:3
8
作者 阎瑾琦 刘国栋 +5 位作者 刘荷中 贾锐 王浩 刘宁 张亮 于继云 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2008年第2期111-115,共5页
目的:为适应恶性肿瘤免疫治疗中多基因联合应用的需要,在真核表达载体pVAX1的基础上,利用内0t。核糖体进入位点IRES序列,构建双顺反子真核表达载体pVAX1-IRES,以增强DNA疫苗的免疫疗效方法:通rLPCR扩增获得目的基因IRES并定向克隆... 目的:为适应恶性肿瘤免疫治疗中多基因联合应用的需要,在真核表达载体pVAX1的基础上,利用内0t。核糖体进入位点IRES序列,构建双顺反子真核表达载体pVAX1-IRES,以增强DNA疫苗的免疫疗效方法:通rLPCR扩增获得目的基因IRES并定向克隆到pVAX1载体中,然后在IRES序列的上下游分别插入红色荧光蛋白基因DsRed1和增强型绿色荧光蛋白基因EGFP,瞬时转染人胚胎肾细胞293T,通过流式细胞术和免疫荧光验证基因表达。结果:pVAX1-IRES经相应酶切和测序鉴定,与预期设计一致,DsRed1基因和EGFP基因在pVAX1-IRES载体中,不仅可以分剐表达,而且可以同时表达,显示该双顺反子真核表达载体构建成功结论:pVAX1-IRES双顺反子表达载体的构建,为基因联合表达和恶性肿瘤的免疫治疗作了必要准备。 展开更多
关键词 内部核糖体进入位点 真核表达 疫苗 DNA
携带IRES的BMP2绿色荧光蛋白表达载体的构建和表达 预览 被引量:4
9
作者 邹海波 安洪 +2 位作者 蒋电明 刘建伟 周亚莉 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2004年第4期 455-458,共4页
目的:构建携带有BMP2基因的pIRES2绿色荧光蛋白表达载体,为BMP2在体内外表达及蛋白定位提供标记.方法:酶切pCDAN3.1-BMP2质粒,获得BMP2cDNA片段并亚克隆至pUC18载体上,随后用SalⅠ单酶切pUC18-BMP2,再次获得BMP2cDNA,同时用SalⅠ将载体p... 目的:构建携带有BMP2基因的pIRES2绿色荧光蛋白表达载体,为BMP2在体内外表达及蛋白定位提供标记.方法:酶切pCDAN3.1-BMP2质粒,获得BMP2cDNA片段并亚克隆至pUC18载体上,随后用SalⅠ单酶切pUC18-BMP2,再次获得BMP2cDNA,同时用SalⅠ将载体pIRES2-EGFP线性化后去磷酸化修饰.连接二者构建重组质粒.酶切筛选阳性克隆并鉴定插入的方向.重组质粒转染细胞,用激光共聚焦显微镜、RT-PCR及流式细胞仪检测基因在细胞内的定位、表达及转染效率;结果:重组载体经酶切和测序证明构建正确,并在细胞中表达.结论:成功构建了pIRES2-BMP2-EGFP表达载体,为研究BMP2的细胞内定位提供了一个重要而方便的工具. 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白 绿色荧光蛋白 内部核糖体进入位点 真核表达
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丙型肝炎病毒5’端非编码区的5’端序列对其翻译启动活性的影响 被引量:2
10
作者 刘水平 赵俊琴 +2 位作者 谭德明 朱海鹏 余俊龙 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2005年第4期 355-358,共4页
目的分析丙型肝炎病毒(HCV)5'端非编码区(5'NCR)的5'端序列对其翻译启动活性的影响.方法用PCR技术扩增获得全长和5'端17个碱基缺失的HCV 5'NCR片段,定向克隆至表达质粒pSEAP2-Control的SEAP基因上游,分别构建成全长... 目的分析丙型肝炎病毒(HCV)5'端非编码区(5'NCR)的5'端序列对其翻译启动活性的影响.方法用PCR技术扩增获得全长和5'端17个碱基缺失的HCV 5'NCR片段,定向克隆至表达质粒pSEAP2-Control的SEAP基因上游,分别构建成全长和5'端截短的HCV 5'NCR调控SEAP表达的重组质粒pNCRSEAP和pdNCRSEAP.用脂质体方法将重组质粒转染至肝细胞株QSG7701,并用化学发光法检测SEAP的表达.结果酶切和测序结果表明,重组质粒pNCRSEAP和pdNCRSEAP构建成功.表达的发光强度分别为390482±42856和635265±52285RLU,二者有差异显著性(P<0.01).结论 HCV 5'NCR的5'端碱基缺失提高了它对SEAP基因的翻译启动活性,为进一步分析HCV IRES的结构提供了实验基础. 展开更多
关键词 肝炎病毒 丙型 5’端非编码区 内部核糖体进入位点 翻译启动活性
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雌激素受体2(ESR2) mRNA 5'非翻译区内部核糖体进入位点活性的鉴定与分析
11
作者 孙柳柳 黄方婷 +2 位作者 张旭燕 朱瑞宇 金坚 《中国生物化学与分子生物学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期622-631,共10页
真核生物除了传统的帽依赖型翻译机制外,还存在内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)介导的翻译机制。雌激素受体2(estrogen receptor 2,ESR2)是雌激素受体家族成员之一,其编码的蛋白质在许多肿瘤中发挥重要的作... 真核生物除了传统的帽依赖型翻译机制外,还存在内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)介导的翻译机制。雌激素受体2(estrogen receptor 2,ESR2)是雌激素受体家族成员之一,其编码的蛋白质在许多肿瘤中发挥重要的作用。ESR2蛋白的异常表达会导致众多肿瘤的发生,但其蛋白质翻译水平的调控机制至今仍不清楚。研究发现,在药物刺激的条件下,乳腺癌细胞MCF7/WT中ESR2蛋白的表达提高,但是其转录水平基本未见发生改变。猜测ESR2 mRNA5'非翻译区(5'untranslated region,5'UTR)具有IRES活性。为了验证ESR2 mRNA 5'UTR是否具有IRES元件,将ESR2 mRNA 5'UTR插入到双顺反子报告基因载体(pRF)中,构建pRL-ESR2-FL重组质粒载体,将其瞬时转染到HEK293细胞。结果发现,ESR2 mRNA 5'UTR有假定的IRES活性。并且通过3个排除实验验证了ESR2 IRES活性与其5'UTR中的内部潜在启动子(P〈0.0001)、内部剪切位点以及核糖体通读无关。进一步对其序列进行截短研究发现,ESR2 IRES活性发挥的关键区域是3'端的439~468 nt,且ESR2 IRES最大活性的发挥依赖于5'UTR序列的完整性。并且发现,ESR2 IRES活性的发挥不但需要特定的一级核酸序列,还要有稳定的二级茎环结构。此研究有望为ESR2蛋白调控的相关疾病提供新的药物治疗靶点。 展开更多
关键词 雌激素受2 5'非翻译区 内部核糖体进入位点
基于Cre重组酶体系的鸡卵清蛋白基因打靶载体的构建 预览 被引量:1
12
作者 张传生 杜立新 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第4期 685-690,共6页
利用胚胎干细胞基因打靶技术制备转基因鸡是研制鸡输卵管反应器的最佳技术路线.为建立基于Cre/loxp系统的鸡卵清蛋白基因(Ovalbumin gene,OV)位点的双交换打靶载体系统,本研究克隆了鸡的OV基因7.8 kb片段,并与克隆的内部核糖体进入位点(... 利用胚胎干细胞基因打靶技术制备转基因鸡是研制鸡输卵管反应器的最佳技术路线.为建立基于Cre/loxp系统的鸡卵清蛋白基因(Ovalbumin gene,OV)位点的双交换打靶载体系统,本研究克隆了鸡的OV基因7.8 kb片段,并与克隆的内部核糖体进入位点(IRES)、人工合成的含有Cre重组酶识别位点变异体交换盒m2/loxp71-EGFP-loxp66,一起构建了含有Hsv-tk负筛选标记的针对鸡卵清蛋白基因位点的敲入型共表达基因打靶载体pSSC-m2/71EGFP66IRES-OV7.8;以猪β干扰素基因(βInterferon,IFN-β)为目的基因构建了穿梭载体pMD-m2/66-MCS-IFN-MCS-Loxp71,经过限制酶酶切及部分测序鉴定,所构建载体结构正确.进一步将它们共转化组成性表达Cre的细菌BM25.8,验证了loxp突变位点对重组反应的有效性 展开更多
关键词 基因打靶 胚胎干细胞 OV CRE重组酶 RMCE 卵清蛋白基因 转基因鸡 基因构建 打靶载 内部核糖体进入位点
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内部核糖体进入位点介导核糖体翻译起始机制 预览
13
作者 马鹏 周小凯 +3 位作者 常秋燕 李林杰 马晓霞 马忠仁 《动物医学进展》 北大核心 2017年第6期74-78,共5页
部分正链RNA病毒基因的蛋白质合成是由其自身的内部核糖体进入位点(internal ribosomal entry site,IRES)以非依赖5’甲基化帽状结构来实现的。目前,IRES被分为4类,虽然这4类IRES在对其介导的基因合成目的蛋白的机制不同,但是这... 部分正链RNA病毒基因的蛋白质合成是由其自身的内部核糖体进入位点(internal ribosomal entry site,IRES)以非依赖5’甲基化帽状结构来实现的。目前,IRES被分为4类,虽然这4类IRES在对其介导的基因合成目的蛋白的机制不同,但是这些不同蛋白翻译机制是依赖IRES与不同真核翻译起始因子相互作用形成特定的复合物来实现的。真核生物翻译是由起始tRNA(Met-tRNAMeti)/eIF2·GTP三元复合物引发,与翻译因子和40S小亚基结合形成43S复合物,43S复合物在eIFlA协助下与起始密码子结合形成48S复合物,在eIF5·GTP促进下60S亚基与40S亚基结合形成80S核糖体。IRES介导翻译通过eIF4G、IRES与eIF4A结合引导43S复合物与IRES结合。Ⅲ型IRES在无eIF3的参与下与40S小亚基的E位点结合并与eIF2·GTP/initiator tRNA形成48S亚基,在eIF5/eIF5B的调控下与60S亚基形成活化的核糖体进行蛋白质翻译。 展开更多
关键词 核糖体 内部核糖体进入位点 蛋白质翻译起始 Ⅲ型内部核糖体进入位点
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重组共表达载体pSLC-IRES-IL-2的构建及在COS-7细胞中的表达 被引量:1
14
作者 侯丽 赵跃然 +4 位作者 王来城 焦玉莲 张捷 马春燕 崔彬 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期 561-564,共4页
目的: 构建共表达质粒pSLC-IRES-IL-2,并在COS-7细胞中表达.方法: 根据人SLC和IL-2 cDNA的序列分别设计、合成引物,构建以内部核糖体进入位点(IRES)相连的SLC和IL-2基因的真核表达质粒pSLC-IRES-IL-2,用电穿孔法以共表达质粒转染COS-7细... 目的: 构建共表达质粒pSLC-IRES-IL-2,并在COS-7细胞中表达.方法: 根据人SLC和IL-2 cDNA的序列分别设计、合成引物,构建以内部核糖体进入位点(IRES)相连的SLC和IL-2基因的真核表达质粒pSLC-IRES-IL-2,用电穿孔法以共表达质粒转染COS-7细胞.用Western blot检测SLC和IL-2的表达.结果: Western blot检测表明,以重组共表达质粒pSLC-IRES-IL-2转染的COS-7细胞能表达SLC和IL-2,表达产物的Mr同预期的结果相一致.结论:成功地构建SLC和IL-2基因的共表达质粒,以其转染COS-7细胞后,能分泌性表达SLC和IL-2,为肿瘤基因治疗的研究提供一定途径. 展开更多
关键词 SLC 白细胞介素-2 共表达质粒 内部核糖体进入位点 COS-7
内部核糖体进入位点及应用 预览 被引量:2
15
作者 高飞 徐开林 潘秀英 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2005年第5期 369-372,共4页
真核细胞翻译的起始能在两种不同机制下发生,即帽依赖及内部核糖体进入位点方式.后者需通过形成复杂的RNA结构元件称为内部核糖体进入位点/片段(IRES),位于信使RNA 5'端非翻译区(5'-NTR),在反式作用因子存在的情况下可募集核糖... 真核细胞翻译的起始能在两种不同机制下发生,即帽依赖及内部核糖体进入位点方式.后者需通过形成复杂的RNA结构元件称为内部核糖体进入位点/片段(IRES),位于信使RNA 5'端非翻译区(5'-NTR),在反式作用因子存在的情况下可募集核糖体且不需帽子结构启动翻译.随着研究的深入越来越多的病毒及细胞IRES被发现,并逐渐应用到生命科学的研究中. 展开更多
关键词 内部核糖体进入位点 基因治疗
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内皮型一氧化氮合酶与血管结构及功能的相关性 预览 被引量:2
16
作者 韩鹂 孙雪梅 乔彤 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2005年第15期 62-63,i001,共3页
目的:应用内部核糖体进入位点构建携带内皮型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子的双基因表达载体,研究外源性基因内皮型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在人脐静脉内皮细胞ECV304中的转染表达,探讨内皮型一氧化氮合酶与血管结构及功能的... 目的:应用内部核糖体进入位点构建携带内皮型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子的双基因表达载体,研究外源性基因内皮型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在人脐静脉内皮细胞ECV304中的转染表达,探讨内皮型一氧化氮合酶与血管结构及功能的相关性.方法:实验于2003-12/2004-12在南京鼓楼医院科研部完成.将Phcmvsp1a-enos中内皮型一氧化氮合酶基因和PcDNA-vegf中血管内皮生长因子基因定向克隆到真核表达载体PcDNA-ires中,构建重组质粒PcDNA-enos-ires-vegf,经酶切,聚合酶链反应扩增和部分DNA测序分析证实后,转染人脐静脉内皮细胞,硝酸还原酶法检测转染后细胞中一氧化氮和一氧化氮合酶活性,免疫组化和荧光双标记及western blotting检测转染后细胞蛋白水平的表达,Trizol提取总RNA,反转录-聚合酶链反应测定转染后细胞mRNA水平的表达.结果:成功构建携带内皮型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子的双基因表达载体PcDNA-enos-ires-vegf,双基因内皮型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在人脐静脉内皮细胞基因组中获得整合及表达.重组基因PcDNA-enos-ires-vegf 组与对照组PcDNA-enos在一氧化氮含量和一氧化氮合成酶活性的表达差异无显著性意义.PcDNA-enos-ires-vegf转染细胞后转染效率为30%~40%.结论:双基因表达载体PcDNA-enos-ires-vegf的成功构建和双基因内皮型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在人脐静脉内皮细胞基因组中表达为研究内皮型一氧化氮合酶在血管结构与功能上所起上所起的作用奠定了基础. 展开更多
关键词 血管结构 相关性 人脐静脉内皮细胞 内皮型一氧化氮合酶基因 双基因表达载 血管内皮生长因子基因 内部核糖体进入位点 一氧化氮合成酶活性 聚合酶链反应扩增 一氧化氮合酶活性 blotting DNA测序分析 western ECV304 真核表达载
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Angiopoiesis and bone regeneration via co expression of the hVEGF and hBMP genes from an adeno-associated viral vector in vitro and in vivo 被引量:3
17
作者 Chen ZHANG Kun-zheng WANG +4 位作者 Hui QIANG Yi-lun TANG Qian LI Miao LI Xiao-qian DANG 《中国药理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2010年第7期821-830,共10页
关键词 腺相关病毒载 骨形态发生蛋白 基因表达 血管生成 血管内皮生长因子 再生 内部核糖体进入位点 骨髓基质干细胞
内部核糖体进入位点及其研究进展 被引量:2
18
作者 安怀杰 俞炜源 孙志伟 《生物技术通讯》 CAS 2007年第4期 663-666,共4页
内部核糖体进入位点(IRES)是mRNA5端非编码区的一段特殊序列,允许核糖体直接在此序列结合mRNA并起始翻译。对IRES的发现、分类、特征,以及细胞中是否存在该元件进行了简要综述。
关键词 内部核糖体进入位点 双顺反子 非编码区 翻译
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靶向治疗肺癌双自杀基因HSV—TK/CD真核表达载体的构建 预览 被引量:2
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作者 李富骊 何建行 +3 位作者 邱源 刘启才 徐鑫 熊信国 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2007年第1期 37-40,共4页
背景与目的:本研究构建CEA启动子和CMV增强子调控表达的HSV-TK和CD基因双顺反子真核表达载体CMVE—pCEA—TK—IRES—CD。方法:根据特异性引物PCR扩增获得CEA启动子(pCEA),巨细胞病毒的早期基因增强子(CMVE)序列,用基因重组的方... 背景与目的:本研究构建CEA启动子和CMV增强子调控表达的HSV-TK和CD基因双顺反子真核表达载体CMVE—pCEA—TK—IRES—CD。方法:根据特异性引物PCR扩增获得CEA启动子(pCEA),巨细胞病毒的早期基因增强子(CMVE)序列,用基因重组的方法替换载体PIRES-EGFP通用启动子pCMV,得到重组质粒CMVE-PCEA-IRES-EGFP,转染重组质粒到表达CEA的肺癌细胞株中进行绿色荧光蛋白检测,确定启动子能有效启动报告基因在CEA阳性的肺癌细胞中的表达。用PCR扩增得到目的基因HSV—TK和CD,将目的基因HSV-TK和CD亚克隆到载体CMVE-pCEA-IRES-EGFP上,得到自杀基因HSV-TK/CD双表达载体CMVE-pCEA-TK-IRES-CD。结果:经酶切、PCR及DNA测序鉴定,双自杀基因真核表达载体CMVE-pCEA-TK-IRES-CD已成功构建,嵌合启动子CMVE-pCEA调控下能启动下游报告基因在CEA阳性的肺癌细胞株的表达。结论:成功构建了嵌合启动子CMVE-pCEA启动的双自杀基因HSV—TK/CD真核表达载体,为下一步研究双自杀基因对于CEA阳性表达的肺癌的治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 CMVE-pCEA嵌合启动子 HSV-TK/CD基因 内部核糖体进入位点 真核表达
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内部核糖体进入位点控制人癌胚抗原与共刺激分子B7—1的表达 预览
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作者 何天霖 傅传刚 +4 位作者 王中川 曹贵松 王庆敏 戴建新 孙树汉 《中华胃肠外科杂志》 CAS 2003年第1期 40-42,共3页
目的构建能在真核细胞内高效表达的 CEA/B7-1共表达核酸疫苗,为进一步研究癌胚抗原 (CEA)核苷酸疫苗、佐剂及它们的特异性抗肿瘤作用奠定基础.方法通过 RT PCR及基因重组技术获得 CEA的真核表达质粒 pIRES CEA,并利用酶切、连接等手段... 目的构建能在真核细胞内高效表达的 CEA/B7-1共表达核酸疫苗,为进一步研究癌胚抗原 (CEA)核苷酸疫苗、佐剂及它们的特异性抗肿瘤作用奠定基础.方法通过 RT PCR及基因重组技术获得 CEA的真核表达质粒 pIRES CEA,并利用酶切、连接等手段与共刺激分子 B7-1基因重组成通过内部核糖体进入位点连接的含有两个表达单元的真核共表达质粒 pIRES CEA/IL-2.结果全自动电化学法定量测定 CEA表达量为 (23.73± 0.26)ng/ml,流式细胞仪测 B7-1为 44.65%.结论 CEA/B7-1共表达载体在真核细胞中能高效表达 CEA和 B7-1. 展开更多
关键词 癌胚抗原 共刺激分子 共表达质粒 内部核糖体进入位点
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