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水产品中创伤弧菌和副溶血弧菌双重PCR检测方法的建立
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作者 胡元庆 钟颖 李凤霞 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2019年第7期831-835,849共6页
目的建立一种同步检测创伤弧菌和副溶血弧菌的双重PCR方法。方法选择副溶血弧菌tlh基因和创伤弧菌vvhA基因作为靶序列各设计一对引物。用合成的引物对副溶血弧菌和创伤弧菌进行双重PCR扩增,确定特异性和最低检出限。然后用此方法对53株... 目的建立一种同步检测创伤弧菌和副溶血弧菌的双重PCR方法。方法选择副溶血弧菌tlh基因和创伤弧菌vvhA基因作为靶序列各设计一对引物。用合成的引物对副溶血弧菌和创伤弧菌进行双重PCR扩增,确定特异性和最低检出限。然后用此方法对53株副溶血弧菌和7株创伤弧菌进行检测。结果确定了双重PCR检测创伤弧菌和副溶血弧菌的最优反应条件,其中退火温度为60℃,方法具有较好的特异性。对副溶血弧菌的最低限为1.0×10~2 CFU/mL,创伤弧菌最低限为4.2×10~4 CFU/mL。双重PCR对分离株检测符合率达100%。结论建立的双重PCR方法简便、快速、特异性好,可同时检测副溶血弧菌和创伤弧菌,为水产品中病原菌的基层检测提供解决方案。 展开更多
关键词 创伤弧菌 溶血弧菌 双重PCR
宁波地区腹泻患者副溶血弧菌毒力基因及耐药性分析 预览
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作者 谢红意 叶鸿雁 +3 位作者 周方满 施露梅 葛婷婷 乐旭波 《检验医学》 CAS 2019年第2期136-139,共4页
目的分析宁波地区腹泻患者副溶血弧菌毒力基因、Ⅲ型分泌系统(T3SS)及其耐药情况。方法收集分离自腹泻患者粪便样本的副溶血弧菌49株,采用聚合酶链反应(PCR)检测其毒力基因tdh、trh和T3SS1、T3SS2,采用纸片扩散法检测分离的菌株对17种... 目的分析宁波地区腹泻患者副溶血弧菌毒力基因、Ⅲ型分泌系统(T3SS)及其耐药情况。方法收集分离自腹泻患者粪便样本的副溶血弧菌49株,采用聚合酶链反应(PCR)检测其毒力基因tdh、trh和T3SS1、T3SS2,采用纸片扩散法检测分离的菌株对17种常用抗菌药物的敏感性。结果49株副溶血弧菌中有48株tdh阳性,1株trh阳性,47株tdh(+)trh(-),1株tdh(+)trh(+),1株tdh(-)trh(-);49株副溶血弧菌均携带T3SS1基因,47株携带T3SS2α基因,1株携带T3SS2β基因。副溶血弧菌对氨苄西林的耐药率最高(75.5%),对三代头孢、四环素类抗菌药物的敏感性较高,对头孢吡肟、左氧氟沙星和碳氢酶烯类抗菌药物(亚胺培南、美洛培南)的敏感性为100%。结论宁波地区腹泻患者副溶血弧菌毒力基因携带率高,对常见抗菌药物较敏感,应及时监测其耐药率变化,指导临床合理用药。 展开更多
关键词 溶血弧菌 腹泻 毒力基因 耐药性
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TaqMan-MGB探针荧光定量PCR检测致对虾急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌 预览
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作者 童桂香 黎小正 +3 位作者 吴祥庆 黄鸾玉 黄光华 韦信贤 《湖南农业大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期405-411,共7页
根据pirAVp基因保守序列设计特异性引物和TaqMan-MGB探针,经优化反应体系及条件,建立检测致对虾急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(VpAHPND)的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR方法;以重组质粒为标准品制作标准曲线,并进行特异性、敏感性、重复性及... 根据pirAVp基因保守序列设计特异性引物和TaqMan-MGB探针,经优化反应体系及条件,建立检测致对虾急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(VpAHPND)的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR方法;以重组质粒为标准品制作标准曲线,并进行特异性、敏感性、重复性及临床应用试验.结果表明:该方法定量范围宽,起始模板浓度范围为1×10^1~1×10^9拷贝/反应时,标准曲线具良好的线性关系;最低检测限约为10拷贝/反应,与对虾其他病原菌及病毒无交叉反应,重复试验变异系数为0.37%~0.47%,可在1h内完成单个样品检测;对临床对虾样品及水样的检测结果表明,与世界动物卫生组织(OIE)推荐的套式PCR法相比,可提高VpAHPND的阳性检出率,且检测为阳性的样品包含全部套式PCR法检测为阳性的样品.可见,应用TaqMan-MGB探针建立的检测VpAHPND的荧光定量PCR方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好、能快速定量等优点,可用于临床对虾样品及水样的VpAHPND检测. 展开更多
关键词 对虾 急性肝胰腺坏死病 溶血弧菌 TaqMan–MGB探针 荧光定量PCR方法
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副溶血性弧菌CalR调控vopB2的分子机制
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作者 张凌宇 唐浩 +2 位作者 仇越 张义全 王丽 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1672-1677,共6页
【背景】副溶血性弧菌是一种非常重要的食源性致病菌,CalR蛋白是一种全局转录调节因子。III型分泌系统2 (Type 3 secretion systems 2 T3SS2)是副溶血性弧菌主要的毒力因子,vopB2是T3SS2中的一个关键效应蛋白。【目的】研究副溶血弧菌C... 【背景】副溶血性弧菌是一种非常重要的食源性致病菌,CalR蛋白是一种全局转录调节因子。III型分泌系统2 (Type 3 secretion systems 2 T3SS2)是副溶血性弧菌主要的毒力因子,vopB2是T3SS2中的一个关键效应蛋白。【目的】研究副溶血弧菌CalR对vopB2的转录调控机制。【方法】利用引物延伸实验鉴定vopB2及vtrA的转录起始位点,并根据产物的丰度判断CalR对靶基因的调控关系;采用实时定量RT-PCR研究靶基因mRNA在WT和ΔcalR中转录丰度,验证CalR对靶基因的转录调控关系,进一步利用LacZ实验通过比较β-半乳糖苷酶活性的差异来判定CalR对靶基因的调控关系;利用凝胶阻滞实验分析His-CalR对靶基因启动子区是否具有直接的结合作用。【结果】vopB2有两个转录起始位点A(-130和-28)且其活性受CalR的直接抑制;引物延伸和LacZ结果表明CalR对vtrA的转录并无调控作用。【结论】CalR直接抑制vopB2的转录,该抑制作用与vtrA无关联。 展开更多
关键词 溶血弧菌 转录调控 CalR vopB2 vtrA
食品微生物检验质量控制探讨与研究 预览
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作者 颜淑芳 《食品界》 2019年第8期73-75,共3页
2018年第一季度,全国16个省份的食品中毒事件一共38起,中毒病例共1035例,死亡病例19例。细菌性食品中毒事件、中毒人数分别占总数的28.95%、56.33%。其主要的致病因素是金黄色葡萄球菌肠毒素、沙门氏菌和副溶血弧菌等。
关键词 食品微生物检验 质量控制 金黄色葡萄球菌肠毒素 中毒事件 溶血弧菌 中毒病例 死亡病例 致病因素
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凡纳滨对虾WDS基因克隆及其表达分析 预览
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作者 吴诚旭 章双 +2 位作者 黎铭 张海涛 史黎黎 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期165-172,共8页
【目的】分析WDS基因在凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)各组织中的表达情况及应对不同病原感染时的表达变化,以揭示WDS在动物体除生殖外其他生理活动中的功能作用。【方法】采用RACE-PCR克隆凡纳滨对虾WDS基因(LvWDS)cDNA序列,利用在... 【目的】分析WDS基因在凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)各组织中的表达情况及应对不同病原感染时的表达变化,以揭示WDS在动物体除生殖外其他生理活动中的功能作用。【方法】采用RACE-PCR克隆凡纳滨对虾WDS基因(LvWDS)cDNA序列,利用在线生物信息学软件进行序列分析,并以实时荧光定量PCR分析LvWDS基因在凡纳滨对虾不同组织中的表达情况及不同病原感染后的表达变化。【结果】LvWDS基因(GenBank登录号MH330316)c DNA序列全长1880 bp,其中,开放阅读框(ORF)978 bp,5’端非编码区(5’UTR)183 bp,3’端非编码区(3’UTR)719 bp,编码325个氨基酸。LvWDS氨基酸序列含有7个WD40重复序列(保守结构域),与拟穴青蟹(Scylla paramamosain)WDS氨基酸序列的相似性最高,为99%,基于WDS氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树也显示LvWDS与拟穴青蟹WDS的亲缘关系最近。LvWDS基因在凡纳滨对虾精囊中的相对表达量最高,在血细胞、鳃和肠道等免疫组织中处于较高表达水平,在肌肉组织中的表达水平最低。经白斑综合症病毒(WSSV)和副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)感染后,凡纳滨对虾血细胞、鳃和肠道组织中LvWDS基因的相对表达量均不同程度发生变化。【结论】WDS进化十分保守,其在不同物种中的功能稳定。LvWDS除了在凡纳滨对虾生殖发育中发挥重要作用外,可能还与免疫相关,在凡纳滨对虾抗病免疫中发挥作用。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 WD重复蛋白 WDS基因 组织表达 白斑综合症病毒(WSSV) 溶血弧菌
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北京市顺义区三起关联性副溶血弧菌食源性疾病暴发事件的识别与分析
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作者 李颖 张晴 +4 位作者 张爽 张彦春 荆红波 马红梅 逄波 《疾病监测》 CAS 2019年第4期371-376,共6页
目的分析3起由副溶血弧菌(VP)导致的食源性疾病暴发事件,利用国家致病菌识别网(China PIN)对其进行关联性分析。方法收集2018年8月北京市顺义区3起食源性疾病暴发事件的流行病学资料,采集可疑食品、环境和病例样本48份,进行菌株分离和鉴... 目的分析3起由副溶血弧菌(VP)导致的食源性疾病暴发事件,利用国家致病菌识别网(China PIN)对其进行关联性分析。方法收集2018年8月北京市顺义区3起食源性疾病暴发事件的流行病学资料,采集可疑食品、环境和病例样本48份,进行菌株分离和鉴定,对分离的VP菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型,获得的指纹图谱通过致病菌识别网进行比对分析。结果 3起暴发事件中,共从12份病例样本和3份可疑食品样本中分离出15株O3:K6血清型VP,其种特异性基因和毒力基因检测结果为:toxR+/tdh+/trh-,根据PFGE指纹图谱可以将15株VP分成2个簇,每个簇中的指纹图谱相似度为100%。2个指纹图谱簇之间的相似度为93.94%;且与2014—2017年本地区China PIN分子分型数据库中分离自腹泻病例的VP菌株带型不成簇。结论 VP引起的3起食源性疾病暴发事件由共同的传染源导致,China PIN在食源性疾病暴发识别、溯源和关联性分析中有良好的应用前景。 展开更多
关键词 溶血弧菌 脉冲场凝胶电泳 国家致病菌识别网 食源性疾病
中国副溶血弧菌多位点可变数目串联重复序列分型方法的建立
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作者 赵林 陈美玲 +4 位作者 卢昕 李杰 赵宏群 阚飙 逄波 《疾病监测》 CAS 2019年第6期495-500,共6页
目的建立适合中国分离的副溶血弧菌的多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA)方法。方法以我国不同来源的420株副溶血弧菌为研究对象,针对现有的12个可变数目串联重复序列(VNTR)位点使用PCR扩增,产物进行毛细管电泳,对不同位点及其组合... 目的建立适合中国分离的副溶血弧菌的多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA)方法。方法以我国不同来源的420株副溶血弧菌为研究对象,针对现有的12个可变数目串联重复序列(VNTR)位点使用PCR扩增,产物进行毛细管电泳,对不同位点及其组合的分型能力结果进行分析。结果副溶血弧菌的12个VNTR位点中,VPTR7的扩增率比较低(71.90%),VP1-17不具备多态性(Nei值=0.00),VP2-07的稳定性差;6个位点的组合(VP1-10、VPTR1、VPTR3、VPTR5、VPTR6、VPTR8)分型方案可将420株副溶血弧菌分为311个MLVA型,并可区分相同的ST型菌株。结论 6个位点的MLVA分型方案经济性和区分度最优,建立了适合中国分离副溶血弧菌的MLVA分型方案。 展开更多
关键词 溶血弧菌 多位点可变数目串联重复序列分型 可变数目串联重复序列 流行病学 暴发
食品中副溶血性弧菌检验能力验证样品的研制及其应用
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作者 刘娜 骆海朋 +2 位作者 陈怡文 任秀 崔生辉 《食品安全质量检测学报》 CAS 2019年第7期1816-1820,共5页
目的研制食品中副溶血性弧菌检验能力验证样品,并应用于副溶血性弧菌能力验证试验中。方法能力验证样品包括0~3瓶阳性样品和0~3瓶阴性样品。阴性样品仅含有背景细菌,阳性样本在背景菌的基础上添加有副溶血性弧菌。为防止数据串通,编制1~... 目的研制食品中副溶血性弧菌检验能力验证样品,并应用于副溶血性弧菌能力验证试验中。方法能力验证样品包括0~3瓶阳性样品和0~3瓶阴性样品。阴性样品仅含有背景细菌,阳性样本在背景菌的基础上添加有副溶血性弧菌。为防止数据串通,编制1~180的随机数字表,其中90个随机数字作为阳性样品编码,另外90个随机数字则用为阴性样品编码。随机抽取冻干质控阳性样品、阴性样品各20瓶,参照本次能力验证推荐的GB4789.7-2013对样品进行均匀性检验,阳性样品均需要检出副溶血性弧菌,而阴性对照样品应不得检出副溶血性弧菌。将副溶血性弧菌能力验证样品分别在?30、4℃储藏30d监测其储藏稳定性,同时在25和37℃下储藏7 d监测其运输稳定性。结果副溶血性弧菌的质控样在均匀性、储藏稳定性和运输稳定性均能满足质控样使用的要求。在39家实验室反馈结果中,36家结果评定为满意,满意率为92.3%。结论食品中副溶血性弧菌能力验证样品可以满足此次能力验证的需求,国内实验室大部分能满足考核要求,仍有部分实验室需要提高检验检测能力。 展开更多
关键词 溶血弧菌 能力验证 样品研制 考核
副溶血弧菌主要毒力因子三重荧光定量PCR检测方法的建立与应用
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作者 万莹 凌娇 +2 位作者 王权 孙卫东 蒋蔚 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第1期60-66,共7页
为建立快捷、准确、高效检测副溶血弧菌的方法,以副溶血弧菌种属特异性基因toxR和毒力因子tdh、trh基因序列,分别设计3对特异性引物及相应TaqMan探针,并在toxR、tdh和trh基因的3个探针的5’端分别标记FAM、HEX、CY5荧光报告基团,3’端标... 为建立快捷、准确、高效检测副溶血弧菌的方法,以副溶血弧菌种属特异性基因toxR和毒力因子tdh、trh基因序列,分别设计3对特异性引物及相应TaqMan探针,并在toxR、tdh和trh基因的3个探针的5’端分别标记FAM、HEX、CY5荧光报告基团,3’端标记BHQ1淬灭荧光基团,通过优化反应体系和反应参数,确定最佳反应体系,建立一种基于Taq Man探针定量检测副溶血弧菌的三重荧光定量PCR方法。结果:本试验所建立三重荧光定量PCR方法与其他菌株无交叉反应,其最低检出限达到了10 CFU/mL,重复性试验中每组变异系数均小于1%;检测人工染菌的虾肉和贝类样品时,最低检出限亦达到10 CFU/m L,且整个检测扩增时间大约为1 h。结果表明,本研究建立的三重荧光PCR检测方法,特异性强、敏感性高、重复性好且耗时短,是高通量检测致病性副溶血弧菌的有效手段。 展开更多
关键词 溶血弧菌 toxR TDH TRH 三重荧光定量PCR
VPA0961对副溶血弧菌运动能力的调控 预览
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作者 唐浩 仇越 +2 位作者 袁睿韬 黄新祥 张义全 《江苏大学学报:医学版》 CAS 2019年第3期248-252,共5页
目的:构建vpa0961基因突变株及其回补株,并初步探究VPA0961对副溶血弧菌运动能力的调控作用。方法:以副溶血弧菌RIMD2210633野生株的基因组DNA为模板,PCR扩增得到vpa0961的同源臂融合片段,并克隆至自杀质粒pDS132多克隆位点。将pDS132... 目的:构建vpa0961基因突变株及其回补株,并初步探究VPA0961对副溶血弧菌运动能力的调控作用。方法:以副溶血弧菌RIMD2210633野生株的基因组DNA为模板,PCR扩增得到vpa0961的同源臂融合片段,并克隆至自杀质粒pDS132多克隆位点。将pDS132重组质粒通过结合转移的方式转入野生株,进而通过同源重组方法替换原始vpa0961,制备vpa0961无痕突变株(Δvpa0961)。PCR扩增vpa0961整个编码区序列,并将其直接克隆入pBAD33质粒,获得重组回补质粒。将回补质粒结合转移到Δvpa0961中,然后通过特异性引物PCR鉴定并外送测序以获得回补株。将副溶血弧菌的预培养物接种于游动(swimming)和爬动(swarming)平板,37℃静置培养,比较不同菌株间菌苔直径的差异。采用qRT-PCR分析鞭毛蛋白基因lafA、flaB和flaF的mRNA表达水平。结果:特异性扩增及序列分析显示,成功构建vpa0961基因突变株和回补株;与野生株相比,Δvpa0961游动能力和爬动能力明显减弱(t=14.06,36.37,P<0.05);与野生株相比,Δvpa0961 lafA、flaB和flaF mRNA转录水平明显降低(t=185.2,56.36,50.24,P<0.05)。结论:成功构建vpa0961的基因突变株和回补株,且VPA0961对鞭毛基因的转录具有正调控作用。 展开更多
关键词 溶血弧菌 VPA0961 鞭毛 游动 爬动
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2017年宁波市副溶血弧菌临床株病原学和分子特征分析 预览
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作者 高红 张琰 +2 位作者 章丹阳 杨元斌 叶硕 《现代实用医学》 2019年第6期765-768,共4页
目的了解宁波市食源性疾病主动监测病例中副溶血弧菌流行情况、毒力基因携带、耐药和多位点序列分型(MLST)特征。方法对2017年宁波市食源性疾病主动监测哨点分离副溶血弧菌进行菌株复核、血清分型、毒力基因检测、耐药检测,并对部分O3:K... 目的了解宁波市食源性疾病主动监测病例中副溶血弧菌流行情况、毒力基因携带、耐药和多位点序列分型(MLST)特征。方法对2017年宁波市食源性疾病主动监测哨点分离副溶血弧菌进行菌株复核、血清分型、毒力基因检测、耐药检测,并对部分O3:K6血清型菌株进行MLST分子分型。结果2017年11家哨点共检测粪便和肛拭子标本共3467份,分离到318致病株,检出率为9.17%;副溶血弧菌的检出阳性率最高,为4.87%。169株副溶血弧菌分为18种血清型,最主要的血清型为O3:K6,其次为O4:K44和O4:KUT。耐热直接溶血素基因(tdh)携带率高,耐热直接溶血素相关基因(trh)携带率低,有16株不携带这两种毒力基因。副溶血弧菌对头孢他啶、亚胺培南、庆大霉素、四环素和环丙沙星敏感率为100%;对头孢唑林的耐药率高达98.82%;共检出15株多重耐药菌株。30株O3:K6血清型菌株MLST分型均为ST3。结论应加强对副溶血弧菌的监测,尤其是加强对细菌耐药的监测。 展开更多
关键词 溶血弧菌 食源性疾病 毒力基因 耐药 多位点序列分型
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响应面法研究温度、盐度、pH及磷酸盐、硝氮、氨氮对副溶血弧菌生长的影响 预览
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作者 黄梦诗 杨倩倩 +5 位作者 张艳 姜晓瑜 赵俊 张旭志 丁东生 曲克明 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2019年第2期132-140,共9页
副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)在海洋环境中普遍存在,是能够引起人类中毒的重要食源性病原菌之一,研究其生长受环境因子的影响规律对科研和社会生活都具有重要意义。本研究采用响应面法研究温度、盐度、pH、磷酸盐、硝氮和氨... 副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)在海洋环境中普遍存在,是能够引起人类中毒的重要食源性病原菌之一,研究其生长受环境因子的影响规律对科研和社会生活都具有重要意义。本研究采用响应面法研究温度、盐度、pH、磷酸盐、硝氮和氨氮对VP的生长影响,以探讨、评估这6种理化因子的综合作用结果。首先用Design-Expert软件中的Box Behnken中心组合原则设计三因素三水平响应面实验,再进行响应面分析,以培养基光密度(OD600 nm)值为生长状态参数,获得该菌的最佳培养参数:温度为34.5℃,盐度为3%,酸碱度pH为8.0。在此基础上,考察NaNO3、NH4Cl和Na3PO4对VP生长的影响并建立模型。回归方程决定系数R2=0.9217,校正系数R2=0.8211,回归模型F=9.16,P=0.004,表明该模型具有较好的准确性。实验所得实测值与模型演算理论值拟合良好,皆表明磷酸盐、硝氮和氨氮对VP的生长都具有抑制作用。 展开更多
关键词 溶血弧菌 生长 理化因子 影响分析 响应面法
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副溶血弧菌特异性卵黄抗体(AHPND-VpIgY)对凡纳滨对虾幼体被动免疫和育苗成活率的影响 预览
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作者 闫茂仓 王瑶华 +7 位作者 胡利华 张炯明 刘亚南 唐明 罗奎 黄贤克 周前进 陈炯 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期443-448,共6页
将抗高致病性副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)特异性卵黄抗体(AHPND-VpIgY)应用于育苗生产,通过测定氨氮、亚硝酸盐、细菌总数、弧菌总数、相对保护率和育苗成活率,评价了AHPND-VpIgY 在育苗期对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)... 将抗高致病性副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)特异性卵黄抗体(AHPND-VpIgY)应用于育苗生产,通过测定氨氮、亚硝酸盐、细菌总数、弧菌总数、相对保护率和育苗成活率,评价了AHPND-VpIgY 在育苗期对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)幼体的保护效果。结果表明, 0.1g/m3和0.2g/m3 AHPND-VpIgY 组的相对保护率为35.7%和57.2%,两者均显著高于非特异性卵黄抗体组(P<0.05);两组的育苗成活率为50.8%和57.2%,比对照组分别提高19.1%和25.6%。各实验组氨氮、亚硝酸盐、细菌总数及弧菌总数与对照组无显著差异,对水质无影响。综上,特异性的AHPND-VpIgY 能在不改变水质的前提下,有效提高凡纳滨对虾幼体的存活率、相对保护率和育苗成活率,从而提高凡纳滨对虾苗种产量和质量。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 溶血弧菌 卵黄抗体 育苗期 保护效果
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副溶血弧菌现场快速检测方法的建立及初步应用
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作者 姚贵哲 王伟利 +2 位作者 夏明 王冬雪 孟庆峰 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第7期78-80,169-170共4页
为了实现副溶血弧菌的现场快速筛查,降低副溶血弧菌引起的食品安全问题,保障食品安全,试验利用副溶血弧菌 tdh 基因建立了可以快速检测水产品中副溶血弧菌的恒温环介导扩增( LAMP)方法,并通过添加钙黄绿素实现现场快速判定水产品中是否... 为了实现副溶血弧菌的现场快速筛查,降低副溶血弧菌引起的食品安全问题,保障食品安全,试验利用副溶血弧菌 tdh 基因建立了可以快速检测水产品中副溶血弧菌的恒温环介导扩增( LAMP)方法,并通过添加钙黄绿素实现现场快速判定水产品中是否存在副溶血弧菌,同时利用建立的方法对螃蟹及贝类共 40 份水产品进行检测。结果表明:试验建立的方法具有良好的特异性,灵敏度可达 7. 92×10-3 ng /μL,实时浊度仪观察只有副溶血弧菌扩增出曲线,采用钙黄绿素法观察只有副溶血弧菌的扩增体系见到黄绿色。检测方法初步应用结果显示,从 1 例板蟹和 1 例蛤蜊中检测到副溶血弧菌核酸,证实2 例水产品中存在副溶血弧菌。说明试验建立的方法可用于水产品中副溶血弧菌的现场检测。 展开更多
关键词 溶血弧菌 现场快速检测 恒温环介导扩增 食品安全 可视方法
重组大肠杆菌制备副溶血弧菌噬菌体内溶素Lys qdvp001 CHAP域及诱导条件初步优化 预览
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作者 鞠晓晨 吕新伟 +1 位作者 王静雪 林洪 《食品工业科技》 CSCD 北大核心 2018年第6期86-91,共6页
目的:为了利用噬菌体内溶素防控副溶血弧菌,通过克隆表达工程菌pET30a—CHAP制备目的蛋白,并将以包涵体存在的目的蛋白复性得到有活性的噬菌体内溶素蛋白。方法:首先克隆工程菌pET30a—CHAP,经IPTG的诱导表达后,检测菌液上清中内... 目的:为了利用噬菌体内溶素防控副溶血弧菌,通过克隆表达工程菌pET30a—CHAP制备目的蛋白,并将以包涵体存在的目的蛋白复性得到有活性的噬菌体内溶素蛋白。方法:首先克隆工程菌pET30a—CHAP,经IPTG的诱导表达后,检测菌液上清中内溶素含量判断表达形式,再进行诱导条件初步优化。通过将表达的pET30a—CHAP包涵体蛋白先用洗涤剂洗涤去除杂蛋白,然后用尿素变性荆溶解,并用Ni2+ SepharoseTM6 FastFlow亲和层析柱进行层析纯化,用EDTA、氧化型谷胱甘肽、还原型谷胱甘肽等为折叠复性促进剂,经过透析制备可溶性的pET30a—CHAP蛋白,再检测目的蛋白的抑菌活性。结果:本实验确定了重组菌内溶素的表达形式为没有活性的包涵体;初步确定最佳诱导条件为诱导温度为16℃,IPTG终浓度0.5mmol/L,诱导时间为7h;复性后的内溶素具有抑菌活性。结论:本研究为利用内溶素防控副溶血弧菌以及其他革兰氏阴性细菌提供了制备方法。 展开更多
关键词 溶血弧菌 溶血弧菌噬菌体 内溶素 包涵体复性
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五倍子物的提取及其对弧菌抑制作用的初步研究 预览 被引量:1
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作者 朱珍珍 李青霞 +3 位作者 邓嘉仪 郑梓唯 赵鋆伟 唐建洲 《中国畜牧兽医文摘》 2018年第2期62-63,共2页
在传统的提取法基础之上,优化五倍子提取工艺提取五倍子有效成分,并研究不同浓度五倍子提取物对南北白对虾养殖过程中常见弧菌的抑制作用。方法:通过平板培养溶藻弧菌、创伤弧菌、副溶血弧菌等广泛存在于海水和海产品中的病原菌,并利... 在传统的提取法基础之上,优化五倍子提取工艺提取五倍子有效成分,并研究不同浓度五倍子提取物对南北白对虾养殖过程中常见弧菌的抑制作用。方法:通过平板培养溶藻弧菌、创伤弧菌、副溶血弧菌等广泛存在于海水和海产品中的病原菌,并利用纸片琼脂扩散法研究五倍子提取物对病原菌的生长抑制效果。结果表明:采用低浓度的盐酸水提法能获得较好的提取效果,提取物浓度为1g/ml时对弧菌抑制效果最好。结论:1g/ml浓度的盐酸提五倍子物对弧菌具有较好的抑制效果,在养殖过程中具有较好的应用价值。 展开更多
关键词 五倍子提取物 创伤弧菌 溶藻弧菌 溶血弧菌 抑制效果
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几种消毒剂对凡纳滨对虾致病性弧菌的杀灭作用 预览 被引量:1
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作者 刘志轩 王印庚 +5 位作者 张正 王凯 蔡生力 包海岩 姚学良 张振 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2018年第3期112-119,共8页
本研究对分离的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)及Vibrio sp.Ex25共4株急性肝胰腺坏死病(AHPND)致病菌(编号分别为PV130903A、PV140731A、PV150526A和PV140... 本研究对分离的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)及Vibrio sp.Ex25共4株急性肝胰腺坏死病(AHPND)致病菌(编号分别为PV130903A、PV140731A、PV150526A和PV140821A)进行了杀灭作用实验,研究了聚六亚甲基胍(PHMG)、双氧水(H_2O_2)、聚维酮碘(PVPI)及二氧化氯(ClO_2)4种消毒剂对4株致病菌的杀灭浓度、杀灭时间及杀灭率的比较分析;同时追踪了PHMG在凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖过程中对池塘水体弧菌的杀灭效果。结果显示,2μl/L的ClO_2作用1 h、1μl/L的PHMG或1μl/L的H_2O_2作用2 h、8μl/L的PVPI作用6 h可完全杀灭4种弧菌,PHMG和PVPI的杀菌率随时间的推移逐渐升高,H_2O_2和ClO_2的杀菌率在达到峰值之后均有不同程度的下降。在池塘养殖水体的弧菌杀灭实验中,浓度为0.5、1、2μl/L的PHMG可使养殖水体中的弧菌总量分别在第4天、第3天和第3天下降到最低值,分别为初始弧菌总数的79.14%、82.48%和87.30%;各浓度实验组弧菌总量达到最低值后逐步升高,直到第11天时上述各浓度实验组的弧菌总量仍然低于消毒前初始值的3.58%、5.53%和6.10%。综合比较分析,这4种消毒剂对致病性弧菌的杀菌能力强弱为:PHMG〉H_2O_2〉ClO_2〉PVPI。结合消毒剂的杀菌浓度、杀菌效果、持续时间以及使用成本等几个方面考虑,认为PHMG具有高效、持久等优点,在水产养殖中将会有良好的应用前景。 展开更多
关键词 溶血弧菌 哈维氏弧菌 溶藻弧菌 VIBRIO sp. 聚六亚甲基胍 杀菌效果
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副溶血性弧菌和创伤弧菌多重降落PCR体系的建立
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作者 王义涛 王云 《医学检验与临床》 2018年第3期14-17,24共5页
目的:建立一种可以同时检测食源性疾病中常见病原性海洋弧菌,主要是创伤弧菌及副溶血性弧菌的多重降落PCR反应体系。方法:收集2017年3月-2017年10月食源性疾病高发期就诊的患者粪便标本进行分离培养鉴定并分析,同时针对创伤弧菌的wh... 目的:建立一种可以同时检测食源性疾病中常见病原性海洋弧菌,主要是创伤弧菌及副溶血性弧菌的多重降落PCR反应体系。方法:收集2017年3月-2017年10月食源性疾病高发期就诊的患者粪便标本进行分离培养鉴定并分析,同时针对创伤弧菌的whA基因、副溶血性弧菌Parcol基因及16S基因靶标分别设计3对特异性引物,应用该引物建立多重降落PCR,并检测103份粪便标本,其结果与细菌培养法进行比较。结果:建立的多重降落PCR对致病菌两种基因(vvhA、col)DNA的检测下限分别为104CFU/mL、103CFU/mL;与细菌培养法相比,灵敏度可迭100%,检测vvhA、col基因特异性分别为97.94%、95.12%,总特异性达96.65%。结论:所建立的多重降落PCR具有高灵敏度与特异性,可直接检测由创伤弧菌和副溶血性弧菌引起的食源性感染,其结果可以直接用于临床检测。该方法可用于由创伤弧菌和副溶血性弧菌引起的食源性感染的快速诊断与流行病学调查。 展开更多
关键词 溶血弧菌 创伤弧菌 多重降落PCR 食源性疾病 病原性海洋弧菌
上海地区虾源弧菌分离鉴定及分子分型研究 预览
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作者 安伟 张海强 高晓华 《中国农学通报》 2018年第36期140-145,共6页
为了进一步了解上海市凡纳滨对虾弧菌的分布特征以及主要种属的分子基因型特征,为本地区虾的弧菌病的流行调查、防控治疗提供依据。本研究采用选择性培养基筛选和全自动细菌鉴定仪鉴定的方法,对不同时间,不同池塘的虾源弧菌进行分离鉴定... 为了进一步了解上海市凡纳滨对虾弧菌的分布特征以及主要种属的分子基因型特征,为本地区虾的弧菌病的流行调查、防控治疗提供依据。本研究采用选择性培养基筛选和全自动细菌鉴定仪鉴定的方法,对不同时间,不同池塘的虾源弧菌进行分离鉴定,总共分离到52株不同来源的弧菌,其中30株副溶血弧菌(57.7%),9株拟态弧菌(17.3%),7株创伤弧菌(13.5%),4株溶藻弧菌(7.7%),1株霍乱弧菌(1.9%)以及1株河流弧菌(1.9%)。调查结果显示:上海地区虾源弧菌以副溶血弧菌为主。进而对30副溶血弧菌株副溶血弧菌进行分子分型研究,EIRC-PCR指纹图谱显示基因型存在多态性,每个分离株的基因扩增条带数介于4~8之间,大小都在250~4500 bp之间;聚类分析分为5个亚群,其中Ⅰ亚群15株(50%),Ⅱ亚群6株(20%),Ⅲ亚群6株(20%),Ⅳ亚群2株(6.7%),Ⅴ亚群(3.3%)。结果表明,上海地区虾源副溶血弧菌存在一种主要流行亚群。 展开更多
关键词 弧菌 溶血弧菌 EIRC-PCR 凡纳滨对虾
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