期刊文献+
共找到433篇文章
< 1 2 22 >
每页显示 20 50 100
腺苷脱氨酶三种原核表达载体的构建及蛋白表达 预览
1
作者 韩丽乔 张露 +4 位作者 林海标 黄小亭 吴新忠 黄宪章 庄俊华 《国际检验医学杂志》 CAS 2019年第3期281-284,289共5页
目的 利用分子克隆技术表达腺苷脱氨酶蛋白。方法 从人白细胞中提取总RNA,逆转录为cDNA,再以其为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增腺苷脱氨酶基因,然后将目的基因连接到3种原核质粒pET-28b、pET-32a(+)和pHSIE中,再将测序完全正确... 目的 利用分子克隆技术表达腺苷脱氨酶蛋白。方法 从人白细胞中提取总RNA,逆转录为cDNA,再以其为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增腺苷脱氨酶基因,然后将目的基因连接到3种原核质粒pET-28b、pET-32a(+)和pHSIE中,再将测序完全正确的克隆质粒用CaCl2法转化入大肠杆菌BL21(DE3)中进行蛋白表达,并筛选最优表达条件,经Western-blot和SDS-PAGE鉴定蛋白表达情况。结果 3种质粒载体携带的目的基因DNA测序结果证实其很好地连接入载体质粒,表达的ADA蛋白经Western-blot和SDS-PAGE鉴定符合,最优表达条件为诱导剂IPTG浓度0.4 mmol/L,表达温度为16℃,表达时间为24 h。结论 该实验成功构建了腺苷脱氨酶的3个原核载体(BL21+pET-28b+ADA,BL21+pET-32a+ADA,BL21+pHSIE+ADA),且3个载体均成功高效表达了腺苷脱氨酶蛋白。 展开更多
关键词 腺苷脱氨酶 ADA 原核载体 pET-28b pET-32a pHSIE 蛋白表达
在线阅读 下载PDF
生长分化因子15基因的克隆及重组原核表达载体的构建 预览
2
作者 董艳敏 刘满宇 +1 位作者 张文慧 张林波 《安徽农学通报》 2018年第11期13-15,共3页
为克隆人生长分化因子15基因,构建h GDF15基因的重组原核表达载体,为研究该基因的功能奠定实验基础,利用PCR技术克隆其基因序列,将其分别连接至p ET28a和p Cold I载体,构建重组p ET28a-h GDF15和p Cold I-h GDF15原核表达载体,并进行质... 为克隆人生长分化因子15基因,构建h GDF15基因的重组原核表达载体,为研究该基因的功能奠定实验基础,利用PCR技术克隆其基因序列,将其分别连接至p ET28a和p Cold I载体,构建重组p ET28a-h GDF15和p Cold I-h GDF15原核表达载体,并进行质粒PCR和双酶切验证以及测序验证。结果表明:重组载体构建成功,为进一步研究h GDF15蛋白的作用机制奠定基础。 展开更多
关键词 人生长分化因子15 原核载体
在线阅读 下载PDF
人血管内皮生长因子A(VEGFA)的原核载体构建、蛋白表达及鉴定 预览 被引量:1
3
作者 赵瑜 胡月新 +3 位作者 卢敏南 焦扬 赵洪波 刘建军 《昆明医科大学学报》 2015年第6期31-34,共4页
目的克隆人VEGFA基因,与原核载体融合表达、纯化及其鉴定,并将其应用于肿瘤血管生长研究过程中.方法采用PCR方法扩增人VEGFA序列,将其克隆入p GEX-KG原核载体,获得p GEX-KG-h VEGFA重组质粒.将该质粒转化入E.coli菌株BL21(DE3),经IPT... 目的克隆人VEGFA基因,与原核载体融合表达、纯化及其鉴定,并将其应用于肿瘤血管生长研究过程中.方法采用PCR方法扩增人VEGFA序列,将其克隆入p GEX-KG原核载体,获得p GEX-KG-h VEGFA重组质粒.将该质粒转化入E.coli菌株BL21(DE3),经IPTG诱导其表达,以GSTrap亲和层析柱纯化融合蛋白,采用SDS-PAGE电泳,Western Blot方法鉴定融合蛋白的表达.结果 PCR扩增获得了h VEGFA基因片段,经测序证实与Gen Bank公布的序列一致,重组的质粒载体经过PCR、酶切鉴定,证明重组质粒中已成功的插入了h VEGFA基因片段.成功构建了该蛋白的原核表达载体p GEX-KG-h VEGFA.结论融合蛋白在IPTG终浓度为0.5 mmol/L、25℃条件下诱导表达,并获得纯化融合蛋白.采用Western Blot的方法可检测到目的融合蛋白GST-h VEGFA的表达. 展开更多
关键词 VEGFA 原核载体 融合蛋白 亲和纯化
在线阅读 下载PDF
E.coli O157:H7鞭毛蛋白H7抗原的表达纯化及抗血清的制备
4
作者 蔡冉 周洁 +4 位作者 许桂丽 徐悦玥 潘英 李素芹 李越希 《药物生物技术》 CAS 2014年第3期199-203,共5页
应用生物信息学分析工具对E.coli O157∶H7鞭毛蛋白H7抗原(flic基因)表位进行分析,筛选抗原表位较富集的片段;优化基因序列,使其适合在原核载体中表达并化学合成序列。构建重组质粒pGEX-4T-2-flic和pET28a(+)-flic,转化E.coli BL21(DE3)... 应用生物信息学分析工具对E.coli O157∶H7鞭毛蛋白H7抗原(flic基因)表位进行分析,筛选抗原表位较富集的片段;优化基因序列,使其适合在原核载体中表达并化学合成序列。构建重组质粒pGEX-4T-2-flic和pET28a(+)-flic,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,分别用GST胶亲和层析技术和金属螯合层析技术纯化GST标签和His标签的目的蛋白,获得了高纯度的GST-Flic和His-Flic。使用His-Flic抗原免疫新西兰大耳白兔,间接ELISA法检测体液免疫效价,兔颈动脉取血并离心制备获得兔抗血清。纯化的两种蛋白和制备的兔血清多抗为研制E.coli O157∶H7检测试剂奠定了基础。 展开更多
关键词 E.COLI O157∶H7 鞭毛蛋白H7抗原 原核载体 E.COLI BL21(DE3) Flic
GST-MIG,GST-IP-10融合蛋白原核载体的构建与表达 预览
5
作者 德吉央宗 李勇 《北华大学学报:自然科学版》 CAS 2013年第4期413-417,共5页
目的探讨GST—MIG,GST—IP-10融合蛋白原核载体的构建与表达.方法高压水动力尾静脉注射pCMV—tag2B空载质粒的12只小鼠为对照组,注射pCMV—tag2B—HBx质粒的12只小鼠为观察组.采用Elisa法检测IFN.叮表达;采用免疫组化法检测小鼠... 目的探讨GST—MIG,GST—IP-10融合蛋白原核载体的构建与表达.方法高压水动力尾静脉注射pCMV—tag2B空载质粒的12只小鼠为对照组,注射pCMV—tag2B—HBx质粒的12只小鼠为观察组.采用Elisa法检测IFN.叮表达;采用免疫组化法检测小鼠肝脏中MIG,IP-10表达;扩增MIG,IP-10基因至pET42a,构建载体后行IPTG诱导表达;采用PAGE和Westernblot法鉴定蛋白表达;采用GST柱纯化表达蛋白。结果对照组小鼠肝脏中无MIG,IP-10表达,观察组小鼠肝脏中有MIG,IP-10表达;观察组小鼠肝脏中IFN-γ表达升高21.4%,对照组降低了54.1%,与小鼠肝脏中MIG,IP-10表达-致;MIG基因条带为330bp,IP-10基因条带为246bp,经重组质粒测序模版检测,并与Blast进行对比,测序结果与目的基因-致;未诱导组无蛋白表达,pET42a空载IPTG诱导仅有GST表达(26kD),pET42a—mMIG,pET42a—mIP-10重组质粒IPTG诱导有mMIG,mIP-10表达;25℃下,IPTG质量浓度为0.2mmol/L,转速为150r/min,GST-MIG,GST-IP-10融合蛋白含量最高;上清经15%SDS—PAGE检测可提高目的蛋白纯度;采用Westernblot检测融合蛋白,经GST柱纯化后可见融合蛋白条带.结论GST—MIG,GST—IP-10融合蛋白原核载体可成功构建,具有高效表达特征,为制备抗体提供了良好条件. 展开更多
关键词 GST—MIG GST—IP-10 融合蛋白 原核载体 构建与表达
在线阅读 下载PDF
细胞黏附分子1(ICAM-1)ScFv基因原核载体的构建及表达 被引量:2
6
作者 李月红 张国力 +2 位作者 岳玉环 吴广谋 朱平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期 725-727,共3页
应用PCR技术扩增ICAM-1ScFv基因,经纯化测序,得到约750bp的核苷酸片段,并构建了原核重组表达质粒pET20b-ICAM-1ScFv。将重组质粒转化至表达菌BL21(DE3)中,诱导后的SDS-PAGE分析显示,pET20b-ICAM-1ScFv表达量占菌体蛋白总量的18.4%。... 应用PCR技术扩增ICAM-1ScFv基因,经纯化测序,得到约750bp的核苷酸片段,并构建了原核重组表达质粒pET20b-ICAM-1ScFv。将重组质粒转化至表达菌BL21(DE3)中,诱导后的SDS-PAGE分析显示,pET20b-ICAM-1ScFv表达量占菌体蛋白总量的18.4%。本试验将重组蛋白的表达条件进行优化,结果表明,ICAM-1ScFv蛋白在pET20b表达载体中的最佳表达条件为37℃诱导5h。 展开更多
关键词 ICAM-1 SCFV 原核载体 表达
SDH全基因的拼接及原核表达 预览
7
作者 涂继方 汪旭珍 徐莉 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期 6-8,共3页
目的:构建闭联异松树脂醇二脂脱氢酶(SDH)全基因片段与原核表达质粒载体,在大肠杆菌中进行表达。方法:将SDH3′端和5′端序列通过PCR方法拼接获得全基因后,然后将其插入到相应的原核表达质粒载体PGEX-6p-1中,形成了重组载体,并使其... 目的:构建闭联异松树脂醇二脂脱氢酶(SDH)全基因片段与原核表达质粒载体,在大肠杆菌中进行表达。方法:将SDH3′端和5′端序列通过PCR方法拼接获得全基因后,然后将其插入到相应的原核表达质粒载体PGEX-6p-1中,形成了重组载体,并使其在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导其表达蛋白,再用SDS-PAGE电泳检测表达结果。结果:成功的将SDH基因片段拼接成全基因,并将其构建入原核表达载体PGEX-6p-1中。测序结果表明载体构建成功,无插入和移码突变。经1.5mmol/LIPTG诱导后获得与预测大小(29.253kDa)完全一致的目的蛋白即闭联异松树脂醇二脂脱氢酶蛋白,并测得在37℃、250r/min的实验条件下的最佳诱导时间为4h。结论:成功获得了重组质粒并在大肠杆菌中较好的诱导表达得到了闭联异松树脂醇二脂脱氢酶的蛋白。 展开更多
关键词 原核表达 拼接 原核载体 闭联异松树脂醇二脂脱氢酶
在线阅读 下载PDF
鸡蛋主要过敏原卵类粘蛋白基因的克隆及原核载体构建与表达 预览 被引量:3
8
作者 陈大玮 邬玉兰 +2 位作者 刘志刚 吴序栎 孔小丽 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期 828-831,共4页
目的:本研究利用PET表达载体克隆,表达鸡蛋主要过敏原卵类粘蛋白基因,为鸡蛋过敏疾病的特异性诊断和治疗以及进一步的实验研究奠定了一定的基础。方法:提取鸡输卵管组织总RNA,利用RT-PCR技术扩增卵类粘蛋白基因(ovomucoid,OVM),并... 目的:本研究利用PET表达载体克隆,表达鸡蛋主要过敏原卵类粘蛋白基因,为鸡蛋过敏疾病的特异性诊断和治疗以及进一步的实验研究奠定了一定的基础。方法:提取鸡输卵管组织总RNA,利用RT-PCR技术扩增卵类粘蛋白基因(ovomucoid,OVM),并与已知序列进行同源性比较,将该片段连接入原核表达载体pET-28a,IPTG诱导表达目的蛋白。结果:成功克隆鸡蛋主要过敏原卵类粘蛋白(ovomucoid,OVM)的全长基因,该基因的开放阅读框长度为633bp(包括终止密码子),编码210个氨基酸,与GenBank提供的OVM基因序列同源性达99%。该序列编码的蛋白为小分子量蛋白,相对分子质量约为21kD,与理论值均相符。IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析表明目的蛋白在宿主大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达。结论:本研究采用体外重组的方法克隆出卵类粘蛋白基因,并实现在大肠杆菌中大量表达,这为后续鸡蛋食品基础性研究奠定基础。 展开更多
关键词 鸡蛋 卵类粘蛋白 基因克隆 原核载体 表达
在线阅读 下载PDF
淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白基因片段原核载体的构建及表达 预览 被引量:6
9
作者 吴兴安 胡刚 +6 位作者 李继业 刘勇 张芳琳 于澜 白文涛 孙修勤 徐志凯 《高技术通讯》 CAS CSCD 2003年第6期 78-80,65,共4页
淋巴囊肿病病毒感染牙鲆鳃细胞系FG-9307,提取细胞总RNA,采用RT-PCR法成功获得了淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白0.6kb基因片段.构建其原核表达载体,IPTG诱导表达.结果表明,该融合蛋白分子量约48kD,可与抗LCDV多克隆血清特异反应.为LCDV基... 淋巴囊肿病病毒感染牙鲆鳃细胞系FG-9307,提取细胞总RNA,采用RT-PCR法成功获得了淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白0.6kb基因片段.构建其原核表达载体,IPTG诱导表达.结果表明,该融合蛋白分子量约48kD,可与抗LCDV多克隆血清特异反应.为LCDV基因工程疫苗的研制奠定了实验基础. 展开更多
关键词 淋巴囊肿病病毒 主要衣壳蛋白 基因片段 原核载体 虹彩病毒 诱导表达
在线阅读 下载PDF
TAT—乙肝病毒靶向核糖核酸酶融合蛋白原核载体的构建及表达 被引量:8
10
作者 丁劲 刘军 +2 位作者 薛采芳 李英辉 宫卫东 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期 49-51,共3页
目的: 构建蛋白质转导结构域(protein transduction domain, PTD)TAT和乙肝病毒靶向核糖核酸酶(targeted ribonuclease, TR)融合蛋白的原核表达载体, 并在大肠杆菌中表达. 方法: 将已构建的乙肝病毒靶向核糖核酸酶基因、乙肝病毒核心蛋... 目的: 构建蛋白质转导结构域(protein transduction domain, PTD)TAT和乙肝病毒靶向核糖核酸酶(targeted ribonuclease, TR)融合蛋白的原核表达载体, 并在大肠杆菌中表达. 方法: 将已构建的乙肝病毒靶向核糖核酸酶基因、乙肝病毒核心蛋白(HBV core protein, HBVc)基因、人嗜酸性粒细胞来源的神经毒素(human eosinophil derived neurotoxin, hEDN)基因, 克隆入含PTD TAT的pTAT原核表达载体, 在大肠杆菌BL21(DE3)LysS 内, 以IPTG诱导融合蛋白表达.表达产物用SDS-PAGE及Western blot分析鉴定.结果: 成功地构建了乙肝病毒靶向核糖核酸酶及其两个对照的融合蛋白原核表达载体, 并在IPTG诱导下获得特异性表达. 结论: Tat-乙肝病毒靶向核糖核酸酶融合蛋白的构建, 为体内应用靶向核酸酶治疗乙型肝炎奠定了基础. 展开更多
关键词 TAT-乙肝病毒 靶向核糖核酸酶 融合蛋白 原核载体 构建
HIV—1核心蛋白p24在大肠杆菌中的表达与纯化 预览
11
作者 王宏伟 戴炜 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第9期 394-396,共3页
探索进一步提高HIV-1P24gag蛋白在大肠杆菌中的表达效率,增加产物的纯化手段。方法:通过改造原核表达载体PBV220和pET28,构建了一种通用型温控原核表达载体pVV5,将HIV-1gag基因的1148-18... 探索进一步提高HIV-1P24gag蛋白在大肠杆菌中的表达效率,增加产物的纯化手段。方法:通过改造原核表达载体PBV220和pET28,构建了一种通用型温控原核表达载体pVV5,将HIV-1gag基因的1148-1857编码序列,插入到pVV5b和pET28b的相应位点中,构建了重组表达质粒,pEG1b和pEG7b,转化到大肠杆菌中进行表达,产物利用IMAC金属螯合层析柱进行纯经,纯化的表达产物用 展开更多
关键词 原核载体 人免疫缺陷病毒 核心蛋白 纯化
在线阅读 下载PDF
荷斯坦牛中性粒细胞β-防御素基因克隆及其原核表达质粒的构建 预览 被引量:2
12
作者 刘双龙 王长法 +4 位作者 杨宏军 杨少华 阿合买提·买买提 高运东 仲跻峰 《畜牧与兽医》 北大核心 2007年第11期 24-26,共3页
根据已发表的牛β-防御素基因序列设计引物,从具有临床乳腺炎症状的茼斯坦奶牛血液中性粒细胞中提取RNA,克隆牛β-防御素基因并插入到原核表达载体pQE-30中,构建了原核表达质粒pQE-30/β—defesion。测序结果表明,克隆的目的基因长... 根据已发表的牛β-防御素基因序列设计引物,从具有临床乳腺炎症状的茼斯坦奶牛血液中性粒细胞中提取RNA,克隆牛β-防御素基因并插入到原核表达载体pQE-30中,构建了原核表达质粒pQE-30/β—defesion。测序结果表明,克隆的目的基因长189bp,编码1个氨基酸,与已报道的牛β-防御素氨基酸序列同源性达95.6%。本研究为牛乳腺防御素的表达及功能、活性的研究奠定了一定的基础。 展开更多
关键词 Β-防御素 原核载体的构建 荷斯坦牛
在线阅读 下载PDF
Annexin A2原核表达载体的构建及表达纯化 预览
13
作者 王德利 杨华 +1 位作者 汤海峰 王宇石 《中国实验诊断学》 2019年第6期1067-1070,共4页
在真核生物中,存在一类由钙离子介导的的膜磷脂结合蛋白——膜联蛋白Annexin家族,酵母和原核生物中未发现存在。Annexin最早是在劳什肉瘤病毒转化的鸡胚细胞中发现的。已发现的Annexin家族成员归为五类:A类为脊椎动物膜联蛋白;无脊椎动... 在真核生物中,存在一类由钙离子介导的的膜磷脂结合蛋白——膜联蛋白Annexin家族,酵母和原核生物中未发现存在。Annexin最早是在劳什肉瘤病毒转化的鸡胚细胞中发现的。已发现的Annexin家族成员归为五类:A类为脊椎动物膜联蛋白;无脊椎动物膜联蛋白属于B类;真菌和部分单细胞真核生物被归为C类;D类为植物膜联蛋白;原核生物的膜联蛋白家族属于E类;另外还有40余种膜联蛋白仍待归类[1]。 展开更多
关键词 原核表达载体 目的基因 家族成员 ANNEXIN A2 质粒载体 大肠杆菌菌株 双酶切 膜联蛋白 重组子 GST 重组质粒
在线阅读 下载PDF
补体免疫抑制剂-免疫球蛋白超家族补体受体的原核表达与纯化
14
作者 陶思跃 尤涛 +1 位作者 毕意辉 苏盖 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1267-1269,共3页
目的构建免疫球蛋白超家族补体受体(CRIg)的原核表达质粒pSmartⅠ-SUMO-CRIg,并通过大肠杆菌表达体系对其进行表达和纯化,并检测表达产物活性.方法从人肝脏细胞HHMa中提取总RNA,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和DNA无缝克隆技术,将编... 目的构建免疫球蛋白超家族补体受体(CRIg)的原核表达质粒pSmartⅠ-SUMO-CRIg,并通过大肠杆菌表达体系对其进行表达和纯化,并检测表达产物活性.方法从人肝脏细胞HHMa中提取总RNA,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和DNA无缝克隆技术,将编码人CRIg胞外段基因序列克隆至pSmart-Ⅰ载体上,选择阳性菌落进行质粒提取和测序,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Westernblot)对其表达产物进行检测,预测SDS-PAGE检测结果位于40 000处.最后通过补体旁路途径溶血实验检测其活性.重复3次实验取算术平均值绘制溶血曲线.结果扩增出的人CRIg片段长度为819 bp,测序结果比对为人CRIg胞外段序列,提取质粒转化至Rosetta菌株后通过IPTG诱导发现CRIg可以稳定在上清中表达.溶血实验证明25 μm蛋白浓度可以几乎完全抑制溶血.结论 CRIg可以在原核表达体系中实现可溶性表达. 展开更多
关键词 免疫球蛋白超家族补体受体基因 补体 免疫抑制剂 无缝克隆 原核表达载体
斯氏副柔线虫SHR基因表达载体的构建及生物信息学分析
15
作者 赵学亮 王姝懿 +3 位作者 呼和巴特尔 冯陈晨 孙柯 王文龙 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期116-123,共8页
为探讨斯氏副柔线虫免疫相关SHR基因作为疫苗候选抗原及早期诊断抗原的可能性,提取斯氏副柔线虫的总RNA,用RT-PCR技术扩增SHR基因,并将PCR产物克隆到pMD19-T载体,构建原核表达载体pET-30a(+)-SHR,利用在线软件对该基因编码蛋白序列进行... 为探讨斯氏副柔线虫免疫相关SHR基因作为疫苗候选抗原及早期诊断抗原的可能性,提取斯氏副柔线虫的总RNA,用RT-PCR技术扩增SHR基因,并将PCR产物克隆到pMD19-T载体,构建原核表达载体pET-30a(+)-SHR,利用在线软件对该基因编码蛋白序列进行生物信息学分析。结果表明:克隆获得SHR基因全长1 083 bp,编码360个氨基酸,理论等电点为6.09,无信号肽和跨膜区;磷酸化预测含有29个磷酸化位点;结构分析发现,α-螺旋构成二级结构的主要成分,亲水性氨基酸比例超过60%;抗原表位预测表明,SHR蛋白是一种抗原性较高的亲水性蛋白。推测SHR有望用作斯氏副柔线虫的免疫诊断抗原和疫苗候选抗原。 展开更多
关键词 原核表达载体 SHR基因 抗原表位 生物信息学
人野生型S100A10原核表达载体的构建、蛋白表达纯化及鉴定 预览
16
作者 王德利 尹显贵 +1 位作者 杨华 李赫 《中国实验诊断学》 2019年第3期535-537,共3页
S100A10又被称为p11,属于S100家族成员,是一种钙离子结合蛋白,在细胞内外发挥多种功能与膜联蛋白A2(ANXA2)形成异源四聚体AIIt中被发现。在生理状态下AIIt定位在细胞的内膜及外膜上,其中外膜上的AIIt为纤溶酶原(plasminogen)和组织纤溶... S100A10又被称为p11,属于S100家族成员,是一种钙离子结合蛋白,在细胞内外发挥多种功能与膜联蛋白A2(ANXA2)形成异源四聚体AIIt中被发现。在生理状态下AIIt定位在细胞的内膜及外膜上,其中外膜上的AIIt为纤溶酶原(plasminogen)和组织纤溶酶原激活剂(tPA)提供锚定位点,是调控肿瘤细胞迁移与转移的关键蛋白复合体,被认为是肿瘤治疗的一个潜在靶点。 展开更多
关键词 原核表达载体 蛋白表达纯化 人野生型 组织纤溶酶原激活剂 肿瘤细胞迁移 钙离子结合蛋白 鉴定 蛋白复合体
在线阅读 下载PDF
猪β防御素3表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达 预览
17
作者 赵新豪 林夏清 +2 位作者 张坤 王梦云 李春丽 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期374-378,414共6页
根据GenBank上发表的猪β防御素3(pBD3)基因的序列,通过生物学软件预测其成熟肽序列。提取猪舌组织RNA,设计引物,通过PCR的方法扩增得到约150bp的pBD3成熟肽基因序列,构建其原核表达载体pET-pBD3,并获得工程菌株BL21-pET-pBD3。IPTG诱... 根据GenBank上发表的猪β防御素3(pBD3)基因的序列,通过生物学软件预测其成熟肽序列。提取猪舌组织RNA,设计引物,通过PCR的方法扩增得到约150bp的pBD3成熟肽基因序列,构建其原核表达载体pET-pBD3,并获得工程菌株BL21-pET-pBD3。IPTG诱导表达后,比对照多表达了1条约16kD的蛋白条带,通过免疫蛋白印记说明所表达的蛋白为带有His·Tag的融合蛋白,证明pBD3成功表达。 展开更多
关键词 猪β防御素3 原核表达载体 表达
在线阅读 下载PDF
金黄色葡萄球菌SrtA Δ N59基因的克隆及原核表达载体构建 预览
18
作者 周婷婷 张景洲 《中国实验诊断学》 2019年第4期710-712,共3页
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)是一种人畜共患的病原菌,主要引起败血症、肺炎、脑膜炎、心内膜炎及肠炎等细菌感染性疾病[1,2]。SA对环境的适应性较强,对临床应用的抗生素易产生耐药性[3]。在临床中可供选择的药物种类不多... 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)是一种人畜共患的病原菌,主要引起败血症、肺炎、脑膜炎、心内膜炎及肠炎等细菌感染性疾病[1,2]。SA对环境的适应性较强,对临床应用的抗生素易产生耐药性[3]。在临床中可供选择的药物种类不多,通过基因水平分析其耐药性,寻找抗菌靶点将成为治疗SA引起特异性感染的一条重要途径。转肽酶A(Sortase A,SrtA)是金黄色葡萄球菌管家基因. 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 PCR N59 原核表达载体 基因克隆 重组质粒
在线阅读 下载PDF
稻瘟病菌两个效应蛋白基因原核表达和瞬时表达载体构建
19
作者 刘艳琴 王一 +1 位作者 杨静 李成云 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2018年第9期2841-2848,共8页
为了研究稻瘟病菌效应蛋白基因功能,本研究构建了稻瘟病菌效应蛋白基因BAS1和BAS4与3×FLAG标签融合的原核表达载体及其与GFP融合的瞬时表达载体。以持有BAS1和BAS4基因的稻瘟病菌株的cDNA为模板,RT-PCR扩增目的基因BAS1和BAS4编码... 为了研究稻瘟病菌效应蛋白基因功能,本研究构建了稻瘟病菌效应蛋白基因BAS1和BAS4与3×FLAG标签融合的原核表达载体及其与GFP融合的瞬时表达载体。以持有BAS1和BAS4基因的稻瘟病菌株的cDNA为模板,RT-PCR扩增目的基因BAS1和BAS4编码区,选用p3×FLAG-CMV-10为模板扩增3×FLAG基因,分别将BAS1和BAS4与3×FLAG连接到原核表达载体p GEX-4T-1中,获得原核表达载体p GEX-BAS1-3×FLAG和p GEX-BAS4-3×FLAG,测序结果表明克隆到的BAS1、BAS4和3×FLAG序列及连接方向正确。将构建好的原核表达载体转化到表达感受态细胞Transetta(DE3)中得到转化子,利用IPTG诱导表达原核表达产物,SDS-PAGE电泳结果表明,目的蛋白约为40 kD,与理论值相符。为了进一步研究BAS1和BAS4的亚细胞定位,利用同源重组方法构建了pBWA(V)HS-BAS1-GLosgfph和pBWA(V)HS-BAS4-GLosgfp瞬时表达载体。本研究所构建的BAS1和BAS4与3×FLAG融合的原核表达载体及瞬时表达载体将为进一步研究BAS1和BAS4功能及定位提供一定的实验基础。 展开更多
关键词 稻瘟病菌 原核表达载体 瞬时表达载体 效应蛋白
金鱼HSC70和HSP40基因克隆及其原核表达 预览
20
作者 金新萍 谢倩 +1 位作者 吕斌 曹诣斌 《南方农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期367-374,共8页
【目的】克隆金鱼热激同源蛋白70(HSC70)和热休克蛋白(HSP40)基因,构建原核表达载体并通过IPTG诱导表达获得目的蛋白,明确HSC70和HSP40蛋白的生物学功能,为揭示金鱼的高温应答机制打下基础。【方法】提取金鱼鳃组织总RNA,利用RT-PCR扩... 【目的】克隆金鱼热激同源蛋白70(HSC70)和热休克蛋白(HSP40)基因,构建原核表达载体并通过IPTG诱导表达获得目的蛋白,明确HSC70和HSP40蛋白的生物学功能,为揭示金鱼的高温应答机制打下基础。【方法】提取金鱼鳃组织总RNA,利用RT-PCR扩增金鱼HSC70和HSP40基因,将目的基因片段克隆至线性空表达载体pET-32a上构建原核表达载体pET-32a-HSC70和pET-32a-HSP40,转化大肠杆菌Rosetta表达菌株后用IPTG进行诱导表达,并以SDS-PAGE和Westernblotting检测分析表达获得的融合蛋白。【结果】金鱼HSC70基因CDS序列全长1950bp,编码650个氨基酸;金鱼HSP40基因CDS序列全长996bp,编码332个氨基酸。金鱼HSC70氨基酸序列与斑马鱼、人类、家鼠、金线鲃和草鱼的相似度分别为96.28%、95.50%、95.35%、98.15%和98.61%;HSP40氨基酸序列与斑马鱼的完全一致(相似度100.00%),与普通鲤鱼、金线鲃、人类和家鼠的相似度均为94.12%。原核诱导表达获得的融合蛋白Trx-HSC70和Trx-HSP40为可溶性表达,其大小约91.5和55.0kD,均能与Anti-Trx抗体发生特异性反应。【结论】HSC70和HSP40蛋白在鱼类及哺乳动物中高度保守,经原核诱导表达获得的金鱼融合蛋白Trx-HSC70和Trx-HSP40为可溶性表达,且携带有Trx标签,能与Anti-Trx抗体发生特异性反应,可作为互作蛋白用于RNApulldown试验。 展开更多
关键词 金鱼 HSC70基因 HSP40基因 克隆 原核表达载体
在线阅读 免费下载
上一页 1 2 22 下一页 到第
使用帮助 返回顶部 意见反馈