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单纯疱疹病毒1型US11蛋白结合DNA甲基转移酶3A的作用研究 预览
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作者 钟霞 潘建华 童坚 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期56-60,共5页
目的通过免疫共沉淀联合质谱分析筛查与单纯疱疹病毒1型(HSV-1)中US11蛋白存在潜在相互作用的宿主蛋白。方法使用荧光标记的HSV-1病毒感染人成纤维细胞(HFF),通过免疫共沉淀(IP)方法对US11及其相互作用蛋白进行提取和纯化,并与质谱(MS)... 目的通过免疫共沉淀联合质谱分析筛查与单纯疱疹病毒1型(HSV-1)中US11蛋白存在潜在相互作用的宿主蛋白。方法使用荧光标记的HSV-1病毒感染人成纤维细胞(HFF),通过免疫共沉淀(IP)方法对US11及其相互作用蛋白进行提取和纯化,并与质谱(MS)联用来鉴定相关蛋白。结果利用IP-MS分析技术成功筛选出7个与US11存在潜在相互作用宿主蛋白,其中DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)被定性为一种新的US11结合蛋白。结论HSV-1病毒US11蛋白与哺乳动物DNA甲基转移酶机制的功能关联,DNMT3A是HSV-1感染所需的有效宿主因子。 展开更多
关键词 免疫共沉淀 质谱 单纯疱疹病毒1 US11蛋白 DNA甲基转移酶3A
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us3基因的缺失对单纯疱疹病毒1型毒力和抗凋亡功能的影响 预览
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作者 吴化叶 牟唐维 +4 位作者 徐兴丽 冯骁 王丽春 范胜涛 李琦涵 《微生物与感染》 2019年第3期137-145,共9页
利用CRISPR/Cas9系统使单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1) ul7、ul41、LAT 基因缺失构建M3减毒株(M3株),在M3株基础上通过缺失 us3 得到M4突变株(M4株)。本研究旨在分析野毒株(McKrae株)、M3株与M4株在毒力和抗细胞... 利用CRISPR/Cas9系统使单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1) ul7、ul41、LAT 基因缺失构建M3减毒株(M3株),在M3株基础上通过缺失 us3 得到M4突变株(M4株)。本研究旨在分析野毒株(McKrae株)、M3株与M4株在毒力和抗细胞凋亡方面的差异。结果表明,McKrae组出现明显的临床症状,且100%死亡(P<0.001),而M3、M4组未出现临床症状。M4组小鼠组织中病毒载量明显低于McKrae组和M3组;病理学检测表明,McKrae组出现蛛网膜出血、胶质小结等现象,而M3、M4组未见病理损伤,M4组炎性因子表达与McKrae、M3组相比也显著下降(P<0.01);免疫后M4组较M3组出现高水平的中和抗体、γ干扰素(interferon γ,IFN-γ)和白细胞介素4(interleukin 4,IL-4)抗原特异性T细胞;McKrae株再次感染时,M4组小鼠组织中病毒载量明显低于对照组和M3组;在人急性T细胞淋巴瘤细胞中,M4株相比McKrae株和M3株可明显诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒1 减毒株 us3基因 细胞凋亡
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龈下菌斑人类巨细胞病毒、EB病毒、单纯疱瘆病毒1型指标检测在诊断慢性牙周炎中的应用研究
3
作者 徐俊仙 陆兰芳 姜梅 《中国卫生检验杂志》 CAS 2019年第18期2265-2268,共4页
目的研究龈下菌斑人类巨细胞病毒(HCMV)、EB病毒(EBV)、单纯疱疹病毒1型(HSV-1)指标检测在诊断慢性牙周炎中的应用效果。方法2017年6月-2018年6月于本院口腔科接受诊治的70例慢性牙周炎患者作为观察对象,对每个患者的牙周炎位置及轻度... 目的研究龈下菌斑人类巨细胞病毒(HCMV)、EB病毒(EBV)、单纯疱疹病毒1型(HSV-1)指标检测在诊断慢性牙周炎中的应用效果。方法2017年6月-2018年6月于本院口腔科接受诊治的70例慢性牙周炎患者作为观察对象,对每个患者的牙周炎位置及轻度龈炎位置龈下菌斑进行取样,获取标本后提取DNA,采用PCR扩增法对HCMV、EBV、HSV-1指标进行检测,观察并记录牙周炎位置及轻度龈炎位置的HCMV、EBV、HSV-1阳性率。结果相较于轻度龈炎位置,慢性牙周炎患者的牙周炎位置HCMV、EBV、HSV-1阳性率高,差异有统计学意义(P<0.05);相较于轻度龈炎位置,慢性牙周炎患者的牙周炎位置龈下菌斑HCMV、EBV、HSV-1合并感染总检出率高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论龈下菌斑HCMV、EBV、HSV-1与慢性牙周炎相关活动性存在一定相关性,在临床诊断慢性牙周炎中应用价值高,能为临床鉴别、诊治慢性牙周炎提供信息。 展开更多
关键词 龈下菌斑 人类巨细胞病毒 EB病毒 单纯疱疹病毒1 慢性牙周炎
夏枯草水提物体外抗单纯疱疹病毒1型作用的研究
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作者 陈蕾 杨青 +2 位作者 孙佳瑜 单爱云 周倩 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期74-77,共4页
目的:研究夏枯草水提物体外抗单纯疱疹病毒1型(HSV-1)作用。方法:以Vero细胞作为病毒感染靶细胞,给予不同浓度的药物处理,镜下观察细胞的形态变化,应用MTT法检测夏枯草水提物体外抗HSV-1的效果。并以不同浓度夏枯草水提物作用于HSV-1感... 目的:研究夏枯草水提物体外抗单纯疱疹病毒1型(HSV-1)作用。方法:以Vero细胞作为病毒感染靶细胞,给予不同浓度的药物处理,镜下观察细胞的形态变化,应用MTT法检测夏枯草水提物体外抗HSV-1的效果。并以不同浓度夏枯草水提物作用于HSV-1感染的不同阶段,探讨夏枯草水提物抗HSV-1的机制。结果:夏枯草水提物对HSV-1具有明显的抑制作用,随着浓度的增加,抗病毒作用增强,呈量效关系,TI(药物治疗指数)值为45.71。进一步实验发现夏枯草水提物6.25 mg生药/ml在体外即能抑制病毒吸附和生物合成,又能直接杀灭病毒。结论:夏枯草水提物具有显著的抗HSV-1作用,是对病毒感染不同阶段综合作用的结果。 展开更多
关键词 夏枯草水提物 VERO细胞 单纯疱疹病毒1 病毒
微生物感染与阿尔茨海默病发病关系的研究进展 预览
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作者 宋丹利 蔡宏斌 +2 位作者 朱燕萍 邵康梅 葛朝明 《山东医药》 CAS 2019年第30期85-89,共5页
阿尔茨海默病(AD)是最常见的痴呆类型,其病因尚未明确.近年来,AD的"微生物感染假说"备受关注,多种微生物感染与AD的发生相关.单纯疱疹病毒1型的DNA存在于AD患者的大脑中,并与淀粉样斑块共定位;细胞内单纯疱疹病毒感染不仅可... 阿尔茨海默病(AD)是最常见的痴呆类型,其病因尚未明确.近年来,AD的"微生物感染假说"备受关注,多种微生物感染与AD的发生相关.单纯疱疹病毒1型的DNA存在于AD患者的大脑中,并与淀粉样斑块共定位;细胞内单纯疱疹病毒感染不仅可引起几种淀粉样蛋白前体蛋白片段的产生,还可导致糖原合成酶激酶-3的激活和淀粉样蛋白的积累.人体胃肠道含有庞大的微生物群,肠道菌群的细菌产物进入大脑后会引起炎症并促进Aβ的蓄积.慢性牙周炎患者发生AD的风险升高,牙龈卟啉单胞菌也在AD患者的大脑中被检测出,且小鼠的慢性牙周病原体感染会引起与AD一致的病理改变.幽门螺杆菌感染也与痴呆的发生有关,一些基础研究从基因和分子水平探究其致病机制,发现Hp可通过增强γ-分泌酶的活性直接促进Aβ的产生和释放,并通过中断突触功能诱导认知障碍.螺旋体感染与AD的发生相关,从AD患者的脑组织中可培养出伯氏疏螺旋体;感染螺旋体的原代细胞内出现了Aβ沉积.另在AD患者的脑脊液中发现了真菌DNA、蛋白质,并在AD患者的大脑中检测到真菌细胞. 展开更多
关键词 微生物感染 阿尔茨海默病 单纯疱疹病毒1 肠道菌群 牙龈卟啉单胞菌 幽门螺杆菌 螺旋体 真菌感染
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羊栖菜提取物的体外抗病毒作用 预览 被引量:1
6
作者 岳路路 高敏 +1 位作者 张秋红 闫滨 《世界中医药》 CAS 2018年第1期199-201,206共4页
目的:探讨羊栖菜提取物的体外抗病毒作用。方法:对羊栖菜的提取物进行了常见的第三类病原体病毒呼吸道合胞病毒(RSV)、单纯疱疹病毒1型(HSV-1)、肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A16、柯萨奇病毒B2、柯萨奇病毒B3、柯萨奇病毒B5... 目的:探讨羊栖菜提取物的体外抗病毒作用。方法:对羊栖菜的提取物进行了常见的第三类病原体病毒呼吸道合胞病毒(RSV)、单纯疱疹病毒1型(HSV-1)、肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A16、柯萨奇病毒B2、柯萨奇病毒B3、柯萨奇病毒B5(CVA16、CVB2、CVB3、CVB5)等7种病毒的抗病毒效应研究,显微镜下观察细胞存活率。结果:羊栖菜提取物对上述7种病毒的抑制能力远远优于广谱抗病毒药物利巴韦林,尤以对EV71的抑制效果最为明显,抑毒指数极高。结论:羊栖菜提取物对这7种病毒均具有良好的抑制作用,为进一步研究羊栖菜提取物对第三类病原体病毒的广谱抗病毒作用奠定基础。 展开更多
关键词 羊栖菜 病毒作用 呼吸道合胞病毒 单纯疱疹病毒1 肠道病毒71 柯萨奇病毒
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一种肉桂水提物抗单纯疱疹病毒1型活性研究
7
作者 任超 黄茜 +3 位作者 王萍 李莹 杨兆祥 张建文 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2018年第5期520-524,共5页
目的评价一种肉桂水提物KPC—rg1对单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)的抗病毒活性,并探索其可能的广谱抗病毒作用。方法体外培养Vero细胞,以HSV-1和HSV-1与KPC-rg1共孵育混悬液分别感染细胞,观察细胞形态并检... 目的评价一种肉桂水提物KPC—rg1对单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)的抗病毒活性,并探索其可能的广谱抗病毒作用。方法体外培养Vero细胞,以HSV-1和HSV-1与KPC-rg1共孵育混悬液分别感染细胞,观察细胞形态并检测病毒载量;利用小鼠和树鼢角膜感染模型对HSV-1和HSV-1与KPC-rg1共孵育混悬液分别感染动物后的角膜病变情况进行评分;通过细胞病变效应实验和荧光衰减实验测定KPC—rg1对9种病毒的体外抗病毒活性。结果被HSV-1感染的Vero细胞加入KPC—rg1(0.0001~1.0ms/ml)后对病毒复制有抑制作用,而HSV-1与KPC—rg1(0.001~1.0mg/ml)共孵育后能保护细胞不被感染;KPC—rg1对HSV-1感染的动物角膜病变有一定的改善作用,而KPC—rg1与HSV-1共孵育后能完全保护动物不被HSV-1感染;KPC—rg1对多种包膜病毒有潜在的广谱抗病毒作用。结论KPC—rg1是一种溶胶(丁达尔现象),可能与病毒能快速形成稳定的KPC-rg1/病毒超纳米颗粒结构,使病毒失去感染能力。KPC—rg1通过包裹HSV—1病毒抑制其感染,减少了潜伏或新增殖病毒对机体造成损伤,可缓解患者反复遭受病痛折磨。本研究丰富了肉桂水提物在抗病毒,特别是抗HSV-1的作用,为其开发成为潜在的抗HSV-1药物提供了初步科学依据。 展开更多
关键词 肉桂水提物KPC-rg1 单纯疱疹病毒1 病毒
单纯疱疹病毒1型感染神经胶质细胞的代谢组学研究 预览
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作者 马丽华 杨宏静 +2 位作者 徐晓艳 石中全 邓榕 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2017年第2期134-141,共8页
目的研究单纯疱疹病毒1型(HSV-1)对人类少突胶质细胞(OL细胞)代谢的影响,从而探讨HSV-1感染的分子机制。方法将OL细胞随机分为两组,一组为感染组,感染HSV-1,一组为正常对照组,不感染HSV-1,运用核磁共振氢谱(1HNMR)检测二组... 目的研究单纯疱疹病毒1型(HSV-1)对人类少突胶质细胞(OL细胞)代谢的影响,从而探讨HSV-1感染的分子机制。方法将OL细胞随机分为两组,一组为感染组,感染HSV-1,一组为正常对照组,不感染HSV-1,运用核磁共振氢谱(1HNMR)检测二组细胞培养液水相代谢产物,最后由偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)对数据进行分析。结果感染组与正常对照组细胞培养液水相代谢物的组成有显著差异:被HSV-1感染的OL细胞的培养液中,亮氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺增多,丙氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、乳酸减少。结论HSV-1感染改变OL细胞的氨基酸代谢,HSV-1可能通过扰乱宿主细胞的代谢路径,促进自己的繁殖,并影响神经系统的功能活动。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒1 代谢组学 核磁共振氢谱 神经胶质细胞
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盐酸小檗碱体外抗单纯疱疹病毒1型的作用及机制研究 被引量:2
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作者 张燕 陈恬 +2 位作者 黄厚意 杨洁 曾南 《中药药理与临床》 CSCD 北大核心 2017年第1期33-37,共5页
目的:探讨盐酸小檗碱体外抗单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的作用及作用机制。方法:MTT法检测盐酸小檗碱对Vero细胞的毒性作用,观察HSV-1感染Vero细胞后所致的细胞病变效应(Cytopathologic effects,CPE),实时荧光定量PCR法检测盐酸小檗... 目的:探讨盐酸小檗碱体外抗单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的作用及作用机制。方法:MTT法检测盐酸小檗碱对Vero细胞的毒性作用,观察HSV-1感染Vero细胞后所致的细胞病变效应(Cytopathologic effects,CPE),实时荧光定量PCR法检测盐酸小檗碱对病毒蛋白gD的mRNA表达水平,免疫印迹(Western blot)法检测盐酸小檗碱对病毒蛋白ICP27和ICP8表达的影响。结果:盐酸小檗碱半数中毒浓度(TC50)为392.5μmol/L,病毒半数抑制浓度(IC50)为66.49μmol/L,选择性指数(SI)为5.9。实时荧光定量PCR结果显示盐酸小檗碱可降低HSV-1 gD的mRNA表达水平。Western blot显示盐酸小檗碱可明显抑制病毒蛋白ICP27和ICP8的表达。结论:盐酸小檗碱具有抗HSV-1的作用,可能与抑制病毒蛋白ICP27的表达进而影响ICP8和gD的表达有关。 展开更多
关键词 盐酸小檗碱 病毒作用 单纯疱疹病毒1
BALB/c小鼠在HSV-1不同条件感染下的临床与病理及病原差异分析 被引量:2
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作者 汤贝贝 张小龙 +6 位作者 何玉凤 段永忠 王丽春 徐兴丽 胡雅洁 周巨民 李琦涵 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期200-207,共8页
目的探讨BALB/c小鼠模型在不同条件下感染HSV-1后的临床表现、病理现象及组织器官中的病毒分布特性,为HSV-1不同毒株感染模式小鼠的研究提供综合的参考指标体系。方法本研究利用HSV-1 17+和McKrae毒株,经滴鼻和角膜途径感染不同周龄... 目的探讨BALB/c小鼠模型在不同条件下感染HSV-1后的临床表现、病理现象及组织器官中的病毒分布特性,为HSV-1不同毒株感染模式小鼠的研究提供综合的参考指标体系。方法本研究利用HSV-1 17+和McKrae毒株,经滴鼻和角膜途径感染不同周龄的BALB/c小鼠,建立急性感染模式;经皮下和足垫途径感染不同周龄的BALB/c小鼠,建立慢性感染模式。结果实验小鼠的临床、病理学、病原学指标的观察结果表明:虽然小鼠临床症状均表现为倒毛、弓背,但在不同条件下感染不同毒株的动物其体重和死亡率指标存在差异;定量PCR技术检测结果证实神经组织(脑、脊髓、三叉)内病毒载量的增殖趋势不同;病理学检查提示急性感染组仅脑组织中出现明显病理损伤,慢性感染组仅三叉神经中表现病理损伤。而慢性感染组动物的三叉神经组织,虽未检测到具有指标意义的潜伏相关转录本(latency associated transcript, LAT),但是其组织块与Vero细胞共培养却可导致细胞出现感染性病变。结论HSV-1不同毒株经不同攻毒途径感染小鼠后,小鼠在体重、死亡率,毒株在机体内的复制模式等方面存在明显差异。因此,基于不同感染模式的相关研究,其观察指标侧重点应该不同。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒1 小鼠 差异
BALB/c小鼠作为单纯疱疹病毒1型感染模型的免疫学分析 预览
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作者 张小龙 汤贝贝 +5 位作者 何玉凤 段永忠 王丽春 张志晓 周巨民 李琦涵 《微生物与感染》 2017年第4期222-228,共7页
在单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)小鼠感染及其相关研究中,临床病理和免疫学指标对其分析具有重要技术意义。本研究观察了HSV-1在不同条件下感染BALB/c小鼠后的多个免疫学指标,包括外周血单核细胞(peripheral b... 在单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)小鼠感染及其相关研究中,临床病理和免疫学指标对其分析具有重要技术意义。本研究观察了HSV-1在不同条件下感染BALB/c小鼠后的多个免疫学指标,包括外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)群体中树突细胞比例及功能、血清中和抗体水平、PBMC中HSV-1抗原特异性T细胞水平,以及潜伏感染期小鼠神经组织中CD8~+T细胞浸润情况。结果显示,HSV-1毒株Mckrae、17~+以角膜及滴鼻途径感染3周龄及6周龄BALB/c小鼠后,小鼠PBMC中树突细胞数量增加,并显示出刺激病毒抗原特异性T细胞增殖的能力。病毒感染后35d,小鼠PBMC中未检测到白细胞介素4(interleukin 4,IL-4)~+抗原特异性T细胞,但能检测到低水平的γ干扰素(interferonγ,IFN-γ)~+抗原特异性T细胞;小鼠血清中未检测到或仅能检测到低水平的中和抗体。HSV-1以皮下及足垫注射途径感染BALB/c小鼠90d后,足垫感染途径较皮下感染诱导出更高水平的血清中和抗体,PBMC中可检测到IL-4~+及IFN-γ~+抗原特异性T细胞,但不同毒株及小鼠周龄之间出现T细胞反应程度差异。组织病理学结果表明,各组小鼠三叉神经组织中均有CD8~+T细胞浸润。这些结果提示,不同HSV-1毒株以不同途径感染不同周龄BALB/c小鼠后,均可刺激树突细胞成熟及呈递病毒抗原,但血清中和抗体及PBMC中病毒抗原特异性T细胞水平在不同毒株、感染途径及小鼠周龄之间有差异。 展开更多
关键词 BALB/C小鼠 单纯疱疹病毒1 免疫学分析
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树突状细胞、CD8+T细胞与单纯疱疹病毒1型的潜伏感染
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作者 张小龙 李琦涵 《中国科学:生命科学》 CSCD 北大核心 2017年第6期606-615,共10页
单纯疱疹病毒1型(HSV-1)属于疱疹病毒a亚科,是一种在人群中广泛传播的病原体.HSV-1病毒感染机体后可在宿主神经系统中建立起长期的潜伏感染,并不时地从潜伏状态“重激活”导致临床症状及体液排毒.病毒抗原特异性CD8+T细胞具有抑... 单纯疱疹病毒1型(HSV-1)属于疱疹病毒a亚科,是一种在人群中广泛传播的病原体.HSV-1病毒感染机体后可在宿主神经系统中建立起长期的潜伏感染,并不时地从潜伏状态“重激活”导致临床症状及体液排毒.病毒抗原特异性CD8+T细胞具有抑制神经细胞中HSV-1“重激活”,维持病毒潜伏感染状态的能力.本文从树突状细胞对病毒抗原的递呈,病毒抗原特异性CD8+T细胞的来源、种类、抗原特异性及功能等方面对近年来的研究进展做一综述. 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒1 树突状细胞 CD8+T细胞 潜伏感染
二代测序诊断幼儿单纯疱疹病毒1型脑炎一例 被引量:2
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作者 张建昭 陈倩 +6 位作者 郑萍 董静静 冯硕 范思远 任海涛 宫艳萍 关鸿志 《中华儿科杂志》 CSCD 北大核心 2017年第11期862-863,共2页
患儿女,8月龄.因"发热12 d,间断抽搐8 d,睡眠增多6 d"于2017年5月在首都儿科研究所附属儿童医院就诊.入院12 d前出现发热,热峰2次/d,最高体温39.6℃,伴有轻微咳嗽,无抽搐,无呕吐、腹泻,无嗜睡.就诊于当地医院,血常规提示白细胞大致正... 患儿女,8月龄.因"发热12 d,间断抽搐8 d,睡眠增多6 d"于2017年5月在首都儿科研究所附属儿童医院就诊.入院12 d前出现发热,热峰2次/d,最高体温39.6℃,伴有轻微咳嗽,无抽搐,无呕吐、腹泻,无嗜睡.就诊于当地医院,血常规提示白细胞大致正常,淋巴细胞比例为主,予中成药口服4 d,热峰温度较前增高,每日热峰4~6次/d.入院前8d高热时抽搐1次,表现为呼之不应,双眼凝视,右下肢抖动,无牙关紧闭、口周发绀及大小便失禁等,数秒钟自行缓解,1h后再次出现抽搐1次,表现同前,于当地医院镇静后1 min缓解,复查血常规提示白细胞升高,中性为主,予"头孢曲松"静脉滴注2 d,发热情况无好转.入院6 d前出现嗜睡,奶摄入量较少,偶有烦躁,完善腰椎穿刺检查提示脑脊液常规:有核细胞0;脑脊液蛋白570 mg/L,糖和氯化物正常范围;予人免疫球蛋白5 g/d共2 d,患儿嗜睡同前,间断烦躁,仍有间断抽搐,发作形式同前,伴有间断肢体抖动. 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒1 首都儿科研究所 间断抽搐 白细胞升高 医院就诊 脑炎 幼儿 诊断
DNA疫苗pRSC-gD.gC-IL-21的构建及其预防HSK的动物实验初步研究 预览
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作者 董莉莉 胡凯 汤明霞 《东南大学学报:医学版》 北大核心 2016年第6期932-938,共7页
目的:构建DNA疫苗pRSC-gD.gC-IL-21,探讨其是否能诱导动物免疫应答及抵抗眼角膜单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)的感染。方法:提取HSV-1基因组DNA,PCR扩增获得gC基因。以pRSC-gD-IL-21质粒为模板(本实验室2011年构建),构建重组质粒pRSC-g... 目的:构建DNA疫苗pRSC-gD.gC-IL-21,探讨其是否能诱导动物免疫应答及抵抗眼角膜单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)的感染。方法:提取HSV-1基因组DNA,PCR扩增获得gC基因。以pRSC-gD-IL-21质粒为模板(本实验室2011年构建),构建重组质粒pRSC-gD.gC-IL-21,用纳米材料壳聚糖(chitosan)包裹,采用黏膜接种的方式分别以pRSC-gD.gC-IL-21+chitosan、pRSC-gD-IL-21+chitosan、pRSC+chitosan及chitosan免疫小鼠3次,间隔2周,末次免疫2周后检测各项免疫学指标,同时评价小鼠对病毒攻击角膜的免疫保护作用。结果:经测序、酶切及Westernblot鉴定,重组质粒pRSC-gD.gC-IL-21构建成功,chitosan包裹率高。与对照鼠相比,该疫苗在鼠体内产生了更强的特异性中和抗体、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)及自然杀伤细胞(NK)杀伤活性增强、泪液中特异性sIgA水平增高,同时使小鼠产生了较强的针对眼角膜HSV-1感染的免疫保护作用。结论:DNA疫苗pRSC-gD.gC-IL-21构建成功,能诱导小鼠产生较强的免疫应答及针对HSV-1眼部感染的免疫保护作用,能够预防单纯疱疹病毒性角膜炎(HSK)的发生、发展。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒1 DNA疫苗 糖蛋白C 壳聚糖 单纯疱疹病毒性角膜炎 小鼠
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靶向DC DNA疫苗的研制及抗鼠眼角膜HSV-1感染的初步研究
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作者 汤如 胡凯 《现代医学》 2016年第11期1546-1550,共5页
目的:构建靶向树突状细胞(DC)的DNA疫苗pRSC-NLDC145·gD-IL-21,针对抵抗鼠眼角膜单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的感染,探讨其是否能产生更强的免疫应答反应。方法:通过基因克隆的方法构建靶向DC的重组质粒pRSC-NLDC145·gD-IL-... 目的:构建靶向树突状细胞(DC)的DNA疫苗pRSC-NLDC145·gD-IL-21,针对抵抗鼠眼角膜单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的感染,探讨其是否能产生更强的免疫应答反应。方法:通过基因克隆的方法构建靶向DC的重组质粒pRSC-NLDC145·gD-IL-21,对其进行鉴定,并和壳聚糖包裹组成纳米DNA疫苗,分别以靶向组pRSC-NLDC145·gD-IL-21+壳聚糖、非靶向组pRSC-gD-IL-21+壳聚糖、pRSC+壳聚糖和壳聚糖免疫小鼠3次,间隔2周,检测各疫苗对小鼠免疫应答的水平。结果:靶向DC的重组质粒可在真核细胞内进行蛋白水平的表达,且和纳米壳聚糖包裹形成包封率较高的靶向DNA疫苗组,较非靶向组在鼠体内产生了更强的免疫应答反应。结论:眼表黏膜接种靶向DC的纳米DNA疫苗pRSC-NLDC145·gD-IL-21,在小鼠单纯疱疹病毒性角膜炎(HSK)动物模型中显示了更强的免疫保护反应。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒1 树突状细胞靶向DNA疫苗 壳聚糖 单纯疱疹病毒性角膜炎 小鼠
肿瘤坏死因子1/2型受体在单纯疱疹病毒Ⅰ型引起的急性视网膜坏死中的作用 预览
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作者 阳辉 张新芳 冉瑞金 《广东医学》 CAS 北大核心 2016年第9期1293-1296,共4页
目的 研究肿瘤坏死因子1/2型受体(TNFR1/2)在单纯疱疹病毒Ⅰ型引起的急性视网膜坏死中的作用。方法 选取3×10~4pfu H129感染野生型C57BL/6、TNFR1缺陷、TNFR2缺陷小鼠各10只,病毒同样注射到一侧眼前房。每天观察小鼠状态,记录死... 目的 研究肿瘤坏死因子1/2型受体(TNFR1/2)在单纯疱疹病毒Ⅰ型引起的急性视网膜坏死中的作用。方法 选取3×10~4pfu H129感染野生型C57BL/6、TNFR1缺陷、TNFR2缺陷小鼠各10只,病毒同样注射到一侧眼前房。每天观察小鼠状态,记录死亡小鼠数量,至第9天为止,计算小鼠死亡率;Western blot法检测cleaved caspase 3、NF-κB在小鼠中的表达;FACS法检测TNFR缺陷小鼠免疫细胞占总细胞的百分率。结果 第8天TNFR1缺陷和TNFR2缺陷小鼠的死亡率依次为100%和60%,均高于野生型C57BL/6小鼠的死亡率(30%)。在病程第3、5天,TNFR1缺陷和TNFR2缺陷小鼠中cleaved caspase 3的表达量显著高于野生型C57BL/6小鼠(P〈0.05);NF-κB的表达量在野生型小鼠注射眼中随病程的推进而增加,但在TNFR1缺陷和TNFR2缺陷小鼠中无显著变化。HSV-1 H129感染TNFR1缺陷小鼠第5天,注射眼中CD4~+T细胞较野生型C57BL/6小鼠增加(P〈0.05),Mac-1~+巨噬细胞/小胶质细胞较野生型C57BL/6小鼠明显减少,差异有统计学意义(P〈0.05);NK细胞和CD8~+T细胞与野生型C57BL/6小鼠相比较差异无统计学意义(P〉0.05)。HSV-1 H129感染TNFR2缺陷小鼠第5天,注射眼中NK细胞、CD8~+T细胞、CD4~+T细胞和Mac-1~+巨噬细胞/小胶质细胞与野生型C57BL/6小鼠相比较差异均无显著性统计学意义(P〉0.05)。结论 TNFR1或TNFR2的缺陷均能引起HSV-1 H129感染C57BL/6小鼠注射眼视网膜细胞凋亡的增加和免疫反应紊乱。 展开更多
关键词 急性视网膜坏死 单纯疱疹病毒1 肿瘤坏死因子1受体 肿瘤坏死因子2受体
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人二倍体细胞对不同病毒感染过程的生物学效应比较分析 被引量:1
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作者 王辉 张莹 +7 位作者 刘龙丁 廖芸 王建斌 胡雅洁 王丽春 赵婷 王艳翠 李琦涵 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2016年第9期907-912,共6页
目的分析人二倍体细胞对不同病毒感染的生物学反应差异性及相关分子生物学机制。方法用人类肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)和人单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)感染人二倍体细胞,光镜和电镜下观察感染细胞... 目的分析人二倍体细胞对不同病毒感染的生物学反应差异性及相关分子生物学机制。方法用人类肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)和人单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)感染人二倍体细胞,光镜和电镜下观察感染细胞形态学特征;比较两种病毒在人二倍体细胞上的增殖动力学及两种病毒感染后细胞酶谱的变化;采用基因芯片检测两种病毒感染后人二倍体细胞基因反应的差异。结果感染细胞的光镜或电镜的超微结构观察均表现出许多相同的特点,包括细胞变圆、肿胀、折光性增强,以及细胞细微结构的受损,大多数细胞器的破坏等。两种病毒在人二倍体细胞上具有不同滴度峰值的增殖动力学过程;对细胞超氧化物歧化酶的动力学改变趋势有不同影响,但对乳酸脱氢酶和琥珀酸脱氢酶动力学变化趋势无明显影响;两种病毒感染引起人二倍体细胞出现不同的基因反应,其中与信号转导及与天然免疫反应有关的mRNA转录效率具有一定的差异。结论人二倍体细胞对EV71、HSV-1感染过程表现不同的生物学效应。 展开更多
关键词 二倍体细胞 肠道病毒71 单纯疱疹病毒1 酶谱 基因表达谱
复方黄柏液体外抗病毒试验初步研究 被引量:2
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作者 岳路路 高敏 +1 位作者 张秋红 闫滨 《辽宁中医药大学学报》 CAS 2016年第11期20-22,共3页
目的:简单研究复方黄柏液及其组方提取成分、水部位、醇部位体外对呼吸道合胞病毒、单纯疱疹病毒1型、肠道病毒71型3种病毒的抑制作用。方法:采用致细胞病变效应法(CPE法),进行体外抗病毒试验,逐日观察细胞病变,计算得出抑毒指数。... 目的:简单研究复方黄柏液及其组方提取成分、水部位、醇部位体外对呼吸道合胞病毒、单纯疱疹病毒1型、肠道病毒71型3种病毒的抑制作用。方法:采用致细胞病变效应法(CPE法),进行体外抗病毒试验,逐日观察细胞病变,计算得出抑毒指数。结果:复方黄柏液对3种病毒的抑毒指数是32、16、128。结论:复方黄柏液对呼吸道合胞病毒、单纯疱疹病毒1型以及肠道病毒71型均具有明显的抑制作用,并且抗病毒效果呈现:EV71〉RSV〉HSV-1,即复方黄柏液对EV71的作用效果最好。 展开更多
关键词 复方黄柏液 呼吸道合胞病毒 单纯疱疹病毒1 肠道病毒71 病毒
基因组编辑技术在1型单纯疱疹病毒研究中的作用和意义 被引量:1
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作者 徐兴丽 李琦涵 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期472-476,共5页
病毒基因组编辑技术对研究病毒基因的功能及病毒感染性疾病的治疗有着不可或缺的作用。随着基因工程技术的发展,多种病毒基因组突变技术应运而生。传统的同源重组技术一直用于编辑病毒基因组,然而,该技术的重组频率极低。此后,基因... 病毒基因组编辑技术对研究病毒基因的功能及病毒感染性疾病的治疗有着不可或缺的作用。随着基因工程技术的发展,多种病毒基因组突变技术应运而生。传统的同源重组技术一直用于编辑病毒基因组,然而,该技术的重组频率极低。此后,基因组较大的病毒如单纯疱疹病毒1型(HSV-1)可以通过细菌人工染色体质粒系统进行编辑,但是将较大的病毒基因组克隆到细菌人工染色体质粒费力费时,并且质粒的部分基因或药物选择标记物可能残留在病毒基因组内而影响病毒基因的功能。2013年发现的CRISPR-cas9系统可以完成对各类DNA病毒高效准确的定点基因编辑,而且该系统在对病毒基因组进行编辑过程中不会遗留系统自身的遗传物质。本文就同源重组技术、细菌人工染色体和CRISPR-cas9系统这三类基因组编辑技术在 HSV-1相关研究中的应用进行简要综述。 展开更多
关键词 基因组编辑技术 单纯疱疹病毒1
单纯疱疹病毒1型(HSV-1)糖蛋白B基因疫苗对HSV-1原发及潜伏感染的抑制作用 被引量:1
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作者 孟祥俊 苏云 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第1期17-20,共4页
目的观察单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus-1,HSV-1)糖蛋白B基因疫苗(pg B)在防治HSV-1原发及潜伏感染的作用。方法将BALB/c小鼠随机分为4组:A组(实验组,注射含质粒pg B的PBS)、B组(阳性对照组,注射灭活的HSV-1病毒液)、... 目的观察单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus-1,HSV-1)糖蛋白B基因疫苗(pg B)在防治HSV-1原发及潜伏感染的作用。方法将BALB/c小鼠随机分为4组:A组(实验组,注射含质粒pg B的PBS)、B组(阳性对照组,注射灭活的HSV-1病毒液)、C组(载体对照组,注射含质粒pc DNA3的PBS)和D组(空白对照组,注射PBS)。各组小鼠均于双侧股四头肌多点注射,共免疫3次,间隔3周。于末次免疫3周后行角膜划痕接种HSV-1。术后1~14、21和28 d行角膜荧光素染色,在裂隙灯显微镜下观察角膜炎病变形成情况。角膜接种病毒第30天,处死全部小鼠,取三叉神经节,接种Vero细胞,观察病毒潜伏感染形成情况。结果 A组和B组小鼠接种HSV-1后仅有轻度角膜上皮炎发生,且6 d内全部愈合,组间比较差异无统计学意义(P〉0.05);C组和D组小鼠接种后第2天角膜上皮炎达到高峰,7 d后炎症慢慢消失,与A组比较,差异有统计学意义(P〈0.05)。A组和B组小鼠接种后未发生角膜基质炎,且无1例死亡;C组和D组小鼠在接种后第5天出现炎症反应,并逐渐加重,接种后11~14 d角膜基质炎达到高峰,在接种后第30天有30%小鼠死亡。Vero细胞检测病毒潜伏感染,A组和B组未发生细胞病变,而C组和D组第5天发生细胞病变。结论 pg B能有效预防实验小鼠HSV-1原发感染,并抑制潜伏感染的形成。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒1 糖蛋白B 基因疫苗 原发感染 潜伏感染 单纯疱疹病毒性角膜炎
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