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抗狂犬病病毒单克隆抗体临床试验设计和评价考虑要点 认领
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作者 林琳 赵建中 +2 位作者 刘丽华 魏春敏 曾新 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期125-128,共4页
狂犬病是我国重要的公共卫生威胁,抗狂犬病病毒单克隆抗体因批间效价差异小、安全性提高、可大量制备等优势,有替代原有抗狂犬病病毒被动免疫制剂的潜力。本文对抗狂犬病病毒单克隆抗体新药临床试验设计和评价重点关注问题进行了讨论分析。
关键词 狂犬病 单克隆抗体 临床试验 抗狂犬病病毒单克隆抗体
单克隆抗体及其抗感染作用的研究进展 认领
2
作者 崔乐乐 卜桐 +6 位作者 刘兆基 张涵旭 史雨 井雯雯 李爱梅 考文萍 翟爱霞 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2020年第2期87-92,共6页
骨髓瘤细胞和单个B细胞可融合形成杂交瘤细胞,这种细胞分离并克隆后可产生针对单一表位,且结构和功能相同的抗体,即单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)。单克隆抗体发展历程经历了四个阶段。其制备技术也在不断革新与发展。目前单克... 骨髓瘤细胞和单个B细胞可融合形成杂交瘤细胞,这种细胞分离并克隆后可产生针对单一表位,且结构和功能相同的抗体,即单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)。单克隆抗体发展历程经历了四个阶段。其制备技术也在不断革新与发展。目前单克隆抗体技术发展日益成熟,在疾病治疗与诊断中发挥着关键的作用。单克隆抗体与天然抗体不同,具有效价高、特异性强、交叉反应少、可大量制备,靶向性高等特点。mAb可用于诊断及治疗感染性疾病、自身免疫病以及癌症等。对mAb的发展历程及mAb在抗感染性疾病中的应用进行简要阐述。 展开更多
关键词 抗体 单克隆抗体 全人源单克隆抗体 抗感染 感染性疾病
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文章速递非洲猪瘟病毒p30单克隆抗体的制备和鉴定 认领
3
作者 杨莎莎 苗雨润 +8 位作者 薄宗义 王振忠 谭凯 鲍晨沂 吴晓东 陈鸿军 郑龙三 钱莺娟 戴建君 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期976-981,共6页
p30蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)的膜蛋白,在病毒感染早期分泌表达,含量丰富且抗原性较高,是重要的病毒早期诊断靶标。本研究以ASFV基因Ⅱ型格鲁吉亚2007株p30基因的质粒为模板扩增p30基因片段,连接至原核表达载体pET-28a,转化到大肠杆菌Ro... p30蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)的膜蛋白,在病毒感染早期分泌表达,含量丰富且抗原性较高,是重要的病毒早期诊断靶标。本研究以ASFV基因Ⅱ型格鲁吉亚2007株p30基因的质粒为模板扩增p30基因片段,连接至原核表达载体pET-28a,转化到大肠杆菌Rosetta后,经IPTG诱导表达和镍柱纯化;将纯化后的重组p30蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合和间接ELISA方法,筛选出了2株能够稳定分泌抗p30蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,并通过制备腹水的方法获得单克隆抗体;最后经Western-blot和IFA试验鉴定,其均能与ASFV感染细胞发生特异性反应。本研究为ASFV感染的诊断和致病机制研究提供了重要材料。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 p30蛋白 单克隆抗体
文章速递三聚氰胺单克隆抗体制备与鉴定 认领
4
作者 封青 李研 +2 位作者 孙晶莹 梁导艳 赵彭花 《食品安全质量检测学报》 CAS 2020年第15期5303-5308,共6页
目的制备高度特异的三聚氰胺单克隆抗体,经酶联免疫吸附试验鉴定并制备胶体金试剂盒。方法以牛血清白蛋白交联的三聚氰胺为抗原,免疫BALB/c小鼠,通过传统杂交瘤融合和筛选技术制备抗三聚氰胺单克隆抗体,经纯化制备腹水,采用酶联免疫吸... 目的制备高度特异的三聚氰胺单克隆抗体,经酶联免疫吸附试验鉴定并制备胶体金试剂盒。方法以牛血清白蛋白交联的三聚氰胺为抗原,免疫BALB/c小鼠,通过传统杂交瘤融合和筛选技术制备抗三聚氰胺单克隆抗体,经纯化制备腹水,采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immune sorbent assay, ELISA)对抗体进行效价测定、亚类测定、交叉鉴定和蛋白质免疫印迹试验(westernblot)特异性鉴定后制备胶体金试剂盒。结果筛选出1株抗三聚氰胺单抗,制备的三聚氰胺胶体金试剂盒敏感值能达到30μg/L。结论获得了高度特异的且能稳定分泌三聚氰胺抗体的细胞株。 展开更多
关键词 单克隆抗体 特性鉴定 酶联免疫吸附 胶体金免疫层析法诊断纸条法
文章速递我国单抗类药物的国内药物经济学评价研究现状 认领
5
作者 刘国强 康朔 《中国药物经济学》 2020年第7期35-40,48,共7页
目的系统评价我国单抗类药物的国内药物经济学评价研究现状。方法计算机系统检索公开发表在中国期刊全文数据库、万方数据知识服务平台、中文期刊全文数据库的有关单抗类药物的药物经济学评价研究,并对其进行汇总分析。结果经逐层筛选... 目的系统评价我国单抗类药物的国内药物经济学评价研究现状。方法计算机系统检索公开发表在中国期刊全文数据库、万方数据知识服务平台、中文期刊全文数据库的有关单抗类药物的药物经济学评价研究,并对其进行汇总分析。结果经逐层筛选后共纳入29篇文献,包括16篇成本-效用分析,13篇成本-效果分析,最早的研究可追溯至2009年。从研究角度看,10项研究未明确研究角度,8项研究采用卫生体系角度,8项研究采用医保支付方角度,3项研究采用全社会角度;从贴现率看,13项研究未考虑贴现,11项研究采用3%的贴现率,5项研究采用5%的贴现率;从所涉疾病来看,19项研究为肿瘤类疾病,6项研究为类风湿性关节炎,2项研究为湿性年龄相关性黄斑变性,2项研究为过敏性鼻炎-哮喘综合征;从成本来看,21项研究仅纳入了直接医疗成本,7项研究纳入了直接成本和间接成本,1项研究纳入了直接医疗成本和间接成本,所有研究均未纳入隐性成本;从敏感性分析看,7项研究仅进行了单因素敏感性分析,8项研究仅进行了多因素敏感性分析,10项研究同时进行了单因素敏感性分析和概率敏感性分析,2项研究未明确敏感性分析类型,2项研究未进行敏感性分析。结论我国单抗类药物的药物经济学评价相关研究存在起步较晚且数量较少;研究角度及贴现率的选择不够统一;研究所涉及的疾病领域较为单一,主要涉及肿瘤性疾病;成本的识别较为单一;敏感性分析不够全面等问题。 展开更多
关键词 单克隆抗体 药物经济学 成本-效果分析 成本-效用分析 系统评价 卫生技术评估
文章速递人乳头瘤病毒-16 L1蛋白抗体的制备及应用 认领
6
作者 刘传志 卞文治 梁雨萍 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2020年第8期908-911,共4页
目的制备人乳头瘤病毒-16(human papillomavirus type-16,HPV-16)L1蛋白抗体,并验证HPV-16鼠源单抗的特性。方法以HPV-16 L1蛋白分别免疫BALB/c小鼠及新西兰大耳白兔,制备HPV-16鼠源单抗及兔血清多抗,建立检测HPV-16抗体的双抗夹心ELIS... 目的制备人乳头瘤病毒-16(human papillomavirus type-16,HPV-16)L1蛋白抗体,并验证HPV-16鼠源单抗的特性。方法以HPV-16 L1蛋白分别免疫BALB/c小鼠及新西兰大耳白兔,制备HPV-16鼠源单抗及兔血清多抗,建立检测HPV-16抗体的双抗夹心ELISA方法;鉴定鼠源单抗的特异性、热稳定性,并验证方法的准确性。结果制备的HPV-16鼠源单抗最高效价为5.5×10^6,兔血清多抗效价为2.25×10^7。该鼠源单抗仅与灭活病毒HPV-16呈阳性反应,而与灭活病毒HPV-18、HPV-52及HPV-58无交叉反应,于37℃保存6 d,蛋白稳定性良好;灭活HPV-16浓度在1~50μg/mL范围内时,检测偏差率在5%以内。结论成功制备了HPV-16鼠源单抗,其特异性强,热稳定性良好,建立的双抗夹心ELISA法检测准确,为早期临床HPV筛查及治疗效果评价提供了可能。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒-16 宫颈癌 L1蛋白 单克隆抗体 克隆抗体
胶体金试纸条同时检测鲤鱼中7种苯并咪唑类药物的残留 认领
7
作者 张彩芹 张勋 +5 位作者 李洁 李娜 肖香 欧阳琴 王云 周兴华 《现代食品科技》 EI CAS 北大核心 2020年第6期291-296,共6页
为检测鲤鱼中苯并咪唑类药物残留,降低其对人体造成的危害,本文基于单克隆抗体之上建立胶体金试纸条检测方法。首先以2-甲氧基羰基氨基-3H-苯并咪唑-5-羧酸为半抗原,用活化酯法偶联蛋白质制备免疫原,免疫小鼠,进行细胞融合制备单克隆抗... 为检测鲤鱼中苯并咪唑类药物残留,降低其对人体造成的危害,本文基于单克隆抗体之上建立胶体金试纸条检测方法。首先以2-甲氧基羰基氨基-3H-苯并咪唑-5-羧酸为半抗原,用活化酯法偶联蛋白质制备免疫原,免疫小鼠,进行细胞融合制备单克隆抗体,而后用合成的胶体金标记单克隆抗体制备胶体金试纸条。通过间接竞争ELSIA法(ic-ELISA)测得阿苯达唑、甲苯咪唑、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜、芬苯达唑、氟苯咪唑、奥芬达唑的半抑制浓度(IC50)分别为0.44、0.16、3.47、5.62、0.62、0.10、5.77 ng/mL。胶体金试纸条在鲤鱼中的阿苯达唑、甲苯咪唑、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜、芬苯达唑、氟苯咪唑、奥芬达唑的检测限分别为4、2、50、100、10、1、100 ng/g,检测时间为15 min。因此,该方法灵敏度高、成本低、速度快且无需仪器辅助,适宜现场大量鲤鱼样本的快速检测。 展开更多
关键词 苯并咪唑 单克隆抗体 胶体金试纸条 鲤鱼
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嗜肺军团菌快速检测胶体金试纸的研制 认领
8
作者 张秋 李杰 +3 位作者 王猛 王毅 杨波 胡征 《检验医学》 CAS 2020年第7期726-733,共8页
目的研制特异性检测嗜肺军团菌(Lp)的胶体金免疫层析试纸条。方法通过基因工程制备Lp-肽聚糖关联脂蛋白(PAL)重组蛋白并进行纯化,筛选分泌抗Lp-PAL重组蛋白单克隆抗体(简称单抗)的杂交瘤细胞株,采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫... 目的研制特异性检测嗜肺军团菌(Lp)的胶体金免疫层析试纸条。方法通过基因工程制备Lp-肽聚糖关联脂蛋白(PAL)重组蛋白并进行纯化,筛选分泌抗Lp-PAL重组蛋白单克隆抗体(简称单抗)的杂交瘤细胞株,采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫印迹法鉴定筛选到的Lp-1和Lp-2单抗的特异性,采用生物膜层干涉(BLI)技术鉴定抗原抗体反应的特异性。依据双抗体夹心原理制备胶体金免疫层析试纸条,并初步评价其检测性能(特异性、灵敏度及稳定性)。结果筛选到2株高效分泌抗Lp-PAL蛋白抗体的杂交瘤细胞株Lp-1和Lp-2,纯化得到2种单抗Lp-1和Lp-2。间接ELISA检测结果表明,Lp-1及Lp-2单抗只与Lp发生阳性反应,与其他10种呼吸道常见病原菌(肺炎链球菌、卡他莫拉菌、流感嗜血杆菌、肺炎支原体、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、奇异变形杆菌)无交叉反应。免疫印迹法结果显示,Lp-1和Lp-2单抗与Lp-PAL天然蛋白和重组蛋白有强反应,与肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌无目的反应条带。BLI技术的验证结果显示,抗原抗体的相互作用力均较强,解离速率慢,Lp-1和Lp-2单抗识别的是同一抗原的不同抗原表位,且只与Lp有强反应,与其他10种细菌均无特异性结合反应。制备的胶体金免疫层析试纸条最低检出限为1×107 CFU/mL,与Lp常见4种血清型(Lp14、Lp12、Lp9和Lp6)均有特异性反应,与肺炎链球菌、卡他莫拉菌等10种常见呼吸道病原菌均无交叉反应,可在25℃环境下稳定6个月。结论 PAL蛋白具有高度的表面暴露性和较强的抗原性,可作为Lp的检测标志物,以此为基础制备的胶体金免疫层析试纸条具有快速、简便、灵敏的特点,适用于Lp感染的快速检测。 展开更多
关键词 嗜肺军团菌 单克隆抗体 肽聚糖关联脂蛋白 生物膜层干涉技术 胶体金免疫层析法
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抗表皮生长因子受体单克隆抗体部分质量控制项目的趋势分析 认领
9
作者 武刚 刘春雨 +6 位作者 崔永菲 孙亮 张荣建 段茂芹 付志浩 李萌 王兰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2020年第1期113-119,共7页
在过去的30年,单克隆抗体已从科学工具转变为应用广泛的临床疗法[1],现广泛应用于恶性肿瘤、移植排斥、自身免疫性和传染性疾病等一系列疾病的治疗[2]。新单克隆抗体药物以每年近40种的速度进入临床研究[3],已成为近年来复合增长率较快... 在过去的30年,单克隆抗体已从科学工具转变为应用广泛的临床疗法[1],现广泛应用于恶性肿瘤、移植排斥、自身免疫性和传染性疾病等一系列疾病的治疗[2]。新单克隆抗体药物以每年近40种的速度进入临床研究[3],已成为近年来复合增长率较快的一类生物技术药物,约占现有生物制药研发35%[4],截至2017年初,全球有52种单克隆抗体进入Ⅲ期临床研究,超过230种单克隆抗体在Ⅱ期临床研究中[5]用于癌症治疗取得了相当大的成功[6]。基于分子水平的肿瘤靶向疗法为癌症患者提供了新的治疗机会[7],生长因子受体系统和血管生成已成为重要的治疗靶点,其中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)一直是人们关注的焦点[8-11]。 展开更多
关键词 表皮生长因子受体 单克隆抗体 质量控制 趋势分析
成人重度支气管哮喘生物靶向治疗研究进展 认领
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作者 袁胜芳 宋宁 +1 位作者 王布 张宇 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期376-379,共4页
支气管哮喘的发病率逐年升高,其中重度哮喘更是加重了患者的身心负担,影响患者的生活治疗,增加医疗费用。近年来,研发了包括抗IgE单克隆抗体、抗IL-5/抗IL-5R、抗IL-4R、抗细胞因子胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)单克隆抗体、抑制KIT原... 支气管哮喘的发病率逐年升高,其中重度哮喘更是加重了患者的身心负担,影响患者的生活治疗,增加医疗费用。近年来,研发了包括抗IgE单克隆抗体、抗IL-5/抗IL-5R、抗IL-4R、抗细胞因子胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)单克隆抗体、抑制KIT原癌基因受体酪氨酸激酶等用于重度哮喘的生物靶向治疗的新药。本文对重度哮喘生物靶向治疗的新进展进行了总结,旨在提高临床医师对重度哮喘诊治的认识。 展开更多
关键词 生物靶向治疗 重度哮喘 重度支气管哮喘 临床医师 受体酪氨酸激酶 单克隆抗体 原癌基因 医疗费用
HIV-1 CRF07_BC亚型gp140探针的构建及特异性B细胞分选与单克隆中和抗体制备 认领
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作者 亢佳星 李丹 +3 位作者 任莉 郝彦玲 王铮 王静媛 《中国艾滋病性病》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期470-475,共6页
目的构建用于膜蛋白特异性B细胞分选的BC亚型gp140分子探针(CN54 gp140-Avi),从我国1型艾滋病病毒(HIV-1)感染者外周血单个核细胞(PBMCs)中分选特异性记忆B细胞进而获得单克隆抗体,并鉴定其生物特性。方法利用聚合酶链反应(PCR)方法构... 目的构建用于膜蛋白特异性B细胞分选的BC亚型gp140分子探针(CN54 gp140-Avi),从我国1型艾滋病病毒(HIV-1)感染者外周血单个核细胞(PBMCs)中分选特异性记忆B细胞进而获得单克隆抗体,并鉴定其生物特性。方法利用聚合酶链反应(PCR)方法构建特异性分子探针(CN54 gp140-Avi),并进行生物素化,利用该探针分选特异性记忆B细胞克隆,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别扩增出IgG的轻重链可变区基因,并克隆入表达载体,共转染293F细胞后获得抗体,检测抗体的中和活性。结果成功构建出CN54 gp140-Avi生物素化分子探针,利用该分子探针从HIV-1 BC亚型感染者PBMCs中分离得到单克隆抗体CBJB363-B4,B4抗体重链来源于IGHV1-3*01F家系,轻链为Lambda链,属于IGLV1-40*01F家系,体细胞突变率均较低。B4抗体可以很好地结合CN54 gp140蛋白。该抗体可以有效中和MW965、X2278、398-F1毒株。结论成功制备出具有生物学活性的CN54 gp140-Avi探针,并获得具有中和活性的单克隆抗体。利用该分子探针,未来有望获得较多更强中和能力的抗体,为开发艾滋病抗体药物和基础疫苗学研究等领域提供新的工具和思路。 展开更多
关键词 分子探针 1型艾滋病病毒 单克隆抗体 中和活性
A型塞内卡病毒VP2蛋白阻断ELISA检测方法的建立 认领
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作者 申珊 许立阳 +7 位作者 李蕊 史雪坤 王慧青 苗天姿 马玉忠 秦建华 袁万哲 汪恩强 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第14期87-90,共4页
为了建立一种检测A型塞内卡病毒(SVA)VP2蛋白抗体的阻断ELISA方法,试验用SVA VP2蛋白作为抗原包被酶标板,采用棋盘法确定最佳蛋白包被浓度和单克隆抗体最佳稀释倍数。同时对阻断ELISA的其他条件(封闭液、血清稀释度、底物反应条件)进行... 为了建立一种检测A型塞内卡病毒(SVA)VP2蛋白抗体的阻断ELISA方法,试验用SVA VP2蛋白作为抗原包被酶标板,采用棋盘法确定最佳蛋白包被浓度和单克隆抗体最佳稀释倍数。同时对阻断ELISA的其他条件(封闭液、血清稀释度、底物反应条件)进行优化,对方法的特异性和重复性进行考察。结果表明:VP2蛋白最佳包被浓度为0.5μg/mL;最佳封闭液为2%BSA,每孔200μL,37℃封闭1 h;待检血清最佳稀释度为1∶1,在37℃条件下作用1 h;单克隆抗体最佳稀释度为1∶40000,在37℃条件下作用1 h;底物最佳反应条件为室温避光10 min。特异性试验结果显示,SVA阳性血清与猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综征病毒、猪瘟病毒、猪口蹄疫病毒、猪流行性腹泻病毒阳性血清均无交叉反应。批间、批内重复性试验结果的变异系数均小于10%。对200份猪血清样本进行荧光抗体中和试验和阻断ELISA方法检测,符合率为96.0%。说明该ELISA方法具有良好的特异性和重复性,可用于塞内卡病毒血清抗体检测和流行病学调查。 展开更多
关键词 A型塞内卡病毒 VP2蛋白 单克隆抗体 阻断ELISA 特异性
精准激发人体免疫系统的“小宇宙” 认领
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作者 张晔 《北方人》 2020年第14期54-55,共2页
在新冠肺炎疫情暴发后,抗体药物因为独特的靶向性而被率先研究开发,其研发进展一直牵动人心。4月14日,在国务院联防联控机制召开的新闻发布会上,科技部带来了科研攻关领域的好消息:单克隆抗体等攻关项目正在积极推动。
关键词 人体免疫系统 抗体药物 攻关项目 单克隆抗体 靶向性 新闻发布会 科研攻关 好消息
基于单克隆抗体的双酚A间接竞争酶联免疫分析法的建立 认领
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作者 张玉超 刘旭东 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2020年第17期172-177,共6页
为建立一种简便、快速、准确的双酚A检测方法,采用活性酯法将双酚酸与牛血清蛋白、卵清蛋白偶联制备人工抗原免疫BALB/c小鼠。选择抗血清效价和灵敏度高的BALB/c小鼠,采用聚乙二醇法制备杂交瘤细胞,获得一株可分泌双酚A单克隆抗体的杂... 为建立一种简便、快速、准确的双酚A检测方法,采用活性酯法将双酚酸与牛血清蛋白、卵清蛋白偶联制备人工抗原免疫BALB/c小鼠。选择抗血清效价和灵敏度高的BALB/c小鼠,采用聚乙二醇法制备杂交瘤细胞,获得一株可分泌双酚A单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过方阵滴定和反应条件优化,建立一种基于单克隆抗体的双酚A间接竞争酶联免疫分析法。该检测方法在0.5 ng/mL~50 ng/mL内有良好的线性关系,最低检测限IC10为0.5 ng/mL,半数抑制率IC50为16.65 ng/mL,水样中加标回收率为89.72%~105.25%。该单克隆抗体效价高、特异性强,该检测方法灵敏度高。 展开更多
关键词 双酚A 人工抗原 单克隆抗体 间接竞争酶联免疫分析法
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基于配体结合分析-液相色谱串联质谱技术的生物技术药物定量分析方法研究进展 认领
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作者 桂罗兰 董立厚 +3 位作者 宋海峰 向慎思 李黎 葛志强 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期1150-1159,共10页
随着生物技术的发展,蛋白多肽类药物日益增多,对此类药物的定量检测及药代动力学研究变得越来越重要。传统生物技术药物分析方法主要是以配体结合分析(ligand-binding assay,LBA)为主,而液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem ... 随着生物技术的发展,蛋白多肽类药物日益增多,对此类药物的定量检测及药代动力学研究变得越来越重要。传统生物技术药物分析方法主要是以配体结合分析(ligand-binding assay,LBA)为主,而液相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)技术由于兼具色谱的高分离能力和质谱的高选择性等优点,也已成为生物大分子药物定量分析的有力手段。综合上述2种方法的各自优势,LCMS/MS技术联用LBA技术进行样品前处理,不仅能降低背景的复杂性,还能避免交叉反应,可以大大提高方法的选择性和灵敏度。另外,使用肽水平的免疫捕获可进一步提高分析灵敏度。联合使用配体结合分析-液相色谱串联质谱(hybird LBA with LC-MS/MS,LBA-LC-MS/MS)技术的关键影响因素包括(:1)捕获试剂的亲和力;(2)酶切位点和效率;(3)指纹肽的选择;(4)内标的选择;(5)蛋白质和肽段的纯化;(6)色谱分离;(7)质谱条件的优化。本文综述了近年来研究蛋白多肽类药物药代动力学的各种分析方法,其中LC-MS/MS和毛细管电泳(capillary electrophoresis,CE)-MS联用技术可望成为药代动力学研究中较有前途的分析方法。 展开更多
关键词 生物大分子药物 液质联用技术 免疫亲和捕获 定量分析 单克隆抗体 样品前处理 配体结合分析-液相色谱串联质谱技术联用
鸭骨骼肌肌钙蛋白I单克隆抗体的制备及其特性 认领
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作者 刘静静 张静 +3 位作者 孙劲冲 吴萌 杜顺丰 李春生 《肉类研究》 北大核心 2020年第2期60-64,共5页
提取鸭骨骼肌肌钙蛋白I(skeletal muscle troponin I,sTnI)用于制备单克隆抗体,并对抗体性能进行评价。将鸭骨骼肌提取后经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE)测... 提取鸭骨骼肌肌钙蛋白I(skeletal muscle troponin I,sTnI)用于制备单克隆抗体,并对抗体性能进行评价。将鸭骨骼肌提取后经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE)测定,取凝胶条带免疫小鼠,融合后经筛选获得分泌抗鸭sTnI的杂交瘤细胞株,用酶联免疫吸附测定法检测抗体效价、亚型及特异性等特性。结果表明:鸭骨骼肌提取物经SDS-PAGE后出现2条颜色较深的条带,取分子质量24 kDa条带用于免疫;筛选后获得2株单克隆抗体,其中3E7特异性较好,效价在1∶1.0×10^5以上,为IgG1亚型,亲和常数(Ka)为5.9×10^5 L/mol;免疫印迹结果显示,抗体3E7能与鸭骨骼肌提取物反应,与牛、羊、鸡、鱼骨骼肌提取物无明显反应。 展开更多
关键词 鸭骨骼肌肌钙蛋白I 单克隆抗体 肉类来源 免疫学鉴别 特异性
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H5N1禽流感病毒PB1-F2特异性单克隆抗体的制备与鉴定 认领
17
作者 徐国双 刘恩华 +2 位作者 张茂林 段铭 关振宏 《动物医学进展》 北大核心 2020年第7期1-6,共6页
以重组的H5N1亚型禽流感病毒(AIV)PB1-F2的C端蛋白(cPB1-F2)为免疫原制备单克隆抗体,并鉴定其特异性。构建cPB1-F2的pGEX-6p-1原核表达载体,进行蛋白表达与纯化;采用杂交瘤技术制备筛选抗重组cPB1-F2蛋白的杂交瘤细胞株,利用间接免疫荧... 以重组的H5N1亚型禽流感病毒(AIV)PB1-F2的C端蛋白(cPB1-F2)为免疫原制备单克隆抗体,并鉴定其特异性。构建cPB1-F2的pGEX-6p-1原核表达载体,进行蛋白表达与纯化;采用杂交瘤技术制备筛选抗重组cPB1-F2蛋白的杂交瘤细胞株,利用间接免疫荧光和酶联免疫吸附试验筛选鉴定阳性细胞株,并对单克隆抗体特异性进行鉴定。结果显示,纯化的重组cPB1-F2蛋白具有良好的免疫原性,筛选获得了3株稳定分泌抗cPB1-F2单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为6F4、2C5和4D3,经鉴定抗体均为IgG1亚类,且3株单克隆抗体均能特异性识别重组PB1-F2蛋白。结果表明成功制备了cPB1-F2特异性单克隆抗体,为研制针对流感病毒的抗体药物奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H5N1 PB1-F2 单克隆抗体
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1-芘丁酸单克隆抗体的制备及免疫学性能鉴定 认领
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作者 胡骁飞 孔蒙蒙 +3 位作者 邢广旭 邢云瑞 孙亚宁 张改平 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1114-1118,共5页
目的:拟制备灵敏、特异的1-芘丁酸(PBA)单克隆抗体并对其免疫学性能进行鉴定。方法:碳二亚胺法(EDC)制备人工抗原PBA-BSA和PBA-OVA。PBA-BSA免疫BALB/c小鼠,选择血清效价高、灵敏度良好的小鼠进行细胞融合并筛选出分泌抗PBA单克隆抗体... 目的:拟制备灵敏、特异的1-芘丁酸(PBA)单克隆抗体并对其免疫学性能进行鉴定。方法:碳二亚胺法(EDC)制备人工抗原PBA-BSA和PBA-OVA。PBA-BSA免疫BALB/c小鼠,选择血清效价高、灵敏度良好的小鼠进行细胞融合并筛选出分泌抗PBA单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法批量制备抗体并对其免疫学性能进行鉴定。结果:筛选出能稳定分泌PBA单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株10C2A6,单克隆抗体效价为1∶2.56×10^5,IC50为0.86 ng/ml,亚型为IgG2b型,亲和常数为1.96×10^9 L/mol,与芘、1-芘甲醛和1-芘甲醇的交叉反应率分别为1.74%、1.42%和0.63%,与其他物质交叉反应率均小于0.05%。结论:本实验成功制备出了灵敏、特异的PBA单克隆抗体,并为其免疫学检测方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 1-芘丁酸 人工抗原 细胞融合 杂交瘤细胞 单克隆抗体
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人巨细胞病毒gH蛋白表达及其单克隆抗体的制备 认领
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作者 刘乐 廖旻晶 +3 位作者 徐叶 刘如石 钟志宏 王庆林 《激光生物学报》 CAS 2020年第3期260-267,共8页
人巨细胞病毒(HCMV)是全球范围内普遍感染的一种疱疹病毒,也是引起胎儿先天性畸形和器官移植受者死亡最常见的病原体。有研究表明,gH蛋白是HCMV主要的中和性抗原,特异性抗gH抗体具有中和HCMV及阻断病毒在细胞间传播的潜力。本研究以含... 人巨细胞病毒(HCMV)是全球范围内普遍感染的一种疱疹病毒,也是引起胎儿先天性畸形和器官移植受者死亡最常见的病原体。有研究表明,gH蛋白是HCMV主要的中和性抗原,特异性抗gH抗体具有中和HCMV及阻断病毒在细胞间传播的潜力。本研究以含人巨细胞病毒临床株Toledo全基因组的细菌人工染色体(BAC)为模板,扩增去除信号肽和跨膜区的gH基因片段,并将其插入表达载体构建pET32a’-gH重组表达质粒,将序列鉴定正确的重组质粒转化进入表达菌株TransB,诱导重组蛋白表达。用纯化的重组gH蛋白免疫8周龄BALB/c雄鼠,经杂交瘤技术获得5株稳定分泌抗gH单克隆抗体的细胞株,分别命名为8A9、8B4、8C4、8D9、8D12。所获5株单克隆抗体对gH蛋白均具有良好的反应性,其中8A9、8B4、8D9和8D12具有一定的病毒捕获能力,且8D9和8D12的捕获能力较强。本研究获得了具有自主知识产权的抗gH单克隆抗体,抗体具有良好的病毒捕获能力。在此基础上,我们将进一步鉴定其是否为中和抗体,为今后开发治疗HCMV感染的中和抗体奠定基础。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 gH糖蛋白 单克隆抗体 病毒捕获
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对中国非霍奇金淋巴瘤患者自体造血干细胞移植及动员的思考 认领
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作者 朱军 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期1-4,共4页
淋巴瘤是发病率最高的血液淋巴系统恶性肿瘤[1]。据统计,中国男性淋巴瘤发病率约为7.43/10万,在中国男性恶性肿瘤发病率中位居第9位,女性淋巴瘤发病率尽管未排入前十,但男女合计的淋巴瘤死亡率为3.62/10万,在中国恶性肿瘤死亡率中位居... 淋巴瘤是发病率最高的血液淋巴系统恶性肿瘤[1]。据统计,中国男性淋巴瘤发病率约为7.43/10万,在中国男性恶性肿瘤发病率中位居第9位,女性淋巴瘤发病率尽管未排入前十,但男女合计的淋巴瘤死亡率为3.62/10万,在中国恶性肿瘤死亡率中位居第10位[2]。非霍奇金淋巴瘤(NHL)发病率约占所有淋巴瘤的90%[3]。单克隆抗体、小分子靶向药物和免疫治疗等新方法、新药物的应用显著改善了NHL患者的近期疗效和远期生存,但中国淋巴瘤患者的5年生存率仅为37.2%[4],其中复发难治侵袭性NHL患者的预后尤其差,生活质量受到严重影响。 展开更多
关键词 非霍奇金淋巴瘤 淋巴瘤患者 远期生存 免疫治疗 单克隆抗体 复发难治 男女合计 自体造血干细胞移植
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